Name: live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy
Uploaded: 2020-05-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Questo studio è stato sostenuto dalla sovvenzione del National Science Centre Opus 2018/29/B/N'6/00539 a J.

1. Preparazione di B. bacteriovorus lysate per l'analisi microscopica
<ol><li>In una fiaschetta da 250 mL, impostare la cocultura combinando 1 mL di coltura fresca 24 h B. batteriovorus (ad esempio, HD100 DnaN-mNeonGreen/Pil-mCherry) e 3 mL di coltura prede durante la notte (ad esempio, E. coli S17-1 p-MR100) con 50 mL di buffer Ca-HEPES (25 mM HEPES, 2 mM CaCl2 [pH - 7,6]) integrato con antibiotici quando necessario (qui, 50 g/mL kanamycin).</li>
	<li>Incubare la cocoltura per 24 ...

<ol>
	<li>Shatzkes, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predatory+Bacteria+Attenuate+Klebsiella+pneumoniae+Burden+in+Rat+Lungs.">Predatory Bacteria Attenuate Klebsiella pneumoniae Burden in Rat Lungs.</a> mBio. 7 (6), (2016).</li><li>Iebba, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bdellovibrio+bacteriovorus+directly+attacks+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus+Cystic+fibrosis+isolates.">Bdellovibrio bacteriovorus directly attacks Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Cystic fibrosis isolates.</a> Frontiers in Microbiology. 5, (2014).</li><li>Willis, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+Predatory+Bacteria+Work+Alongside+Host+Immune+Cells+to+Treat+Shigella+Infection+in+Zebrafish+Larvae.">Injections of Predatory Bacteria Work Alongside Host Immune Cells to Treat Shigella Infection in Zebrafish Larvae.</a> Current biology: CB. 26 (24), 3343-3351 (2016).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+flagellar+filament+and+the+role+of+motility+in+bacterial+prey-penetration+by+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Characterizing the flagellar filament and the role of motility in bacterial prey-penetration by Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Molecular Microbiology. 60 (2), 274-286 (2006).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Predatory+Patchwork:+Membrane+and+Surface+Structures+of+Bdellovibrio+bacteriovorus.">A Predatory Patchwork: Membrane and Surface Structures of Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Advances in Microbial Physiology. 54, 313-361 (2008).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+Chromosomal+Replication+in+Predatory+Bacterium+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Initiation of Chromosomal Replication in Predatory Bacterium Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1898 (2016).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+Chromosome+Replication+and+Its+Relationship+to+Predatory+Attack+Lifestyles+in+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Dynamics of Chromosome Replication and Its Relationship to Predatory Attack Lifestyles in Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Applied and Environmental Microbiology. 85 (14), (2019).</li><li>Fenton, A. K., Kanna, M., Woods, R. D., Aizawa, S. I., Sockett, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shadowing+the+actions+of+a+predator:+backlit+fluorescent+microscopy+reveals+synchronous+nonbinary+septation+of+predatory+Bdellovibrio+inside+prey+and+exit+through+discrete+bdelloplast+pores.">Shadowing the actions of a predator: backlit fluorescent microscopy reveals synchronous nonbinary septation of predatory Bdellovibrio inside prey and exit through discrete bdelloplast pores.</a> Journal of Bacteriology. 192 (24), 6329-6335 (2010).</li><li>Kuru, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+D-amino-acids+reveal+bi-cellular+cell+wall+modifications+important+for+Bdellovibrio+bacteriovorus+predation.">Fluorescent D-amino-acids reveal bi-cellular cell wall modifications important for Bdellovibrio bacteriovorus predation.</a> Nature Microbiology. 2 (12), 1648-1657 (2017).</li><li>Dashiff, A., Junka, R. A., Libera, M., Kadouri, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predation+of+human+pathogens+by+the+predatory+bacteria+Micavibrio+aeruginosavorus+and+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Predation of human pathogens by the predatory bacteria Micavibrio aeruginosavorus and Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Journal of Applied Microbiology. 110 (2), 431-444 (2011).</li></ol>

A causa del crescente interesse per l'uso di B. bacteriovorus come antibiotico vivente, sono necessari nuovi strumenti per osservare il ciclo di vita predatorio, in particolare le interazioni predatore-patogeno. Il protocollo presentato viene utilizzato per tracciare l'intero ciclo di vita B. bacteriovorus, soprattutto durante la sua crescita all'interno dell'host, in tempo reale. Inoltre, l'applicazione di un ceppo che produce morsetto beta fluorescente della polimerasi DEL DNA III holoenzyme ha permes...

Bdellovibrio bacteriovorus è un piccolo batterio gram-negativo che preda altri batteri gram-negativi, tra cui patogeni nocivi come Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa e Shigella flexneri1,2,3. Poiché B. bacteriovorus uccide agenti patogeni, è considerato un potenziale antibiotico vivente che può essere applicato per combattere le infezioni batteriche, in particolare quelle causate da ceppi multifarmacori.
B. bacteriovorus presenta un ciclo di vita particolare costituito da due fasi: una fase di attacco non replicativo e una fase riproduttiva intracellulare (Figura 1). Nella fase di vita libera, questo batterio altamente motile, che si muove a velocità fino a 160 m/s, cerca la sua preda. Dopo essersi attaccata alla membrana esterna della preda, entra nel periplasma4,5. Durante la fase riproduttiva interperiplasmica, B. bacteriovorus utilizza una pletora di enzimi idrolitici per degradare le macromolecole dell'ospite e riutilizzarle per la propria crescita. Poco dopo aver invaso il periplasma, la cellula ospite muore e si gonfia in una struttura sferica chiamata bdelloplast, all'interno della quale la cellula predatoria allunga e replica i suoi cromosomi. Il processo di replica inizia dall'origine della replica (oriC)6 e procede fino a quando diverse copie del cromosoma non sono state completamente sintetizzate7. È interessante notare che la replica di ogni cromosoma non è seguita dalla divisione cellulare. Invece, il predatore si allunga per formare una cellula lunga, multinucleoide e filamentosa. Al momento dell'esaurimento dei nutrienti, il filamento subisce setto sincrono e le cellule della progenie vengono rilasciate dal bdelloplast8.
Prima che B. bacteriovorus possa essere usato come antibiotico vivente contro le infezioni batteriche, è fondamentale comprendere le principali fasi del suo ciclo di vita, in particolare quelle legate alla sua proliferazione all'interno della preda. L'imaging a cellule vive di B. bacteriovorus è stato impegnativo, a causa delle varie forme morfologiche del predatore e della sua preda durante il complesso ciclo di vita. Finora, le interazioni tra B. bacteriovorus e la sua cellula ospite sono state studiate principalmente dalla microscopia elettronica e dall'analisi a scatto a scatto2,9,10, entrambe con limitazioni, soprattutto quando vengono utilizzate per monitorare le fasi successive del ciclo di vita predatorio. Questi metodi forniscono immagini ad alta risoluzione di cellule B. batteriovorus e consentono l'osservazione di un piccolo predatore durante la fase di attacco o di crescita. Tuttavia, non consentono il tracciamento di singole cellule B. batteriovorus durante entrambe le fasi del ciclo di vita.
Presentato qui è un protocollo completo per l'utilizzo di microscopia a fluorescenza time-lapse (TLFM) per monitorare l'intero ciclo di vita di B. bacteriovorus. Un sistema costituito da un cuscinetto di agarose viene utilizzato in combinazione con un piatto di imaging cellulare, in cui le cellule predatorie possono muoversi liberamente sotto il cuscinetto di agarose mentre le cellule preda immobilizzate sono in grado di formare bdelloplasts (Figura 2). Questo set-up è preparato sulla base di ceppi specifici di E. coli e B. bacteriovorus, ma il protocollo può essere facilmente modificato per adattarsi ai singoli ceppi di un utente (ad esempio, portando diversi marcatori di selezione, proteine fuse con fluorofori diversi, ecc.).
In questo caso, per visualizzare B. bacteriovorus durante la fase di attacco, è stato costruito un ceppo specifico (HD100 DnaN-mNeonGreen/Pil-mCherry) che esprime una versione fluorescente della proteina citoplasmica, Pil , (disponibile nel nostro laboratorio su richiesta)7. Questo ceppo produce inoltre DnaN (il morsetto β-sliding), una sottounità di oloenzima della polimerasi del DNA III, fusa con una proteina fluorescente. Ciò consente di monitorare la replicazione del DNA in corso all'interno delle cellule predatorie man mano che crescono all'interno dei bdelloplasts.
Sebbene il protocollo e il software descritti utilizzati per l'acquisizione delle immagini si riferis facciano riferimento a un microscopio invertito fornito da un produttore specifico (c'è la tabella dei materiali), questa tecnica può essere regolata per qualsiasi microscopio invertito dotato di camera ambientale o di un altro supporto di riscaldamento esterno e in grado di imaging time-lapse. Per l'analisi dei dati, gli utenti possono scegliere qualsiasi software disponibile compatibile con i singoli formati di output.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61105/61105fig01.jpg"> Figura 1: B. ciclo di vita batterivoro in E. coli come cella ospite. Durante la fase di attacco, una cellula B. bacteriovorus che nuota libera cerca e si attacca a una cellula E. coli ospitante. Dopo l'invasione, la cellula predatoria viene localizzata nel periplasma della preda, cambiando la forma della cellula ospite e formando un bdelloplast. La fase riproduttiva inizia con la formazione di bdelloplastica. La cellula predatoria digerisce la cellula preda e riutilizza semplici composti per costruire le proprie strutture. B. bacteriovorus cresce come un lungo filamento singolo all'interno del periplasma dell'ospite. Quando le risorse della cellula preda sono esaurite, il filamento B. bacteriovorus si setta in modo sincrono e forma cellule progenie. Dopo che le cellule della progenie sviluppano i loro flagelli, elivano il bdelloplast. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61105/61105fig01large.jpg" target="_blank">Si prega di fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MPW MED. INSTRUMENTS</td>
			<td>MPW-260R</td>
			<td>Rotor ref. 12183</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CertifiedMolecular Biology Agarose</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>161-3100</td>
			<td>low fluorescence agarose for agarose pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>https://imagej.net/Fiji</td>
			<td>Open source image processing package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Dish 35 mm</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>81218-200</td>
			<td>uncoated glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>GE</td>
			<td>DeltaVision Elite</td>
			<td>Microtiter Stage, ultimate focus laser module, DV Elite CoolSnap HQ2 Camera, SSI assembly FP DV, kit obj. Oly 100x oil 1.4 NA, prism Nomarski 100x LWD DIC, ENV ctrl IX71 uTiter opaQ 240 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minisart Filter 0.45 &#181;m</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>16555----------K</td>
			<td>Cellulose Acetate, Sterile, Luer Lock Outlet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Start SoftWoRx</td>
			<td>GE</td>
			<td></td>
			<td>Manufacturer-supplied imaging software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy

Bdellovibrio bacteriovorus è un piccolo batterio predatorio negativo e obbligato che uccide altri batteri gram-negativi, compresi gli agenti patogeni nocivi. Pertanto, è considerato un antibiotico vivente. Per applicare B. bacteriovorus come antibiotico vivente, è prima necessario comprendere le principali fasi del suo complesso ciclo di vita, in particolare la sua proliferazione all'interno della preda. Finora, è stato difficile monitorare le fasi successive del ciclo di vita predatorio in tempo reale. Presentato qui è un protocollo completo per l'imaging in tempo reale dell'intero ciclo di vita di B. bacteriovorus, soprattutto durante la sua crescita all'interno dell'host. A tale scopo, viene utilizzato un sistema costituito da un cuscinetto di agarose in combinazione con piatti di imaging cellulare, in cui le cellule predatorie possono muoversi liberamente sotto il cuscinetto di agarose mentre le cellule di preda immobilizzate sono in grado di formare bdelloplasts. L'applicazione di un ceppo che produce una β-sottounità di polimerasi del DNA III consente inoltre di monitorare la replicazione cromosomia durante la fase di riproduzione del ciclo di vita B. batteriovorus.

Il sistema basato su TLFM descritto consente di tenere traccia in tempoFigure 3delle singole Movie 1cellule di B. La fusione Pil-mCherry consente di etichettare l'intera cellula predatoria nella fase di attacco e nella fase iniziale della fase di crescita (Figura 3). Il passaggio dall'attacco alla fase replicativa è stato presentato non solo dalla formazione bdelloplast ospite, ma anche dalla comparsa del replisome (macchina di replica...

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Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Qui è presentato un protocollo che descrive il monitoraggio dell'intero ciclo di vita del batterio predatorio Bdellovibrio bacteriovorus utilizzando la microscopia a fluorescenza time-lapse in combinazione con un cuscinetto di agarose e piatti di imaging cellulare.

Imaging a cellule vive del ciclo di vita del predatore batterico Bdellovibrio bacteriovorus utilizzando la microscopia a fluorescenza Time-Lapse

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...

L'imaging batteriovoro Bdellovibrio a cellule vive è stato impegnativo a causa del complesso ciclo di vita di questi batteri predatori. Il nostro protocollo consente il monitoraggio delle fasi del ciclo di vita completo in tempo reale. Sebbene il nostro protocollo si basi su uno specifico ceppi di equalizzazione, può essere facilmente adattato a una varietà di ceppi batterici tra cui ceppi patogeni.Per impostare una coltura di B.bacteriovorus, combinare un millilitro di batteri freschi coltivati 24 ore su 24 con tre millilitri di coltura di prede durante la notte in un matraccio da 250 millilitri contenente 50 millilitri di tampone di hippy di calcio integrati con antibiotici se necessario. Dopo un'incubazione di 24 ore a 30 gradi Celsius e 200 giri al minuto, verificare che le cellule preda siano state completamente lisci dalla microscopia a contrasto facciale montata sul liquido. Devono essere presenti numerose cellule B.bacteriovorus in fase multi-attacco e nessuna cellula E.coli o bdelloplast dovrebbe essere visibile.Filtrare la coltura di B.bacteriovorus attraverso un filtro di dimensioni dei pori di 0,45 micrometri in un tubo conico da 50 millilitri e sospendere il filtrato in una centrifuga. Quindi sospendere di nuovo il pellet di B.bacteriovorus in tre millilitri di hippy di calcio tamponare a una densità ottica finale a 600 nanometri di circa 0,2 e incubare i batteri a 30 gradi celsius e 200 giri al minuto per 30 minuti. Per preparare le cellule ospiti, selezionare una singola colonia dal ceppo ospite di interesse e nodulare i batteri in 10 millilitri di mezzo YT integrati con antibiotici se necessario per un'incubazione notturna a 37 gradi Celsius e 180 giri al minuto.La mattina seguente trasferire due millilitri della coltura notturna in una provetta da due millilitri e pelletare le cellule per centrifugazione. Quindi sospendere di nuovo il pellet in 200 microlitri di tamponamento hippy di calcio. È molto importante sospendere completamente l'intero pellet cellulare dopo la centrifugazione per assicurarsi che la cellula preda sia separata a livello di singola cella.Per preparare le cellule alla microscopia a fluorescenza time-lapse, in primo luogo, mescolare 200 milligrammi di agarosio a basso grado molecolare fluorescente con 20 millilitri di tamponamento hippy di calcio e sciogliere l'agarosio in un forno a microonde. Versare tre millilitri dell'agarosio fuso in un piatto inferiore di vetro da 35 millimetri e lasciare che l'agarosio si solidifichi. Utilizzando una micro spatola da laboratorio, rimuovere con cura il tampone di agarosio dal piatto senza disturbare il palo centrale del pad e posizionare il lato inferiore del pad verso l'alto su una copertura della piastra di Petri.Posizionare cinque microlitri della sospensione della cella ospite concentrata sul pad capovolto e utilizzare un ciclo di inoculazione per diffondere le cellule nel polo centrale. Aggiungere quindi cinque microlitri della sospensione B.bacteriovorus concentrata sulla superficie rivestita della cellula ospite senza diffondersi e riportare rapidamente il gel al piatto inferiore inferiore in vetro da 35 millilitri dall'alto verso il basso. Quindi coprire il piatto con un coperchio.Per la microscopia Time-Lapse Florescence della co-coltura, mettere la piastra in un portapiatti di Petri in modo che la piastra non si muova nel corso dell'esperimento e posizionare una goccia di olio ad immersione sull'obiettivo del microscopio invertito e una goccia sul fondo del piatto. Montare il supporto sullo stadio del microscopio all'interno della camera del microscopio invertito e nel software del microscopio impostare l'ingrandimento su 100X e la lente policroma su GFP e Mcherry. Utilizzando un iPS in Brightfield, individuate il piano focale e aprite l'inutile manager.Spostare la fase e utilizzare il pulsante contrassegni per memorizzare le coordinate di almeno 10 posizioni di interesse. Passare dall'iPS al monitor. Impostare il piano focale e fare clic sul pulsante sostituisci punto inutile da gestore per calibrare ogni punto.Aprire il progettista dell'esperimento e deselezionare la casella di impilamento delle malattie. Selezionare i canali fluorescenti appropriati e le impostazioni di eliminazione ottimali e impostare gli intervalli tra l'acquisizione dell'immagine e il tempo totale dell'esperimento. Abilitare la manutenzione dello stato attivo per le posizioni scelte e selezionare la cartella dati in cui i file di immagine devono essere salvati automaticamente.Ricontrollare tutte le impostazioni nel controllo software del microscopio e avviare l'esperimento time-lapse. Dopo la prima ora dell'esperimento, verificare che tutte le posizioni dello stadio siano ancora a fuoco. Al termine dell'esperimento time-lapse, rimuovere la piastra di Petri e scartare la piastra da 35 millimetri con un tampone di agarosio secondo gli opportuni protocolli di biosicurezza.Per l'elaborazione dei dati delle immagini time-lapse, trasferire i dati sperimentali su un computer caricato con il software Fiji e aprire un'immagine nelle Figi. Nelle opzioni di importazione dei biosi formati selezionare stack di visualizzazione con hyperstack. In modalità colore composito, selezionare scala automatica.Scorrendo gli stack di immagini si valuta se le cellule e i bdelloplasti sono rimasti a fuoco nel corso dell'esperimento. Se le macchie fluorescenti verdi del DNA e del verde mNeon sono presenti all'interno delle cellule B.bacteriovorus all'interno dei bdelloplasti durante tutta la fase di crescita e se tutte le fasi del ciclo di vita predatorio possono essere visualizzate. Per analizzare un particolare bdelloplasto cellulare B.bacteriovorus, utilizzare uno strumento di selezione per contrassegnare la cellula di interesse.Quindi duplicare l'area scelta. Nell'immagine duplicata, fai clic su processo e smussa e per ogni canale fluorescente fai clic su immagine, colore, strumenti canali e seleziona il canale di interesse. Quindi fare clic su immagine, regolazione e contrasto della luminosità per regolare la luminosità e il contrasto dell'immagine in ogni canale.Per aggiungere una barra di scala, selezionare analizza, strumenti e barra di scala. Per aggiungere un timestamp alle immagini, fare clic su immagini, stack e timestamp. Per salvare le immagini modificate, selezionare TIF.Per salvare i dati come sequenza di immagini, AVI per produrre un filmato o PNG per salvare una singola immagine del fotogramma corrente. Questo sistema basato sulla microscopia a fluorescenza time-lapse consente il tracciamento in tempo reale delle singole cellule B.bacteriovorus e fornisce preziose informazioni su ogni fase del complesso ciclo di vita predatorio. La fusione gogna mCherry consente di etichettare l'intera cellula predatoria nella fase di attacco e nella fase iniziale della fase di crescita.Il passaggio dall'attacco alla fase replicativa può essere visualizzato non solo dalla formazione ospite di bdelloplast ma anche dalla comparsa del replisome. Il replisome viene assemblato al polo cellulare invasore e più di un replisome può essere osservato all'interno di un filamento B.bacteriovorus in crescita man mano che la fase di riproduzione progredisce. Dopo che diverse copie del cromosoma sono state sintetizzati, la replicazione viene terminata.Infine, il filamento multinucleato subisce settazione e le cellule di progenie vengono rilasciate dal bdelloplasto. Le cellule B.bacteriovorus dovrebbero essere abbastanza materiali da cercare attivamente la loro preda e l'intera densità cellulare dovrebbe essere abbastanza alta da consentire l'attacco cellulare predatorio. Questa piattaforma può essere utile in esperimenti che coinvolgono agenti patogeni resistenti a più farmaci e per facilitare il miglioramento dell'ingegneria genetica del batteriovoro B come antibiotico vivo nella medicina umana e veterinaria.

Research

JoVE Journal

Biology

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Monitoring Actin Disassembly with Time-lapse Microscopy

Monitoraggio Actina Smontaggio con Time-lapse Microscopia

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