Name: live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy
Uploaded: 2020-05-08T14:00:00
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이 연구는 국립 과학 센터 보조금 Opus에 의해 지원 되었다 2018/29/B/NZ6/00539 J.Z.C.

1. 현미경 분석을 위한 B. 박테리오보루스 용액의 준비
<ol><li>250mL 플라스크에서 신선한 24h B. 박테리오보루스 배양의 1mL를 결합하여 공동 문화를 설정합니다(예: HD100 DnaN-mNeonGreen/PilZ-mCherry) 및 야간 먹이 배양(예: 대장균 S17-1 pZMR100)의 3mL, 50mL의 Ca-HEPES 버퍼(25mM HEPES, 2mM CaCl2 [pH = 7.6]) 항생제로 보충하였다(50).</li>
	<li>200 rpm에서 흔들어 30 °C에서 24 시간 동안 공동 문화를 ?...

<ol>
	<li>Shatzkes, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predatory+Bacteria+Attenuate+Klebsiella+pneumoniae+Burden+in+Rat+Lungs.">Predatory Bacteria Attenuate Klebsiella pneumoniae Burden in Rat Lungs.</a> mBio. 7 (6), (2016).</li><li>Iebba, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bdellovibrio+bacteriovorus+directly+attacks+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus+Cystic+fibrosis+isolates.">Bdellovibrio bacteriovorus directly attacks Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Cystic fibrosis isolates.</a> Frontiers in Microbiology. 5, (2014).</li><li>Willis, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+Predatory+Bacteria+Work+Alongside+Host+Immune+Cells+to+Treat+Shigella+Infection+in+Zebrafish+Larvae.">Injections of Predatory Bacteria Work Alongside Host Immune Cells to Treat Shigella Infection in Zebrafish Larvae.</a> Current biology: CB. 26 (24), 3343-3351 (2016).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+flagellar+filament+and+the+role+of+motility+in+bacterial+prey-penetration+by+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Characterizing the flagellar filament and the role of motility in bacterial prey-penetration by Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Molecular Microbiology. 60 (2), 274-286 (2006).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Predatory+Patchwork:+Membrane+and+Surface+Structures+of+Bdellovibrio+bacteriovorus.">A Predatory Patchwork: Membrane and Surface Structures of Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Advances in Microbial Physiology. 54, 313-361 (2008).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+Chromosomal+Replication+in+Predatory+Bacterium+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Initiation of Chromosomal Replication in Predatory Bacterium Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1898 (2016).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+Chromosome+Replication+and+Its+Relationship+to+Predatory+Attack+Lifestyles+in+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Dynamics of Chromosome Replication and Its Relationship to Predatory Attack Lifestyles in Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Applied and Environmental Microbiology. 85 (14), (2019).</li><li>Fenton, A. K., Kanna, M., Woods, R. D., Aizawa, S. I., Sockett, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shadowing+the+actions+of+a+predator:+backlit+fluorescent+microscopy+reveals+synchronous+nonbinary+septation+of+predatory+Bdellovibrio+inside+prey+and+exit+through+discrete+bdelloplast+pores.">Shadowing the actions of a predator: backlit fluorescent microscopy reveals synchronous nonbinary septation of predatory Bdellovibrio inside prey and exit through discrete bdelloplast pores.</a> Journal of Bacteriology. 192 (24), 6329-6335 (2010).</li><li>Kuru, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+D-amino-acids+reveal+bi-cellular+cell+wall+modifications+important+for+Bdellovibrio+bacteriovorus+predation.">Fluorescent D-amino-acids reveal bi-cellular cell wall modifications important for Bdellovibrio bacteriovorus predation.</a> Nature Microbiology. 2 (12), 1648-1657 (2017).</li><li>Dashiff, A., Junka, R. A., Libera, M., Kadouri, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predation+of+human+pathogens+by+the+predatory+bacteria+Micavibrio+aeruginosavorus+and+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Predation of human pathogens by the predatory bacteria Micavibrio aeruginosavorus and Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Journal of Applied Microbiology. 110 (2), 431-444 (2011).</li></ol>

살아있는 항생제로 B. bacteriovorus를 사용에 증가 하는 관심으로 인해, 약탈 수명 주기를 관찰 하기 위한 새로운 도구, 특히 육식-병원 체 상호 작용, 필요. 제시된 프로토콜은 전체 B. bacteriovorus 수명 주기를 추적하는 데 사용되며, 특히 호스트 내부의 성장 중에 실시간으로 사용됩니다. 더욱이, DNA 폴리머라제 III 홀로자임의 형광 태그 베타 클램프를 생성하는 균주의 적용은 B. bacteriov...

Bdellovibrio bacteriovorus는 작은 (0.3-0.5 μm x 0.5-1.4 μm) 그람 음성 박테리아는 클렙시엘라 폐렴, 슈도모나스 아에루기노사, , 시글라 플렉너리1,2,3등 유해한 병원균을 포함한 다른 그램 음성 박테리아에 먹이를 주는 작은 박테리아입니다.3 B. bacteriovorus병원체를 죽이기 때문에, 세균감염을 방지하기 위하여 적용될 수 있는 잠재적인 살아있는 항생제로 간주됩니다, 특히 다제 저항하는 긴장에 기인한 그들.
B. 박테리오보루스는 2단계로 구성된 특이한 수명 주기를 나타낸다: 자유로운 살아있는 비복제 공격 단계 및 세포내 생식단계(그림 1). 자유 생활 단계에서 최대 160 μm /s의 속도로 움직이는이 매우 운동성 박테리아는 먹이를 검색합니다. 먹이의 외부 멤브레인에 부착 한 후, 그것은4주변4,5로들어간다. 인터페리플라스믹 생식 단계 동안, B. bacteriovorus는 숙주의 거대 분자를 저하시키고 자신의 성장을 위해 재사용하기 위해 다양한 가수 분해 효소를 사용합니다. 곧 주변을 침공 한 후, 호스트 세포는 죽고 약탈 세포가 염색체를 복제 내부 bdelloplast라는 구형 구조로 팽창. 복제 프로세스는 복제 원점에서시작(oriC)6 염색체의 여러 복사본이 완전히 합성 될 때까지진행 7. 흥미롭게도, 각 염색체의 복제는 세포 분열뒤에 선행되지 않습니다. 대신, 육식 동물은 길고 다중 핵및 필라멘트 세포를 형성하기 위해 길게 합니다. 영양 고갈시 필라멘트는 동기 정화를 거치고 자손 세포는 bdelloplast8에서방출됩니다.
B. bacteriovorus 세균성 감염에 대하여 살아있는 항생제로 이용될 수 있기 전에, 그것의 생활 주기의 중요한 단계, 특히 먹이 안쪽에 그것의 증식과 관련되었던 그 이해하는 것이 중요합니다. B. bacteriovorus의 살아있는 세포 화상 진찰은 복잡한 생활 주기 도중 포식자의 각종 형태및 그것의 먹이 때문에 도전되었습니다. 지금까지, B. bacteriovorus와 그것의 호스트 세포 사이 상호 작용은 주로 전자 현미경 검사법과 스냅 샷 분석에 의해 공부되었습니다22,9,,10,둘 다 한계가 있는, 특히 때 그들은 약탈 수명 주기의 연속적인 단계를 감시하는 데 이용되는 경우에. 이러한 방법은 B. bacteriovorus 세포의 고해상도 이미지를 제공하고 공격 또는 성장 단계 동안 작은 육식 동물의 관찰을 가능하게한다. 그러나, 그들은 두 수명 주기 단계에 걸쳐 단일 B. bacteriovorus 세포의 추적을 허용하지 않습니다.
여기에 제시된 것은 시간 경과 형광 현미경 검사법(TLFM)을 사용하여 B. bacteriovorus의전체 수명 주기를 모니터링하기 위한 포괄적인 프로토콜이다. 아가로즈 패드로 구성된 시스템은 세포 이미징 접시와 함께 사용되며, 이 에 고정된 먹이 세포는 보엽성형을 형성할 수 있는 동안 약탈세포가 아가로즈 패드 아래에서 자유롭게 이동할 수있다(도 2). 이러한 설정은 대장균과 B. 박테리오보루스의특정 균주에 따라 제조되지만, 프로토콜은 사용자의 개별 균주에 맞게 쉽게 변경될 수 있습니다(예: 다른 선택 마커, 다른 형광구와 융합된 단백질 등).
이 경우, 공격 단계에서 B. bacteriovorus를 시각화하기 위해, 특정 균주(HD100 DnaN-mNeonGreen/PilZ-mCherry)는 세포질 단백질, PilZ(요청 시 실험실에서 사용가능)의형광태그 버전을 표현하는 것으로 구성되었다. 이 균주는 추가로 DNAN (β 슬라이딩 클램프), DNA 폴리머라제 III 홀로효소의 하위 단위, 형광 단백질과 융합을 생성합니다. 이것은 그들이 bdelloplasts 내에서 성장으로 약탈 세포 내부를 모니터링하는 지속적인 DNA 복제를 가능하게.
이미지 수집에 사용되는 기술 프로토콜 및 소프트웨어는 특정 제조업체가 제공하는 반전 된 현미경을 참조하지만 (재료의 표참조), 이 기술은 환경 챔버 또는 기타 외부 가열 홀더가 장착 된 모든 반전 현미경에 대해 조정 될 수 있으며 시간 경과 이미징이 가능합니다. 데이터 분석의 경우 사용자는 개별 출력 형식과 호환되는 사용 가능한 소프트웨어를 선택할 수 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61105/61105fig01.jpg"> 도 1: 대장균에서 항균의 생물 주기가 숙주 세포로서. 공격 단계 동안, 자유 수영 B. 박테리오보루스 세포는 호스트 대장균 세포에 검색하고 부착합니다. 침공 후, 약탈 세포는 먹이의 주변에 국한되어 숙주 세포의 모양을 변경하고 bdelloplast를 형성합니다. 생식 단계는 bdelloplast 형성으로 시작됩니다. 약탈 세포는 먹이 세포를 소화하고 자신의 구조를 구축하기 위해 간단한 화합물을 재사용합니다. B. 박테리오보루스는 호스트의 주변지 에서 긴 단일 필라멘트로 성장합니다. 먹이 세포의 자원이 소진되면 B. 박테리오보루스 필라멘트는 동기적으로 패혈증을 형성하고 자손 세포를 형성합니다. 자손 세포가 기조세포를 개발한 후, 그들은 bdelloplast를 lyse. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61105/61105fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MPW MED. INSTRUMENTS</td>
			<td>MPW-260R</td>
			<td>Rotor ref. 12183</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CertifiedMolecular Biology Agarose</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>161-3100</td>
			<td>low fluorescence agarose for agarose pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>https://imagej.net/Fiji</td>
			<td>Open source image processing package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Dish 35 mm</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>81218-200</td>
			<td>uncoated glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>GE</td>
			<td>DeltaVision Elite</td>
			<td>Microtiter Stage, ultimate focus laser module, DV Elite CoolSnap HQ2 Camera, SSI assembly FP DV, kit obj. Oly 100x oil 1.4 NA, prism Nomarski 100x LWD DIC, ENV ctrl IX71 uTiter opaQ 240 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minisart Filter 0.45 &#181;m</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>16555----------K</td>
			<td>Cellulose Acetate, Sterile, Luer Lock Outlet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Start SoftWoRx</td>
			<td>GE</td>
			<td></td>
			<td>Manufacturer-supplied imaging software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy

Bdellovibrio bacteriovorus는 유해한 병원체를 포함하여 그밖 그람 음성 박테리아를 죽이는 작은 그람 음성, 의무 약탈 박테리아입니다. 따라서 살아있는 항생제로 간주됩니다. 살아있는 항생제로 B. bacteriovorus를 적용하려면, 그것의 복잡한 수명 주기의 주요 단계를 이해하는 것이 첫째로, 특히 먹이 안쪽의 증식. 지금까지, 그것은 실시간으로 약탈 생활 주기의 연속 단계를 모니터링 하는 도전 하고있다. 여기에 소개되는 것은 B. bacteriovorus의전체 수명 주기의 실시간 이미징을 위한 포괄적인 프로토콜입니다, 특히 호스트 내부의 성장 도중. 이를 위해 아가로즈 패드로 구성된 시스템은 세포 이미징 접시와 함께 사용되며, 이 요리는 고정된 먹이 세포가 bdelloplasts를 형성할 수 있는 동안 약탈 세포가 아가로즈 패드 아래에서 자유롭게 이동할 수 있습니다. DNA 폴리머라제 III의 형광 태그 β-서브유닛을 생성하는 균주의 적용은 B. bacteriovorus 수명 주기의 재생 단계에서 염색체 복제를 모니터링할 수 있게 한다.

설명된 TLFM 기반 시스템은B.bacteriovorus의 개별 세포가 제 시간에 추적할 수 있게하고(도 3, Movie 1)복잡한 약탈 수명 주기의 각 단계에 대한 귀중한 정보를 제공한다. PilZ-mCherry 융합은 전체 약탈 세포가 공격 단계뿐만 아니라 성장 단계의 초기 단계에 표시될 수 있게한다(도 3). 공격에서 복제 단계로의 전환은 호스트 bdelloplast 형성뿐만 ?...

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Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

여기에 제시된 것은 아가로즈 패드 및 세포 화상 진찰 접시와 함께 시간 경과 형광 현미경을 사용하여 약탈적인 박테리아 Bdellovibrio bacteriovorus의 완전한 수명 주기의 감시를 기술하는 프로토콜입니다.

시간 경과 형광 현미경 검사를 사용하여 세균 육식 동물 Bdellovibrio 박테리오보루스의 라이프 사이클의 라이브 세포 이미징

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...

라이브 셀 Bdellovibrio bacteriovorus 화상 진찰은 이 약탈한 박테리아의 복잡한 생활 주기 때문에 도전적이되었습니다. 우리의 프로토콜은 실시간으로 완전한 수명 주기의 단계를 모니터링 할 수 있습니다. 우리의 프로토콜은 특정 균등균균에 근거하더라도, 병원성 긴장을 포함하여 세균성 긴장의 각종에 쉽게 적응될 수 있습니다.B.bacteriovorus 문화를 설정하려면, 신선한 24 시간 배양 박테리아의 1 밀리리터와 하룻밤 먹이 문화의 세 밀리리터를 결합 250 밀리리터 칼슘 히피 버퍼의 50 필요에 따라 항생제로 보충. 섭씨 30도에서 24시간 배양하고 분당 200개의 회전을 한 후, 먹이 세포가 액체 장착 얼굴 대비 현미경 검사법에 의해 완전히 제거되었는지 확인하십시오. 수많은 다중 공격 단계B.bacteriovorus 세포가 존재해야 하며 E.coli 세포 또는 bdelloplast를 볼 수 없어야 합니다.B.bacteriovorus 배양을 0.45 마이크로미터 모공 크기 필터를 50 밀리리터 원내 튜브로 변형시키고 원심분리기의 여과를 중단합니다. 그런 다음 B.bacteriovorus 펠릿을 칼슘 히피 버퍼 의 3 밀리리터에서 약 0.2의 600 나노미터에서 최종 광학 밀도로 다시 중단하고 30 분당 30도 및 200 회전에서 박테리아를 배양합니다. 숙주 세포를 준비하려면 숙주 균주에서 단일 콜로니를 선택하고 10 밀리리터의 YT 배지에서 박테리아를 숙인하여 1박 잠식에 필요한 항생제로 보충하고 분당 180개의 회전을 한다.다음 아침 은 2 밀리 리터 테스트 튜브와 원심 분리에 의해 세포를 펠릿하룻밤 문화의 두 밀리리터를 전송. 그런 다음 칼슘 히피 버퍼의 200 마이크로 리터에서 펠릿을 다시 중단합니다. 먹이 세포가 단일 세포 수준에서 분리되어 있는지 확인하기 위해 원심 분리 후 전체 셀 펠릿을 완전히 다시 중단하는 것이 매우 중요합니다.시간 경과 형광 현미경 검사법을 위해 세포를 준비하려면 먼저 200 밀리그램의 낮은 형광 분자 등급아가로즈를 20 밀리리터의 칼슘 히피 버퍼와 혼합하고 파수기로 녹입니다. 녹인 아가로즈 3밀리리터를 35mm 유리 바닥 접시에 붓고 아가로즈가 고화되도록 합니다. 실험실 마이크로 주걱을 사용하여 패드의 중앙 기둥을 방해하지 않고 접시에서 아가로즈 패드를 조심스럽게 제거하고 패드 바닥을 페트리 접시 덮개에 올려 놓습니다.농축 된 숙주 세포 현탁액 5 개를 뒤집힌 패드에 놓고 접종 루프를 사용하여 중앙 극에 세포를 퍼뜨리게합니다. 다음으로 농축된 B.bacteriovorus 현탁액 5개에 퍼지지 않고 주전자 코팅 표면에 마이크로리터를 넣고 젤을 35밀리리터 유리 바닥 접시 상면으로 빠르게 되돌려 줍니다. 그런 다음 뚜껑으로 접시를 덮습니다.공동 배양의 시간 경과 플로레시네이션 현미경 검사용은 접시를 실험 과정에서 움직이지 않도록 페트리 접시 홀더에 놓고 1방울의 침수 오일을 반전 된 현미경 목표에 놓고 접시 바닥에 한 방울을 놓습니다. 반전된 현미경 챔버 내의 현미경 단계에 홀더를 장착하고 현미경 소프트웨어에서 배율을 100X로 설정하고 GFP및 Mcherry에 다크롬 렌즈를 설정합니다. 브라이트필드에서 iPS를 사용하여 초점 평면을 찾아 무의미한 관리자를 엽니다.스테이지를 이동하고 표시점 버튼을 사용하여 관심 있는 위치가 최소 10개 이상의 좌표를 저장합니다. iPS에서 모니터로 카메라 용을 전환합니다. 초점 평면을 설정하고 무의미한 교체 점 버튼을 클릭하여 관리자에게 각 점을 보정합니다.실험 디자이너를 열고 질병 스태킹 상자를 표시 해제합니다. 적절한 형광 채널과 최적의 제거 설정을 선택하고 이미지 수집과 실험의 총 시간 사이의 간격을 설정합니다. 선택한 위치에 대한 포커스 유지 관리를 활성화하고 이미지 파일을 자동으로 저장해야 하는 데이터 폴더를 선택합니다.현미경 소프트웨어 제어의 모든 설정을 다시 확인하고 시간 경과 실험을 시작합니다. 실험의 첫 번째 시간 후에도 모든 스테이지 위치가 여전히 집중되어 있는지 확인합니다. 시간 경과 실험이 완료되면 페트리 접시를 제거하고 적절한 생체 안전 프로토콜에 따라 아가로즈 패드로 35mm 접시를 폐기하십시오.타임랩스 이미지 데이터의 처리를 위해 실험 데이터를 피지 소프트웨어가 탑재된 컴퓨터로 전송하고 피지에서 이미지를 엽니다. 바이오 포맷 가져오기 옵션에서 하이퍼스택이 있는 뷰 스택을 선택합니다. 복합 색상 모드에서는 자동 축척을 선택합니다.이미지 스택을 스크롤하여 세포와 bdelloplasts가 실험 과정에서 포커스를 유지했는지 여부를 평가합니다. DNA와 mNeon 녹색에서 녹색 형광 반점이 성장 단계 전반에 걸쳐 bdelloplasts 안쪽에 B.bacteriovorus 세포 안에 존재하는지 그리고 약탈 수명 주기의 모든 단계가 시각화될 수 있는지 여부. 특정 B.bacteriovorus 세포 bdelloplast를 분석하려면 선택 도구를 사용하여 관심 있는 셀을 표시합니다.그런 다음 선택한 영역을 복제합니다. 중복된 이미지에서 프로세스를 클릭하고 매끄럽고 각 형광 채널에 대해 이미지, 색상, 채널 도구를 클릭하고 관심 있는 채널을 선택합니다. 그런 다음 이미지, 조정 및 밝기 대비를 클릭하여 각 채널에서 이미지의 밝기와 대비를 조정합니다.축척 막대를 추가하려면 분석, 도구 및 배율 막대를 선택합니다. 이미지에 타임스탬프를 추가하려면 이미지, 스택 및 시간 스탬퍼를 클릭합니다. 수정된 이미지를 저장하려면 TIF를 선택합니다.데이터를 이미지 시퀀스로 저장하려면 AVI가 현재 프레임의 단일 이미지를 저장하기 위해 동영상을 생성하거나 PNG를 생성합니다. 이 시간 경과 형광 현미경 기반 시스템은 개별 B.bacteriovorus 세포의 실시간 추적을 허용하고 복잡한 약탈 수명 주기의 각 단계에 대한 귀중한 정보를 제공합니다. 알약 mCherry 융합은 전체 약탈 세포가 성장 단계의 초기 단계에서뿐만 아니라 공격 단계뿐만 아니라 공격 단계에서 표시 될 수 있습니다.공격에서 복제 단계로의 전환은 호스트 bdelloplast 형성뿐만 아니라 replisome의 모양으로 도포할 수 있습니다. 레플리솜은 침입 세포극에서 조립되며, 번식상이 진행됨에 따라 성장하는 B.bacteriovorus 필라멘트 내에서 하나 이상의 replisome를 관찰할 수 있다. 염색체의 여러 복사본이 합성되면 복제가 종료됩니다.마지막으로, 다핵 필라멘트는 정화를 거치고 자손 세포는 bdelloplast에서 방출됩니다. B.bacteriovorus 세포는 적극적으로 그들의 먹이를 검색하기에 충분한 물질이어야하며 전체 세포 밀도는 약탈 세포 부착을 허용 할 만큼 충분히 높아야합니다. 이 플랫폼은 다중 약물 내성 병원균을 포함하는 실험에서 유용할 수 있으며 인간 및 수의학에서 살아있는 항생제로 B.bacteriovorus의 유전 공학의 개선을 용이하게할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Monitoring Actin Disassembly with Time-lapse Microscopy

시간 경과 현미경과 분해 굴지 모니터링

연구

생물학

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