Name: live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy
Uploaded: 2020-05-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Denne studien ble støttet av National Science Centre grant Opus 2018/29/B/NZ6/00539 til J.Z.C.

1. Fremstilling av B. bakteriovorus lysat for mikroskopisk analyse
<ol><li>I en 250 ml kolbe, sett opp kokulturen ved å kombinere 1 ml fersk 24 h B. bakteriovoruskultur (f.eks. HD100 DnaN-mNeonGreen/PilZ-mCherry) og 3 ml byttekultur over natten (f.eks. E. coli S17-1 pZMR100) med 50 ml Ca-HEPES buffer (25 mM HEPES, 2 mM CaCl2 [pH = 7,6]) supplert med antibiotika ved behov (her, 50 μg/ml kanamycin).</li>
	<li>Inkuber coculture for 24 t ved 30 ° C med risting ved 200 rpm.</li>
	<li...

<ol>
	<li>Shatzkes, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predatory+Bacteria+Attenuate+Klebsiella+pneumoniae+Burden+in+Rat+Lungs.">Predatory Bacteria Attenuate Klebsiella pneumoniae Burden in Rat Lungs.</a> mBio. 7 (6), (2016).</li><li>Iebba, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bdellovibrio+bacteriovorus+directly+attacks+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus+Cystic+fibrosis+isolates.">Bdellovibrio bacteriovorus directly attacks Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Cystic fibrosis isolates.</a> Frontiers in Microbiology. 5, (2014).</li><li>Willis, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+Predatory+Bacteria+Work+Alongside+Host+Immune+Cells+to+Treat+Shigella+Infection+in+Zebrafish+Larvae.">Injections of Predatory Bacteria Work Alongside Host Immune Cells to Treat Shigella Infection in Zebrafish Larvae.</a> Current biology: CB. 26 (24), 3343-3351 (2016).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+flagellar+filament+and+the+role+of+motility+in+bacterial+prey-penetration+by+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Characterizing the flagellar filament and the role of motility in bacterial prey-penetration by Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Molecular Microbiology. 60 (2), 274-286 (2006).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Predatory+Patchwork:+Membrane+and+Surface+Structures+of+Bdellovibrio+bacteriovorus.">A Predatory Patchwork: Membrane and Surface Structures of Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Advances in Microbial Physiology. 54, 313-361 (2008).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+Chromosomal+Replication+in+Predatory+Bacterium+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Initiation of Chromosomal Replication in Predatory Bacterium Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1898 (2016).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+Chromosome+Replication+and+Its+Relationship+to+Predatory+Attack+Lifestyles+in+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Dynamics of Chromosome Replication and Its Relationship to Predatory Attack Lifestyles in Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Applied and Environmental Microbiology. 85 (14), (2019).</li><li>Fenton, A. K., Kanna, M., Woods, R. D., Aizawa, S. I., Sockett, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shadowing+the+actions+of+a+predator:+backlit+fluorescent+microscopy+reveals+synchronous+nonbinary+septation+of+predatory+Bdellovibrio+inside+prey+and+exit+through+discrete+bdelloplast+pores.">Shadowing the actions of a predator: backlit fluorescent microscopy reveals synchronous nonbinary septation of predatory Bdellovibrio inside prey and exit through discrete bdelloplast pores.</a> Journal of Bacteriology. 192 (24), 6329-6335 (2010).</li><li>Kuru, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+D-amino-acids+reveal+bi-cellular+cell+wall+modifications+important+for+Bdellovibrio+bacteriovorus+predation.">Fluorescent D-amino-acids reveal bi-cellular cell wall modifications important for Bdellovibrio bacteriovorus predation.</a> Nature Microbiology. 2 (12), 1648-1657 (2017).</li><li>Dashiff, A., Junka, R. A., Libera, M., Kadouri, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predation+of+human+pathogens+by+the+predatory+bacteria+Micavibrio+aeruginosavorus+and+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Predation of human pathogens by the predatory bacteria Micavibrio aeruginosavorus and Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Journal of Applied Microbiology. 110 (2), 431-444 (2011).</li></ol>

På grunn av den økte interessen for å bruke B. bakteriovorus som et levende antibiotika, er det nødvendig med nye verktøy for å observere rovlivssyklusen, spesielt rovdyr-patogeninteraksjoner. Den presenterte protokollen brukes til å spore hele B. bakteriovorus livssyklus, spesielt under veksten inne i verten, i sanntid. Videre, anvendelsen av en stamme som produserer fluorescerende merket beta klemme av DNA polymerase III holoenzyme aktivert overvåking av kromosom replikering progresjon gjennom...

Bdellovibrio bakteriovorus er en liten (0,3–0,5 μm med 0,5–1,4 μm) gram-negativ bakterie som bytter på andre gram-negative bakterier, inkludert skadelige patogener som Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa og Shigella flexneri1,2,3. Siden B. bakteriovorus dreper patogener, regnes det som et potensielt levende antibiotika som kan brukes til å bekjempe bakterielle infeksjoner, spesielt de som er forårsaket av multiresistente stammer.
B. bakteriovorus viser en særegen livssyklus bestående av to faser: en frittlevende ikke-repliktiv angrepsfase og en intracellulær reproduksjonsfase (figur 1). I frilivsfasen søker denne svært motile bakterien, som beveger seg med hastigheter på opptil 160 μm/s, etter byttet. Etter å ha festet seg til byttets ytre membran, kommer den inn i periplasma4,5. Under den interperiplasmiske reproduktive fasen bruker B. bakteriovorus en mengde hydrolytiske enzymer for å forringe vertens makromolekyler og gjenbruke dem for sin egen vekst. Kort tid etter å ha invadert periplasma, dør vertscellen og bloats inn i en sfærisk struktur kalt en bdelloplast, inne som rovcellen langstrakte og replikerer kromosomene. Replikeringsprosessen starter på replikeringsopprinnelsen (oriC)6 og fortsetter til flere kopier av kromosomet er fullstendig syntetisert7. Interessant, replikering av hvert kromosom etterfølges ikke av celledeling. I stedet forlenger rovdyret for å danne en lang, multinukleoid og filamentøs celle. Ved uttømming av næringsstoffer gjennomgår filamentet synkron septering og avkomceller frigjøres fra bdelloplast8.
Før B. bakteriovorus kan brukes som et levende antibiotika mot bakterielle infeksjoner, er det avgjørende å forstå de viktigste stadiene av livssyklusen, spesielt de som er relatert til spredning inne i byttet. Live-celle avbildning av B. bakteriovorus har vært utfordrende, på grunn av de ulike morfologiske former for rovdyret og dens byttedyr under den komplekse livssyklusen. Så langt har interaksjonene mellom B. bakteriovorus og vertscellen hovedsakelig blitt studert av elektronmikroskopi og snap-shot analyse2,9,10, som begge har begrensninger, spesielt når de brukes til å overvåke påfølgende stadier av rovlivssyklusen. Disse metodene gir høyoppløselige bilder av B. bakteriovorusceller og muliggjør observasjon av et lite rovdyr under angreps- eller vekstfasen. Imidlertid tillater de ikke sporing av enkelt B. bakteriovorusceller gjennom begge livssyklusfasene.
Presentert her er en omfattende protokoll for bruk av time-lapse fluorescens mikroskopi (TLFM) for å overvåke hele livssyklusen til B. bakteriovorus. Et system bestående av en agarose pad brukes i kombinasjon med en celle-imaging parabolen, der de rovdyrcellene kan bevege seg fritt under agarose pad mens immobiliserte byttedyr celler er i stand til å danne bdelloplasts (Figur 2). Dette oppsettet er utarbeidet basert på spesifikke stammer av både E. coli og B. bakteriovorus, men protokollen kan lett endres for å passe til en brukers individuelle stammer (f.eks. bærer forskjellige utvalgsmarkører, proteiner smeltet sammen med forskjellige fluoroforer, etc.).
I dette tilfellet, for å visualisere B. bakteriovorus under angrepsfasen, ble en bestemt stamme (HD100 DnaN-mNeonGreen / PilZ-mCherry) konstruert som uttrykker en fluorescerende merket versjon av cytoplasmatisk protein, PilZ (tilgjengelig i vårt laboratorium på forespørsel)7. Denne stammen produserer i tillegg DnaN (β-glidende klemme), en underenhet av DNA polymerase III holoenzyme, smeltet sammen med et fluorescerende protein. Dette gjør det mulig å overvåke pågående DNA-replikering inne i rovcellene etter hvert som de vokser innenfor bdelloplasts.
Selv om den beskrevne protokollen og programvaren som brukes til bildeoppkjøp refererer til et omvendt mikroskop levert av en bestemt produsent (se Materialstabell), kan denne teknikken justeres for ethvert invertert mikroskop utstyrt med et miljøkammer eller en annen ekstern varmeholder og i stand til tidsforløp. For dataanalyse kan brukerne velge hvilken som helst tilgjengelig programvare som er kompatibel med de enkelte utdataformatene.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61105/61105fig01.jpg"> Figur 1: B. bakteriovorus livssyklus i E. coli som vertscelle. Under angrepsfasen søker en frittsvømming B. bakteriovoruscelle etter og festes til en vert E. coli-celle. Etter invasjonen blir rovcellen lokalisert i byttets periplasma, endrer vertscellens form og danner en bdelloplast. Den reproduktive fasen starter med bdelloplast dannelse. Rovcellen fordøyer byttedyrcellen og gjenbruker enkle forbindelser for å bygge sine egne strukturer. B. bakteriovorus vokser som en lang enkelt filament inne i vertens periplasma. Når byttedyrcellens ressurser er oppbrukt, er B. bakteriovorus filament synkront septater og danner avkomceller. Etter at avkomcellene utvikler sin flagella, lyser de bdelloplast. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61105/61105fig01large.jpg" target="_blank">Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MPW MED. INSTRUMENTS</td>
			<td>MPW-260R</td>
			<td>Rotor ref. 12183</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CertifiedMolecular Biology Agarose</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>161-3100</td>
			<td>low fluorescence agarose for agarose pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>https://imagej.net/Fiji</td>
			<td>Open source image processing package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Dish 35 mm</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>81218-200</td>
			<td>uncoated glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>GE</td>
			<td>DeltaVision Elite</td>
			<td>Microtiter Stage, ultimate focus laser module, DV Elite CoolSnap HQ2 Camera, SSI assembly FP DV, kit obj. Oly 100x oil 1.4 NA, prism Nomarski 100x LWD DIC, ENV ctrl IX71 uTiter opaQ 240 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minisart Filter 0.45 &#181;m</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>16555----------K</td>
			<td>Cellulose Acetate, Sterile, Luer Lock Outlet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Start SoftWoRx</td>
			<td>GE</td>
			<td></td>
			<td>Manufacturer-supplied imaging software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy

Bdellovibrio bacteriovorus er en liten gram-negativ, obligatorisk rovdyr bakterie som dreper andre gram-negative bakterier, inkludert skadelige patogener. Derfor regnes det som et levende antibiotika. For å bruke B. bakteriovorus som et levende antibiotika, er det først nødvendig å forstå de store stadiene av sin komplekse livssyklus, spesielt spredning inne i byttedyr. Så langt har det vært utfordrende å overvåke påfølgende stadier av rovlivssyklusen i sanntid. Presentert her er en omfattende protokoll for sanntidsavbildning av hele livssyklusen til B. bakteriovorus, spesielt under veksten inne i verten. For dette formålet brukes et system bestående av en agarosepute i kombinasjon med celleavbildningsretter, der rovcellene kan bevege seg fritt under agaroseputen mens immobiliserte byttedyrceller er i stand til å danne bdelloplasts. Anvendelsen av en stamme som produserer en fluorescerende merket β-underenhet av DNA polymerase III ytterligere tillater kromosom replikering som skal overvåkes under reproduksjonsfasen av B. bakteriovorus livssyklus.

Det beskrevne TLFM-baserte systemet gjør at individuelle celler av B. bakteriovorus kan spores i tide (Figur 3, Movie 1) og gir verdifull informasjon om hvert trinn i den komplekse rovlivssyklusen. PilZ-mCherry-fusjonen gjør at hele rovcellen kan merkes i angrepsfasen, samt tidlig stadium av vekstfasen (figur 3). Overgangen fra angrepet til replikeringsfasen ble visualisert ikke bare av verten bdelloplast formasjon, men også ved utse...

Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Presentert her er en protokoll som beskriver overvåking av hele livssyklusen til rovbakterien Bdellovibrio bakteriovorus ved hjelp av time-lapse fluorescens mikroskopi i kombinasjon med en agarose pad og celle-imaging retter.

Live-Cell Imaging av livssyklusen til bakteriell Predator Bdellovibrio bakteriovorus ved hjelp av Time-Lapse Fluorescence Mikroskopi

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...

Live-Cell Bdellovibrio bacteriovorus imaging har vært utfordrende på grunn av den komplekse livssyklusen til disse rovbakteriene. Vår protokoll tillater overvåking av stadier av fullstendig livssyklus i sanntid. Selv om vår protokoll er basert på en bestemt utjevning stammer, kan det lett tilpasses en rekke bakterielle stammer, inkludert patogene stammer.For å sette opp en B.bacteriovorus kultur, kombinere en milliliter friske 24-timers kultiverte bakterier med tre milliliter av overnatting byttedyr kultur i en 250 milliliter kolbe som inneholder 50 milliliter kalsium hippier buffer supplert med antibiotika etter behov. Etter en 24 timers inkubasjon ved 30 grader Celsius og 200 omdreininger per minutt, kontroller at byttedyrcellene er fullt lyset av væskemontert ansiktskontrastmikroskopi. Tallrike multi-angrep faset B.bacteriovorus celler bør være til stede og ingen E.coli celle eller bdelloplast skal være synlig.Sil B.bacteriovorus kulturen gjennom en 0,45 mikrometer pore størrelse filter i en 50 milliliter konisk rør og suspendere ned filtrat i en sentrifuge. Deretter re-suspendere B.bacteriovorus pellet i tre milliliter kalsium hippier buffer til en endelig optisk tetthet på 600 nanometer på ca 0,2 og inkubere bakteriene på 30 grader celsius og 200 omdreininger per minutt i 30 minutter. For å forberede vertscellene, velg en enkelt koloni fra vertsstammen av interesse og for å nikke bakteriene i 10 milliliter YT-medium supplert med antibiotika etter behov for en overnattingsinkubasjon ved 37 grader Celsius og 180 omdreininger per minutt.Neste morgen overføre to milliliter av natten kultur til en to milliliter testrør og pellet cellene ved sentrifugering. Deretter re-suspendere pellet i 200 mikroliter av kalsium hippier buffer. Det er svært viktig å fullstendig suspendere hele cellepellet etter sentrifugering for å sikre at byttedyrcellen er skilt på enkeltcellenivå.For å forberede cellene for time-lapse fluorescens mikroskopi, først, bland 200 milligram lav fluorescerende molekylær karakter agarose med 20 milliliter kalsium hippier buffer og oppløse agarose i en mikrobølgeovn. Hell tre milliliter av smeltet agarose i en 35 millimeter glass bunnrett og la agarose å stivne. Bruk en mikrospatel for laboratorier, fjern forsiktig agaroseputen fra fatet uten å forstyrre den midterste stangen på puten og legg puten nederst opp på et Petri-skåldeksel.Plasser fem mikroliter av den konsentrerte vertscelleopphengen på den snudde puten og bruk en inokulasjonssløyfe til å spre celler i midtstangen. Deretter legger du til fem mikroliter av den konsentrerte B.bacteriovorus suspensjon på vertscellebelagt overflate uten å spre seg og raskt returnere gelen til 35 milliliter glass bunnfatet øverst ned. Dekk deretter parabolen med et lokk.For Time-Lapse Florescence mikroskopi av co-kulturen, plasser parabolen i en Petri parabolen holder slik at parabolen ikke vil bevege seg i løpet av eksperimentet og plassere en dråpe nedsenking olje på invertert mikroskop mål og en dråpe på bunnen av parabolen. Monter holderen på mikroskopstadiet i det inverterte mikroskopkammeret, og i mikroskopprogramvaren setter du forstørrelsen til 100X og polykromlinsen til GFP og Mcherry. Bruk en iPS i Brightfield til å lokalisere fokusflyet og åpne den meningsløse lederen.Flytt scenen og bruk markpunktknappen til å lagre koordinatene til minst 10 stillinger av interesse. Bytt kameravalen fra iPS til skjermen. Sett fokusplanet, og klikk erstatt punktknappen i den meningsløse til lederen for å kalibrere hvert punkt.Åpne eksperimentutformingen og fjern merket sykdomsstablingsboksen. Velg de riktige fluorescerende kanalene og de optimale elimineringsinnstillingene, og angi intervallene mellom bildeanskaffelsen og den totale tiden for eksperimentet. Aktiver fokusvedlikehold for de valgte posisjonene, og velg datamappen der bildefilene skal lagres automatisk.Kontroller alle innstillingene i mikroskopprogramvarekontrollen på nytt og start tidsforløpseksperimentet. Etter den første timen av eksperimentet, sjekk at alle scenen posisjoner er fortsatt i fokus. Når time-lapse eksperimentet er ferdig, fjerne Petri parabolen og kaste 35 millimeter parabolen med en agarose pad i henhold til de riktige bio-sikkerhetsprotokoller.For behandling av tidsforløpsbildedataene, overfør eksperimentelle data til en datamaskin lastet med Fiji-programvaren og åpne et bilde på Fiji. Velg visningsstakk med hyperstakk i importalternativer for bioformater. Velg automatisk skalering i komposittfargemodus.Ved å bla gjennom bildestablene vurdere om cellene og bdelloplasts forble fokus i løpet av eksperimentet. Hvorvidt de grønne fluorescerende flekkene fra DNA og mNeon grønn er til stede i B.bacteriovorus cellene inne i bdelloplasts gjennom vekstfasen og om alle stadier av rovlivssyklusen kan visualiseres. For å analysere en bestemt B.bacteriovorus celle bdelloplast, bruk et utvalgsverktøy for å markere cellen av interesse.Deretter dupliserer du det valgte området. Klikk prosess og glatt i det dupliserte bildet, og klikk bilde, farge, kanalverktøy og velg interessekanalen. Klikk deretter på bilde, justering og lysstyrkekontrast for å justere lysstyrken og kontrasten til bildet i hver kanal.Hvis du vil legge til en skaleringslinje, velger du analyser, verktøy og skaleringslinje. Hvis du vil legge til et tidsstempel i bildene, klikker du bilder, stabler og tidsstempler. Hvis du vil lagre de endrede bildene, velger du TIF.Hvis du vil lagre dataene som en bildesekvens, AVI for å produsere en film eller PNG for å lagre ett enkelt bilde av gjeldende ramme. Dette Time-Lapse Fluorescence mikroskopibaserte systemet gjør det mulig å spore individuelle B.bacteriovorus-celler i sanntid og gir verdifull informasjon om hvert trinn i den komplekse rovlivssyklusen. Den pillsy mCherry fusjon gjør at hele rovcellen kan merkes i angrepsfasen, så vel som i den tidlige fasen av vekstfasen.Overgangen fra angrepet til replikeringsfasen kan visualiseres ikke bare av verten bdelloplast formasjon, men også ved utseendet av replisom. Svarsomet er montert på den invaderende cellestangen, og mer enn én replisom kan observeres i en voksende B.bacteriovorus-filament etter hvert som reproduksjonsfasen utvikler seg. Når flere kopier av kromosomet er syntetisert, avsluttes replikeringen.Til slutt gjennomgår den multinukleerte filamentet septering og avkomcellene frigjøres fra bdelloplast. B.bacteriovorus cellene bør være materiale nok til å aktivt søke etter byttet sitt og hele celletettheten skal være høy nok til å tillate rovcellevedlegg. Denne plattformen kan være nyttig i eksperimenter som involverer multi-resistente patogener og for å lette forbedringer i genteknologi av B.bacteriovorus som levende antibiotika i menneskelig og veterinærmedisin.

Research

JoVE Journal

Biology

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Monitoring Actin Disassembly with Time-lapse Microscopy

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kvantitative Live-Cell fluorescens-mikroskopi Analyse av Fission gjær

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Quantitative Analysis of Random Migration of Cells Using Time-lapse Video Microscopy

Kvantitativ analyse av Random migrasjon av celler ved hjelp av Time-lapse video Mikroskopi

Cell migration is a dynamic process, which is important for embryonic development, tissue repair, immune system function, and tumor invasion 1, 2. During ...

Acquiring Fluorescence Time-lapse Movies of Budding Yeast and Analyzing Single-cell Dynamics using GRAFTS

Anskaffelse Fluorescens Time-lapse filmer av Spirende gjær og analysere encellede Dynamics bruke grafts

Fluorescence time-lapse microscopy has become a powerful tool in the study of many biological processes at the single-cell level. In particular, movies ...

Visualization of Craniofacial Development in the sox10: kaede Transgenic Zebrafish Line Using Time-lapse Confocal Microscopy

Visualisering av Kraniofacial Development i sox10: kaede Transgenic Sebrafisk linjen ved hjelp av Time-lapse konfokalmikroskopi

Vertebrate palatogenesis is a highly choreographed and complex developmental process, which involves migration of cranial neural crest (CNC) cells, ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Sporing av Hematopoietiske Stem og stamceller i Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Functional Imaging of Viral Transcription Factories Using 3D Fluorescence Microscopy

Funksjonell Imaging av Viral transkripsjon fabrikker bruker 3D fluorescens mikroskopi

It is well known that spatial and temporal regulation of genes is an integral part of governing proper gene expression. Consequently, it is invaluable to ...

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

En allsidig metode for montering Arabidopsis forlater Intravital tidsinnstilt bildebehandling

The plant immune response associated with a genome-wide transcriptional reprogramming is initiated at the site of infection. Thus, the immune response is ...