Name: live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy
Uploaded: 2020-05-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Denna studie stöddes av National Science Centre grant Opus 2018/29/B/NZ6/00539 till J.Z.C.

1. Beredning av B. bacteriovorus lysate för mikroskopisk analys
<ol><li>I en 250 mL-kolv, sätt upp kokulturen genom att kombinera 1 mL färsk 24 h B. bakteriovoruskultur (t.ex. HD100 DnaN-mNeonGreen/PilZ-mCherry) och 3 ml av byteskultur över natten (t.ex. E. coli S17-1 pZMR100) med 50 mL Ca-HEPES buffert (25 mM HEPES, 2 mM CaCl2 [pH = 7,6]) kompletteras med antibiotika när det behövs (här, 50 μg/mL kanamycin).</li>
	<li>Inkubera kokulturen i 24 h vid 30 °C med skakningar vi...

<ol>
	<li>Shatzkes, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predatory+Bacteria+Attenuate+Klebsiella+pneumoniae+Burden+in+Rat+Lungs.">Predatory Bacteria Attenuate Klebsiella pneumoniae Burden in Rat Lungs.</a> mBio. 7 (6), (2016).</li><li>Iebba, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bdellovibrio+bacteriovorus+directly+attacks+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus+Cystic+fibrosis+isolates.">Bdellovibrio bacteriovorus directly attacks Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Cystic fibrosis isolates.</a> Frontiers in Microbiology. 5, (2014).</li><li>Willis, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+Predatory+Bacteria+Work+Alongside+Host+Immune+Cells+to+Treat+Shigella+Infection+in+Zebrafish+Larvae.">Injections of Predatory Bacteria Work Alongside Host Immune Cells to Treat Shigella Infection in Zebrafish Larvae.</a> Current biology: CB. 26 (24), 3343-3351 (2016).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+flagellar+filament+and+the+role+of+motility+in+bacterial+prey-penetration+by+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Characterizing the flagellar filament and the role of motility in bacterial prey-penetration by Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Molecular Microbiology. 60 (2), 274-286 (2006).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Predatory+Patchwork:+Membrane+and+Surface+Structures+of+Bdellovibrio+bacteriovorus.">A Predatory Patchwork: Membrane and Surface Structures of Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Advances in Microbial Physiology. 54, 313-361 (2008).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+Chromosomal+Replication+in+Predatory+Bacterium+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Initiation of Chromosomal Replication in Predatory Bacterium Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1898 (2016).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+Chromosome+Replication+and+Its+Relationship+to+Predatory+Attack+Lifestyles+in+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Dynamics of Chromosome Replication and Its Relationship to Predatory Attack Lifestyles in Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Applied and Environmental Microbiology. 85 (14), (2019).</li><li>Fenton, A. K., Kanna, M., Woods, R. D., Aizawa, S. I., Sockett, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shadowing+the+actions+of+a+predator:+backlit+fluorescent+microscopy+reveals+synchronous+nonbinary+septation+of+predatory+Bdellovibrio+inside+prey+and+exit+through+discrete+bdelloplast+pores.">Shadowing the actions of a predator: backlit fluorescent microscopy reveals synchronous nonbinary septation of predatory Bdellovibrio inside prey and exit through discrete bdelloplast pores.</a> Journal of Bacteriology. 192 (24), 6329-6335 (2010).</li><li>Kuru, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+D-amino-acids+reveal+bi-cellular+cell+wall+modifications+important+for+Bdellovibrio+bacteriovorus+predation.">Fluorescent D-amino-acids reveal bi-cellular cell wall modifications important for Bdellovibrio bacteriovorus predation.</a> Nature Microbiology. 2 (12), 1648-1657 (2017).</li><li>Dashiff, A., Junka, R. A., Libera, M., Kadouri, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predation+of+human+pathogens+by+the+predatory+bacteria+Micavibrio+aeruginosavorus+and+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Predation of human pathogens by the predatory bacteria Micavibrio aeruginosavorus and Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Journal of Applied Microbiology. 110 (2), 431-444 (2011).</li></ol>

På grund av det ökade intresset för att använda B. bacteriovorus som ett levande antibiotikum behövs nya verktyg för att observera den rovlevande livscykeln, särskilt rovdjurspatogenaktioner. Det presenterade protokollet används för att spåra hela B. bacteriovorus livscykel, särskilt under sin tillväxt inuti värden, i realtid. Dessutom tillämpning av en stam som producerar fluorescerande taggade beta klämma av DNA polymeras III holoenzym aktiverat övervakning av kromosom replikering prog...

Bdellovibrio bakteriovorus är en liten (0,3– 0,5 μm med 0,5–1,4 μm) gramnegativ bakterie som lever på andra gramnegativa bakterier, inklusive skadliga patogener som Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa och Shigella flexneri1,2,3. Eftersom B. bacteriovorus dödar patogener, det anses vara en potentiell levande antibiotikum som kan tillämpas för att bekämpa bakteriella infektioner, särskilt de som orsakas av multiresistenta stammar.
B. bacteriovorus uppvisar en säregen livscykel som består av två faser: en fri-levande icke-replikiv attack fas och en intracellulär reproduktiv fas (Figur 1). I den fria levande fasen söker denna mycket motila bakterie, som rör sig med hastigheter på upp till 160 μm/s, efter sitt byte. Efter att ha fäst på bytets yttre membran kommer den in i periplasmen4,5. Under interperiplasmic reproduktiv fas, B. bacteriovorus använder en uppsjö av hydrolytiska enzymer för att försämra värdens makromolekyler och återanvända dem för sin egen tillväxt. Strax efter att ha invaderat periplasmen dör värdcellen och svällar in i en sfärisk struktur som kallas en bdelloplast, inuti vilken rovdjurscellen förlänger och replikerar sina kromosomer. Replikeringsprocessen startar vid replikeringsursprunget (oriC)6 och för fortlöper tills flera kopior av kromosomen har syntetiserats helt7. Intressant nog är replikering av varje kromosom inte följt av celldelning. Istället, rovdjuret elongates att bilda en lång, multinucleoid och fintrådiga cell. Vid näringsutarmning genomgår glödtråden synkron septation och avkommaceller frigörs från bdelloplasten8.
Innan B. bacteriovorus kan användas som en levande antibiotika mot bakteriella infektioner, är det viktigt att förstå de stora stadierna av sin livscykel, särskilt de som rör dess spridning inuti bytet. Live-cell imaging av B. bacteriovorus har varit utmanande, på grund av de olika morfologiska former av rovdjur och dess byte under den komplexa livscykeln. Hittills har interaktionerna mellan B. bacteriovorus och dess värdcell huvudsakligen studerats av elektronmikroskopi och snap-shot analys2,9,10, som båda har begränsningar, särskilt när de används för att övervaka successiva stadier av den rovgiriga livscykeln. Dessa metoder ger högupplösta bilder av B. bacteriovorus celler och möjliggöra observation av en liten rovdjur under attacken eller tillväxtfasen. De tillåter dock inte spårning av enstaka B. bacteriovorus celler under båda livscykelfaserna.
Presenteras här är ett omfattande protokoll för att använda time-lapse fluorescens mikroskopi (TLFM) för att övervaka den kompletta livscykeln för B. bacteriovorus. Ett system bestående av en agarospad används i kombination med en cell-avbildningsskål, där rovcellerna kan röra sig fritt under agarospaden medan de immobiliserade bytescellerna kan bilda bdelloplaster (Figur 2). Denna uppbyggnad är förberedd utifrån specifika stammar av både E. coli och B. bacteriovorus, men protokollet kan lätt ändras för att passa en användares individuella stammar (t.ex. bär olika selektion markörer, proteiner smält med olika fluoroforer, etc.).
I detta fall, att visualisera B. bacteriovorus under attacken fasen, en specifik stam (HD100 DnaN-mNeonGreen/PilZ-mCherry) konstruerades som uttrycker en fluorescerande taggade version av cytoplasmatiskt protein, PilZ (finns i vårt laboratorium på begäran)7. Detta anstränger dessutom jordbruksprodukter DnaN (denskjutna klämman för β-glidning), en subunit av DNA-polymerase III holoenzym, fixerat med ett fluorescerande protein. Detta gör det möjligt för pågående DNA-replikering att övervakas inuti de rovgiriga cellerna när de växer inom bdelloplaster.
Även om det beskrivna protokollet och programvara som används för bildanskaffning avser ett inverterat mikroskop som tillhandahålls av en specifik tillverkare (se Table of Materials), kan denna teknik justeras för alla inverterade mikroskop utrustad med en miljökammare eller annan extern värme hållare och kan time-lapse imaging. För dataanalys kan användare välja all tillgänglig programvara som är kompatibel med de enskilda utdataformaten.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61105/61105fig01.jpg"> Figur 1: B. bacteriovorus livscykel i E. coli som värdcell. Under attackfasen söker en fritt simmande B. bacteriovoruscell efter och fäster vid en värd E. coli-cell. Efter invasionen blir rovdjurscellen lokaliserad i bytets periplasm, vilket ändrar värdcellens form och bildar en bdelloplast. Reproduktionsfasen börjar med bdelloplastbildning. Rovcellen smälter bytescellen och återanvänder enkla föreningar för att bygga sina egna strukturer. B. bacteriovorus växer som en lång enda glödtråd inuti värdens periplasm. När bytescellens resurser är uttömda, septaterar och bildar B. bacteriovorusfilament och bildar avkommaceller. Efter avkomman celler utveckla sin flagella, de lyse bdelloplast. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61105/61105fig01large.jpg" target="_blank">Vänligen klicka här för att visa en större version av denna figur.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MPW MED. INSTRUMENTS</td>
			<td>MPW-260R</td>
			<td>Rotor ref. 12183</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CertifiedMolecular Biology Agarose</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>161-3100</td>
			<td>low fluorescence agarose for agarose pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>https://imagej.net/Fiji</td>
			<td>Open source image processing package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Dish 35 mm</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>81218-200</td>
			<td>uncoated glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>GE</td>
			<td>DeltaVision Elite</td>
			<td>Microtiter Stage, ultimate focus laser module, DV Elite CoolSnap HQ2 Camera, SSI assembly FP DV, kit obj. Oly 100x oil 1.4 NA, prism Nomarski 100x LWD DIC, ENV ctrl IX71 uTiter opaQ 240 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minisart Filter 0.45 &#181;m</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>16555----------K</td>
			<td>Cellulose Acetate, Sterile, Luer Lock Outlet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Start SoftWoRx</td>
			<td>GE</td>
			<td></td>
			<td>Manufacturer-supplied imaging software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy

Bdellovibrio bakterienovorus är en liten gramnegativ, obligate rovgiriga bakterie som dödar andra gramnegativa bakterier, inklusive skadliga patogener. Därför anses det vara en levande antibiotika. För att applicera B. bacteriovorus som ett levande antibiotikum är det först nödvändigt att förstå de stora stadierna av dess komplexa livscykel, särskilt dess spridning inuti byte. Hittills har det varit en utmaning att övervaka successiva stadier av den rovgiriga livscykeln i realtid. Presenteras här är ett omfattande protokoll för realtidsavbildning av den kompletta livscykeln för B. bacteriovorus, särskilt under sin tillväxt inuti värden. För detta ändamål används ett system bestående av en agarospad i kombination med cellavbildningsrätter, där rovcellerna kan röra sig fritt under agarospaden medan immobiliserade bytesceller kan bilda bdelloplaster. Tillämpningen av en stam som producerar en fluorescerande taggade β-subenhet av DNA-polymeras III ytterligare tillåter kromosom replikering övervakas under reproduktionsfasen av B. bacteriovorus livscykel.

Det beskrivna TLFM-baserade systemet gör att enskilda celler av B. bacteriovorus kan spåras i tid (Figur 3, Film 1) och ger värdefull information om varje steg i den komplexa rovlivscykeln. PilZ-mCherry-fusionen gör det möjligt att märka hela rovdjurscellen i attackfasen samt tidigt stadium av tillväxtfasen (figur 3). Övergången från attacken till replikativ fas visualiserades inte bara av värdbdelloplastbildningen utan ocks?...

Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Presenteras här är ett protokoll som beskriver övervakning av den fullständiga livscykeln för underprissättning bakterie bdellovibrio bakteriovorus med hjälp av time-lapse fluorescens mikroskopi i kombination med en agaros pad och cell-imaging rätter.

Live-Cell Imaging av livscykeln för bakteriell Predator Bdellovibrio bacteriovorus med hjälp av Time-Lapse Fluorescens mikroskopi

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...

Live-Cell Bdellovibrio bacteriovorus imaging har varit utmanande på grund av den komplexa livscykeln för dessa rovgiriga bakterier. Vårt protokoll tillåter övervakning av stadierna av fullständig livscykel i realtid. Även om vårt protokoll är baserad på en specifik utjämna stammar, kan det lätt anpassas till en mängd olika bakteriestammar inklusive patogena stammar.För att skapa en B.bacteriovorus kultur, kombinera en milliliter av färska 24-timmars odlade bakterier med tre milliliter över natten byte kultur i en 250 milliliter kolv som innehåller 50 milliliter kalcium hippies buffert kompletteras med antibiotika som behövs. Efter en 24 timmars inkubation vid 30 grader Celsius och 200 varv per minut, kontrollera att bytescellerna har helt lysts av flytande monterad ansiktskontrastmikroskopi. Ett flertal flera angrepp fasas B.bacteriovorus celler bör vara närvarande och ingen E.coli cell eller bdelloplast bör vara synliga.Sila B.bacteriovorus kulturen genom en 0,45 mikrometer porstorlek filter i en 50 milliliter koniska röret och avbryta ner filtratet i en centrifug. Sedan åter avbryta B.bacteriovorus pelleten i tre milliliter kalcium hippies buffert till en slutlig optisk densitet vid 600 nanometer på cirka 0,2 och inkubera bakterierna på 30 grader celsius och 200 varv per minut i 30 minuter. För att förbereda värdcellerna väljer du en enda koloni från värdstammen av intresse och att nodulera bakterierna i 10 milliliter YT-medium kompletterat med antibiotika som behövs för en övernattningsinkubation vid 37 grader Celsius och 180 varv per minut.Nästa morgon överför två milliliter av den över natten kulturen till ett två milliliter provrör och pellet cellerna genom centrifugation. Sedan åter avbryta pelleten i 200 mikroliter av kalcium hippies buffert. Det är mycket viktigt att helt åter upphäva hela cellpelletsen efter centrifugeringen för att se till att bytescellen separeras på encellsnivå.För att förbereda cellerna för time-lapse fluorescens mikroskopi, först, blanda 200 milligram låg fluorescerande molekylär kvalitet agarose med 20 milliliter kalcium hippies buffert och lösa upp agaros i en mikrovågsugn. Häll tre milliliter av den smälta agaros i en 35 millimeter glas botten skålen och låt agaros att stelna. Med hjälp av ett laboratorium mikro spatel, försiktigt bort agaros pad från skålen utan att störa mittpålen av dynan och placera dynan botten sidan upp på en Petriskål täcka.Placera fem mikroliter av den koncentrerade värdcellsupphängningen på den vända dynan och använd en inokuleringsslinga för att sprida celler i mittstången. Nästa lägga till fem mikroliter av koncentrerad B.bacteriovorus suspension på värdcellen belagda ytan utan att sprida och snabbt tillbaka gelen till 35 milliliter glas botten skålen övre sidan ner. Täck sedan skålen med lock.För Time-Lapse Florescence mikroskopi av samkultur, placera skålen i en Petriskål innehavaren så att skålen inte kommer att röra sig under loppet av experimentet och placera en droppe nedsänkning olja på inverterade mikroskop mål och en droppe på botten av skålen. Montera hållaren på mikroskopet scenen inom inverterad mikroskop kammaren och i mikroskopet programvara ställa förstoringen till 100X och polykrom lins till GFP och Mcherry. Med hjälp av en iPS i Brightfield, lokalisera fokalplanet och öppna den meningslösa chefen.Flytta scenen och använd markeringspunkternas knapp för att lagra koordinaterna för minst 10 intressepositioner. Växla kameran val från iPS till monitorn. Ställ in fokalplanet och klicka på knappen för att ersätta punkt i den meningslösa till chef för att kalibrera varje punkt.Öppna experimentdesignern och omarkerade sjukdomsstaplingslådan. Välj lämpliga lysrörskanaler och de optimala elimineringsinställningarna och ställ in intervallen mellan bildförvärvet och experimentets totala tid. Aktivera fokusunderhåll för de valda positionerna och välj den datamapp som bildfilerna ska sparas i automatiskt i.Kontrollera om alla inställningar i mikroskopet programvara kontroll och starta time-lapse experiment. Efter den första timmen av experimentet, kontrollera att alla av scenen positioner är fortfarande i fokus. När timelapse-experimentet är klart, ta bort Petri-skålen och kassera 35 millimeters skålen med en agarospad enligt lämpliga biosäkerhetsprotokoll.För bearbetning av timelapse-bilddata överför du de experimentella datan till en dator som laddats med Fiji-programvaran och öppnar en bild i Fiji. I importalternativ för bio-format väljer du Visa stack med hyperstack. I kompositfärgläge väljer du automatisk skala.Genom att bläddra igenom bildstackarna bedöma om cellerna och bdelloplasterna förblev i fokus under experimentets gång. Huruvida de gröna fluorescerande fläckar från DNA och mNeon gröna finns inom B.bacteriovorus cellerna inne i bdelloplasts hela tillväxtfasen och om alla stadier av den rovgiriga livscykeln kan visualiseras. För att analysera en viss B.bacteriovorus cell bdelloplast, använd ett markeringsverktyg för att markera den cell av intresse.Duplicera sedan den valda regionen. I den duplicerade bilden klickar du på process och smidig och för varje fluorescerande kanal, klicka på bild, färg, kanaler verktyg och välj kanal av intresse. Klicka sedan på bild, justera och ljusstyrka kontrast för att justera ljusstyrka och kontrast för bilden i varje kanal.Om du vill lägga till en skalningslist väljer du analysera, verktyg och skalningslist. Om du vill lägga till en tidsstämpel i bilderna klickar du på bilder, staplar och tidsstämplare. Om du vill spara de ändrade bilderna väljer du TIF.Om du vill spara data som en bildsekvens, AVI att producera en film, eller PNG för att spara en enda bild av den aktuella bildrutan. Detta Time-Lapse Fluorescens mikroskopi baserat system möjliggör realtid spårning av enskilda B.bacteriovorus celler och ger värdefull information om varje steg i komplexa rovdrift livscykel. Den pilly mCherry fusionen gör det möjligt för hela rovdjurscellen att märkas i attackfasen samt i det tidiga skedet av tillväxtfasen.Övergången från attacken till den replikiva fasen kan visualiseras inte bara av värden bdelloplastbildning utan också genom utseendet på den replisom. Den replisome är monterad vid den invaderande cellpolen och mer än en replisome kan observeras inom en växande B.bacteriovorus glödtråd som reproduktionsfasen fortskrider. Efter att flera kopior av kromosomen syntetiserats avslutas replikeringen.Slutligen genomgår den flerkärniga glödtråden septation och avkommacellerna frigörs från bdelloplasten. B.bacteriovorus cellerna bör vara tillräckligt material för att aktivt söka efter sitt byte och hela celltätheten bör vara tillräckligt hög för att tillåta rovdjur cell fastsättning. Denna plattform kan vara användbar i experiment som involverar multiresistenta patogener och för att underlätta förbättringar i gentekniken hos B.bacteriovorus som levande antibiotikum inom human- och veterinärmedicin.

Research

JoVE Journal

Biology

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Monitoring Actin Disassembly with Time-lapse Microscopy

Övervakning Actin demontering med Time-lapse Mikroskopi

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

Time-lapse avbildning av Mitos Efter siRNA Transfektion

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Mikroskopi av tidig embryogenesen i Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kvantitativa levande celler fluorescens-mikroskopi Analys av fissionsjäst

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Quantitative Analysis of Random Migration of Cells Using Time-lapse Video Microscopy

Kvantitativ analys av Random migration av celler med Time-lapse video Mikroskopi

Cell migration is a dynamic process, which is important for embryonic development, tissue repair, immune system function, and tumor invasion 1, 2. During ...

Acquiring Fluorescence Time-lapse Movies of Budding Yeast and Analyzing Single-cell Dynamics using GRAFTS

Förvärva Fluorescens Time-lapse filmer av knoppande jäst och analysera Encelliga Dynamics med transplantat

Fluorescence time-lapse microscopy has become a powerful tool in the study of many biological processes at the single-cell level. In particular, movies ...

Visualization of Craniofacial Development in the sox10: kaede Transgenic Zebrafish Line Using Time-lapse Confocal Microscopy

Visualisering av Kraniofaciala utveckling i sox10: Kaede Transgena Zebrafish Linje Använda Time-lapse konfokalmikroskopi

Vertebrate palatogenesis is a highly choreographed and complex developmental process, which involves migration of cranial neural crest (CNC) cells, ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Spårning av Hematopoietic Stem och stamceller i vuxen mus calvarial Benmärg

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Functional Imaging of Viral Transcription Factories Using 3D Fluorescence Microscopy

Funktionell avbildning av Viral transkription fabriker använder 3D fluorescensmikroskopi

It is well known that spatial and temporal regulation of genes is an integral part of governing proper gene expression. Consequently, it is invaluable to ...

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

En mångsidig metod för montering av Arabidopsis lämnar för Intravital Time-lapse Imaging

The plant immune response associated with a genome-wide transcriptional reprogramming is initiated at the site of infection. Thus, the immune response is ...