Name: real-time imaging of ccl5-induced migration of periosteal skeletal stem cells in mice
Uploaded: 2020-09-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-Time Imaging of CCL5-Induced Migration of Periosteal Skeletal Stem Cells in Mice at JoVE.com

इस काम को टेक्सास पुरस्कार के हड्डी रोग कार्यक्रम, कैरोलीन विस लॉ फंड अवार्ड, और पुरस्कार संख्या R01 AR072018, R21 AG064345, R01 CA221946 से D.P. के तहत राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थानों के NIAMS द्वारा समर्थित किया गया था।  हम बीसीएम ऑप्टिकल इमेजिंग और वाइटल माइक्रोस्कोपी कोर में एमई डिकिंसन और टीजे वडक्कन और एनआईएच (AI036211, CA125123, और DK056338) से वित्त पोषण के साथ बीसीएम उन्नत प्रौद्योगिकी कोर को धन्यवाद देते हैं।
.

सभी चूहों को रोगज़नक़ मुक्त स्थितियों में बनाए रखा गया था, और सभी प्रक्रियाओं को Baylor College of Medicine की Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया था।
1. माउस तैयारी
<ol><li>क्रॉस Mx1-Cre17 और Rosa26-loxP-stop-loxP-tdTomato</e...

<ol>
	<li>Einhorn, T. A., Gerstenfeld, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fracture+healing:+mechanisms+and+interventions.">Fracture healing: mechanisms and interventions.</a> Nature Reviews Rheumatology. 11 (1), 45-54 (2015).</li><li>Murao, H., Yamamoto, K., Matsuda, S., Akiyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periosteal+cells+are+a+major+source+of+soft+callus+in+bone+fracture.">Periosteal cells are a major source of soft callus in bone fracture.</a> Journal of Bone and Mineral Metabolism. 31 (4), 390-398 (2013).</li><li>Colnot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+cell+fate+decisions+within+periosteum+and+bone+marrow+during+bone+regeneration.">Skeletal cell fate decisions within periosteum and bone marrow during bone regeneration.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 24 (2), 274-282 (2009).</li><li>Roberts, S. J., van Gastel, N., Carmeliet, G., Luyten, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncovering+the+periosteum+for+skeletal+regeneration:+the+stem+cell+that+lies+beneath.">Uncovering the periosteum for skeletal regeneration: the stem cell that lies beneath.</a> Bone. 70, 10-18 (2015).</li><li>Duchamp de Lageneste, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periosteum+contains+skeletal+stem+cells+with+high+bone+regenerative+potential+controlled+by+Periostin.">Periosteum contains skeletal stem cells with high bone regenerative potential controlled by Periostin.</a> Nature Communications. 9 (1), 773 (2018).</li><li>Olivos-Meza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretreatment+of+periosteum+with+TGF-beta1+in+situ+enhances+the+quality+of+osteochondral+tissue+regenerated+from+transplanted+periosteal+grafts+in+adult+rabbits.">Pretreatment of periosteum with TGF-beta1 in situ enhances the quality of osteochondral tissue regenerated from transplanted periosteal grafts in adult rabbits.</a> Osteoarthritis Cartilage. 18 (9), 1183-1191 (2010).</li><li>Debnath, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+a+periosteal+stem+cell+mediating+intramembranous+bone+formation.">Discovery of a periosteal stem cell mediating intramembranous bone formation.</a> Nature. 562 (7725), 133-139 (2018).</li><li>Ransom, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axin2-expressing+cells+execute+regeneration+after+skeletal+injury.">Axin2-expressing cells execute regeneration after skeletal injury.</a> Scientific Reports. 6, 36524 (2016).</li><li>Ouyang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prx1+and+3.2kb+Col1a1+promoters+target+distinct+bone+cell+populations+in+transgenic+mice.">Prx1 and 3.2kb Col1a1 promoters target distinct bone cell populations in transgenic mice.</a> Bone. 58, 136-145 (2013).</li><li>Wilk, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+Calvarial+Skeletal+Stem+Cells+Expressing+PRX1+Reside+Exclusively+in+the+Calvarial+Sutures+and+Are+Required+for+Bone+Regeneration.">Postnatal Calvarial Skeletal Stem Cells Expressing PRX1 Reside Exclusively in the Calvarial Sutures and Are Required for Bone Regeneration.</a> Stem Cell Reports. 8 (4), 933-946 (2017).</li><li>Ortinau, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Functionally+Distinct+Mx1+alphaSMA++Periosteal+Skeletal+Stem+Cells.">Identification of Functionally Distinct Mx1+alphaSMA+ Periosteal Skeletal Stem Cells.</a> Cell Stem Cell. 25 (6), 784-796 (2019).</li><li>Deveza, L., Ortinau, L., Lei, K., Park, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+gene+expression+identifies+distinct+molecular+signatures+of+bone+marrow-+and+periosteal-skeletal+stem/progenitor+cells.">Comparative analysis of gene expression identifies distinct molecular signatures of bone marrow- and periosteal-skeletal stem/progenitor cells.</a> PLoS One. 13 (1), 0190909 (2018).</li><li>Schindeler, A., McDonald, M. M., Bokko, P., Little, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+remodeling+during+fracture+repair:+The+cellular+picture.">Bone remodeling during fracture repair: The cellular picture.</a> Seminars in Cell and Developmental Biology. 19 (5), 459-466 (2008).</li><li>Shi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gli1+identifies+osteogenic+progenitors+for+bone+formation+and+fracture+repair.">Gli1 identifies osteogenic progenitors for bone formation and fracture repair.</a> Cell Stem Cell. 15 (2), 782-796 (2017).</li><li>Zhou, B. O., Yue, R., Murphy, M. M., Peyer, J. G., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin-receptor-expressing+mesenchymal+stromal+cells+represent+the+main+source+of+bone+formed+by+adult+bone+marrow.">Leptin-receptor-expressing mesenchymal stromal cells represent the main source of bone formed by adult bone marrow.</a> Cell Stem Cell. 15 (2), 154-168 (2014).</li><li>Grcevic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+fate+mapping+identifies+mesenchymal+progenitor+cells.">In vivo fate mapping identifies mesenchymal progenitor cells.</a> Stem Cells. 30 (2), 187-196 (2012).</li><li>Kuhn, R., Schwenk, F., Aguet, M., Rajewsky, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+gene+targeting+in+mice.">Inducible gene targeting in mice.</a> Science. 269 (5229), 1427-1429 (1995).</li><li>Srinivas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre+reporter+strains+produced+by+targeted+insertion+of+EYFP+and+ECFP+into+the+ROSA26+locus.">Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus.</a> BMC Developmental Biology. 1, 4 (2001).</li><li>Park, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+bone+marrow+MSCs+are+dynamic,+fate-restricted+participants+in+bone+maintenance+and+regeneration.">Endogenous bone marrow MSCs are dynamic, fate-restricted participants in bone maintenance and regeneration.</a> Cell Stem Cell. 10 (3), 259-272 (2012).</li><li>Nitzsche, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+Review:+MSC+Adhesion+Cascade-Insights+into+Homing+and+Transendothelial+Migration.">Concise Review: MSC Adhesion Cascade-Insights into Homing and Transendothelial Migration.</a> Stem Cells. 35 (6), 1446-1460 (2017).</li><li>Adler, J., Pagakis, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reducing+image+distortions+due+to+temperature-related+microscope+stage+drift.">Reducing image distortions due to temperature-related microscope stage drift.</a> Journal of Microscopy. 210, 131-137 (2003).</li><li>Roberts, S. J., Ke, H. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anabolic+Strategies+to+Augment+Bone+Fracture+Healing.">Anabolic Strategies to Augment Bone Fracture Healing.</a> Current Osteoporosis Reports. 16 (3), 289-298 (2018).</li></ol>

हड्डी के उपचार के दौरान, पेरिओस्टेल कोशिकाएं एक चोट callus3 के भीतर नए विभेदित चोंड्रोसाइट्स और ओस्टियोब्लास्ट्स का मुख्य स्रोत हैं। अस्थि मज्जा के समान, osteogenic / chondrogenic एसएससी को भी पेरिओस्टेम<...

फ्रैक्चर मरम्मत एक गतिशील, बहुकोशिकीय प्रक्रिया है जो भ्रूण कंकाल के विकास और रीमॉडलिंग से अलग है। इस प्रक्रिया के दौरान, क्षतिग्रस्त ऊतक से चोट के संकेतों के प्रेरण के बाद कंकाल स्टेम / पूर्वज कोशिकाओं की तेजी से भर्ती, प्रसार और बाद के भेदभाव का पालन किया जाता है, जो फ्रैक्चर 1 की समग्र स्थिरता और निर्धारण के लिए सभी महत्वपूर्ण हैं। विशेष रूप से, फ्रैक्चर हीलिंग के शुरुआती चरणों में नरम कैलस गठन की आवश्यकता होती है, जिसे मुख्य रूप से पेरिओस्टेल निवासी कोशिकाओं के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता है2। जब हड्डियां घायल हो जाती हैं, तो पेरिओस्टेल कोशिकाओं का एक सबसेट तेजी से प्रतिक्रिया करता है और कॉलस 3 के भीतर नए विभेदित उपास्थि मध्यवर्ती और ओस्टियोब्लास्ट में योगदान देता है, जो पेरिओस्टियम के भीतर एक अलग कंकाल स्टेम / पूर्वज सेल आबादी की उपस्थिति को फंसाता है। इसलिए, पेरिओस्टेम-निवासी कंकाल स्टेम कोशिकाओं (एसएससी) की पहचान और कार्यात्मक लक्षण वर्णन अपक्षयी हड्डी रोगों और हड्डी के दोषों के लिए एक आशाजनक चिकित्सीय दृष्टिकोण का गठन करता है।
एसएससी को अस्थि मज्जा सहित कई ऊतक स्थानों में रहने के लिए माना जाता है। अस्थि मज्जा के समान, osteogenic / chondrogenic एसएससी को भी पेरिओस्टेम 4,5,6 में पहचाना गया है।  भ्रूण की हड्डी के विकास के दौरान इन पेरिओस्टेल एसएससी (पी-एसएससी) को प्रारंभिक मेसेनकाइमल वंश मार्करों (यानी, Prx1-Cre5, Ctsk-Cre7, और Axin2-CreER8) के साथ लेबल किया जा सकता है। इन एकल आनुवंशिक वंश अनुरेखण मॉडल की एक महत्वपूर्ण सीमा यह है कि लेबल किए गए सेल आबादी के भीतर पर्याप्त विषमता है। इसके अलावा, वे लेबल किए गए एसएससी को विवो में अपनी संतानों से अलग नहीं कर सकते हैं। इस सीमा को संबोधित करने के लिए, हमने हाल ही में अस्थि मज्जा एसएससी (बीएम-एसएससी) 11 से पी-एसएससी को स्पष्ट रूप से कल्पना करने के लिए एक दोहरी रिपोर्टर माउस (Mx1-Cre + Rosa26-Tomato + α SMA-GFP +) विकसित किया है। इस मॉडल के साथ, यह निर्धारित किया गया है कि पी-एसएससी को Mx1 + αSMA + दोहरी लेबलिंग द्वारा चिह्नित किया गया है, जबकि अधिक विभेदित Mx1 + कोशिकाएं अस्थि मज्जा, एंडोस्टेल और पेरिओस्टेल सतहों, और कॉर्टिकल और ट्रैबेक्यूलर हड्डियों 11,12 में रहती हैं।
एकाधिक साइटोकिन्स और विकास कारकों को हड्डी remodeling और मरम्मत को विनियमित करने के लिए जाना जाता है और महत्वपूर्ण खंड दोष1,13 में कंकाल की मरम्मत की वृद्धि के लिए परीक्षण किया गया है। हालांकि, हड्डी के डिब्बे के शारीरिक बाधा के विघटन के माध्यम से उत्पन्न चोट मॉडल की सेलुलर जटिलता के कारण, अंतर्जात पी-एसएससी माइग्रेशन और उपचार के दौरान सक्रियण पर इन अणुओं के प्रत्यक्ष प्रभाव अस्पष्ट हैं। एसएससी की कार्यात्मक विशेषताओं और प्रवासी गतिशीलता का मूल्यांकन अक्सर एक ट्रांसवेल या खरोंच परख करके विट्रो में किया जाता है, साइटोकिन्स या विकास कारकों के साथ संयोजन में अन्य सेल आबादी में प्रवास को प्रेरित करने के लिए जाना जाता है। इस प्रकार, विवो सिस्टम में उनके अनुरूप में आवेदन के लिए इन इन विट्रो प्रयोगों से परिणामों की व्याख्या चुनौतीपूर्ण है। वर्तमान में, कंकाल स्टेम / पूर्वज सेल माइग्रेशन के विवो मूल्यांकन में आमतौर पर वास्तविक समय में नहीं देखा जाता है; बल्कि, यह फ्रैक्चर के बाद के निश्चित समय बिंदुओं पर मापा जाता है5,7,14,15,16.
इस विधि की एक सीमा यह है कि माइग्रेशन का मूल्यांकन एकल-सेल स्तर पर नहीं किया जाता है; बल्कि, यह सेल आबादी में परिवर्तन के माध्यम से मापा जाता है। लाइव पशु इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी और अतिरिक्त रिपोर्टर चूहों की पीढ़ी में हाल ही में प्रगति के कारण, व्यक्तिगत कोशिकाओं की विवो ट्रैकिंग में अब संभव है। जीवित पशु इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी का उपयोग करते हुए, हमने एमएक्स 1 / टमाटर / αSMA-GFP चूहों में 24-48 घंटे के बाद की चोट के भीतर एक हड्डी की चोट के लिए कैल्वरिया सीवन आला से पी-एसएससी के अलग-अलग प्रवास को देखा।
CCL5/CCR5 को हाल ही में प्रारंभिक चोट प्रतिक्रिया के दौरान भर्ती और सक्रियण P-SC को प्रभावित करने वाले एक नियामक तंत्र के रूप में पहचाना गया था। दिलचस्प बात यह है कि वास्तविक समय में चोट के जवाब में पर्याप्त पी-एसएससी माइग्रेशन का कोई पता नहीं चला था। हालांकि, सीसीएल 5 के साथ एक चोट का उपचार पी-एसएससी के एक मजबूत, दिशात्मक रूप से अलग प्रवास का उत्पादन करता है, जिसे वास्तविक समय में कैप्चर किया जा सकता है। इसलिए, इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य सीसीएल 5 के साथ उपचार के बाद वास्तविक समय में पी-एसएससी के इन विवो माइग्रेशन को रिकॉर्ड करने के लिए एक विस्तृत पद्धति प्रदान करना है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:720px;" width="719">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">&#189;&#8221; optical post</td>
			<td style="width:175px;">ThorLabs</td>
			<td style="width:135px;">TR2</td>
			<td style="width:247px;">For imaging mount</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">1 mL syringe</td>
			<td style="width:175px;">BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">27G needle</td>
			<td style="width:175px;">BD PercisionGlide</td>
			<td>305111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">29G insulin syringe</td>
			<td style="width:175px;">McKesson</td>
			<td>102-SN05C905P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">50 mL conicol tube</td>
			<td style="width:175px;">Falcon</td>
			<td>352098</td>
			<td>For mouse restraint</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">Adjustable angle plate</td>
			<td style="width:175px;">Renishaw</td>
			<td>R-PCA-5023-50-20</td>
			<td>For imaging mount</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">Alcohol wipes</td>
			<td style="width:175px;">Coviden</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">betadine surgical scrub</td>
			<td style="width:175px;">Henry Schen</td>
			<td>67618-151-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">Buprenorphine SR-LAB</td>
			<td style="width:175px;">ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td>1mg/mL Sustained Release</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:164px;">Combo III</td>
			<td style="width:175px;">Obtained from staff veterinarian</td>
			<td>N/A</td>
			<td style="width:247px;">37.6 mg/mL Ketamine; 1.9 mg/mL Xylazine; 0.37 mg/mL Acepronazine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">Coverslip</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td>12-545-87</td>
			<td>24 x 40 premium superslip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">Fine tip forcepts</td>
			<td style="width:175px;">FST</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">Ketamine</td>
			<td style="width:175px;">KetaVed</td>
			<td>50989-161-06</td>
			<td style="width:247px;">100 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:164px;">Leica TCS SP8MP with DM6000CFS</td>
			<td style="width:175px;">Leica Microsystems</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">Matrigel</td>
			<td style="width:175px;">R &#38; D Systems</td>
			<td>344500101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:164px;">Medical tape</td>
			<td style="width:175px;">McKesson</td>
			<td>100199</td>
			<td>3&#34; x 10 yds (7.6 cm x 9.1 m)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:164px;">Methocellulose</td>
			<td style="width:175px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19560</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:164px;">Microdissection scissors</td>
			<td style="width:175px;">FST</td>
			<td>1456-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">Motorized stage</td>
			<td style="width:175px;">Anaheim automation</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">Needle holder</td>
			<td style="width:175px;">FST</td>
			<td>12500-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:164px;">Nonabsorbable sutures</td>
			<td style="width:175px;">McKesson</td>
			<td>S913BX</td>
			<td style="width:247px;">monofilament nylon 5-0 nonabsorbable sutures with attached C-1 reverse cutting needle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">Opthalmic ointment</td>
			<td style="width:175px;">Rugby</td>
			<td>0536-1086-91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">RANTES</td>
			<td style="width:175px;">Biolegend</td>
			<td>594202</td>
			<td>10 &#181;g/50 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:164px;">Right-angle clamp for &#189;&#8221; post, 3/16&#8221; Hex</td>
			<td style="width:175px;">ThorLabs</td>
			<td>RA90</td>
			<td>For imaging mount</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:164px;">Spring-loaded 3/16&#8221; Hex-locking &#188;&#8221; thumbscrew</td>
			<td style="width:175px;">ThorLabs</td>
			<td>TS25H</td>
			<td>For imaging mount</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">Sterile cotton swabs</td>
			<td style="width:175px;">Henry Schen</td>
			<td>100-9249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">Sterile DPBS (1x)</td>
			<td style="width:175px;">Corning</td>
			<td>21-030-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="71">
			<td height="71" style="height:71px;width:164px;">Sterile drapes</td>
			<td style="width:175px;">McKessen</td>
			<td>25-517</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:164px;">Surgical gloves</td>
			<td style="width:175px;">McKessen</td>
			<td>3158VA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:164px;">Triple antibiotic ointment</td>
			<td style="width:175px;">Taro Pharmaceuticals U.s.a., Inc.</td>
			<td>51672-2120-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:164px;">Vacutainer blood collection set</td>
			<td style="width:175px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">REF 367298</td>
			<td style="width:247px;">25G butterfly needle infusion set with 12&#34; tubing</td>
		</tr>
	</tbody>
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real-time imaging of ccl5-induced migration of periosteal skeletal stem cells in mice

पेरिओस्टेल कंकाल स्टेम सेल (पी-एसएससी) आजीवन हड्डी के रखरखाव और मरम्मत के लिए आवश्यक हैं, जिससे उन्हें फ्रैक्चर उपचार को बढ़ाने के लिए उपचार के विकास के लिए एक आदर्श ध्यान केंद्रित किया जाता है।  पेरिओस्टेल कोशिकाएं फ्रैक्चर उपचार के लिए नए चोंड्रोसाइट्स और ओस्टियोब्लास्ट की आपूर्ति करने के लिए तेजी से एक चोट में स्थानांतरित होती हैं। परंपरागत रूप से, सेल माइग्रेशन को प्रेरित करने के लिए एक साइटोकाइन की प्रभावकारिता केवल एक ट्रांसवेल या खरोंच परख प्रदर्शन करके विट्रो में आयोजित की गई है। मल्टीफोटॉन उत्तेजना का उपयोग करके इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी में प्रगति के साथ, यह हाल ही में पता चला था कि 1) पी-एसएससी प्रवासी जीन सीसीआर 5 को व्यक्त करते हैं और 2) सीसीआर 5 लिगैंड के साथ उपचार जिसे सीसीएल 5 के रूप में जाना जाता है, फ्रैक्चर उपचार में सुधार करता है और सीसीएल 5 के जवाब में पी-एसएससी के प्रवास में सुधार करता है। इन परिणामों को वास्तविक समय में कैप्चर किया गया है। यहां वर्णित एक प्रोटोकॉल है जो सीसीएल 5 के साथ उपचार के बाद चोट की ओर कैल्वेरियल सीवन कंकाल स्टेम सेल (एसएससी) आला से पी-एसएससी माइग्रेशन की कल्पना करने के लिए है। प्रोटोकॉल एक माउस संयम और इमेजिंग माउंट के निर्माण, माउस calvaria की शल्य चिकित्सा तैयारी, एक calvaria दोष के प्रेरण, और समय अंतराल इमेजिंग के अधिग्रहण का विवरण देता है।

कंकाल पूर्वजों को प्रवासी या संचार क्षमता 20 होने का प्रस्ताव दिया गया है। हाल ही में, Mx1-Cre+ Rosa26-Tomato+α SMA-GFP+ (Mx1/Tomato/αSMA-GFP) रिपोर्टर चूहों को उत्पन्न किया गया था, जिसमें P-SSCs को Mx1+</...

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Real-Time Imaging of CCL5-Induced Migration of Periosteal Skeletal Stem Cells in Mice

यह प्रोटोकॉल जीवित पशु इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके वास्तविक समय में सीसीएल 5-मध्यस्थता पेरिओस्टेल स्केलेटल स्टेम सेल माइग्रेशन का पता लगाने का वर्णन करता है।

चूहों में पेरिओस्टेल कंकाल स्टेम कोशिकाओं के सीसीएल 5-प्रेरित प्रवासन की वास्तविक समय इमेजिंग

Periosteal skeletal stem cells (P-SSCs) are essential for lifelong bone maintenance and repair, making them an ideal focus for the development of ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

मानव कंकाल की मांसपेशी से प्राथमिक myogenic कोशिकाओं और fibroblasts के अलगाव और मात्रात्मक Immunocytochemical विशेषता

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

क्षैतिज पूरे माउंट: मोटा, तीन आयामी ऊतक के लिए एक उपन्यास प्रसंस्करण और इमेजिंग प्रोटोकॉल

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

चोट प्रेरित वार्धक्य के मूल्यांकन और कंकाल की मांसपेशी में Vivo reprogramming में

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

विकास में रीयल-टाइम कल्पना करने के लिए बहु फोटॉन समय चूक इमेजिंग: Zebrafish भ्रूण में न्यूरल क्रेस्ट कोशिकाओं पलायन का दृश्य

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

सिंगल सेल Photoconversion में रह Zebrafish बरकरार

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Pax7 और Laminin एंटीबॉडी के साथ इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा कंकाल मांसपेशी उपग्रह कोशिकाओं की पहचान

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

नाभिक, प्रोटीन, और Cytoskeleton के वितरण का अध्ययन करने के लिए Caenorhabditis एलिगेंस Germline का अभिकलनी विश्लेषण

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

मानव प्रेरित Pluripotent स्टेम सेल से Somite डेरिवेटिव के विट्रो पीढ़ी में

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

पराबैंगनी-सी (यूवी-सी) क्षति के जवाब में प्राथमिक माउस नेत्र सतह कोशिकाओं/स्टेम सेल में ऑक्सीडेटिव क्षति का आकलन

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

Performing Human Skeletal Muscle Xenografts in Immunodeficient Mice

प्रतिरक्षा कमी चूहे में मानव कंकाल मांसपेशी Xenografts प्रदर्शन

Treatment effects observed in animal studies often fail to be recapitulated in clinical trials. While this problem is multifaceted, one reason for this ...