Name: rapid and cost-effective rna extraction of rat pancreatic tissue
Uploaded: 2020-09-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rapid and Cost-Effective RNA Extraction of Rat Pancreatic Tissue at JoVE.com

Denne undersøgelse blev støttet økonomisk af Shiraz University of Medical Sciences (Grant No. 93-01-01-7178\03-07-2014). Vi takker Mr. Zomorodian og Mr. Rostami på Institut for e-Learning i Medical Sciences, Virtual School og Center of Excellence i e-Learning, Shiraz University of Medical Sciences for redigering af videoen.

Etisk godkendelse af denne undersøgelse blev indhentet fra Shiraz University of Medical Sciences (Godkendelsesnummer: 93-01-01-7178\03-07-2014). approval
BEMÆRK: Brug mandlige Sprague-Dawley rotter vejer 250 g. Hætteglassen, der indeholder en splint af pancreas væv nedsænket i RNA stabilisere reagens i en flydende nitrogentank ved -80 °C og bruge RNA ekstraktion reagens opløsning til at opretholde integriteten af RNA.
1. Fjernelse af rotte pan...

<ol>
	<li>McCarthy, B., Hoyer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identity+of+DNA+and+diversity+of+messenger+RNA+molecules+in+normal+mouse+tissues.">Identity of DNA and diversity of messenger RNA molecules in normal mouse tissues.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 52 (4), 915-922 (1964).</li><li>Tan, S. C., Yiap, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA,+RNA,+and+protein+extraction:+the+past+and+the+present.">DNA, RNA, and protein extraction: the past and the present.</a> BioMed Research International. 2009, (2009).</li><li>Peirson, S. N., Butler, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+extraction+from+mammalian+tissues.">RNA extraction from mammalian tissues.</a> Circadian Rhythms: Methods and Protocols. , 315-327 (2007).</li><li>Skidmore, A. F., Beebee, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+use+of+the+potent+ribonuclease+inhibitor+aurintricarboxylic+acid+for+the+isolation+of+RNA+from+animal+tissues.">Characterization and use of the potent ribonuclease inhibitor aurintricarboxylic acid for the isolation of RNA from animal tissues.</a> Biochemical Journal. 263 (1), 73-80 (1989).</li><li>Mukhopadhyay, T., Roth, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+total+RNA+from+tissues+or+cell+lines:+visualization+in+gel.">Isolation of total RNA from tissues or cell lines: visualization in gel.</a> RNA Isolation and Characterization Protocols. , 55-59 (1998).</li><li>Raeymaekers, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+PCR:+theoretical+considerations+with+practical+implications.">Quantitative PCR: theoretical considerations with practical implications.</a> Analytical Biochemistry. 214 (2), 582-585 (1993).</li><li>Sparmann, G., J&#228;schke, A., Loehr, M., Liebe, S., Emmrich, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+homogenization+as+a+key+step+in+extracting+RNA+from+human+and+rat+pancreatic+tissue.">Tissue homogenization as a key step in extracting RNA from human and rat pancreatic tissue.</a> Biotechniques. 22 (3), 408 (1997).</li><li>Kiba, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-quality+RNA+extraction+from+rat+pancreas+for+microarray+analysis.">High-quality RNA extraction from rat pancreas for microarray analysis.</a> Pancreas. 35 (1), 98-100 (2007).</li><li>Gill, S. S., Aubin, R. A., Bura, C. A., Curran, I. H., Matula, T. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ensuring+recovery+of+intact+RNA+from+rat+pancreas.">Ensuring recovery of intact RNA from rat pancreas.</a> Molecular Biotechnology. 6 (3), 359-362 (1996).</li><li>Hernandez, G. E., Mondala, T. S., Head, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+a+novel+room+temperature+RNA+storage+medium+for+compatibility+in+microarray+gene+expression+analysis.">Assessing a novel room temperature RNA storage medium for compatibility in microarray gene expression analysis.</a> Biotechniques. 47 (2), 667 (2009).</li><li>Mullin, A. E., Soukatcheva, G., Verchere, C. B., Chantler, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+in+situ+ductal+perfusion+to+facilitate+isolation+of+high-quality+RNA+from+mouse+pancreas.">Application of in situ ductal perfusion to facilitate isolation of high-quality RNA from mouse pancreas.</a> Biotechniques. 40 (5), 617 (2006).</li><li>Li, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+method+using+TRIzol+reagent+and+liquid+nitrogen+produces+high-quality+RNA+from+rat+pancreas.">A modified method using TRIzol reagent and liquid nitrogen produces high-quality RNA from rat pancreas.</a> Applied Biochemistry and Biotechnology. 158 (2), 253-261 (2009).</li><li>Griffin, M., Abu-El-Haija, M., Abu-El-Haija, M., Rokhlina, T., Uc, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+and+versatile+method+for+obtaining+high+quality+rna+from+pancreas.">A simplified and versatile method for obtaining high quality rna from pancreas.</a> Biotechniques. 52 (5), 332 (2012).</li><li>Jun, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+optimization+for+extracting+high-quality+RNA+from+the+human+pancreas+tissue.">Method optimization for extracting high-quality RNA from the human pancreas tissue.</a> Translation Oncology. 11 (3), 800-807 (2018).</li><li>Green, M. R., Sambrook, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+win+the+battle+with+RNase.">How to win the battle with RNase.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (2), 101857 (2019).</li><li>Li, D. -. S., Yuan, Y. -. H., Tu, H. -. J., Dai, L. -. j. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas.">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1649 (2009).</li><li>Armstrong, J. A., Schulz, J. R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agarose+gel+electrophoresis.">Agarose gel electrophoresis.</a> Current Protocol: Essential Laboratory Techniques. (1), 1-20 (2008).</li><li>Aranda, P. S., LaJoie, D. M., Jorcyk, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleach+gel:+a+simple+agarose+gel+for+analyzing+RNA+quality.">Bleach gel: a simple agarose gel for analyzing RNA quality.</a> Electrophoresis. 33 (2), 366-369 (2012).</li><li>Sambrook, J., Fritsch, E. F., Maniatis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cloning:+a+laboratory+manual.">Molecular cloning: a laboratory manual.</a> Cold spring harbor laboratory press. , (1989).</li><li>Potenza, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybridase+activity+of+human+ribonuclease-1+revealed+by+a+real-time+fluorometric+assay.">Hybridase activity of human ribonuclease-1 revealed by a real-time fluorometric assay.</a> Nucleic Acids Research. 34 (10), 2906-2913 (2006).</li><li>Jackson, D., Lewis, F., Taylor, G., Boylston, A., Quirke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+extraction+of+DNA+and+RNA+and+analysis+by+the+polymerase+chain+reaction.">Tissue extraction of DNA and RNA and analysis by the polymerase chain reaction.</a> Journal of Clinical Pathology. 43 (6), 499-504 (1990).</li><li>Quesada, I., Tudur&#237;, E., Ripoll, C., Nadal, &. #. 1. 9. 3. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+the+pancreatic+&#945;-cell+and+glucagon+secretion:+role+in+glucose+homeostasis+and+diabetes.">Physiology of the pancreatic &#945;-cell and glucagon secretion: role in glucose homeostasis and diabetes.</a> Journal of Endocrinology. 199 (1), 5-19 (2008).</li><li>Quertinmont, E., Nicaise, C., Gustot, T., Deviere, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Homogenization+with+the+MagNA+Lyser+Instrument+for+Total+RNA+Extraction+Using+the+TriPure+Reagent.">Tissue Homogenization with the MagNA Lyser Instrument for Total RNA Extraction Using the TriPure Reagent.</a> Liver (mg). 100 (100), 100 (2004).</li><li>Dastgheib, S., Irajie, C., Assaei, R., Koohpeima, F., Mokarram, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+RNA+extraction+from+rat+pancreatic+tissue.">Optimization of RNA extraction from rat pancreatic tissue.</a> Iranian Journal of Medical Sciences. 39 (3), 282 (2014).</li></ol>

I molekylærbiologi er det vigtigt at opnå RNA af høj kvalitet. Tilstedeværelsen af ribonucleaseenzymer i celler og væv nedbryder hurtigt RNA og gør ekstraktionskomplekset. RNases er stabile enzymer, der fungerer uden co-faktorer. Små mængder RNase er tilstrækkelige til at ødelægge RNA. Når rotte pancreas væv fjernes fra bughulen, er det nødvendigt at desinficere de kirurgiske instrumenter ved stærke rengøringsmidler, skylle dem grundigt og læg dem i en ovn i mindst 4 timer ved 240 °C for at inaktivere R...

Strukturelle gendata kan transskriberes til et funktionelt produkt gennem genekspression. RNA-analyse bruges til at opdage forskelle i genekspression på tværs af forskellige forhold. Der findes en række metoder til ekstraktion af nukleinsyrer som følger: guanidinium thiocyanat, ekstraktion via phenol-chloroform, cellulosebaseret kromatografi, ekstraktion af silicamatrater og anionudveksling1,2.
Korrekt påvisning af genekspression påvirkes af RNA's integritet isoleret fra væv; Derfor er det vigtigt at evaluere integriteten af RNA isoleret fra væv, før yderligere test udføres, fordi supplerende molekylære test på lav kvalitet RNA kan bringe diagnostiske applikationsresultater. Således høj integritet RNA er nødvendig for molekylære biologiske tests med forskellige diagnostiske anvendelser: kvantitative RT-PCR, mikro-arrays, ribonuclease beskyttelse assay, nordlige blot analyse, RNA kortlægning, og cDNA bibliotek konstruktion3,4.
RNA bliver temmelig ustabil efter at være blevet holdt i lang tid. Lange mRNA-fragmenter over 10 kb er særligt modtagelige fornedbrydning 5,6. Således, forskere skal overveje forskellige faktorer, der påvirker integriteten af renset RNA. Renheden af RNA skal beskyttes mod RNases, proteiner, genomisk DNA og enzymatisk inhibitorforurening. Desuden skal det bedste og acceptable absorptionsforhold RNA til UV (260/280) være inden for intervallet 1,8-2,0 med minimal fragmentering over elektroforese. Nyligt udviklede laboratorieteknikker har gjort det muligt for forskerne at vurdere integriteten af den molekylære analyseprøve merepraktisk 7,8.
Det er meget vanskeligere at udtrække ubeskadiget RNA fra pancreas væv end andre typer af væv på grund af den høje mængde af ribonukleaser (RNases). Men, eksisterende ekstraktionsmetoder, nemlig den hurtige udslyngning af bugspytkirtlen væv fra bughulen og homogenisering ved lave temperaturer for at hindre RNases, har vist sigineffektiv 7,8,,9,,10,11,12,13,14.
Formålet med denne sammenlignende forsøgsundersøgelse er at ændre og sammenligne eksisterende metoder til bestemmelse af de mest effektive metoder. Med henblik herpå blev forskellige protokoller for RNA-ekstraktion ændret og sammenlignet. Det var specifikt rettet mod bestemmelse af den billigste metode, der kræver et minimum af pancreas væv.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>116801</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atoclave</td>
			<td>Teb Zaim</td>
			<td></td>
			<td>Iran</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Merck</td>
			<td>107024</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethylpyrocarbonate (DEPC)-treated water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>sigma</td>
			<td>60-00-4</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis tank</td>
			<td>Payapajoohesh</td>
			<td></td>
			<td>Iran</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf microTube</td>
			<td>Extragene</td>
			<td></td>
			<td>Taiwan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EtBr</td>
			<td>sigma</td>
			<td>E 8751</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>81870</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Tube</td>
			<td>Extragene</td>
			<td></td>
			<td>Taiwan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Merck</td>
			<td>344198</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formamide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>344206</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer-sunicator</td>
			<td>Microson XL 2000</td>
			<td></td>
			<td>USA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>sigma</td>
			<td>19516</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride</td>
			<td>sigma</td>
			<td>1867-66-9</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>Jal Tajhiz</td>
			<td></td>
			<td>Iran</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mgnetic stirrer</td>
			<td>Labrotechnik</td>
			<td></td>
			<td>USA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette Tips</td>
			<td>Extragene</td>
			<td></td>
			<td>Taiwan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MOPS</td>
			<td>sigma</td>
			<td>85022106</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na AC</td>
			<td>Merck</td>
			<td>567422</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Merck</td>
			<td>109137</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven</td>
			<td>Teb Zaim</td>
			<td></td>
			<td>Iran</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PH meter</td>
			<td>Knick</td>
			<td></td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA Later/RNA stabilization reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>76104</td>
			<td>USA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical instrument</td>
			<td>Agn Thos</td>
			<td></td>
			<td>German made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes</td>
			<td>AvaPezeshk</td>
			<td></td>
			<td>Iran</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TriPure reagent/RNA extraction reagent</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11667157001</td>
			<td>USA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>Labinco</td>
			<td></td>
			<td>Netherland</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Memmert</td>
			<td></td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>zylazine</td>
			<td>sigma</td>
			<td>7361-61-7</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rapid and cost-effective rna extraction of rat pancreatic tissue

Uanset ekstraktionsmetoden udføres optimeret RNA-ekstraktion af væv og cellelinjer i fire faser: 1) homogenisering, 2) effektiv denaturering af proteiner fra RNA, 3) ribonuclease inaktivering og 4) fjernelse af forurening fra DNA, proteiner og kulhydrater. Men det er meget besværligt at opretholde integriteten af RNA, når der er høje niveauer af RNase i vævet. Spontan autolyse gør det meget vanskeligt at udtrække RNA fra pancreas væv uden at beskadige det. Således, en praktisk RNA ekstraktion metode er nødvendig for at opretholde integriteten af pancreas væv under ekstraktionsprocessen. En eksperimentel og sammenlignende undersøgelse af eksisterende protokoller blev udført ved at opnå 20-30 mg rotte pancreas væv i mindre end 2 minutter og udvinde RNA. Resultaterne blev vurderet ved elektroforese. Forsøgene blev udført tre gange med hensyn til generalisering af resultaterne. Nedsænkning pancreas væv i RNA stabilisering reagens ved -80 °C i 24 h gav høj integritet RNA, når RNA ekstraktion reagens blev brugt som reagens. De opnåede resultater var sammenlignelige med resultaterne fra kommercielle kits med spin kolonne bindinger.

Vurdering af RNA's integritet i RNA-ekstraktionsgenren i henhold til en rutinemæssig og modificeret kirurgisk protokol uden RNA-stabiliseringsgense Der blev observeret uacceptable bånd efter ekstraktion af RNA med RNA-ekstraktionsreagesen fra en rutinemæssig kirurgisk protokol. Vognbane 1 viser RNA fra leveren som en kontrol. Vognbane 2 viser den forringede status for 28S/18S rRNA-bånd i total RNA fra en rutinemæssig kirurgisk protokol. Når mængden af pancreas væv blev reduceret til 50 mg (lan...

Watch this Scientific Journal Video about Rapid and Cost-Effective RNA Extraction of Rat Pancreatic Tissue at JoVE.com

Rapid and Cost-Effective RNA Extraction of Rat Pancreatic Tissue

Renheden og integriteten af det isolerede RNA er et afgørende skridt i RNA-afhængige analyser. Her præsenterer vi en praktisk, hurtig og billig metode til at udtrække RNA fra en lille mængde ubeskadiget pancreas væv.

Hurtig og omkostningseffektiv RNA udvinding af rotte pancreas væv

Regardless of the extraction method, optimized RNA extraction of tissues and cell lines are carried out in four stages: 1) homogenization, 2) effective ...

Hej alle sammen. Vi har designet, en ligetil, hurtig i klassen beskrivende metode til effektiv RNA ekstraktion fra pancreas væv. Den største fordel ved denne metode er en optimeret procedure til at udtrække RNA fra mindste mængde væv på grund af autolyse. Hej igen. Demonstration af proceduren vil blive udført af Sanaz Dastghaib, det er min PHD studerende i vores laboratorium på Biochemistry Department of Shiraz University of Medical Sciences.First forberede kirurgi sted, sætte alle krav under kølerhjelmen. At inaktivere RNase sterilisere alle kirurgi instrumenter i en ovn. Injicer ketamin-xylazin intraperitoneally 80/8 milligram pr kg. Tilføj 1 cc.RNA stabilisering reagens i korrekt mikrorør til at bebo aktivering af endonuclease i eksisterende væv. Læg straks rotten på operationsbrættet. Gå væk kirurgen for en midterlinjen snit. Derefter sterilisere alle abdominaloverflade med 70% alkohol for at fjerne rotte hår. Skær huden til operationen. Omforme snit blev gjort for at åbne maven fra pubesområde til forben. Flip abdominale organer til venstre side, at udsætte bugspytkirtlen. Omhyggeligt finde bugspytkirtlen væv, som er spredt i bughulen. Find området under skærmen for at finde ud af bugspytkirtlen uden at blive forvekslet med fedtvæv. Fjern straks 20 til 30 milligram bugspytkirtel fra bughulen på mindre end to minutter. Læg det fjernede væv i mikrorøret meget hurtigt og skær det med overskrævs-fræseren for at trænge ind i RNA-stabiliseringsregensen til adskilte væv. Anstøn dig for, at mikrorøret kan fryses med det samme. Alle deres mikrorør skal opbevares i de 80

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Optimized Protocol for the Extraction of Proteins from the Human Mitral Valve

Optimeret protokol til ekstraktion af proteiner fra humanmitralventilen

Analysis of the cellular proteome can help to elucidate the molecular mechanisms underlying diseases due to the development of technologies that permit ...

Mouse Adipose Tissue Collection and Processing for RNA Analysis

Musen fedtvæv indsamling og forarbejdning til RNA analyser

Compared to other tissues, white adipose tissue has a considerably less RNA and protein content for downstream applications such as real-time PCR and ...

Toeprinting Analysis of Translation Initiation Complex Formation on Mammalian mRNAs

Toeprinting analyse af oversættelse indledningen kompleks dannelse på pattedyr mRNAs

Translation initiation is the rate-limiting step of protein synthesis and represents a key point at which cells regulate their protein output. Regulation ...

Rapid Isolation of the Mitoribosome from HEK Cells

Hurtig Isolation af Mitoribosome fra HEK celler

The human mitochondria possess a dedicated set of ribosomes (mitoribosomes) that translate 13 essential protein components of the oxidative ...

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) Strategy

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture CARIC Strategy

Opsamling og identifikation af RNA-bindende proteiner ved hjælp af klik kemi-assisteret RNA-interactome Capture (CARIC) strategi

A comprehensive identification of RNA-binding proteins (RBPs) is key to understanding the posttranscriptional regulatory network in cells. A widely used ...

Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis

Udvinding og analyse af taiwanske grønne Propolis

Taiwanese green propolis is rich in prenylated flavonoids and exhibits a broad range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, and ...

Studying RNA Interactors of Protein Kinase RNA-Activated during the Mammalian Cell Cycle

At studere RNA Interactors af Protein Kinase RNA-aktiveret under pattedyr cellecyklus

Protein kinase RNA-activated (PKR) is a member of the innate immune response proteins and recognizes the double-stranded secondary structure of viral ...

Extremely Rapid and Specific Metabolic Labelling of RNA In Vivo with 4-Thiouracil (Ers4tU)

Extremely Rapid and Specific Metabolic Labelling of RNA In Vivo with 4-Thiouracil Ers4tU

Ekstremt hurtig og specifik metabolisk mærkning af RNA in vivo med 4-thiouracil (Ers4tU)

The nucleotide analogue, 4-thiouracil (4tU), is readily taken up by cells and incorporated into RNA as it is transcribed in vivo, allowing isolation of ...

Ganglioside Extraction, Purification and Profiling

Gangliosidekstraktion, rensning og profilering

Gangliosides are glycosphingolipids that contain one or more sialic acid residues. They are found on all vertebrate cells and tissues but are especially ...