Un protocole amélioré pour purifier et directement mono-biotinylate recombinant BDNF dans un tube pour les études de trafic cellulaire dans les neurones
Visualization of Retrograde Axonal Transport of BDNF-QD in Live Neurons
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Represetative Results
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Conclusion
Transcript
L’objectif global de cette procédure est de produire et de purifier l’oviducte BDNF dans un protocole optimisé impliquant la transfection des cellules HEK293 et la purification dans une colonne de chromatographie. L’oviducte BDNF est ensuite mono-
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Le BDNF recombinant contenant une séquence Avi (BDNFAvi) est produit dans les cellules HEK293 d’une manière rentable et est purifié par la chromatographie d’affinité. BDNFavi est alors directement mono-biotinylé avec l’enzyme BirA dans un tube. BDNFavi et BDNFavi mono-biotinylés conservent leur activité biologique par rapport au BDNF disponible dans le commerce.