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5.6K Views
•
13:46 min
July 11th, 2020
DOI :
10.3791/61262-v
Chapters
0:00
Introdcution
0:48
Transfection of HEK293 cells
1:49
Media Collection and Storage
3:02
Media Concentration and Purification
4:58
In vitro Mono-biotinylation Reaction
6:01
Biotinylation Analysis
6:56
Visualization of Retrograde Axonal Transport of BDNF-QD in Live Neurons
7:58
Represetative Results
13:17
Conclusion
Transcript
この手順の全体的な目標は、HEK293細胞のトランスフェクションとクロマトグラフィーカラムでの精製を含む最適化されたプロトコルでBDNFオビダクトを生成し、精製することです。BDNFの卵管は、蛍光顕微鏡による後部標識および検出のためのインビトロ反応によって単一ビオチン化される。この手順の主な利点は、BDNFの生産、精製、および単一バイオチン化を最適化された方法で可能にすることです。
この妊娠パラメータは、費用対効果の高いトランスフェクション試薬を使用して最大BDNF産生に最適化
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Summary
Avi配列を含む組換えBDNF(BDNFAvi)は、コスト効率の高い方法でHEK293細胞で産生され、アフィニティークロマトグラフィーによって精製される。BDNFaviは、その後、チューブ内の酵素BirAで直接モノビオチン化されます。BDNFaviおよびモノビオチン化BDNFaviは、市販のBDNFと比較して生物学的活性を保持します。
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