Name: phage therapy application to counteract pseudomonas aeruginosa infection in cystic fibrosis zebrafish embryos
Uploaded: 2020-05-12T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Phage Therapy Application to Counteract Pseudomonas aeruginosa Infection in Cystic Fibrosis Zebrafish Embryos at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado pela Fundação Italiana de Fibrose Cística (FFC#22/2017; Associazione "Gli amici della Ritty" Casnigo e FFC#23/2019; Un respiro in più Onlus La Mano tesa Onlus).

Os zebrafish adultos (Danio rerio) da cepa AB (European Zebrafish Resource Center EZRC) são mantidos de acordo com as diretrizes internacionais (Diretiva da UE 2010/63/UE) e nacionais (decreto italiano 4de março de 2014, n. 26) sobre a proteção de animais usados para fins científicos. As condições padrão são definidas na instalação de peixes com um ciclo escuro de 14 horas/10 h e temperatura da água do tanque a 28° C.
1. Elaboração de soluções e ferramentas</...

<ol>
	<li>Cisek, A. A., D&#261;browska, I., Gregorczyk, K. P., Wy&#380;ewski, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phage+Therapy+in+Bacterial+Infections+Treatment:+One+Hundred+Years+After+the+Discovery+of+Bacteriophages.">Phage Therapy in Bacterial Infections Treatment: One Hundred Years After the Discovery of Bacteriophages.</a> Current Microbiology. 74 (2), 277-283 (2017).</li><li>Trend, S., Fonceca, A. M., Ditcham, W. 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D., Kalmanson, G. M., Bronfenbrenner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+methods+in+the+study+of+the+phage-antiphage+reaction.">Quantitative methods in the study of the phage-antiphage reaction.</a> Journal of Immunology. 46, 267-279 (1943).</li><li>Kimmel, C., Ballard, W., Kimmel, S., Ullmann, B., Schilling, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 203, 253-310 (1995).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+zebrafish+embryos+to+analyze+gene+function.">Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function.</a> Journal of Visualized Experiments. (25), e1115 (2009).</li><li>Traver, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+as+a+Model+Organism+to+Study+Development+of+the+Immune+System.">The Zebrafish as a Model Organism to Study Development of the Immune System.</a> Advances in Immunology. 81, 253-330 (2003).</li></ol>

Neste manuscrito, descrevemos o protocolo para realizar a infecção por P. aeruginosa (PAO1) em embriões de zebrafish e como aplicar a terapia de phage com um coquetel de phages previamente identificado como capaz de infectar PAO1 para resolvê-lo. O uso de bacteriófagos como alternativa aos tratamentos com antibióticos tem sido de crescente interesse desde os últimos anos. Isso se deve principalmente à difusão de infecções bacterianas multidrogas resistentes (MDR), que constituem um problema sério par...

A terapia phage, o uso dos inimigos naturais das bactérias para combater infecções bacterianas, está ganhando interesse renovado à medida que a resistência bacteriana aos antibióticos se torna generalizada1,,2. Esta terapia, utilizada há décadas na Europa Oriental, poderia ser considerada um tratamento complementar a antibióticos na cura de infecções pulmonares em pacientes com CF e uma possível alternativa terapêutica para pacientes infectados com bactérias resistentes a todos os antibióticos atualmente em uso2,,3. As vantagens da terapia antibiótico são que os bacteriófagos se multiplicam no local da infecção, enquanto os antibióticos são metabolizados e eliminados do corpo4,,5. De fato, a administração de coquetéis de phages virulentos isolados em diferentes laboratórios tem se mostrado eficaz no tratamento de infecções pseudomonas aeruginosa em modelos animais tão diferentes quanto insetos e mamíferos6,,7,,8. A terapia de phage também mostrou-se capaz de reduzir a carga bacteriana em feridas de queimadura infectadas com P. aeruginosa e Escherichia coli em um ensaio clínico randomizado9.
O zebrafish (Danio rerio) emergiu recentemente como um modelo valioso para estudar infecções com vários patógenos, incluindo P. aeruginosa10,11, Mycobacterium abscessus e Burkolderia cepacia12,13. Ao microinjetar bactérias diretamente na circulação sanguínea do embrião14 é fácil estabelecer uma infecção sistêmica que é neutralizada pelo sistema imunológico inato de zebrafish, que é conservado evolutivo com neutrófilos e geração de macrófagos semelhante à contraparte humana. Além disso, durante o primeiro mês de vida, os embriões de zebrafish carecem da resposta imune adaptativa, tornando-os modelos ideais para estudar a imunidade inata, que é o mecanismo crítico de defesa em infecções pulmonares humanas15. O zebrafish surgiu recentemente como um poderoso sistema de modelo genético para entender melhor o início da CF e desenvolver novos tratamentos farmacológicos10,,16,17. O modelo de zebrafish CF de cftr knock-down gerado com injeção de morfolino em zebrafish apresentou uma resposta de explosão respiratória amortecida e reduziu a migração de neutrófilo10, enquanto o nocaute do CFTR leva à posição do órgão interno prejudicada e à destruição do pâncreas exócrino, um fenótipo que espelha a doença humana16,17. De maior interesse foi a constatação de que a carga bacteriana P. aeruginosa foi significativamente maior em embriões de perda de função cftrdo que em controles em 8 horas pós-infecção (hpi), o que paralelamente aos resultados obtidos com camundongos e células epiteliais brônquias humanas2,,18.
Neste trabalho, demonstramos que a terapia de phage é eficaz contra infecções por P. aeruginosa em embriões de zebrafish.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:629px;" width="630">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:275px;">Bacto Agar</td>
			<td style="width:183px;">BD</td>
			<td style="width:108px;">214010</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Calcium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10043-52-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">CsCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>289329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dulbecco&#39;s phospate buffered saline PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>886-86-2</td>
			<td>common name tricaine</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Femtojet Micromanipulator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fleming/brown P-97</td>
			<td>Sutter Instrument Company</td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">LE-Agarose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11685660001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Low Melting Agarose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CAS 9012-36-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Magnesium sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7487-88-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Methyl Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>28983-56-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Microinjection needles</td>
			<td>Harvard apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">N-Phenylthiourea &#62;=98%</td>
			<td>Aldrich-P7629</td>
			<td>103-85-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Oligo Morpholino</td>
			<td>Gene Tools</td>
			<td></td>
			<td>designed by the researcher</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PEG6000</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>528877</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Phenol Red Solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CAS 143-74-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7447-40-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pronase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9036-06-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium chloride ACS reagent, &#8805;99.0%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>S9I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tris HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T5941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Triton X</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tryptone</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0042B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Yeast extract</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0021B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Z-MOLDS Microinjection</td>
			<td>Word Precision Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

phage therapy application to counteract pseudomonas aeruginosa infection in cystic fibrosis zebrafish embryos

A resistência antimicrobiana, uma das principais consequências da incerteza diagnóstica e da superprescrição antimicrobiana, é uma causa cada vez mais reconhecida de infecções graves, complicações e mortalidade em todo o mundo com um enorme impacto em nossa sociedade e no sistema de saúde. Em particular, pacientes com sistemas imunológicos comprometidos ou patologias pré-existentes e crônicas, como a fibrose cística (CF), são submetidos a tratamentos antibióticos frequentes para controlar as infecções com a aparência e difusão de isolados resistentes a multidroga. Portanto, é urgente abordar terapias alternativas para combater infecções bacterianas. O uso de bacteriófagos, os inimigos naturais das bactérias, pode ser uma solução possível. O protocolo detalhado neste trabalho descreve a aplicação da terapia de phage contra a infecção por Pseudomonas aeruginosa em embriões de zebrafish CF. Os embriões de zebrafish foram infectados com P. aeruginosa para demonstrar que a terapia phage é eficaz contra infecções por P. aeruginosa, pois reduz a letalidade, a carga bacteriana e a resposta imune pró-inflamatória em embriões CF.

Os resultados e os números aqui apresentados são encaminhados aos embriões cf gerados através da injeção de morfoolinos cftr como descrito anteriormente10 e na etapa 5. Para validar o fenótipo cf, considerou-se a posição prejudicada de órgãos internos como coração, fígado e pâncreas, conforme descrito anteriormente17 (Figura 1). Resultados semelhantes foram obtidos no caso dos embriões WT, conforme relatado em nossa pub...

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Phage Therapy Application to Counteract Pseudomonas aeruginosa Infection in Cystic Fibrosis Zebrafish Embryos

Apresentado aqui é um protocolo para a infecção por Pseudomonas aeruginosa e aplicação de terapia de phage em embriões de zebrafish fibrose cística (CF).

Aplicação de terapia phage para neutralizar pseudomonas aeruginosa infecção em embriões de zebrafish fibrose cística

Antimicrobial resistance, a major consequence of diagnostic uncertainty and antimicrobial overprescription, is an increasingly recognized cause of severe ...

Este protocolo facilita a preparação e administração de um coquetel viral e phage contra pseudomonas aeruginosa em embriões de zebrafish. A principal vantagem dessa técnica é que ela permite uma avaliação in vivo da eficácia da praga no combate à infecção bacteriana. O coquetel de phage é eficiente tanto no tipo selvagem quanto nos modelos de zebrafish de fibrose cística.Abrindo a possibilidade de aplicar a terapia de phage a infecções bacterianas em pacientes com fibrose cística. A terapia phage também pode ser aplicada para neutralizar infecções bacterianas específicas em outros sistemas modelo. Para preparar um estoque de phage para o experimento.Adicione 1,25 vezes 10 ao sétimo phages a uma cultura OD 600 de 0,05 P.aeruginosa a uma multiplicidade de infecção de uma vezes 10 para os três negativos e incubar a cultura por três a quatro horas com agitação até que o OD 600 caia para 0,1 a 0,3. No final da incubação incubar o lysate com um micrograma por mililitro de DNAse e RNAse por 30 minutos a 37 graus Celsius. E pelotar as células por centrifugação.No final do filtro de centrifugação o supernascer através de um diâmetro de poros de 0,8 micro metros e adicionar 58 gramas por litro de cloreto de sódio e 105 gramas por litro de PEG 6000. Incubar a solução a quatro graus Celsius durante a noite. Na manhã seguinte, precipitar a praga por centrifugação.No final da centrofugação remova o supernascer e dissolva cuidadosamente a pelota de phage em 15 mililitros de tampão de cloreto de sódio Tris. Para purificar as pragas por gradiente de densidade de cloreto de césio, primeiro estratifique dois mililitros de quatro soluções diferentes de cloreto de césio em tubos de ultracentrífugo politomérico para um Rotor SW 41 e adicione 3,5 mililitros da suspensão de phage a cada tubo. Cloreto de césio é tóxico.Adote sempre os procedimentos de segurança adequados ao manusear e descartar este composto. Quando todos os tubos estiverem carregados, coloque os tubos no rotor, tomando cuidado para que os tubos estejam equilibrados. E centrifugar as amostras por duas horas a 100.000 vezes g e quatro graus Celsius.No final da centrifugação, use uma seringa com uma agulha de calibre 19 para aspirar a camada branca entre o D é igual a 1,5 e o D equivale a 1,4 regiões de densidade. E transfira as suspensões para novos tubos de poliallômero tamanho SW 60. Centrifugar as suspensões por pelo menos 16 horas a 150.000 vezes g e quatro graus Celsius.E transfira as bandas visíveis para tubos de diálise com um corte de 6.000 Dalton. Em seguida, dilímpe as amostras coletadas duas vezes contra 500 mililitros de água por 20 minutos por diálise e durante a noite contra 500 mililitros de tampão de cloreto de sódio tris. Na manhã seguinte, filtre o estoque de phage resultante com um filtro de poros de 0,22 mímetro e armazene o estoque a quatro graus Celsius.No dia da micro injeção dilui duas soluções de estoque de morfolinos micromolar em água estéril a uma concentração final de 0,25 picomolar por embrião para obter uma solução de injeção de morfolino de cinco microliter. E adicione 0,5 microliters de fenol vermelho a cada solução. Em seguida, use uma micropipette de 20 microliteres com uma ponta de carregamento de gel fino para carregar uma agulha de micro injeção com todo o volume de solução mista de morfolino e fixar a agulha a um micromistor conectado a um suporte sob um microscópio estéreo.Em seguida, com uma ou duas células, embriões de peixe zebra dispostos em um slide de vidro colocado dentro de uma placa de Petri de 96 milímetros de diâmetro, penetram o acorde e a gema com a ponta da agulha de micro injeção e injetam dois nanoliters da mistura de morfina no embrião. Às 26 horas após a fertilização, carregue uma agulha de micro injeção com aproximadamente cinco microliters de P.aeruginosa inoculum e insira a agulha dorsalmente até o ponto de partida do ducto de Cuvier no qual o duto começa a se espalhar sobre o saco de gema. Injete um a três nanoliters do inóculo PAO1 no embrião certificando-se de que o volume se expanda diretamente dentro do duto e entre na circulação.Após a injeção transfira o embrião para uma das duas novas placas de Petri contendo e3 médio fresco suplementado com fenilhiourea por uma incubação de 30 minutos ou três horas a 28 graus Celsius. Em seguida, carregue uma agulha de micro injeção com aproximadamente cinco microliters do coquetel de phage e fixe a agulha no micro injetor. Em seguida, injete um a três nanoliters de coquetel de phage no duto de Cuvier de cada embrião previamente injetado com bactérias e coloque os embriões em uma das duas novas placas de Petri contendo e3 médio fresco suplementado com fenilhiourea a 28 graus Celsius.Às quatro horas após a infecção, use uma pipeta plástica para transferir um embrião anestesiado em um prato de fundo de vidro. E encha o prato com ponto de fusão baixo quente agarose solução. Quando a agarose estiver fria, encha suavemente o prato com e3 médio suplementado com solução anestéstica.Coloque o prato sob o microscópio estéreo e use uma ponta de pipeta para posicionar o embrião na orientação desejada. Em seguida, coloque o prato sob um microscópio estéreo fluorescente com um filtro fluorescente para bactérias positivas GFP por até 18 horas após a infecção e imagem do embrião para a progressão da expressão GFP aos nove, 14 e 18 horas pós-infecção. Para determinar a carga bacteriana em oito horas após a infecção, transfira 15 embriões micro-injetados anestinados em um tubo de centrífuga de 1,5 mililitro e substitua a solução anestésica por 300 microlitres de 1%Triton X-100 em PBS.Passe as agulhas através da agulha estéril de 27 medidores de uma seringa de insulina pelo menos 15 vezes para homogeneizar os embriões. E preparar diluições seriais do homogeneizar transferindo 100 microliters da mistura resultante em 900 microliters de PBS estéril por diluição. Para selecionar para a cepa P.aeruginosa naturalmente resistente à anicilina, placa 10 microliters das diluições em ágar LB suplementado com ampicillina e incuba-los durante a noite a 37 graus Celsius.No dia seguinte, conte o número de colônias. Para permitir o cálculo do número total de unidades formadoras de colônias e o número médio de colônias formando unidades por embrião infectado. Para avaliar a letalidade da infecção por P.aeruginosa, os embriões injetados em 20 horas após a infecção sob um microscópio estéreo contam o número de embriões brancos mortos opacos.Em seguida, calcule a concentração letal meia máxima 50 dose de P.aeruginosa que resultou na morte de 50% dos embriões injetados em 20 horas após a infecção. Para validar o fenótipo da fibrose cística, a posição prejudicada de órgãos internos como o fígado cardíaco e o pâncreas podem ser avaliadas. A carga bacteriana é reduzida pela terapia de phage em embriões de fibrose cística infectados com P.Aeruginosa.Em 48 horas após a fertilização, embriões de fibrose cística infectados com bactérias P.Aeroginosa positivas da GFP, uma colônia formando unidades por dose de embrião demonstra uma letalidade de 50% em 20 horas após a infecção. A terapia de phage é igualmente eficaz em 20 horas após a infecção quando entregue 30 minutos ou sete horas após a injeção bacteriana. Aqui, uma fibrose cística e P.Aeruginosa positiva da GFP injetaram embrião em quatro, nove, 14 e 18 horas após a infecção.Em contraste, a fibrose cística mais P.Aeruginosa mais o embrião injetado por phage demonstra uma fluorescência reduzida devido à ação de phage contra as bactérias. A resposta inflamatória gerada pela infecção por P.aeruginosa em embriões de fibrose cística é significativamente aumentada, conforme revelado pela expressão das citocinas pró-inflamatórias, TNF alfa e interleucina 1 beta após injeção de P.aeruginosa em comparação com o controle de zebrafish injetado. No entanto, a expressão de ambas as citocinas inflamatórias é reduzida em animais co-injetados no coquetel phage.As pragas devem ser cuidadosamente purificadas para remover qualquer endotoxina contaminante que possa ser retida durante a preparação. As preparações de phage podem ser analisadas por microscopia eletrônica para avaliar a morfologia da virion. Seria interessante testar se a infecção em pacientes humanos por bactérias que não sejam pseudomonas aeruginosa pode ser curada com a terapia de phage no modelo de zebrafish fibrose cística.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Phage Therapy Application to Counteract Pseudomonas aeruginosa Infection in Cystic Fibrosis Zebrafish Embryos

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

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Pseudomonas aeruginosa e Saccharomyces cerevisiae Biofilme em Células de Fluxo

Many microbial cells have the ability to form sessile microbial communities defined as biofilms that have altered physiological and pathological ...

Imunologia e Infecção

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

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Isolamento de RNA Pseudomonas aeruginosa Colonizar o trato gastrointestinal Murino

Pseudomonas aeruginosa (PA) infections result in significant morbidity and mortality in hosts with compromised immune systems, such as patients with ...

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

A infecção de embriões de zebrafish com patógenos bacterianos intracelulares

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

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Uso de meio de escarro Artificial para testar a eficácia antibiótica contra<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Em condições mais relevantes para o Pulmão Fibrose Cística

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

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Crônica de Longo Prazo<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Infecção das vias aéreas em ratos

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

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Pseudomonas aeruginosa Lesão Pulmonar Induzida Modelo

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

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Um modelo de mouse transiente Transientized IL-8 para o<em&gt; In Vivo</em&gt; Monitoramento de Longo Prazo de Respostas Inflamatórias

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

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Venha para o lado da luz: In Vivo monitoramento de infecções por Pseudomonas aeruginosa biofilme em feridas crônicas em um modelo murino Hairless diabética

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

Methods for Detecting Cytotoxic Amyloids Following Infection of Pulmonary Endothelial Cells by Pseudomonas aeruginosa

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Métodos para detecção de citotóxicos amiloides seguir infecção de pulmonar células endoteliais por Pseudomonas aeruginosa

Patients who survive pneumonia have elevated death rates in the months following hospital discharge. It has been hypothesized that infection of pulmonary ...

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Geração de mutantes de deleção de genes no quadro em Pseudomonas aeruginosa e testes para atenuação de virulência em um modelo simples de infecção por camundongos

Microorganisms are genetically versatile and diverse and have become a major source of many commercial products and biopharmaceuticals. Though some of ...