Name: a bacterial oral feeding assay with antibiotic-treated mosquitoes
Uploaded: 2020-09-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Bacterial Oral Feeding Assay with Antibiotic-Treated Mosquitoes at JoVE.com

وقد دعم هذا العمل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (منحة رقم 81902094، 81600497)، ومشروع خطة العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة هونان (2019RS1036).

1. تشريح midgut وعزلة البكتيريا التي يمكن الاستزراع عنها
<ol><li>إعداد البعوضة للتشريح.<ol>
<li>جمع البعوض 7-9 أيام بعد ظهور مع التعرق. تخدير البعوض الذي تم جمعه عن طريق إخضاعه لدرجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة 3-5 دقائق والحفاظ على تخدير البعوض في طبق بيتري بارد من الجليد حتى التشريح.</li>...

<ol>
	<li>Tolle, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito-borne+diseases.">Mosquito-borne diseases.</a> Current Problems in Pediatric and Adolescent Health Care. 39 (4), 97-140 (2009).</li><li>Wu, P., Yu, X., Wang, P., Cheng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arbovirus+lifecycle+in+mosquito:+acquisition,+propagation+and+transmission.">Arbovirus lifecycle in mosquito: acquisition, propagation and transmission.</a> Expert Reviews in Molecular Medicine. 21, 1 (2019).</li><li>Jayakrishnan, L., Sudhikumar, A. V., Aneesh, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+gut+inhabitants+on+vectorial+capacity+of+mosquitoes.">Role of gut inhabitants on vectorial capacity of mosquitoes.</a> Journal of Vector Borne Diseases. 55 (2), 69 (2018).</li><li>Jupatanakul, N., Sim, S., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+microbiome+modulates+vector+competence+for+arboviruses.">The insect microbiome modulates vector competence for arboviruses.</a> Viruses. 6 (11), 4294-4313 (2014).</li><li>Moro, C. V., Tran, F. H., Raharimalala, F. N., Ravelonandro, P., Mavingui, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+of+culturable+bacteria+including+Pantoea+in+wild+mosquito+Aedes+albopictus.">Diversity of culturable bacteria including Pantoea in wild mosquito Aedes albopictus.</a> BMC Microbiology. 13 (1), 70 (2013).</li><li>Chouaia, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+evidence+for+multiple+infections+as+revealed+by+typing+of+Asaia+bacterial+symbionts+of+four+mosquito+species.">Molecular evidence for multiple infections as revealed by typing of Asaia bacterial symbionts of four mosquito species.</a> Applied and Environmental Microbiology. 76 (22), 7444-7450 (2010).</li><li>Terenius, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midgut+bacterial+dynamics+in+Aedes+aegypti.">Midgut bacterial dynamics in Aedes aegypti.</a> FEMS Microbiology Ecology. 80 (3), 556-565 (2012).</li><li>Bando, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-specific+diversity+of+Serratia+marcescens+in+Anopheles+mosquito+midgut+defines+Plasmodium+transmission+capacity.">Intra-specific diversity of Serratia marcescens in Anopheles mosquito midgut defines Plasmodium transmission capacity.</a> Scientific Reports. 3, 1641 (2013).</li><li>Telang, A., Skinner, J., Nemitz, R. Z., McClure, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metagenome+and+culture-based+methods+reveal+candidate+bacterial+mutualists+in+the+Southern+house+mosquito+(Diptera:+Culicidae).">Metagenome and culture-based methods reveal candidate bacterial mutualists in the Southern house mosquito (Diptera: Culicidae).</a> Journal of Medical Entomology. 55 (5), 1170-1181 (2018).</li><li>Wang, Y., Gilbreath, T. M., Kukutla, P., Yan, G., Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+gut+microbiome+across+life+history+of+the+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae+in+Kenya.">Dynamic gut microbiome across life history of the malaria mosquito Anopheles gambiae in Kenya.</a> PloS One. 6 (9), (2011).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mesh-Duox+pathway+regulates+homeostasis+in+the+insect+gut.">A Mesh-Duox pathway regulates homeostasis in the insect gut.</a> Nature Microbiology. 2 (5), 17020 (2017).</li><li>Gu&#233;gan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+impacts+of+anthropogenic+stressors+on+Aedes+albopictus+mosquito+vector+microbiota.">Short-term impacts of anthropogenic stressors on Aedes albopictus mosquito vector microbiota.</a> FEMS Microbiology Ecology. 94 (12), 188 (2018).</li><li>Valzania, L., Coon, K. L., Vogel, K. J., Brown, M. R., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-induced+transcription+factor+signaling+is+essential+for+larval+growth+of+the+mosquito+Aedes+aegypti.">Hypoxia-induced transcription factor signaling is essential for larval growth of the mosquito Aedes aegypti.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (3), 457-465 (2018).</li><li>Coon, K. L., Vogel, K. J., Brown, M. R., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquitoes+rely+on+their+gut+microbiota+for+development.">Mosquitoes rely on their gut microbiota for development.</a> Molecular Ecology. 23 (11), 2727-2739 (2014).</li><li>de O Gaio, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+midgut+bacteria+to+blood+digestion+and+egg+production+in+Aedes+aegypti+(diptera:+culicidae)(L).">Contribution of midgut bacteria to blood digestion and egg production in Aedes aegypti (diptera: culicidae)(L).</a> Parasites &amp; Vectors. 4 (1), 105 (2011).</li><li>Ramirez, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+tripartite+interactions+between+the+Aedes+aegypti+midgut+microbiota,+innate+immune+system+and+dengue+virus+influences+vector+competence.">Reciprocal tripartite interactions between the Aedes aegypti midgut microbiota, innate immune system and dengue virus influences vector competence.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 6 (3), 1561 (2012).</li><li>Dong, Y., Morton, J. C., Ramirez, J. L., Souza-Neto, J. A., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+entomopathogenic+fungus+Beauveria+bassiana+activate+toll+and+JAK-STAT+pathway-controlled+effector+genes+and+anti-dengue+activity+in+Aedes+aegypti.">The entomopathogenic fungus Beauveria bassiana activate toll and JAK-STAT pathway-controlled effector genes and anti-dengue activity in Aedes aegypti.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 42 (2), 126-132 (2012).</li><li>Anglero-Rodriguez, Y. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Aedes+aegypti-associated+fungus+increases+susceptibility+to+dengue+virus+by+modulating+gut+trypsin+activity.">An Aedes aegypti-associated fungus increases susceptibility to dengue virus by modulating gut trypsin activity.</a> Elife. 6, 28844 (2017).</li><li>Wu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gut+commensal+bacterium+promotes+mosquito+permissiveness+to+arboviruses.">A gut commensal bacterium promotes mosquito permissiveness to arboviruses.</a> Cell Host &amp; Microbe. 25 (1), 101-112 (2019).</li><li>M&#246;hlmann, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+gut+bacteria+on+the+infection+and+transmission+of+pathogenic+arboviruses+by+biting+midges+and+mosquitoes.">Impact of gut bacteria on the infection and transmission of pathogenic arboviruses by biting midges and mosquitoes.</a> Microbial Ecology. , (2020).</li><li>Llorca, M., Gros, M., Rodr&#237;guez-Mozaz, S., Barcel&#243;, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+preservation+for+the+analysis+of+antibiotics+in+water.">Sample preservation for the analysis of antibiotics in water.</a> Journal of Chromatography. A. 1369, 43-51 (2014).</li><li>Berendsen, B., Elbers, I., Stolker, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+the+stability+of+antibiotics+in+matrix+and+reference+solutions+using+a+straightforward+procedure+applying+mass+spectrometric+detection.">Determination of the stability of antibiotics in matrix and reference solutions using a straightforward procedure applying mass spectrometric detection.</a> Food Additives &amp; Contaminants: Part A, Chemistry, Analysis, Control, Exposure &amp; Risk Assessment. 28 (12), 1657-1666 (2011).</li><li>Hill, C. L., Sharma, A., Shouche, Y., Severson, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+midgut+microflora+and+dengue+virus+impact+on+life+history+traits+in+Aedes+aegypti.">Dynamics of midgut microflora and dengue virus impact on life history traits in Aedes aegypti.</a> Acta Tropica. 140, 151-157 (2014).</li><li>Eng, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifaceted+functional+implications+of+an+endogenously+expressed+tRNA+fragment+in+the+vector+mosquito+Aedes+aegypti.">Multifaceted functional implications of an endogenously expressed tRNA fragment in the vector mosquito Aedes aegypti.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (1), 0006186 (2018).</li><li>Kajla, M. K., Barrett-Wilt, G. A., Paskewitz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacteria:+A+novel+source+for+potent+mosquito+feeding-deterrents.">Bacteria: A novel source for potent mosquito feeding-deterrents.</a> Science Advances. 5 (1), 6141 (2019).</li><li>Gon&#231;alves, G. G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+MALDI-TOF+MS+to+identify+the+culturable+midgut+microbiota+of+laboratory+and+wild+mosquitoes.">Use of MALDI-TOF MS to identify the culturable midgut microbiota of laboratory and wild mosquitoes.</a> Acta Tropica. 200, 105174 (2019).</li><li>Kuss, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+microbiota+promote+enteric+virus+replication+and+systemic+pathogenesis.">Intestinal microbiota promote enteric virus replication and systemic pathogenesis.</a> Science. 334 (6053), 249-252 (2011).</li><li>Rani, A., Sharma, A., Rajagopal, R., Adak, T., Bhatnagar, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+diversity+analysis+of+larvae+and+adult+midgut+microflora+using+culture-dependent+and+culture-independent+methods+in+lab-reared+and+field-collected+Anopheles+stephensi-an+Asian+malarial+vector.">Bacterial diversity analysis of larvae and adult midgut microflora using culture-dependent and culture-independent methods in lab-reared and field-collected Anopheles stephensi-an Asian malarial vector.</a> BMC Microbiology. 9 (1), (2009).</li><li>Apte-Deshpande, A., Paingankar, M., Gokhale, M. D., Deobagkar, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serratia+odorifera+a+midgut+inhabitant+of+Aedes+aegypti+mosquito+enhances+its+susceptibility+to+dengue-2+virus.">Serratia odorifera a midgut inhabitant of Aedes aegypti mosquito enhances its susceptibility to dengue-2 virus.</a> PLoS One. 7 (7), 40401 (2012).</li><li>Behura, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+microbiota+and+metagenomics,+and+its+relevance+to+disease+transmission.">Mosquito microbiota and metagenomics, and its relevance to disease transmission.</a> Nature. 436, 257-260 (2013).</li><li>Dickson, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+laboratory+colonies+of+Aedes+aegypti+harbor+the+same+adult+midgut+bacterial+microbiome.">Diverse laboratory colonies of Aedes aegypti harbor the same adult midgut bacterial microbiome.</a> Parasites &amp; Vectors. 11 (1), 1-8 (2018).</li></ol>

وقد وجدت البحوث على التفاعلات الميكروب المضيف أن الميكروبات الأمعاء المختلفة تؤثر على علم وظائف الأعضاء المضيف من خلال آليات متباينة. هذه المادة يقدم طريقة للتحقيق في دور كل من البعوض ميكروب الأمعاء، بما في ذلك تشريح البعوض منتصف، واستزراع بكتيريا الأمعاء زراعة، والعلاج بالمضادات الحيو...

ويعتبر البعوض أن تكون أهم ناقلات الأمراض المسببة للأمراض البشرية، ونقل أكثر من مائة مسببات الأمراض بما في ذلك فيروس زيكا، فيروس حمى الضنك، والطفيليات Plasmodium 1. عندما يأخذ البعوض وجبة دم للحصول على العناصر الغذائية للوَفَس، فإنها يمكن أن تبتلع مسببات الأمراض عن طريق الخطأ من مضيف مصاب عن طريق الجهاز الهضمي2. الأهم من ذلك، فإن البعوض midgut، الذي يلعب دورا محوريا في كل من هضم وجبة الدم ومدخل الممرض، ويأوي الميكروبيوم ديناميكية للغاية3.
وقد تميزت العديد من الدراسات المختبرية التي تم تربيتها والحقول التي جمعت البعوض الميكروبية باستخدام إما طريقة تعتمد على الثقافة أو البكتيريا تسلسل المقايسة4,5,6. الأنواع بما في ذلك البانتوا، Serratia، Klebsiella، Elizabethkingia، و Enterococcus يتم عزلها عادة من البعوض في مختلف الدراسات5،7،8،9. ومن المثير للاهتمام، يتقلب ميكروبيوتا الأمعاء البعوض بشكل حيوي في كل من تنوع المجتمع وكمية أنواع البكتيريا، تتأثر بمرحلة التنمية، والأنواع، والأصل الجغرافي، وسلوك التغذية4. تشير الدراسات إلى أن تغذية الدم تزيد بشكل كبير من إجمالي الحمل البكتيري مع التوسع السريع للأنواع من Enterobacteriaceae وانخفاض في التنوع العام10،11. بالإضافة إلى ذلك ، عادة ما يتم القضاء على ميكروبيوتا الأمعاء البعوض من مرحلة اليرقات عندما تخضع الحشرة للتحول أثناء ال pupation و eclosion ؛ وهكذا ، ظهرت حديثا البعوض البالغ بحاجة إلى إعادة إسكان الجراثيم4.
الأمعاء الميكروبية تعدل علم وظائف الأعضاء الحشرات في مختلف الجوانب، بما في ذلك امتصاص المغذيات، والمناعة، والتنمية، والتكاثر، والكفاءة ناقلات12. يرقات البعوض أكسينيك تفشل في التطور وراء أول إنستار في حين أن البكتيريا عن طريق الفم إنقاذ التنمية الإمدادات، مشيرا إلى أن ميكروب الأمعاء البعوض ضروري لتطوير اليرقات13,14. الى جانب ذلك، استنزاف البكتيريا الأمعاء يؤخر هضم وجبة الدم وامتصاص المغذيات، ويؤثر على نضوج البويضات، ويقلل من oviposition15. بالإضافة إلى ذلك ، فإن البعوض الذي يُصاب بصغر الأمعاء يثير استجابات مناعية أعلى مقارنة بالبعوض المعالج بالمضادات الحيوية ، مع تعبير ببتيد مضاد للميكروبات مرتفع باستمرار ضد مسببات الأمراض الأخرى لتصيب16. عادة ما يتم إعطاء المضادات الحيوية عن طريق الفم لإزالة بكتيريا الأمعاء في هذه الدراسات ، ثم يتم إجراء تجارب لمقارنة الفرق بين البعوض الفأس والبعوض مع الميكروبات commensal. ومع ذلك ، فإن البعوض في منتصف الغور يضم مجتمعًا متنوعًا من الميكروبات ، ويمكن لكل نوع من أنواع البكتيريا أن يمارس تأثيرًا متميزًا تجاه علم وظائف الأعضاء المضيف.
الميكروبيات البعوض ينظم كفاءة ناقلات مع آثار متباينة. الاستعمار من قبل بروتيوس معزولة عن البعوض المستمدة من الحقل من المناطق التي تتوطن حمى الضنك يمنح أعلى تنظيما التعبير الببتيد المضاد للميكروبات والمقاومة ضد عدوى فيروس حمى الضنك16. فطر entomopathogenic Beauveria bassiana ينشط المسار المناعي حصيلة وJAK-STAT ضد عدوى arbovirus17. وعلى النقيض من ذلك، فإن الفطريات Talaromyces معزولة عن Aedes aegypti midgut يسهل الإصابة بفيروس حمى الضنك عن طريق تحوير نشاط التربسين الأمعاء18. بالإضافة إلى ذلك ، Serratia marcescens يعزز انتقال الفيروس من خلال بروتين سيكريتوري يسمى SmEnhancin، الذي يهضم طبقة المخاطين على ظهارة الأمعاء من البعوض19.
يوفر هذا الإجراء طريقة منهجية وبديهية لتشريح البعوض منتصف، وعزل مستعمرات البكتيريا التي يمكن تكاثرها، وتحديد أنواع البكتيريا، وإعادة إدخالها عن طريق التغذية عن طريق الفم. وهو يوفر نتائج تمثيلية لتغذية الدم مع بكتيريا commensal، Chryseobacterium 100 1000 100،على تطور المبيض والبعوضة وovposition.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >Adenosine 5&#8242;-triphosphate disodium salt hydrate</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >A2383</td>
			<td >Adenosine 5&#8242;-triphosphate disodium salt hydrate has been used to prepare adenosine triphosphate (ATP) standard solutions</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Aedes aegypti</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Female mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anticoagulant tube</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>363095</td>
			<td>Collect fresh blood</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Centrifuge tube</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F601620-0010</td>
			<td>1.5 ml, Natural, Graduated, Sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cotton balls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Disposable Tissue Grinding Pestle</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F619072-0001</td>
			<td>70 mm Long, Conical, Blue, Sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ethanol absolute</td>
			<td>Paini</td>
			<td></td>
			<td>Dilute it to 75% ethanol</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Forceps</td>
			<td>RWD</td>
			<td>F11029</td>
			<td>Dissection</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hemotek Membrane Feeding System</td>
			<td>Hemotek</td>
			<td></td>
			<td>Components of the feeding system, including&#160; Hemotek temperature controller, feeder-housing assembly, metal feeder assembled.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Incubator shaker</td>
			<td></td>
			<td>ZQZY-78AN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Inoculation Loops</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F619312-0001</td>
			<td>10 &#956;l, Yellow</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >LB Agar Powder</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A507003</td>
			<td>Tryptone 10.0 g&#65307; Yeast Extract 5.0 g&#65307; NaCl 10.0 g&#65307; Agar 15.0 g.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >LB Broth Powder</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A507002</td>
			<td>Tryptone 10.0 g&#65307; Yeast Extract 5.0 g&#65307; NaCl 10.0 g.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paper cup</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Place mosquito</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Parafilm</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F104002</td>
			<td>4 inx 125 ft</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Petri dish</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F611203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Penicillin G procaine salt hydrate</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A606248</td>
			<td>White powder. Soluble in water, soluble in methanol, slightly soluble in water, ethanol</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Single Channal Pipettor</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Streptomycin sulfate</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A610494</td>
			<td>Streptomycin sulfate is a glucosamine antibiotic that interferes with the synthesis of prokaryotic proteins.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sucrose</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A502792</td>
			<td>Soluble in water, ethanol and methanol, slightly soluble in glycerol and pyridine.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >TIANamp Bacteria DNA Kit</td>
			<td>TIANGEN</td>
			<td>DP302</td>
			<td>Extract DNA&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Utility Fabric-Mosquito Netting White</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vortex mixer</td>
			<td>Scintic Industries</td>
			<td>S1-0246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1.5ml EP tube</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F600620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10X PBS buffer</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>E607016</td>
			<td>This product is a 10X solution. Please dilute it 10 times before use. The pH value is 7.4.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a bacterial oral feeding assay with antibiotic-treated mosquitoes

البعوض منتصف الموانئ الموانئ ميكروبيوم ديناميكية للغاية التي تؤثر على التمثيل الغذائي المضيف، والتكاثر، واللياقة البدنية، والكفاءة ناقلات. وقد أجريت دراسات لدراسة تأثير ميكروبات الأمعاء ككل؛ ومع ذلك، يمكن أن الميكروبات المختلفة تمارس آثار متميزة نحو المضيف. توفر هذه المقالة منهجية لدراسة تأثير كل ميكروب أمعاء البعوض المحدد والآلية المحتملة.
يحتوي هذا البروتوكول على جزأين. الجزء الأول يقدم كيفية تشريح البعوض منتصف، عزل مستعمرات البكتيريا التي يمكن تكاثرها، وتحديد أنواع البكتيريا. يوفر الجزء الثاني الإجراء الخاص بتوليد البعوض المعالج بالمضادات الحيوية وإعادة إدخال نوع واحد من البكتيريا المحددة.

تم إخراج منتصف البعوض المعالج بالمضادات الحيوية وبدون مضادات حيوية لاستخراج الحمض النووي ، وتم إجراء qPCR بأوامير بكتيريا عالمية. ويبين الشكل 1 التعبير عن البكتيريا 16S rRNA في مجموعة التحكم ومجموعة العلاج بالمضادات الحيوية. وتظهر النتائج أن حوالي 98٪ من البكتيريا الأمعاء قد أزيلت، وا...

Watch this Scientific Journal Video about A Bacterial Oral Feeding Assay with Antibiotic-Treated Mosquitoes at JoVE.com

A Bacterial Oral Feeding Assay with Antibiotic-Treated Mosquitoes

جرثومية عن طريق الفم الرضاعة مع البعوض المعالجة بالمضادات الحيوية

تقدم هذه المقالة بروتوكولًا للتحقيق في تأثير بكتيريا الأمعاء الفردية للبعوض ، بما في ذلك عزل وتحديد الميكروبات القابلة للزراعة في منتصف البعوض ، واستنزاف المضادات الحيوية لبكتيريا الأمعاء البعوض ، وإعادة إدخال نوع واحد محدد من البكتيريا.

The mosquito midgut harbors a highly dynamic microbiome that affects the host metabolism, reproduction, fitness, and vector competence. Studies have been ...

البعوض midgut الموانئ مجتمع معقد من الميكروبات التي تؤثر على التمثيل الغذائي المضيف، والتكاثر، واللياقة البدنية، وكفاءة الطبيب البيطري. مع كل ميكروب الأمعاء هو تأثير مختلف. يقدم هذا الفيديو الإجراء لدراسة الدور الخاص بكل سلالة بكتيريا أو علم وظائف الأعضاء المضيف.للحصول على ثقافة من المستعمرات البكتيرية الأمعاء، تشريح البعوض منتصف تحت حالة معقمة. الأرض تشريح منتصف، serotologinate، وتنتشر على لوحة أجار. اختيار مستعمرات واحدة من لوحة، وتحديد الأنواع البكتيريا عن طريق تسلسل الجينات SRNA 16 بهم.تغذية البعوض مع النقش COD التي تحتوي على المضادات الحيوية لمدة ثلاثة أيام متتالية لإزالة ميكروبيوتا الأمعاء. يمكن تأكيد فعالية العلاج بالمضادات الحيوية عن طريق تشريح منتصف البعوض المتعفن لمعلاج وحدة تشكيل المستعمرة قبل المتطرفين اللاحقين. ثم إعادة إدخال أنواع بكتيريا محددة كانت معزولة سابقًا عن الأمعاء البعوضية عن طريق فحص التغذية الفموية.ويمكن تقييم تأثير البكتيريا على فسيولوجيا المضيف من خلال مقارنة البعوض غير المعالج، والبعوض المعالج بالمضادات الحيوية، والبعوض إعادة إدخال ضبط النفس محددة. تشريح منتصف و البكتيريا القابلة للزراعة العزلة. في البداية ، جمع البعوض في قفص مع pirator وخلية البعوض في مربع جمع.تخدير البعوض عن طريق تعريضه لدرجة حرارة 4 درجة لمدة ثلاث إلى خمس دقائق. الحفاظ على البعوض تخدير عن طريق وضعها في طبق بيتري الجليد الباردة. تطهير مقاعد البدلاء، تشريح المجهر، والملاط عن طريق رش 75٪ الإيثانول لتجنب التلوث بالبكتيريا من البيئة.سطح تعقيم البعوض عن طريق تسجيل وتهز لهم في 75٪ الإيثانول لمدة ثلاث دقائق وشطف مرتين مع المخزن المؤقت PBS. تقسيم البعوض بشكل منفصل على شريحة زجاجية معقمة تحتوي على قطرة من برنامج تلفزيوني. إزالة بعناية الساقين والأجنحة ورأس البعوض باستخدام ملقط.المشبك الصدر البعوضة والقسم الأخير من البطن كان ملقط وسحب بعيدا لعزل الجهاز الهضمي. استخدام ملقط لإزالة المحاصيل وأنبوب malpighian من الجهاز الهضمي. يتم وضع المحصول في الجزء الخلفي من منتصف الوطيس والانتفاخات بعد تناول ماء السكر.أنابيب Malpighian هي مجموعة من أنابيب مطرح مرهف على تقاطع منتصف و hindgut. وضع ماكياج تشريح في أنبوب EP مع 200 microliters معقم PBS العازلة وطحنه مع القس طحن العقيمة في مقاعد البدلاء نظيفة. الحبوب لتحميل متجانسة إلى ثلاثة أوهام الإيقاع في 50 ميكرولترات من كل وهم إلى لوحة LB أجار وطبقة يائسة.احتضان لوحة ك 37 درجة لمدة يوم واحد إلى يومين حتى المستعمرات واحدة قابلة للتنفيذ. اختيار مستعمرات واحدة في 150 ملليلتر قارورة مخروطية تحتوي على 50 ملليلتر رطل حمالات الصدر المتوسطة. يهز البكتيريا في 37 درجة بين عشية وضحاها.تحديد الأنواع. استخراج توتو الحمض النووي بواسطة طقم بناء الحمض النووي الجينومي البكتيري وتضخيم 16 SRDNA من قبل PCR. استعادة وتنقية شظايا الحمض النووي من منتجات PCR بواسطة Ambrose هلام electrophoresis ومجموعة الانتعاش قاد.إجراء تسلسل الحمض النووي على شظايا الحمض النووي المنقى ليكون تسلسل سلسلة البكتيريا التي تم تحقيقها. تشغيل البحث عن الانفجار إلى استعلام تسلسل الجينات SRNA 16 من تحديد البكتيريا ضد البكتيريا وararaea وقاعدة البيانات. تم تعريف مستوى الأنواع على أنه أكبر من أو يساوي 99٪ 16 تشابه تسلسل SRDNA إلى أقرب دخول البنك الفريق.تم تعيين العزلة إلى المقابلة، جنس عندما هو تسلسل 16 SRDNA، وكان التشابه أقل من 99٪، وأكبر من أو يساوي 95٪ العلاج بالمضادات الحيوية والبكتيريا إعادة إدخال. تزن الكمية المطلوبة من سكروز البنسلين وstreptomycin لإعداد لنا 10٪ محلول السكروز، بما في ذلك محاولة 20 وحدة من البنسلين و 20 ميكروغرام من ستريبتوميسين لكل ملليلتر. التسلل إلى كرات القطن في محلول السكروز الذي يحتوي على المضادات الحيوية ووضعها على الجزء العلوي من كوب الورق التي تحتوي على البعوض.تغطية الكرة القطنية مع طبق بيتري 10 سنتيمترا لمنع الواجهة البحرية من التبخر. استبدال كرات القطن مرتين في اليوم وتغذية البعوضة لمدة ثلاثة أيام متتالية. البعوض ينقسم إلى مجموعتين.وضعت المجموعة الأولى في كوب البعوض دون أي علاج، أي كرات القطن الطبيب مع 10٪ لذلك عبر أعطيت يوميا. وعولج الفريق الثاني بالمضادات الحيوية وجرى تقديمها لمدة ثلاثة أيام. في كل مجموعة، تم تشريح البعوض سيرجي.تم استخراج ميكا لاستخراج الحمض النووي الكلي وتم تنفيذ QPCR باستخدام التمهيديات البكتيريا العالمية، ويظهر الشكل الأول التعبير عن 16 SRNA في مجموعة التحكم ومجموعة العلاج بالمضادات الحيوية. تظهر النتائج أن تكلفة أو تحقيق البنسلين وstreptomycin كانت ناجحة. إعداد حل بكتيرية، وتدابير حل البكتيريا في الفيروس مع مطياف، إضافة تعليق واحد البكتيريا OT في أنبوب EP.الطرد المركزي تعليق في 5، 000 RCA لمدة خمس دقائق في أربع درجات تجاهل supernatant، وغسل البليت البكتيريا يحاول مع عازلة برنامج تلفزيوني عقيمة. إعادة تعليق البليت البكتيرية مع 200 microliters معقمة PBS العازلة إضافة 600 ميكرولتر، 10٪ محلول السكروز، 200 مصغرة ATP و 200 تعليق الجرثومي microliter في أنبوب جديد AP ومزيج جيد. بدلا من ذلك، يمكن إعادة تعليق البكتيريا في الحرارة في تنشيط الدم.إعداد تسخين الدم المنشط. تجلط الدم الطازج مع أنبوب مضاد التخثر، واتخاذ 2-3 ملليلتر من الدم الطازج. في أجهزة الطرد المركزي 1000 لمدة 10 دقائق في أربع درجات لفصل البلازما وخلايا الدم.جمع البلازما في أنبوب EP جديد وتفعيل هنا تفعيلها في 56 درجة لمدة ساعة واحدة. غسل انفجار المنزل من خلال الأوقات الخاصة بك مع المخزن المؤقت برنامج تلفزيوني عقيمة. شطف منزل الانفجار المعلقة مع التدفئة تنشيط البلازما.تجميع الغشاء ونظام التغذية. سحب مرض الفيلم إلى أقصى حد. إصلاح مع حلقة بلاستيكية وparfilm مكان العمل لتجنب تسرب ببطء إضافة حل البكتيرية المعدة لوحدة التغذية، إلى أقصى محفظة.لتجنب فقاعة سقطت من اتجاه واحد وختم وحدة التغذية. قم بتوصيل مصدر الطاقة. انتظر حتى تصل درجة الحرارة إلى 37 درجة تثبيت وحدة التغذية مع حل البكتيريا على وحدة التغذية.قبل تغذية البعوض البكتيريا يجب وقف لمدة 24 ساعة لاستقلاب المضادات الحيوية. لوحدة التغذية على كوب الورق مع البعوض، ثم السماح التغذية لمدة 90 دقيقة. ويمكن انتقاء البعوض الذي تم تشجيعه بالكامل لإجراء المزيد من الدراسات.نتائج تمثيلية. الرقم الثاني يبين لنا متوسط الأوسمة لكل بعوضة. بعد مؤامرة تغذية المضادات الحيوية معالجة البعوض نرى السحايا.ويبين الشكل الثالث التعبير عن الجينات ذات الصلة التطور المتغير 24 ساعة بعد وجبة الدم التي تحتوي على السحايا C. تظهر النتائج أنه لا يوجد أي تغيير كبير في إنتاج البيض للمجموعة المراقبة والمجموعة الباهتة. شكرا لاهتمامك بالبكتيريا أو مقال التغذية مع البعوض المعالجة بالمضادات الحيوية.

Research

JoVE Journal

Biology

Injection of An. stephensi Embryos to Generate Malaria-resistant Mosquitoes

حقن آن. stephensi الجنين لتوليد الملاريا مقاومة البعوض

The introduction of exogenous genes into the genomes of mosquitoes requires microinjection techniques tailored to the specific species of interest. This ...

Preventing the Spread of Malaria and Dengue Fever Using Genetically Modified Mosquitoes

منع انتشار الملاريا وحمى الضنك عن طريق البعوض المعدل وراثيا

In this candid interview, Anthony A. James explains how mosquito genetics can be exploited to control malaria and dengue transmission.   Population ...

Protocols for Oral Infection of Lepidopteran Larvae with Baculovirus

بروتوكولات العدوى عن طريق الفم من اليرقات Lepidopteran مع الفيروسة العصوية

Baculoviruses are widely used both as protein expression vectors and as insect pest control agents. This video shows how lepidopteran larvae can be ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

رني ضربة قاضية بوساطة الجينات و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; فحص إدرار البول في الإناث البالغات<em&gt; الزاعجة المصرية</em&gt; البعوض

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

A Multi-detection Assay for Malaria Transmitting Mosquitoes

مقايسة متعدد الكشف عن الملاريا بث البعوض

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, ...

High-fat Feeding Paradigm for Larval Zebrafish: Feeding, Live Imaging, and Quantification of Food Intake

ارتفاع الدهون تغذية النموذج لليرقات اسماك الزرد: التغذية، يعيش التصوير، والكمي لتناول الطعام

Zebrafish are emerging as a model of dietary lipid processing and metabolic disease. This protocol describes how to feed larval zebrafish a lipid-rich ...

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

الحفاظ على بعوض الزاعجة المصرية "البعوض مصابة" ولبخيه

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

شفوي من العدوى البكتيرية وإلقاء في melanogaster المورفولوجية

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the best developed model systems of infection and innate immunity. While most work has focused on systemic ...

Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes

بروتوكولات لاختبار السمية لرواية كيمياء مبيدات الحشرات للبعوض

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

أجبر اللعاب كأسلوب لتحليل اختصاص البعوض ناقل

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...