Name: a bacterial oral feeding assay with antibiotic-treated mosquitoes
Uploaded: 2020-09-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Bacterial Oral Feeding Assay with Antibiotic-Treated Mosquitoes at JoVE.com

이 작품은 중국 국립 자연과학 재단(81902094, 81600497)과 후난성 과학 기술 계획 프로젝트(2019RS1036)의 지원을 받았습니다.

1. 미드구트 해부 및 재배 가능한 박테리아 격리
<ol><li>해부를 위해 모기를 준비하십시오.<ol>
<li>모기를 수집 7-9 아스피라기와 출현 후 일. 수집된 모기를 3-5분 동안 4°C의 온도로 조절하여 마취하고 해부전까지 얼음차가운 페트리 접시에 모기를 마취시합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>실험실 기기와 모기 표면을 살균합니다.<ol>
<li>실험 벤치를 살균하고, 현미경, 집게 및 유리 슬...

<ol>
	<li>Tolle, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito-borne+diseases.">Mosquito-borne diseases.</a> Current Problems in Pediatric and Adolescent Health Care. 39 (4), 97-140 (2009).</li><li>Wu, P., Yu, X., Wang, P., Cheng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arbovirus+lifecycle+in+mosquito:+acquisition,+propagation+and+transmission.">Arbovirus lifecycle in mosquito: acquisition, propagation and transmission.</a> Expert Reviews in Molecular Medicine. 21, 1 (2019).</li><li>Jayakrishnan, L., Sudhikumar, A. V., Aneesh, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+gut+inhabitants+on+vectorial+capacity+of+mosquitoes.">Role of gut inhabitants on vectorial capacity of mosquitoes.</a> Journal of Vector Borne Diseases. 55 (2), 69 (2018).</li><li>Jupatanakul, N., Sim, S., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+microbiome+modulates+vector+competence+for+arboviruses.">The insect microbiome modulates vector competence for arboviruses.</a> Viruses. 6 (11), 4294-4313 (2014).</li><li>Moro, C. V., Tran, F. H., Raharimalala, F. N., Ravelonandro, P., Mavingui, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+of+culturable+bacteria+including+Pantoea+in+wild+mosquito+Aedes+albopictus.">Diversity of culturable bacteria including Pantoea in wild mosquito Aedes albopictus.</a> BMC Microbiology. 13 (1), 70 (2013).</li><li>Chouaia, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+evidence+for+multiple+infections+as+revealed+by+typing+of+Asaia+bacterial+symbionts+of+four+mosquito+species.">Molecular evidence for multiple infections as revealed by typing of Asaia bacterial symbionts of four mosquito species.</a> Applied and Environmental Microbiology. 76 (22), 7444-7450 (2010).</li><li>Terenius, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midgut+bacterial+dynamics+in+Aedes+aegypti.">Midgut bacterial dynamics in Aedes aegypti.</a> FEMS Microbiology Ecology. 80 (3), 556-565 (2012).</li><li>Bando, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-specific+diversity+of+Serratia+marcescens+in+Anopheles+mosquito+midgut+defines+Plasmodium+transmission+capacity.">Intra-specific diversity of Serratia marcescens in Anopheles mosquito midgut defines Plasmodium transmission capacity.</a> Scientific Reports. 3, 1641 (2013).</li><li>Telang, A., Skinner, J., Nemitz, R. Z., McClure, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metagenome+and+culture-based+methods+reveal+candidate+bacterial+mutualists+in+the+Southern+house+mosquito+(Diptera:+Culicidae).">Metagenome and culture-based methods reveal candidate bacterial mutualists in the Southern house mosquito (Diptera: Culicidae).</a> Journal of Medical Entomology. 55 (5), 1170-1181 (2018).</li><li>Wang, Y., Gilbreath, T. M., Kukutla, P., Yan, G., Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+gut+microbiome+across+life+history+of+the+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae+in+Kenya.">Dynamic gut microbiome across life history of the malaria mosquito Anopheles gambiae in Kenya.</a> PloS One. 6 (9), (2011).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mesh-Duox+pathway+regulates+homeostasis+in+the+insect+gut.">A Mesh-Duox pathway regulates homeostasis in the insect gut.</a> Nature Microbiology. 2 (5), 17020 (2017).</li><li>Gu&#233;gan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+impacts+of+anthropogenic+stressors+on+Aedes+albopictus+mosquito+vector+microbiota.">Short-term impacts of anthropogenic stressors on Aedes albopictus mosquito vector microbiota.</a> FEMS Microbiology Ecology. 94 (12), 188 (2018).</li><li>Valzania, L., Coon, K. L., Vogel, K. J., Brown, M. R., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-induced+transcription+factor+signaling+is+essential+for+larval+growth+of+the+mosquito+Aedes+aegypti.">Hypoxia-induced transcription factor signaling is essential for larval growth of the mosquito Aedes aegypti.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (3), 457-465 (2018).</li><li>Coon, K. L., Vogel, K. J., Brown, M. R., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquitoes+rely+on+their+gut+microbiota+for+development.">Mosquitoes rely on their gut microbiota for development.</a> Molecular Ecology. 23 (11), 2727-2739 (2014).</li><li>de O Gaio, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+midgut+bacteria+to+blood+digestion+and+egg+production+in+Aedes+aegypti+(diptera:+culicidae)(L).">Contribution of midgut bacteria to blood digestion and egg production in Aedes aegypti (diptera: culicidae)(L).</a> Parasites &amp; Vectors. 4 (1), 105 (2011).</li><li>Ramirez, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+tripartite+interactions+between+the+Aedes+aegypti+midgut+microbiota,+innate+immune+system+and+dengue+virus+influences+vector+competence.">Reciprocal tripartite interactions between the Aedes aegypti midgut microbiota, innate immune system and dengue virus influences vector competence.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 6 (3), 1561 (2012).</li><li>Dong, Y., Morton, J. C., Ramirez, J. L., Souza-Neto, J. A., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+entomopathogenic+fungus+Beauveria+bassiana+activate+toll+and+JAK-STAT+pathway-controlled+effector+genes+and+anti-dengue+activity+in+Aedes+aegypti.">The entomopathogenic fungus Beauveria bassiana activate toll and JAK-STAT pathway-controlled effector genes and anti-dengue activity in Aedes aegypti.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 42 (2), 126-132 (2012).</li><li>Anglero-Rodriguez, Y. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Aedes+aegypti-associated+fungus+increases+susceptibility+to+dengue+virus+by+modulating+gut+trypsin+activity.">An Aedes aegypti-associated fungus increases susceptibility to dengue virus by modulating gut trypsin activity.</a> Elife. 6, 28844 (2017).</li><li>Wu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gut+commensal+bacterium+promotes+mosquito+permissiveness+to+arboviruses.">A gut commensal bacterium promotes mosquito permissiveness to arboviruses.</a> Cell Host &amp; Microbe. 25 (1), 101-112 (2019).</li><li>M&#246;hlmann, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+gut+bacteria+on+the+infection+and+transmission+of+pathogenic+arboviruses+by+biting+midges+and+mosquitoes.">Impact of gut bacteria on the infection and transmission of pathogenic arboviruses by biting midges and mosquitoes.</a> Microbial Ecology. , (2020).</li><li>Llorca, M., Gros, M., Rodr&#237;guez-Mozaz, S., Barcel&#243;, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+preservation+for+the+analysis+of+antibiotics+in+water.">Sample preservation for the analysis of antibiotics in water.</a> Journal of Chromatography. A. 1369, 43-51 (2014).</li><li>Berendsen, B., Elbers, I., Stolker, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+the+stability+of+antibiotics+in+matrix+and+reference+solutions+using+a+straightforward+procedure+applying+mass+spectrometric+detection.">Determination of the stability of antibiotics in matrix and reference solutions using a straightforward procedure applying mass spectrometric detection.</a> Food Additives &amp; Contaminants: Part A, Chemistry, Analysis, Control, Exposure &amp; Risk Assessment. 28 (12), 1657-1666 (2011).</li><li>Hill, C. L., Sharma, A., Shouche, Y., Severson, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+midgut+microflora+and+dengue+virus+impact+on+life+history+traits+in+Aedes+aegypti.">Dynamics of midgut microflora and dengue virus impact on life history traits in Aedes aegypti.</a> Acta Tropica. 140, 151-157 (2014).</li><li>Eng, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifaceted+functional+implications+of+an+endogenously+expressed+tRNA+fragment+in+the+vector+mosquito+Aedes+aegypti.">Multifaceted functional implications of an endogenously expressed tRNA fragment in the vector mosquito Aedes aegypti.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (1), 0006186 (2018).</li><li>Kajla, M. K., Barrett-Wilt, G. A., Paskewitz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacteria:+A+novel+source+for+potent+mosquito+feeding-deterrents.">Bacteria: A novel source for potent mosquito feeding-deterrents.</a> Science Advances. 5 (1), 6141 (2019).</li><li>Gon&#231;alves, G. G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+MALDI-TOF+MS+to+identify+the+culturable+midgut+microbiota+of+laboratory+and+wild+mosquitoes.">Use of MALDI-TOF MS to identify the culturable midgut microbiota of laboratory and wild mosquitoes.</a> Acta Tropica. 200, 105174 (2019).</li><li>Kuss, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+microbiota+promote+enteric+virus+replication+and+systemic+pathogenesis.">Intestinal microbiota promote enteric virus replication and systemic pathogenesis.</a> Science. 334 (6053), 249-252 (2011).</li><li>Rani, A., Sharma, A., Rajagopal, R., Adak, T., Bhatnagar, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+diversity+analysis+of+larvae+and+adult+midgut+microflora+using+culture-dependent+and+culture-independent+methods+in+lab-reared+and+field-collected+Anopheles+stephensi-an+Asian+malarial+vector.">Bacterial diversity analysis of larvae and adult midgut microflora using culture-dependent and culture-independent methods in lab-reared and field-collected Anopheles stephensi-an Asian malarial vector.</a> BMC Microbiology. 9 (1), (2009).</li><li>Apte-Deshpande, A., Paingankar, M., Gokhale, M. D., Deobagkar, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serratia+odorifera+a+midgut+inhabitant+of+Aedes+aegypti+mosquito+enhances+its+susceptibility+to+dengue-2+virus.">Serratia odorifera a midgut inhabitant of Aedes aegypti mosquito enhances its susceptibility to dengue-2 virus.</a> PLoS One. 7 (7), 40401 (2012).</li><li>Behura, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+microbiota+and+metagenomics,+and+its+relevance+to+disease+transmission.">Mosquito microbiota and metagenomics, and its relevance to disease transmission.</a> Nature. 436, 257-260 (2013).</li><li>Dickson, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+laboratory+colonies+of+Aedes+aegypti+harbor+the+same+adult+midgut+bacterial+microbiome.">Diverse laboratory colonies of Aedes aegypti harbor the same adult midgut bacterial microbiome.</a> Parasites &amp; Vectors. 11 (1), 1-8 (2018).</li></ol>

숙주 세균 상호 작용에 대 한 연구는 다른 창 자 미생물 다양 한 메커니즘을 통해 그들의 호스트 생리학에 영향을 발견. 이 기사에서는 모기 미드구트 해부, 재배장 세균 배양, 항생제 치료, 관심 있는 박테리아 재도입 등 모기 장내 미생물의 각 역할을 조사하는 방법을 소개합니다.
성공적인 항생제 치료를 위해, 다음과 같은 세부 사항은 실험을 수행에서 고려되어야한다. 본 ?...

모기는 Zika 바이러스, 뎅기열 바이러스 및 플라스모듐 기생충1을포함하여 백 개의 병원체를 통해 전송하는 인간 병원성 질병의 가장 중요한 벡터로 간주됩니다. 모기가 외란에 대한 영양분을 얻기 위해 혈액 식사를 할 때, 그들은 실수로 소화관을 통해 감염된 호스트에서 병원균을 섭취 할 수있습니다 2. 중요한 것은, 혈액 식사 소화와 병원체 입구 둘 다에 있는 중추적인 역할을 하는 모기 midgut는, 높게 다이내믹한 microbiome3를항구합니다.
여러 연구는 배양 의존적 방법 또는 박테리아 염기서열 분석4,,5,,6을사용하여 실험실 사육 및 현장 수집 모기 미생물을 특징으로한다. 판토에아, 세라티아, 클레브시엘라, 엘리자베스키아, 엔테로코커스를 포함한 종은 다양한 연구에서 모기로부터 일반적으로 분리된다5,,7,,8,,9. 흥미롭게도, 모기 장 내 미생물은 발달 단계, 종, 지리적 기원 및 수유 행동4에의해 영향을 받는 지역 사회의 다양성과 박테리아 종의 양 모두에서 동적으로 변동한다. 연구에 따르면 혈액 공급은 Enterobacteriaceae에서 종의 급속한 확장과 전반적인 다양성10,,11의감소와 함께 총 세균 부하를 극적으로 증가시킨다. 또한, 애벌레 단계의 모기 장내 미생물은 일반적으로 곤충이 새끼와 백과 기 전에 변형을 겪을 때 근절된다; 따라서 새로 등장한 성인 모기는 미생물4를다시 채워야 합니다.
장내 미생물은 영양 흡수, 면역, 발달, 번식 및 벡터역량(12)을포함한 다양한 측면에서 곤충 생리학을 조절한다. 악악 모기 유충은 박테리아 구강 공급이 발달하는 동안 첫 번째 인스타 를 넘어 개발하지 못하며, 이는 모기 장내 미생물이 애벌레 발달에 필수적임을 나타낸다13,,14. 게다가, 창 자 박테리아의 고갈 혈액 식사 소화 및 영양 흡수를 지연, oocyte 성숙에 영향을 미치는, 그리고 oviposition감소 15. 또한, 장내 미생물을 가진 모기는 항생제 처리한 모기에 비해 더 높은 면역 반응을 유도하고,16을감염시키기 위하여 그밖 병원체에 대하여 지속적으로 상승된 항균 펩티드 발현을 가진. 항생제는 일반적으로 이러한 연구에서 팬 창 자 박테리아를 제거 하기 위해 구두 관리, 다음 실험 은 축 축 모기와 모기와 대학 미생물의 차이 비교 하기 위해 실시. 그러나, 모기 midgut는 세균의 다양한 지역 사회를 항구하고, 각 박테리아 종은 호스트 생리학을 향해 명백한 효력을 발휘할 수 있었습니다.
모기 미생물은 다양한 효과로 벡터 역량을 조절합니다. 뎅기열 의 필드 유래 모기로부터 분리된 프로테우스에 의한 식민지화는 뎅기열 바이러스 감염에 대한 조절된 항균 펩티드 발현 및 저항을 부여한다16. 내모병원성 곰팡이 보베리아 bassiana는 arbovirus 감염에 대하여 통행료 및 JAK-STAT 면역 통로를 활성화합니다17. 대조적으로, Aedes aegypti midgut에서 분리된 곰팡이 탈라로미세스는 창자 트립신활동(18)을조절하여 뎅기열 바이러스 감염을 용이하게 한다. 또한, 세라티아 마르케센은 19모기의 장 상피에 있는 뮤신 층을소화하는 SmEnhancin에게 불린 분비 단백질을 통해 arbovirus 전송을 승진시다.
이 절차는 모기 미드구트의 해부, 재배 가능한 박테리아 식민지의 격리, 박테리아 종의 식별 및 구강 수유를 통한 재도입을 위한 체계적이고 직관적인 방법을 제공합니다. 그것은 모기 난소 발달 및 oviposition에, commensal 박테리아, Chryseobacterium meningosepticum와혈액 공급의 대표적인 결과를 제공합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >Adenosine 5&#8242;-triphosphate disodium salt hydrate</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >A2383</td>
			<td >Adenosine 5&#8242;-triphosphate disodium salt hydrate has been used to prepare adenosine triphosphate (ATP) standard solutions</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Aedes aegypti</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Female mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anticoagulant tube</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>363095</td>
			<td>Collect fresh blood</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Centrifuge tube</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F601620-0010</td>
			<td>1.5 ml, Natural, Graduated, Sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cotton balls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Disposable Tissue Grinding Pestle</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F619072-0001</td>
			<td>70 mm Long, Conical, Blue, Sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ethanol absolute</td>
			<td>Paini</td>
			<td></td>
			<td>Dilute it to 75% ethanol</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Forceps</td>
			<td>RWD</td>
			<td>F11029</td>
			<td>Dissection</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hemotek Membrane Feeding System</td>
			<td>Hemotek</td>
			<td></td>
			<td>Components of the feeding system, including&#160; Hemotek temperature controller, feeder-housing assembly, metal feeder assembled.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Incubator shaker</td>
			<td></td>
			<td>ZQZY-78AN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Inoculation Loops</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F619312-0001</td>
			<td>10 &#956;l, Yellow</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >LB Agar Powder</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A507003</td>
			<td>Tryptone 10.0 g&#65307; Yeast Extract 5.0 g&#65307; NaCl 10.0 g&#65307; Agar 15.0 g.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >LB Broth Powder</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A507002</td>
			<td>Tryptone 10.0 g&#65307; Yeast Extract 5.0 g&#65307; NaCl 10.0 g.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paper cup</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Place mosquito</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Parafilm</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F104002</td>
			<td>4 inx 125 ft</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Petri dish</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F611203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Penicillin G procaine salt hydrate</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A606248</td>
			<td>White powder. Soluble in water, soluble in methanol, slightly soluble in water, ethanol</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Single Channal Pipettor</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Streptomycin sulfate</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A610494</td>
			<td>Streptomycin sulfate is a glucosamine antibiotic that interferes with the synthesis of prokaryotic proteins.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sucrose</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A502792</td>
			<td>Soluble in water, ethanol and methanol, slightly soluble in glycerol and pyridine.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >TIANamp Bacteria DNA Kit</td>
			<td>TIANGEN</td>
			<td>DP302</td>
			<td>Extract DNA&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Utility Fabric-Mosquito Netting White</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vortex mixer</td>
			<td>Scintic Industries</td>
			<td>S1-0246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1.5ml EP tube</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F600620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10X PBS buffer</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>E607016</td>
			<td>This product is a 10X solution. Please dilute it 10 times before use. The pH value is 7.4.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a bacterial oral feeding assay with antibiotic-treated mosquitoes

모기 midgut 호스트 신진 대사에 영향을 미치는 매우 동적 미생물군유전체를 항구, 재생, 피트 니스, 그리고 벡터 능력. 연구 는 창 자 미생물의 효과 전체적으로 조사 하기 위해 실시 되었습니다.; 그러나, 다른 미생물 호스트쪽으로 뚜렷한 효력을 발휘할 수 있었습니다. 이 문서는 각 특정 모기 창 자 미생물및 잠재적인 기계장치의 효력을 연구하는 방법론을 제공합니다.
이 프로토콜에는 두 부분이 포함되어 있습니다. 첫 번째 부분은 모기 midgut를 해부하는 방법을 소개합니다, 재배 박테리아 식민지를 분리하고, 박테리아 종을 확인하는 방법. 두 번째 부분은 항생제 처리된 모기를 생성하고 1개의 특정 박테리아 종을 다시 소개하는 절차를 제공합니다.

항생제로 치료된 모기의 중간구와 항생제 없이 DNA 추출을 위해 꺼내졌고, qPCR은 보편적인 세균성 프라이머로 수행되었다. 도 1은 대조군 및 항생제 치료 군에서 세균성 16S rRNA의 발현을 나타낸다. 결과는 창자 박테리아의 대략 98%가 제거되고, 페니실린과 연쇄상 구균의 창자 살균이 성공했다는 것을 보여줍니다.
설명된 방법으로, 박테리아 긴장은 고립되고 확인되...

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A Bacterial Oral Feeding Assay with Antibiotic-Treated Mosquitoes

항생제 치료 모기를 가진 세균성 구강 먹이 분석

이 문서는 모기 midgut 경작 미생물의 격리 및 식별, 모기 창자 박테리아의 항생제 고갈을 포함하여 개별 모기 창자 박테리아의 효력을 조사하고, 1개의 특정 박테리아 종을 재소개하기 위하여 프로토콜을 제시합니다.

The mosquito midgut harbors a highly dynamic microbiome that affects the host metabolism, reproduction, fitness, and vector competence. Studies have been ...

모기 midgut 호스트 신진 대사에 영향을 미치는 미생물의 복잡 한 지역 사회를 항구, 재생, 피트 니스, 그리고 수 의사 능력. 각 창 자 미생물은 다른 효과. 이 비디오는 각 박테리아 긴장 또는 호스트 생리학의 각각의 역할을 연구하는 절차를 소개합니다.장 세균 성 식민지의 문화를 취득하려면, 멸균 상태에서 모기 midgut을 해부. 해부 미드구트를 접고, 세로토요고를 하고, 한천 판 에 퍼짐. 플레이트에서 단일 콜로니를 선택하고 16 개의 SRNA 유전자 서열을 통해 박테리아 종을 식별합니다.장 내 미생물을 제거하기 위해 3 일 연속 항생제를 함유 한 COD 엠보스로 모기를 먹이. 항생제 치료의 효과는 후속 극단주의자 이전에 식민지 형성 단위 분석에 대한 무균 모기의 midgut를 해부함으로써 확인할 수 있습니다. 그런 다음 이전에 구강 수유 분석을 통해 모기 장에서 격리 된 특정 박테리아 종을 다시 소개합니다.호스트 생리학에 박테리아의 효력은 처리되지 않은 모기, 항생제 처리한 모기 및 모기를 비교하여 평가될 수 있었습니다, 모기는 특정 구속을 재도입했습니다. 미드구트 해부와 재배 가능한 박테리아 격리. 우선, 수집 상자에 모기를 흡인기로 케이지에 모기를 수집하고 세포를 수집합니다.3~5분 동안 4도의 온도에 복종하여 모기를 마취합니다. 모기를 얼음 차가운 페트리 접시에 넣음으로써 마취하십시오. 환경으로부터 박테리아에 의한 오염을 피하기 위해 75%에탄올을 살포하여 벤치를 소독하고 현미경을 해부하고 집게를 제거하십시오.표면테이핑하여 75%에탄올로 3분간 흔들어 서 모기를 살균하고 PBS 버퍼로 두 번 헹구는 표면. PBS 한 방울이 들어 있는 멸균 유리 슬라이드에 모기를 따로 양분하십시오. 조심스럽게 집게를 사용하여 모기의 다리, 날개와 머리를 제거합니다.모기의 가슴을 고정하고 복부의 마지막 부분은 집게하고 소화관을 격리하기 위해 떨어져 당겨. 집게를 사용하여 소화관에서 작물과 말피기안 튜브를 제거하십시오. 작물은 설탕 물을 섭취 한 후 midgut및 부푼 의 pnterior에 위치합니다.말피기히안 튜브는 미드구트와 힌구트의 교차점의 날씬한 배설튜브 그룹입니다. 200 마이크로 리터 멸균 PBS 버퍼와 EP 튜브에 해부 메이크업을 배치하고 깨끗한 벤치에 멸균 연삭 목사와 분쇄. 시리얼은 LB 한천 판과 필사적 인 접시에 각 망상의 50 마이크로 리터에서 3 개의 템포 망상에 동종을로드합니다.단일 식민지가 가능할 때까지 플레이트를 1~2일 동안 37도로 배양합니다. 단일 콜로니를 50 밀리리터 lb bras 배지가 들어 있는 150 밀리리터 원추형 플라스크로 선택합니다. 하룻밤 사이에 37도에서 박테리아를 흔들어.종 식별. 세균성 게놈 DNA 생성 키트에 의해 토토 DNA를 추출하고 PCR에 의해 16 SRDNA를 증폭시킵니다. 암브로스 겔 전기포제와 운전 복구 키트에 의해 PCR 제품에서 DNA 단편의 회수 및 정제.정제된 DNA 단편에 DNA 염기서열을 수행하여 달성된 박테리아 사슬 서열을 갖습니다. 박테리아및 고고학 및 데이터베이스에 대하여 박테리아를 식별하는 16SRNA 유전자 서열을 쿼리하여 폭발 검색을 실행한다. 종 수준에 대한 식별은 가장 가까운 팀 은행 진입과 99%16 SRDNA 서열 유사성보다 크거나 동일하다고 정의하였다.상기 분리는 16SRDNA 서열일 때, 중형이 99% 미만이고 95%의 항생제 치료 및 박테리아 재도입에 상응하는 것으로 배부되었다. 우리에게 페니실린의 20 단위와 밀리리터 당 연쇄 절제술의 20 마이크로 그램을 시도 포함, 우리에게 10 % 자당 용액을 준비하기 위해 자당 페니실린과 연쇄 절제술의 필요한 양을 무게. 항생제를 함유한 자당 용액에 면봉에 침투하여 모기를 포함하는 종이 컵 위에 놓습니다.10센티미터 페트리 접시로 면공을 덮어 해안가가 증발하는 것을 방지합니다. 하루에 두 번 면공을 교체하고 3 일 연속 모기를 공급합니다. 모기는 두 그룹으로 나뉩니다.첫 번째 그룹은 치료없이 모기 컵에 배치되었다, 어떤 면봉 의사가 10 %그래서 십자가는 매일 주어졌다. 두 번째 그룹은 항생제로 치료되었고 3 일 동안 봉사했습니다. 각 그룹에서, 세르게이 모기는 해부되었다.미카는 총 DNA 추출을 위해 추출되었고 QPCR은 범용 박테리아 프라이머를 사용하여 수행되었으며, 피규어 는 대조군 및 항생제 치료 군에서 16SRNA의 발현을 나타낸다. 결과는 페니실린과 연쇄상 구균의 비용 또는 실현이 성공했다는 것을 보여줍니다. 세균용 용액을 준비하고, 분광계로 바이러스의 박테리아 용액을 측정하고, EP 튜브에 OT 박테리아 서스펜션 1개를 추가합니다.5, 000 RCA에서 5분 동안 서스펜션을 원심분리하여 4도에서 5분간 폐기하고, 멸균 PBS 버퍼로 박테리아 팔레트 시도를 세척한다. 200 마이크로리터 멸균 PBS 버퍼로 세균 팔레트를 다시 일시 중단하면 600 마이크로리터, 10% 자당 용액, 200 마이크로리터 ATP 및 200 마이크로리터 세균 현탁액을 새로운 AP 튜브에 넣고 잘 섞는다. 또는, 박테리아는 혈액을 활성화에 열에 다시 중단 될 수 있습니다.가열 활성화 된 혈액의 준비. 항응고제 튜브와 신선한 혈액을 응고, 신선한 혈액의 2 ~ 3 밀리 리터를. 1000에서 10분 동안 혈장 과 혈액 세포를 분리하는 4도에서 원심분리기.플라즈마를 새로운 EP 튜브로 수집하고 본원에서 1시간 동안 56도에서 활성화한다. 멸균 PBS 버퍼로 시간을 통해 폭발 집을 씻어. 린스는 가열 활성 플라즈마와 폭발 집을 중단.멤브레인 및 공급 시스템을 조립합니다. 필름 병을 최대로 당깁니다. 플라스틱 링과 작업장 파라필름으로 고정하여 누출을 피하기 위해 서게 준비된 세균용 용액을 최대 지갑에 추가합니다.거품이 한 방향에서 떨어졌을 않도록 피하고 피더 유닛을 밀봉합니다. 전원 공급 장치를 연결합니다. 온도가 37도에 도달 할 때까지 기다립니다 피더에 박테리아 용액피 장치를 설치.박테리아 모기를 먹이기 전에 항생제를 대사하기 위해 24 시간 동안 중단해야합니다. 모기가 있는 종이 컵의 사료 장치의 경우 90분 동안 먹이를 허용합니다. 완전히 격려모기는 추가 연구를 위해 밖으로 골라질 수 있었습니다.대표적인 결과. 그림 2는 우리에게 모기 당 평균 찬사를 보여줍니다. 항생제의 플롯 먹이 후 우리는 meningosepticum을 참조하십시오 모기를 치료.도 3은 C meningosepticum을 포함하는 혈액 식사 후에 24 시간 변이체 발달 관련 유전자의 발현을 나타낸다. 결과는 대조군과 퇴색군의 계란 생산에 큰 변화가 없음을 보여줍니다. 박테리아에 관심이 있거나 항생제 치료 모기를 가진 수유 에세이에 관심을 가져 주셔서 감사합니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Injection of An. stephensi Embryos to Generate Malaria-resistant Mosquitoes

의 사출. stephensi의 태아는 말라리아 방지 모기를 생성하는

The introduction of exogenous genes into the genomes of mosquitoes requires microinjection techniques tailored to the specific species of interest. This ...

연구

생물학

Preventing the Spread of Malaria and Dengue Fever Using Genetically Modified Mosquitoes

유전자 변형 모기를 사용하여 말라리아와 뎅그열 피버의 확산을 방지

In this candid interview, Anthony A. James explains how mosquito genetics can be exploited to control malaria and dengue transmission.   Population ...

Protocols for Oral Infection of Lepidopteran Larvae with Baculovirus

Baculovirus과 Lepidopteran 애벌레의 구강 감염 프로토콜

Baculoviruses are widely used both as protein expression vectors and as insect pest control agents. This video shows how lepidopteran larvae can be ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi - 중재 유전자 최저 및<em&gt; VIVO에서</em성인 여자의&gt; 이뇨 분석<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; 모기

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

A Multi-detection Assay for Malaria Transmitting Mosquitoes

말라리아 모기 전송하기위한 다중 탐지 분석

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, ...

High-fat Feeding Paradigm for Larval Zebrafish: Feeding, Live Imaging, and Quantification of Food Intake

애벌레 Zebrafish의에 대한 패러다임을 먹이 고 지방 : 수유, 라이브 영상, 식품 섭취의 정량화

Zebrafish are emerging as a model of dietary lipid processing and metabolic disease. This protocol describes how to feed larval zebrafish a lipid-rich ...

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Aedes aegypti 모기 감염 Wolbachia 유지

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

세균성 감염 및 Shedding 초파리 melanogaster 에

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the best developed model systems of infection and innate immunity. While most work has focused on systemic ...

Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes

모기에 소설 Insecticidal 화학 물질의 독성을 테스트 하기 위한 프로토콜

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

모기의 벡터 역량을 분석 하는 방법으로 타 액 분 비를 강제

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...