Name: a bacterial oral feeding assay with antibiotic-treated mosquitoes
Uploaded: 2020-09-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Bacterial Oral Feeding Assay with Antibiotic-Treated Mosquitoes at JoVE.com

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Hibe No. 81902094, 81600497) ve Hunan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Planı Projesi (2019RS1036) tarafından desteklenmiştir.

1. Midgut diseksiyon ve kültleştirilebilir bakteri izolasyonu
<ol><li>Sivrisineği diseksiyona hazırla.<ol>
<li>Bir aspiratör ile ortaya çıktıktan 7-9 gün sonra sivrisinek toplamak. Toplanan sivrisinekleri 3-5 dakika boyunca 4 °C'lik bir sıcaklığa maruz bırakarak anestezi yapın ve sivrisinekleri buz gibi bir Petri kabında diseksiyona kadar anestezi yedirin.</li>
	</ol></li>
	<li>Laboratuvar aletlerini ve sivrisinek yüzeyini sterilize edin.<ol>
<li>Çevredeki bakterileri...

<ol>
	<li>Tolle, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito-borne+diseases.">Mosquito-borne diseases.</a> Current Problems in Pediatric and Adolescent Health Care. 39 (4), 97-140 (2009).</li><li>Wu, P., Yu, X., Wang, P., Cheng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arbovirus+lifecycle+in+mosquito:+acquisition,+propagation+and+transmission.">Arbovirus lifecycle in mosquito: acquisition, propagation and transmission.</a> Expert Reviews in Molecular Medicine. 21, 1 (2019).</li><li>Jayakrishnan, L., Sudhikumar, A. V., Aneesh, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+gut+inhabitants+on+vectorial+capacity+of+mosquitoes.">Role of gut inhabitants on vectorial capacity of mosquitoes.</a> Journal of Vector Borne Diseases. 55 (2), 69 (2018).</li><li>Jupatanakul, N., Sim, S., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+microbiome+modulates+vector+competence+for+arboviruses.">The insect microbiome modulates vector competence for arboviruses.</a> Viruses. 6 (11), 4294-4313 (2014).</li><li>Moro, C. V., Tran, F. H., Raharimalala, F. N., Ravelonandro, P., Mavingui, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+of+culturable+bacteria+including+Pantoea+in+wild+mosquito+Aedes+albopictus.">Diversity of culturable bacteria including Pantoea in wild mosquito Aedes albopictus.</a> BMC Microbiology. 13 (1), 70 (2013).</li><li>Chouaia, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+evidence+for+multiple+infections+as+revealed+by+typing+of+Asaia+bacterial+symbionts+of+four+mosquito+species.">Molecular evidence for multiple infections as revealed by typing of Asaia bacterial symbionts of four mosquito species.</a> Applied and Environmental Microbiology. 76 (22), 7444-7450 (2010).</li><li>Terenius, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midgut+bacterial+dynamics+in+Aedes+aegypti.">Midgut bacterial dynamics in Aedes aegypti.</a> FEMS Microbiology Ecology. 80 (3), 556-565 (2012).</li><li>Bando, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-specific+diversity+of+Serratia+marcescens+in+Anopheles+mosquito+midgut+defines+Plasmodium+transmission+capacity.">Intra-specific diversity of Serratia marcescens in Anopheles mosquito midgut defines Plasmodium transmission capacity.</a> Scientific Reports. 3, 1641 (2013).</li><li>Telang, A., Skinner, J., Nemitz, R. Z., McClure, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metagenome+and+culture-based+methods+reveal+candidate+bacterial+mutualists+in+the+Southern+house+mosquito+(Diptera:+Culicidae).">Metagenome and culture-based methods reveal candidate bacterial mutualists in the Southern house mosquito (Diptera: Culicidae).</a> Journal of Medical Entomology. 55 (5), 1170-1181 (2018).</li><li>Wang, Y., Gilbreath, T. M., Kukutla, P., Yan, G., Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+gut+microbiome+across+life+history+of+the+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae+in+Kenya.">Dynamic gut microbiome across life history of the malaria mosquito Anopheles gambiae in Kenya.</a> PloS One. 6 (9), (2011).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mesh-Duox+pathway+regulates+homeostasis+in+the+insect+gut.">A Mesh-Duox pathway regulates homeostasis in the insect gut.</a> Nature Microbiology. 2 (5), 17020 (2017).</li><li>Gu&#233;gan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+impacts+of+anthropogenic+stressors+on+Aedes+albopictus+mosquito+vector+microbiota.">Short-term impacts of anthropogenic stressors on Aedes albopictus mosquito vector microbiota.</a> FEMS Microbiology Ecology. 94 (12), 188 (2018).</li><li>Valzania, L., Coon, K. L., Vogel, K. J., Brown, M. R., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-induced+transcription+factor+signaling+is+essential+for+larval+growth+of+the+mosquito+Aedes+aegypti.">Hypoxia-induced transcription factor signaling is essential for larval growth of the mosquito Aedes aegypti.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (3), 457-465 (2018).</li><li>Coon, K. L., Vogel, K. J., Brown, M. R., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquitoes+rely+on+their+gut+microbiota+for+development.">Mosquitoes rely on their gut microbiota for development.</a> Molecular Ecology. 23 (11), 2727-2739 (2014).</li><li>de O Gaio, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+midgut+bacteria+to+blood+digestion+and+egg+production+in+Aedes+aegypti+(diptera:+culicidae)(L).">Contribution of midgut bacteria to blood digestion and egg production in Aedes aegypti (diptera: culicidae)(L).</a> Parasites &amp; Vectors. 4 (1), 105 (2011).</li><li>Ramirez, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+tripartite+interactions+between+the+Aedes+aegypti+midgut+microbiota,+innate+immune+system+and+dengue+virus+influences+vector+competence.">Reciprocal tripartite interactions between the Aedes aegypti midgut microbiota, innate immune system and dengue virus influences vector competence.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 6 (3), 1561 (2012).</li><li>Dong, Y., Morton, J. C., Ramirez, J. L., Souza-Neto, J. A., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+entomopathogenic+fungus+Beauveria+bassiana+activate+toll+and+JAK-STAT+pathway-controlled+effector+genes+and+anti-dengue+activity+in+Aedes+aegypti.">The entomopathogenic fungus Beauveria bassiana activate toll and JAK-STAT pathway-controlled effector genes and anti-dengue activity in Aedes aegypti.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 42 (2), 126-132 (2012).</li><li>Anglero-Rodriguez, Y. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Aedes+aegypti-associated+fungus+increases+susceptibility+to+dengue+virus+by+modulating+gut+trypsin+activity.">An Aedes aegypti-associated fungus increases susceptibility to dengue virus by modulating gut trypsin activity.</a> Elife. 6, 28844 (2017).</li><li>Wu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gut+commensal+bacterium+promotes+mosquito+permissiveness+to+arboviruses.">A gut commensal bacterium promotes mosquito permissiveness to arboviruses.</a> Cell Host &amp; Microbe. 25 (1), 101-112 (2019).</li><li>M&#246;hlmann, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+gut+bacteria+on+the+infection+and+transmission+of+pathogenic+arboviruses+by+biting+midges+and+mosquitoes.">Impact of gut bacteria on the infection and transmission of pathogenic arboviruses by biting midges and mosquitoes.</a> Microbial Ecology. , (2020).</li><li>Llorca, M., Gros, M., Rodr&#237;guez-Mozaz, S., Barcel&#243;, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+preservation+for+the+analysis+of+antibiotics+in+water.">Sample preservation for the analysis of antibiotics in water.</a> Journal of Chromatography. A. 1369, 43-51 (2014).</li><li>Berendsen, B., Elbers, I., Stolker, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+the+stability+of+antibiotics+in+matrix+and+reference+solutions+using+a+straightforward+procedure+applying+mass+spectrometric+detection.">Determination of the stability of antibiotics in matrix and reference solutions using a straightforward procedure applying mass spectrometric detection.</a> Food Additives &amp; Contaminants: Part A, Chemistry, Analysis, Control, Exposure &amp; Risk Assessment. 28 (12), 1657-1666 (2011).</li><li>Hill, C. L., Sharma, A., Shouche, Y., Severson, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+midgut+microflora+and+dengue+virus+impact+on+life+history+traits+in+Aedes+aegypti.">Dynamics of midgut microflora and dengue virus impact on life history traits in Aedes aegypti.</a> Acta Tropica. 140, 151-157 (2014).</li><li>Eng, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifaceted+functional+implications+of+an+endogenously+expressed+tRNA+fragment+in+the+vector+mosquito+Aedes+aegypti.">Multifaceted functional implications of an endogenously expressed tRNA fragment in the vector mosquito Aedes aegypti.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (1), 0006186 (2018).</li><li>Kajla, M. K., Barrett-Wilt, G. A., Paskewitz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacteria:+A+novel+source+for+potent+mosquito+feeding-deterrents.">Bacteria: A novel source for potent mosquito feeding-deterrents.</a> Science Advances. 5 (1), 6141 (2019).</li><li>Gon&#231;alves, G. G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+MALDI-TOF+MS+to+identify+the+culturable+midgut+microbiota+of+laboratory+and+wild+mosquitoes.">Use of MALDI-TOF MS to identify the culturable midgut microbiota of laboratory and wild mosquitoes.</a> Acta Tropica. 200, 105174 (2019).</li><li>Kuss, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+microbiota+promote+enteric+virus+replication+and+systemic+pathogenesis.">Intestinal microbiota promote enteric virus replication and systemic pathogenesis.</a> Science. 334 (6053), 249-252 (2011).</li><li>Rani, A., Sharma, A., Rajagopal, R., Adak, T., Bhatnagar, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+diversity+analysis+of+larvae+and+adult+midgut+microflora+using+culture-dependent+and+culture-independent+methods+in+lab-reared+and+field-collected+Anopheles+stephensi-an+Asian+malarial+vector.">Bacterial diversity analysis of larvae and adult midgut microflora using culture-dependent and culture-independent methods in lab-reared and field-collected Anopheles stephensi-an Asian malarial vector.</a> BMC Microbiology. 9 (1), (2009).</li><li>Apte-Deshpande, A., Paingankar, M., Gokhale, M. D., Deobagkar, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serratia+odorifera+a+midgut+inhabitant+of+Aedes+aegypti+mosquito+enhances+its+susceptibility+to+dengue-2+virus.">Serratia odorifera a midgut inhabitant of Aedes aegypti mosquito enhances its susceptibility to dengue-2 virus.</a> PLoS One. 7 (7), 40401 (2012).</li><li>Behura, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+microbiota+and+metagenomics,+and+its+relevance+to+disease+transmission.">Mosquito microbiota and metagenomics, and its relevance to disease transmission.</a> Nature. 436, 257-260 (2013).</li><li>Dickson, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+laboratory+colonies+of+Aedes+aegypti+harbor+the+same+adult+midgut+bacterial+microbiome.">Diverse laboratory colonies of Aedes aegypti harbor the same adult midgut bacterial microbiome.</a> Parasites &amp; Vectors. 11 (1), 1-8 (2018).</li></ol>

Konak-mikrop etkileşimleri üzerine yapılan araştırmalar, farklı bağırsak mikroplarının farklı mekanizmalar aracılığıyla konak fizyolojilerini etkilediğini ortaya koydu. Bu makalede sivrisinek bağırsak mikrobu ilgili rolünü araştırmak için yöntem tanıttı, sivrisinek midgut diseksiyon dahil, kültleştirilebilir bağırsak bakterileri kültüre, antibiyotik tedavisi, ve ilgi bakterilerin yeniden tanıtılması.
Başarılı antibiyotik tedavisi için, deney icrasında a?...

Sivrisinekler zika virüsü, Dang virüsü ve Plazmodium parazitleri1 dahil olmak üzere yüzden fazla patojenilen insan patojenik hastalıkların en önemli vektörleri olarak kabul edilir. Sivrisinekler oviposition için besin elde etmek için bir kan yemek almak, yanlışlıkla sindirimsistemi2 yoluyla enfekte bir konak tan patojenleri yutabilir . Daha da önemlisi, sivrisinek midgut, hangi kan yemek sindirim ve patojen girişinde hem3de önemli bir rol oynar, son derece dinamik mikrobiyom 3 limanlar .
Çeşitli çalışmalar da bir kültüre bağlı yöntem ya da bir bakteri sıralama tsay4,5,,6kullanarak laboratuvar yetiştirilen ve alan toplanan sivrisinek mikrobiyota karakterize var. Pantoea, Serratia, Klebsiella, Elizabethkingiave Enterococcus gibi türler genellikle çeşitli çalışmalarda sivrisinek izole5,7,8,9. İlginçtir, sivrisinek bağırsak mikrobiyota dinamik olarak hem toplum çeşitliliği ve bakteri türlerinin miktarı, geliştirme aşamasından etkilenen, türler, coğrafi kökeni ve beslenme davranışı4dalgalanmalar . Çalışmalar kan besleme önemli ölçüde Enterobacteriaceae türlerin hızlı genişleme ve genel çeşitlilik bir azalma ile toplam bakteri yükünü artırır göstermektedir10,11. Buna ek olarak, larva evresinin sivrisinek bağırsağı mikrobiyotası genellikle böcek pupasyon ve klozyon sırasında metamorfoz geçirdiğinde ortadan kalkar; böylece, yeni ortaya çıkan yetişkin sivrisinekmikrobiyotayenidengerekir 4 .
Gut mikrobiyota besin emilimi, bağışıklık, geliştirme, üreme ve vektör yeterlilik12dahil olmak üzere çeşitli yönleriyle, böcek fizyolojisi modüle. Bir bakteri oral kaynağı gelişimi kurtarır iken Axenic sivrisinek larvaları ilk instar ötesinde geliştirmek için başarısız, sivrisinek bağırsak mikrobu larva gelişimi için gerekli olduğunu belirten13,14. Ayrıca, bağırsak bakterilerin tükenmesi kan yemek sindirim ve besin emilimini geciktirir, yumurta olgunlaşmaetkiler, ve oviposition azalır15. Buna ek olarak, bağırsak mikroflorası ile sivrisinekler antibiyotik tedavi sivrisineklere göre daha yüksek bağışıklık yanıtları ortaya çıkarmak, diğer patojenlere karşı sürekli yüksek antimikrobiyal peptit ekspresyonu ile16. Antibiyotikler genellikle sözlü olarak bu çalışmalarda pan bağırsak bakterileri kaldırmak için uygulanır, ve daha sonra deneyler kommensal mikroplar ile axenic sivrisinek ve sivrisinek arasındaki farkı karşılaştırmak için yapılır. Ancak, sivrisinek midgut mikropların çeşitli bir topluluk limanlar, ve her bakteri türleri konak fizyolojisi doğru farklı bir etki uygulayabilir.
Sivrisinek mikrobiyota farklı etkileri ile vektör yetkinliğini düzenler. Dang humması endemik bölgelerin alan kaynaklı sivrisineklerden izole proteus tarafından kolonizasyon upregulated antimikrobiyal peptit ekspresyonu ve dang virüsü enfeksiyonuna karşı direnç verir16. Entomopatojenik mantar Beauveria bassiana arbovirüsenfeksiyonu17karşı Toll ve JAK-STAT bağışıklık yolu aktive . Buna karşılık, mantar Talaromyces Aedes aegypti midgut izole gut tripsin aktivitesimodüleederek dang virüsü enfeksiyonu kolaylaştırır 18 . Buna ek olarak, Serratia marcescens smEnhancein adlı bir salgı proteini ile arbovirüs iletimi teşvik, sivrisinek bağırsak epitel üzerinde müsin tabakası sindirir19.
Bu prosedür, sivrisinek midgut diseksiyon, kültleştirilebilir bakteri kolonilerinin izolasyon, bakteri türlerinin belirlenmesi ve oral beslenme yoluyla yeniden giriş için sistematik ve sezgisel bir yöntem sağlar. Bu bir kommensal bakteri ile kan besleme temsili sonuçlar sağlar, Chryseobacterium meningosepticum, sivrisinek yumurtalık gelişimi ve oviposition.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >Adenosine 5&#8242;-triphosphate disodium salt hydrate</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >A2383</td>
			<td >Adenosine 5&#8242;-triphosphate disodium salt hydrate has been used to prepare adenosine triphosphate (ATP) standard solutions</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Aedes aegypti</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Female mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anticoagulant tube</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>363095</td>
			<td>Collect fresh blood</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Centrifuge tube</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F601620-0010</td>
			<td>1.5 ml, Natural, Graduated, Sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cotton balls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Disposable Tissue Grinding Pestle</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F619072-0001</td>
			<td>70 mm Long, Conical, Blue, Sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ethanol absolute</td>
			<td>Paini</td>
			<td></td>
			<td>Dilute it to 75% ethanol</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Forceps</td>
			<td>RWD</td>
			<td>F11029</td>
			<td>Dissection</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hemotek Membrane Feeding System</td>
			<td>Hemotek</td>
			<td></td>
			<td>Components of the feeding system, including&#160; Hemotek temperature controller, feeder-housing assembly, metal feeder assembled.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Incubator shaker</td>
			<td></td>
			<td>ZQZY-78AN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Inoculation Loops</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F619312-0001</td>
			<td>10 &#956;l, Yellow</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >LB Agar Powder</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A507003</td>
			<td>Tryptone 10.0 g&#65307; Yeast Extract 5.0 g&#65307; NaCl 10.0 g&#65307; Agar 15.0 g.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >LB Broth Powder</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A507002</td>
			<td>Tryptone 10.0 g&#65307; Yeast Extract 5.0 g&#65307; NaCl 10.0 g.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paper cup</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Place mosquito</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Parafilm</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F104002</td>
			<td>4 inx 125 ft</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Petri dish</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F611203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Penicillin G procaine salt hydrate</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A606248</td>
			<td>White powder. Soluble in water, soluble in methanol, slightly soluble in water, ethanol</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Single Channal Pipettor</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Streptomycin sulfate</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A610494</td>
			<td>Streptomycin sulfate is a glucosamine antibiotic that interferes with the synthesis of prokaryotic proteins.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sucrose</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A502792</td>
			<td>Soluble in water, ethanol and methanol, slightly soluble in glycerol and pyridine.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >TIANamp Bacteria DNA Kit</td>
			<td>TIANGEN</td>
			<td>DP302</td>
			<td>Extract DNA&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Utility Fabric-Mosquito Netting White</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vortex mixer</td>
			<td>Scintic Industries</td>
			<td>S1-0246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1.5ml EP tube</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F600620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10X PBS buffer</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>E607016</td>
			<td>This product is a 10X solution. Please dilute it 10 times before use. The pH value is 7.4.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a bacterial oral feeding assay with antibiotic-treated mosquitoes

Sivrisinek midgut konak metabolizmasını etkileyen son derece dinamik bir mikrobiyom barındırır, üreme, fitness, ve vektör yeterlilik. Bir bütün olarak bağırsak mikroplarının etkisini araştırmak için çalışmalar yapılmıştır; ancak, farklı mikroplar ana bilgisayara karşı farklı etkiler uygulayabilir. Bu makalede, her belirli sivrisinek bağırsak mikrobu ve potansiyel mekanizmanın etkisini incelemek için metodoloji sağlar.
Bu protokol iki bölümden oluşur. İlk bölümde sivrisinek midgut diseksiyon, kültleştirilebilir bakteri kolonileri izole ve bakteri türlerini tanımlamak nasıl tanıttı. İkinci bölüm antibiyotik tedavi sivrisinek oluşturmak ve belirli bir bakteri türlerini yeniden tanıtmak için prosedür sağlar.

Antibiyotik le tedavi edilen ve antibiyotiksiz sivrisineklerin orta gutları DNA ekstraksiyonu için çıkarıldı ve qPCR evrensel bakteriyel astarlarla yapıldı. Şekil 1 kontrol grubu ve antibiyotik tedavi grubunda bakteriyel 16S rRNA ekspresyonu gösterir. Sonuçlar bağırsak bakterilerinyaklaşık% 98 kaldırıldı ve penisilin ve streptomisin bağırsak sterilizasyonu başarılı olduğunu göstermektedir.
Açıklanan yöntemlerle bakteri suşları izole edilip tespit ...

Watch this Scientific Journal Video about A Bacterial Oral Feeding Assay with Antibiotic-Treated Mosquitoes at JoVE.com

A Bacterial Oral Feeding Assay with Antibiotic-Treated Mosquitoes

Antibiyotik Tedavi Sivrisinekler ile Bakteriyel Oral Beslenme Tsay

Bu makalede, izole ve sivrisinek midgut kültlenebilir mikropların belirlenmesi, sivrisinek bağırsak bakterilerin antibiyotik tükenmesi de dahil olmak üzere bireysel sivrisinek bağırsak bakterilerin etkisini araştırmak için bir protokol sunuyor ve belirli bir bakteri türleri yeniden tanıtmak.

The mosquito midgut harbors a highly dynamic microbiome that affects the host metabolism, reproduction, fitness, and vector competence. Studies have been ...

Sivrisinek midgut konak metabolizma, üreme, fitness ve veteriner yetkinliğini etkileyen mikropların karmaşık bir topluluk barındırır. Her bağırsak mikrobu ile farklı bir etkisi vardır. Bu video, her bakteri suş veya konak fizyolojisi ilgili rolünü incelemek için prosedür tanıttı.Bağırsak bakteri kolonileri bir kültür elde etmek için, steril koşullar altında sivrisinek midgut incelemek. Diseksiyon midgut zemin, serotologinate, ve agar plaka üzerine yayıldı. Plakadan tek koloniler seçin ve 16 SRNA gen dizilimi ile bakteri türlerini tanımlayın.Bağırsak mikrobiyota kaldırmak için üç gün üst üste antibiyotik içeren COD Kabartma ile sivrisinek beslemek. Antibiyotik tedavisinin etkinliği sonraki aşırılık yanlıları öncesinde koloni oluşturan birim test için aseptik sivrisinek midgut diseksiyon tarafından teyit edilebilir. Daha sonra daha önce oral beslenme tsay yoluyla sivrisinek bağırsağı izole belirli bakteri türlerini yeniden tanıtmak.Bakterilerin konak fizyolojisi üzerindeki etkisi tedavi edilmeyen sivrisinekler, antibiyotik le tedavi edilen sivrisinekler ve sivrisinekler özel kısıtlamayı yeniden ortaya atarak değerlendirilebilir. Midgut diseksiyon ve ekilebilir bakteri izolasyonu. Başlamak için, bir aspiratör ve hücre toplama kutusunda sivrisinek ile kafeste sivrisinek toplamak.3-5 dakika 4 derecelik bir sıcaklığa maruz kalarak sivrisinekanestezi. Sivrisinekler bir buz soğuk Petri kabına yerleştirerek anestezi tutun. Tezgahı dezenfekte edin, mikroskobu inceleyin ve çevreden gelen bakterilerin kirlenmesini önlemek için %75 etanol püskürtün.Yüzey üç dakika boyunca% 75 etanol onları bantlama ve sallayarak sivrisinek sterilize ve PBS tampon ile iki kez durulayın. PBS damla içeren steril bir cam slayt üzerinde ayrı ayrı sivrisinek ikiye bölün. Dikkatle bacaklar, kanatlar ve sivrisinek baş forceps kullanarak kaldırın.Kenetsivrisinek göğüs ve karın son bölümü forceps ve sindirim sistemi izole etmek için ayrı çekin. Sindirim sisteminden ürün ve malpighian tüp kaldırmak için forceps kullanın. Ürün şekerli su yutularak sonra midgut ve şişkinlik pnterior yerle bir edilir.Malpighian tüpleri midgut ve hindgut kavşağında ince boşaltım tüpleri grubudur. 200 mikrolitre steril PBS tampon ile EP tüpü içine diseksiyon makyaj yerleştirin ve temiz tezgah içinde steril taşlama papaz ile eziyet. Tahıl LB agar plaka ve umutsuz plaka için her sanrı 50 mikrolitre de üç tempo sanrılar homojen yüklemek için.Tek koloniler uygun olana kadar plakayı 1-2 gün boyunca 37 derece olarak kuluçkaya yatırın. 50 mililitrelik lb sütyen orta içeren 150 mililitrekonik şişe içine tek koloniler seçin. bir gecede 37 derece de bakteri sallamak.Türlerin tanımlanması. Bakteriyel genomik DNA konstrüksiyon kiti ile TOTO DNA ayıklayın ve PCR tarafından 16 SRDNA yükseltin. Ambrose jel elektroforezi ve sürülme kiti ile PCR ürünlerinden DNA parçalarının geri kazanımı ve saflaştırılması.Elde edilmiş bakteri zinciri dizilerine sahip olmak için saflaştırılmış DNA parçaları üzerinde DNA dizilimi yapıldı. Bakterilere, arkelere ve veritabanına karşı bakterileri tanımlayan 16 SRNA gen dizisini sorgulayarak patlama araması yapın. Tür düzeyine tanımlama, en yakın takım banka girişine %99 16 SRDNA dizi benzerliğinden daha büyük veya eşit olarak tanımlanmıştır.İzole, 16 SRDNA sekansı olduğunda, benzerlik %99'dan daha az ve %95 antibiyotik tedavisi ve bakterinin yeniden girişine eşit olduğundan veya eşit olduğunda buna karşılık gelen cinse atanmıştır. bize hazırlamak için sakaroz penisilin ve streptomisin gerekli miktarda tartmak 10% sakaroz çözeltisi, penisilin 20 adet ve mililitre başına streptomisin 20 mikrogram çalışıyor da dahil olmak üzere. Antibiyotik içeren sakaroz çözeltisi pamuk topları sızın ve sivrisinek içeren kağıt fincan üstüne yerleştirin.Bir deniz kıyısının buharlaşmasını önlemek için pamuk topun üzerini 10 santimetrelik Petri kabıile kapatın. Pamuk topları günde iki kez değiştirin ve üç gün üst üste sivrisinek beslemek. Sivrisinekler iki gruba ayrılır.İlk grup herhangi bir tedavi olmadan bir sivrisinek fincan yerleştirildi, herhangi bir pamuk topları doktor ile 10%Yani çapraz günlük verildi. İkinci grup antibiyotik tedavisi gördü ve üç gün boyunca hizmet etti. Her grupta, Sergei sivrisinekleri kesildi.Mika toplam DNA ekstraksiyonu için çıkarıldı ve QPCR evrensel bakteri astarları kullanılarak yapıldı, şekil bir kontrol grubu ve antibiyotik tedavi grubunda 16 SRNA ifadesini gösterir. Sonuçlar penisilin ve streptomisin maliyeti veya gerçekleştirilmesi başarılı olduğunu göstermektedir. bakteriyel çözelti hazırlamak, bir spektrofotometre ile virüs bir bakteri çözeltisi ölçer, EP tüpü içine bir OT bakteri süspansiyon ekleyin.Santrifüj süspansiyon 5, 000 RCA dört derece de beş dakika için supernatant atın, steril PBS tampon ile bakteri palet çalışır yıkayın. Yeniden 200 mikrolitre steril PBS tampon ile bakteriyel palet askıya 600 mikrolitre, 10%sakaroz çözeltisi, 200 mikrolitre ATP ve 200 mikrolitre bakteriyel süspansiyon yeni bir AP tüp içine ekleyin ve iyice karıştırın. Alternatif olarak, bakteri kan aktive ısı yeniden askıya alınabilir.Isıtıcı aktif kan hazırlanması. antikoagülan tüp ile pıhtı taze kan, taze kan 2-3 mililitre almak. plazma ve kan hücrelerini ayırmak için dört derece 10 dakika 1000 santrifüj.Yeni bir EP tüp içine plazma toplamak ve burada bir saat için 56 derece aktive aktive. Steril PBS tampon ile kez boyunca Wash Blast ev. Isıtma aktif plazma ile patlayıcı ev durula.Membran ve besleme sistemini birleştirin. Film hastalığını en üst düzeyde çekin. plastik halka ve işyeri parafilm yavaş yavaş besleyici ünitesine hazırlanan bakteriyel çözüm eklemek sızıntısını önlemek için düzeltmek, maksimum cüzdan.Kabarcık önlemek için bir yönden düştü ve besleyici birimi mühür. Güç kaynağını bağlayın. Sıcaklık 37 dereceye ulaşana kadar bekleyin besleyici üzerine bakteri çözeltisi ile besleyici ünitesi yüklü.Bakteri sivrisinek besleme den önce antibiyotik metabolize etmek için 24 saat boyunca durdurulmalıdır. Sivrisinek ile kağıt bardak üzerinde besleme ünitesi için, daha sonra 90 dakika besleme izin verin. Tam olarak teşvik sivrisinek daha fazla çalışma için seçilebilir.Temsili sonuçlar. İkinci şekil bize sivrisinek başına ortalama övgüyü gösteriyor. Antibiyotik retosyonu sivrisinektedavi sonra meningosepticum bakın.Şekil 3, C meningosepticum içeren kan yemekten 24 saat sonra varyant gelişimi ile ilgili genlerin ekspresyonunu göstermektedir. Sonuçlar, kontrol grubunun yumurta üretiminde ve solma grubunda önemli bir değişiklik olmadığını göstermektedir. Bakteri veya antibiyotik tedavi sivrisinek ile bir beslenme kompozisyon ilgi için teşekkür ederiz.

a-bacterial-oral-feeding-assay-with-antibiotic-treated-mosquitoes

Research

JoVE Journal

Biology

Injection of An. stephensi Embryos to Generate Malaria-resistant Mosquitoes

The introduction of exogenous genes into the genomes of mosquitoes requires microinjection techniques tailored to the specific species of interest. This video protocol demonstrates a method used by the James laboratory to microinject DNA constructs into Anopheles stephensi embryos for the generation of transformed mosquitoes. Techniques for preparing microinjection needles, collecting and preparing embryos and performing the microinjection are illustrated.

Anopheles stephensi mosquitoes are vectors for malaria inhabiting India and throughout Asia. This video demonstrates the technique for performing microinjections of this species with transgenes that will confer resistance to the malaria to the mosquito. Much of the methodology demonstrated in this video is applicable to microinjection techniques of other mosquito species.

Bir, Enjeksiyon. stephensi Embriyolar Sıtma dayanıklı Sivrisinekler oluşturun

The introduction of exogenous genes into the genomes of mosquitoes requires microinjection techniques tailored to the specific species of interest. This ...

Biyoloji

Preventing the Spread of Malaria and Dengue Fever Using Genetically Modified Mosquitoes

In this candid interview, Anthony A. James explains how mosquito genetics can be exploited to control malaria and dengue transmission.   Population replacement strategy, the idea that transgenic mosquitoes can be released into the wild to control disease transmission, is introduced, as well as the concept of genetic drive and the design criterion for an effective genetic drive system. The ethical considerations of releasing genetically-modified organisms into the wild are also discussed.

In this candid interview, Anthony A. James explains how mosquito genetics can be exploited to control malaria and dengue transmission. Population replacement strategy, the idea that transgenic mosquitoes can be released into the wild to control disease transmission, is introduced as well as the concept of genetic drive and the design criterion for an effective genetic drive system. The ethical considerations of releasing genetically-modified organisms into the wild are also discussed.

Genetiği Değiştirilmiş Sivrisinekler kullanarak Sıtma ve Dang Ateşi Yayılması Önleme

In this candid interview, Anthony A. James explains how mosquito genetics can be exploited to control malaria and dengue transmission.   Population ...

Protocols for Oral Infection of Lepidopteran Larvae with Baculovirus

Baculoviruses are widely used both as protein expression vectors and as insect pest control agents. This video shows how lepidopteran larvae can be infected with polyhedra by droplet feeding and diet plug-based bioassays. This accompanying Springer Protocols section provides an overview of the baculovirus lifecycle and use of baculoviruses as insecticidal agents, including discussion of the pros and cons for use of baculoviruses as insecticides, and progress made in genetic enhancement of baculoviruses for improved insecticidal efficacy.

In this video, we demonstrate oral infection techniques of lepidopteran larvae with baculovirus in order to determine insecticidal efficiency.

Baculovirus lepidopteran Larva Ağız Enfeksiyon Protokolleri

Baculoviruses are widely used both as protein expression vectors and as insect pest control agents. This video shows how lepidopteran larvae can be ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion rate. This method can be used to obtain a better understanding of the process of diuresis in insects and is especially useful in the study of diuresis in blood-feeding arthropods that are able to take up huge amounts of liquid in a single blood meal. 
This RNAi-mediated gene knockdown combined with an in vivo diuresis assay was developed by the Hansen lab to study the effects of RNAi-mediated knockdown of aquaporin genes on Aedes aegypti mosquito diuresis1. 
The protocol is setup in two parts: the first demonstration illustrates how to construct a simple mosquito injection device and how to prepare and inject dsRNA into the thorax of mosquitoes for RNAi-mediated gene knockdown. The second demonstration illustrates how to determine excretion rates in mosquitoes using an in vivo bioassay.

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

In this protocol we combine RNAi-mediated gene silencing with an in vivo diuresis assay to study the effects knockdown of genes of interest has on mosquito fluid excretion.

RNAi-aracılı Gene Nakavt ve<em&gt; In Vivo</emYetişkin Kadınlar&gt; diürez Testi<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; Sivrisinekler

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

A Multi-detection Assay for Malaria Transmitting Mosquitoes

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, several traits are typically characterized using molecular assays to aid in epidemiological studies. These traits include species identification, insecticide resistance, parasite infection status, and host preference. Since populations of the Anopheles gambiae complex are morphologically indistinguishable, a polymerase chain reaction (PCR) is traditionally used to identify species. Once the species is known, several downstream assays are routinely performed to elucidate further characteristics. For instance, mutations known as KDR in a para gene confer resistance against DDT and pyrethroid insecticides. Additionally, enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) or Plasmodium parasite DNA detection PCR assays are used to detect parasites present in mosquito tissues. Lastly, a combination of PCR and restriction enzyme digests can be used to elucidate host preference (e.g., human vs. animal blood) by screening the mosquito bloodmeal for host-specific DNA. We have developed a multi-detection assay (MDA) that combines all of the aforementioned assays into a single multiplex reaction genotyping 33SNPs for 96 or 384 samples at a time. Because the MDA includes multiple markers for species, Plasmodium detection, and host blood identification, the likelihood of generating false positives or negatives is greatly reduced from previous assays that include only one marker per trait. This robust and simple assay can detect these key mosquito traits cost-effectively and in a fraction of the time of existing assays.

Malaria transmitting mosquitoes have a number of epidemiologically important characteristics that can only be detected using molecular techniques. Utilizing a MALDI-TOF based SNP genotyping platform, we developed an assay for simultaneously detecting multiple key traits (species, insecticide resistance, parasite infection and host choice) of malaria vectors.

Sıtma verici Sivrisinekler için bir çok algılama Deneyi

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, ...

High-fat Feeding Paradigm for Larval Zebrafish: Feeding, Live Imaging, and Quantification of Food Intake

Zebrafish are emerging as a model of dietary lipid processing and metabolic disease. This protocol describes how to feed larval zebrafish a lipid-rich meal, which consists of an emulsion of chicken egg yolk liposomes created by sonicating egg yolk in embryo media. Detailed instructions are provided to screen larvae for egg yolk consumption so that larvae that fail to feed will not confound experimental results. The chicken egg yolk liposomes can be spiked with fluorescent lipid analogs, including fatty acids and cholesterol, enabling both systemic and subcellular visualization of dietary lipid processing. Several methods are described to mount larvae that are conducive to short- and long-term live imaging with both upright and inverted objectives at high and low magnification. Additionally presented is an assay to quantify larval food intake by extracting the lipids of larvae fed fluorescent lipid analogs, spotting the lipids on a thin layer chromatography plate, and quantifying the fluorescence. Finally, critical aspects of the procedures, important controls, options for modifying the protocols to address specific experimental questions, and potential limitations are discussed. These techniques can be applied not only to focused, hypothesis driven inquiries, but also to a variety of screens and live imaging techniques to study dietary lipid metabolism and the control of food intake.

Zebrafish are emerging as a valuable model of dietary lipid processing and metabolic disease. Described are protocols of lipid-rich larval feeds, live imaging of dietary fluorescent lipid analogs, and quantification of food intake. These techniques can be applied to a variety of screening, imaging, and hypothesis driven inquiry techniques.

Larva Zebra balığı için Paradigma Besleme Yüksek yağlı: Besleme, Canlı Görüntüleme ve Gıda Alımı miktarının belirlenmesi

Zebrafish are emerging as a model of dietary lipid processing and metabolic disease. This protocol describes how to feed larval zebrafish a lipid-rich ...

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, chikungunya and Zika. Wolbachia-infected mosquitoes can be released into the field to either reduce population sizes through incompatible matings or to transform populations with mosquitoes that are refractory to virus transmission. For these strategies to succeed, the mosquitoes released into the field from the laboratory must be competitive with native mosquitoes. However, maintaining mosquitoes in the laboratory can result in inbreeding, genetic drift and laboratory adaptation which can reduce their fitness in the field and may confound the results of experiments. To test the suitability of different Wolbachia infections for deployment in the field, it is necessary to maintain mosquitoes in a controlled laboratory environment across multiple generations. We describe a simple protocol for maintaining Ae. aegypti mosquitoes in the laboratory, which is suitable for both Wolbachia-infected and wild-type mosquitoes. The methods minimize laboratory adaptation and implement outcrossing to increase the relevance of experiments to field mosquitoes. Additionally, colonies are maintained under optimal conditions to maximize their fitness for open field releases.

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Aedes aegypti mosquitoes infected with Wolbachia are being released into natural populations to suppress the transmission of arboviruses. We describe methods to rear Ae. aegypti with Wolbachia infections in the laboratory for experiments and field release, taking precautions to minimize laboratory adaptation and selection.

Aedes aegypti sivrisinek enfekte Wolbachia ile bakımını yapma

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the best developed model systems of infection and innate immunity. While most work has focused on systemic infections, there has been a recent increase of interest in the mechanisms of gut immunocompetence to pathogens, which require methods to orally infect flies. Here we present a protocol to orally expose individual flies to an opportunistic bacterial pathogen (Pseudomonas aeruginosa) and a natural bacterial pathogen of D. melanogaster (Pseudomonas entomophila). The goal of this protocol is to provide a robust method to expose male and female flies to these pathogens. We provide representative results showing survival phenotypes, microbe loads, and bacterial shedding, which is relevant for the study of heterogeneity in pathogen transmission. Finally, we confirm that Dcy mutants (lacking the protective peritrophic matrix in the gut epithelium) and Relish mutants (lacking a functional immune deficiency (IMD) pathway), show increased susceptibility to bacterial oral infection. This protocol, therefore, describes a robust method to infect flies using the oral route of infection, which can be extended to the study of a variety genetic and environmental sources of variation in gut infection outcomes and bacterial transmission.

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

This protocol describes methods to orally expose and infect the fruit fly Drosophila melanogaster with bacterial pathogens, and to measure the number of infectious bacteria shed following gut infection. We further describe the effect of immune mutants on fly survival following oral bacterial infection.

Bakteriyel enfeksiyon ve atma Drosophila melanogaster içinde sözlü

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the best developed model systems of infection and innate immunity. While most work has focused on systemic ...

Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such as Zika, dengue and malaria. Assays for rapid, high-throughput analyses of unformulated novel chemistries against mosquito larvae and adults are presented. We describe protocols for single point-dose and dose response assays to evaluate the toxicity of small molecule chemistries to the Aedes aegypti vector of Zika, dengue and yellow fever,&#160;the malaria vector, Anopheles gambiae and the northern house mosquito, Culex quinquefasciatus, on contact and via ingestion. As an example, we evaluated the toxicity of amitriptyline, a small molecule antagonist of G protein-coupled receptors, via larval, adult topical and adult blood-feeding assay. The protocols provide a starting point to investigate insecticide potential. Results are discussed in the context of additional experiments to explore product applications and mechanisms for delivery.

Protocols are described for assessing the toxicity of chemistries to immature and adult mosquitoes for development as new classes of larvicides, adulticides and endectocides. The protocols enable high-throughput testing of multiple chemistries at single-point dose and subsequent evaluation via dose response assay to determine toxicity on contact or via ingestion.

Sivrisinekler için roman böcek kimyaları toksisite testleri için iletişim kuralları

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such ...

Detection of Plasmodium Sporozoites in Anopheles Mosquitoes using an Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Plasmodium sporozoites are the infective stage of malaria parasites that infect humans. The sporozoites residing in the salivary glands of female Anopheles mosquitoes are transmitted to humans via mosquito bites during blood feeding. The presence of sporozoites in the mosquito salivary glands thus defines mosquito infectiousness. To determine whether an Anopheles mosquito carries Plasmodium sporozoites, the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method has been the standard tool to detect the Plasmodium circumsporozoite protein (CSP), the major surface protein of the sporozoites. In this method, the head along with the thorax of each mosquito is separated from the abdomen, homogenized, and subjected to a sandwich ELISA to detect the presence of CSP specific to Plasmodium falciparum and each of the two subtypes, VK210 and VK247, of Plasmodium vivax.This method has been used to study malaria transmission, including the seasonal dynamics of mosquito infection and the species of the major malaria vectors in the study sites.

Detection of Plasmodium Sporozoites in Anopheles Mosquitoes using an Enzyme-linked Immunosorbent Assay

This protocol describes a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay to detect salivary gland sporozoites in mosquitoes. Using easily available monoclonal antibodies, the method enables cost-effective, high-throughput detection of mosquitoes carrying Plasmodium falciparum or Plasmodium vivax. The method is suitable for malaria transmission research, including vector surveys.