Name: spectrophotometric screening for potential inhibitors of cytosolic glutathione s-transferases
Uploaded: 2020-10-10T14:30:00
Duration: 14 min 57 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Spectrophotometric Screening for Potential Inhibitors of Cytosolic Glutathione S-Transferases at JoVE.com

इस शोध कार्य को कैनसर्च फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था। लेखक तकनीकी सहायता के लिए सुश्री लारेंस लेस्ने और श्री योएन सरमिएंटो को स्वीकार करना चाहते हैं, विशेष रूप से नकल प्रयोगों के संचालन में, जबकि अवरोधकों के साथ परख का मानकीकरण करते हैं। श्री डेनिस मैरिनो, डॉ सिमोना म्लाकर और डॉ वड म्लाकर द्वारा सार्थक चर्चाओं और जानकारियों को बहुत स्वीकार किया जाता है । हम वीडियो के कथन के साथ उसकी मदद के लिए डॉ पेट्रीसिया Huezo-Diaz कर्टिस का शुक्रिया अदा करते हैं । हम डॉ मुथुकुमार को सिलिको भविष्यवाणियों में उनके इनपुट के लिए धन्यवाद देते हैं । हम इस पांडुलिपि के अंग्रेजी भाषा प्रूफ रीडिंग में उनकी मदद के लिए श्री डैरेन हार्ट को भी धन्यवाद देते हैं ।

<ol>
	<li>Mannervik, B., Danielson, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione+transferases--structure+and+catalytic+activity.">Glutathione transferases--structure and catalytic activity.</a> CRC Critical Reviews in Biochemistry. 23 (3), 283-337 (1988).</li><li>Awasthi, Y. C., Sharma, R., Singhal, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+glutathione+S-transferases.">Human glutathione S-transferases.</a> The International Journal of Biochemistry. 26 (3), 295-308 (1994).</li><li>Rowe, J. D., Nieves, E., Listowsky, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subunit+diversity+and+tissue+distribution+of+human+glutathione+S-transferases:+interpretations+based+on+electrospray+ionization-MS+and+peptide+sequence-specific+antisera.">Subunit diversity and tissue distribution of human glutathione S-transferases: interpretations based on electrospray ionization-MS and peptide sequence-specific antisera.</a> Biochemical Journal. 325, 481-486 (1997).</li><li>Beckett, G. J., Hayes, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione+S-transferases:+biomedical+applications.">Glutathione S-transferases: biomedical applications.</a> Advances in Clinical Chemistry. 30, 281-380 (1993).</li><li>Oakley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione+transferases:+a+structural+perspective.">Glutathione transferases: a structural perspective.</a> Drug Metabolism Reviews. 43 (2), 138-151 (2011).</li><li>Townsend, D. M., Tew, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+glutathione-S-transferase+in+anti-cancer+drug+resistance.">The role of glutathione-S-transferase in anti-cancer drug resistance.</a> Oncogene. 22 (47), 7369-7375 (2003).</li><li>Tew, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione-associated+Enzymes+in+Anticancer+Drug+Resistance.">Glutathione-associated Enzymes in Anticancer Drug Resistance.</a> Cancer Research. 54 (16), 4313-4320 (1994).</li><li>Laborde, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione+transferases+as+mediators+of+signaling+pathways+involved+in+cell+proliferation+and+cell+death.">Glutathione transferases as mediators of signaling pathways involved in cell proliferation and cell death.</a> Cell Death and Differentiation. 17 (9), 1373-1380 (2010).</li><li>Adler, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+JNK+signaling+by+GSTp.">Regulation of JNK signaling by GSTp.</a> The EMBO Journal. 18 (5), 1321-1334 (1999).</li><li>Cho, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione+S-Transferase+Mu+Modulates+the+Stress-activated+Signals+by+Suppressing+Apoptosis+Signal-regulating+Kinase+1.">Glutathione S-Transferase Mu Modulates the Stress-activated Signals by Suppressing Apoptosis Signal-regulating Kinase 1.</a> Journal of Biological Chemistry. 276 (16), 12749-12755 (2001).</li><li>Hayes, J. D., Flanagan, J. U., Jowsey, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione+Transferases.">Glutathione Transferases.</a> Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 45 (1), 51-88 (2005).</li><li>Lo, H. W., Ali-Osman, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+polymorphism+and+function+of+glutathione+S-transferases+in+tumor+drug+resistance.">Genetic polymorphism and function of glutathione S-transferases in tumor drug resistance.</a> Current Opinion in Pharmacology. 7 (4), 367-374 (2007).</li><li>Ansari, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione+S-transferase+gene+variations+influence+BU+pharmacokinetics+and+outcome+of+hematopoietic+SCT+in+pediatric+patients.">Glutathione S-transferase gene variations influence BU pharmacokinetics and outcome of hematopoietic SCT in pediatric patients.</a> Bone Marrow Transplantation. 48 (7), 939-946 (2013).</li><li>Mahajan, S., Atkins, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemistry+and+biology+of+inhibitors+and+pro-drugs+targeted+to+glutathione+S-transferases.">The chemistry and biology of inhibitors and pro-drugs targeted to glutathione S-transferases.</a> Cellular and molecular life sciences: CMLS. 62 (11), 1221-1233 (2005).</li><li>Allocati, N., Masulli, M., Ilio, C. D., Federici, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione+transferases:+substrates,+inihibitors+and+pro-drugs+in+cancer+and+neurodegenerative+diseases.">Glutathione transferases: substrates, inihibitors and pro-drugs in cancer and neurodegenerative diseases.</a> Oncogenesis. 7 (1), 8 (2018).</li><li>Aggarwal, B. B., Kumar, A., Bharti, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticancer+potential+of+curcumin:+preclinical+and+clinical+studies.">Anticancer potential of curcumin: preclinical and clinical studies.</a> Anticancer Research. 23 (1), 363-398 (2003).</li><li>Han, S. S., Chung, S. T., Robertson, D. A., Ranjan, D., Bondada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curcumin+causes+the+growth+arrest+and+apoptosis+of+B+cell+lymphoma+by+downregulation+of+egr-1,+c-myc,+bcl-XL,+NF-kappa+B,+and+p53.">Curcumin causes the growth arrest and apoptosis of B cell lymphoma by downregulation of egr-1, c-myc, bcl-XL, NF-kappa B, and p53.</a> Clinical Immunology. 93 (2), 152-161 (1999).</li><li>Golonko, A., Lewandowska, H., &#346;wis&#322;ocka, R., Jasi&#324;ska, U. T., Priebe, W., Lewandowski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curcumin+as+tyrosine+kinase+inhibitor+in+cancer+treatment.">Curcumin as tyrosine kinase inhibitor in cancer treatment.</a> European Journal of Medicinal Chemistry. 181, 111512 (2019).</li><li>Awasthi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curcumin-glutathione+interactions+and+the+role+of+human+glutathione+S-transferase+P1-1.">Curcumin-glutathione interactions and the role of human glutathione S-transferase P1-1.</a> Chemico-Biological Interactions. 128 (1), 19-38 (2000).</li><li>Appiah-Opong, R., Commandeur, J. N. M., Istyastono, E., Bogaards, J. J., Vermeulen, N. P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+human+glutathione+S-transferases+by+curcumin+and+analogues.">Inhibition of human glutathione S-transferases by curcumin and analogues.</a> Xenobiotica; the Fate of Foreign Compounds in Biological Systems. 39 (4), 302-311 (2009).</li><li>Dubey, V., Owusu-Apenten, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curcumin+Restores+Glutathione-S-Transferase+Activity+for+LNCaP+Prostate+Cancer+Cells.">Curcumin Restores Glutathione-S-Transferase Activity for LNCaP Prostate Cancer Cells.</a> Pure and Applied Chemistry. 2, 61-72 (2014).</li><li>Habig, W. H., Pabst, M. J., Jakoby, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione+S-transferases.+The+first+enzymatic+step+in+mercapturic+acid+formation.">Glutathione S-transferases. The first enzymatic step in mercapturic acid formation.</a> The Journal of Biological Chemistry. 249 (22), 7130-7139 (1974).</li><li>Johnson, K. A., Goody, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Original+Michaelis+Constant:+Translation+of+the+1913+Michaelis-Menten+Paper.">The Original Michaelis Constant: Translation of the 1913 Michaelis-Menten Paper.</a> Biochemistry. 50 (39), 8264-8269 (2011).</li><li>Ochs, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+Enzyme+Inhibition.">Understanding Enzyme Inhibition.</a> Journal of Chemical Education. 77 (11), 1453 (2000).</li><li>Bisswanger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzyme+assays.">Enzyme assays.</a> Perspectives in Science. 1 (1), 41-55 (2014).</li><li>Acker, M. G., Auld, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+for+the+design+and+reporting+of+enzyme+assays+in+high-throughput+screening+applications.">Considerations for the design and reporting of enzyme assays in high-throughput screening applications.</a> Perspectives in Science. 1 (1), 56-73 (2014).</li><li>Cheng, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Anticancer Research. 21, 2895-2900 (2001).</li><li>Yang, J., Copeland, R. A., Lai, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+Balanced+Conditions+for+Inhibitor+Screening+Assays+That+Target+Bisubstrate+Enzymes.">Defining Balanced Conditions for Inhibitor Screening Assays That Target Bisubstrate Enzymes.</a> Journal of Biomolecular Screening. 14 (2), 111-120 (2009).</li><li>Uppugunduri, C. R. S., Muthukumaran, J., Santos-Silva, T., Ansari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+putative+substrates+and+inhibitors+for+Glutathione+S-transferases+using+computational+methods.">Identification of putative substrates and inhibitors for Glutathione S-transferases using computational methods.</a> Zenodo. , (2017).</li><li>Burlingham, B. T., Widlanski, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Intuitive+Look+at+the+Relationship+of+Ki+and+IC50:+A+More+General+Use+for+the+Dixon+Plot.">An Intuitive Look at the Relationship of Ki and IC50: A More General Use for the Dixon Plot.</a> Journal of Chemical Education. 80 (2), 214 (2003).</li><li>Wang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+of+curcumin+in+buffer+solutions+and+characterization+of+its+degradation+products.">Stability of curcumin in buffer solutions and characterization of its degradation products.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 15 (12), 1867-1876 (1997).</li><li>Copeland, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+enzyme+inhibitors+in+drug+discovery.+A+guide+for+medicinal+chemists+and+pharmacologists.">Evaluation of enzyme inhibitors in drug discovery. A guide for medicinal chemists and pharmacologists.</a> Methods of Biochemical Analysis. 46, 1 (2005).</li><li>Kalliokoski, T., Kramer, C., Vulpetti, A., Gedeck, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparability+of+Mixed+IC50+Data+-+A+Statistical+Analysis.">Comparability of Mixed IC50 Data - A Statistical Analysis.</a> PLoS ONE. 8 (4), (2013).</li><li>Brandt, R. B., Laux, J. E., Yates, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calculation+of+inhibitor+Ki+and+inhibitor+type+from+the+concentration+of+inhibitor+for+50%+inhibition+for+Michaelis-Menten+enzymes.">Calculation of inhibitor Ki and inhibitor type from the concentration of inhibitor for 50% inhibition for Michaelis-Menten enzymes.</a> Biochemical Medicine and Metabolic Biology. 37 (3), 344-349 (1987).</li><li>Brooks, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basics+of+Enzymatic+Assays+for+HTS.">Basics of Enzymatic Assays for HTS.</a> Eli Lilly &amp; Company and the National Center for Advancing Translational Sciences. , (2012).</li><li>Arakawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+hepatic+glutathione+transferase+Mu+1+and+Theta+1+activities+in+humans+and+mice+using+genotype+information.">Evaluation of hepatic glutathione transferase Mu 1 and Theta 1 activities in humans and mice using genotype information.</a> Drug Metabolism and Disposition: The Biological Fate of Chemicals. 40 (3), 497-503 (2012).</li><li>Sherratt, P. J., Pulford, D. J., Harrison, D. J., Green, T., Hayes, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+human+class+Theta+glutathione+S-transferase+T1-1+can+catalyse+the+activation+of+dichloromethane,+a+liver+and+lung+carcinogen+in+the+mouse.+Comparison+of+the+tissue+distribution+of+GST+T1-1+with+that+of+classes+Alpha,+Mu+and+Pi+GST+in+human.">Evidence that human class Theta glutathione S-transferase T1-1 can catalyse the activation of dichloromethane, a liver and lung carcinogen in the mouse. Comparison of the tissue distribution of GST T1-1 with that of classes Alpha, Mu and Pi GST in human.</a> The Biochemical Journal. 326 (3), 837-846 (1997).</li></ol>

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-Chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>237329</td>
			<td>Substrate used for the GST enzymatic assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning UV-Transparent Microplates</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS3635</td>
			<td>Transparent plate to perform the enzymatic assay. 
			When using 200 ul, the pathlength is 0.552 cm for this plate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curcumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>8511</td>
			<td>Used for the results section, to test the inhibition potency of curcumin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td>To prepare the stock of the putative inhibitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td>Buffer for the enzymatic reaction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 95%</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>10542382</td>
			<td>To dilute the CDNB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutathione S-Transferase from equine liver</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G6511</td>
			<td>Used for the results section, to test the inhibition potency of curcumin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutathione reduced (GSH)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G4251</td>
			<td>Co-substrate for the GST enzymatic assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>23225</td>
			<td>To quantify the amount of protein present in the enzymatic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectramax iD3</td>
			<td>Molecular devices</td>
			<td></td>
			<td>To do spectrophotometric measurments</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spectrophotometric screening for potential inhibitors of cytosolic glutathione s-transferases

ग्लूटाथिएक एस-ट्रांसफरेस (जीटीएस) मेटाबोलिक एंजाइम हैं जो ग्लूटाथिएक (जीएसएच) कंजूगेशन द्वारा अंतर्जात या बहिर्जात इलेक्ट्रोफिलिक यौगिकों के उन्मूलन के लिए जिम्मेदार हैं। इसके अलावा, जीटीएस माइटोजेन-सक्रिय प्रोटीन किनासेस (एमएपीके) के नियामक हैं जो एपोटोटिक रास्तों में शामिल हैं। जीटीएस का अतिव्यवसंगत विद्युत एल्किलाटिंग एजेंटों के साथ कीमोथेरेपी से गुजरने वाले रोगियों के बीच कम चिकित्सीय प्रभावकारिता से सहसंबद्ध है। जीएसटी अवरोधकों का उपयोग करना इस प्रवृत्ति को पलटने और उपचार शक्ति को बढ़ाने के लिए एक संभावित समाधान हो सकता है। इस लक्ष्य को प्राप्त करने के लिए एक सटीक, त्वरित और आसान एंजाइम परख के साथ ऐसे यौगिकों की खोज की आवश्यकता होती है। 1-क्लोरो-2,4-डिनिट्रोबेनजेन (सीडीएनबी) का उपयोग करके एक स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक प्रोटोकॉल साहित्य में सबसे अधिक नियोजित विधि है। हालांकि, पहले से ही वर्णित जीएसटी निषेध प्रयोग एक इष्टतम निषेध परख के प्रत्येक चरण का ब्यौरा प्रोटोकॉल प्रदान नहीं करते हैं, जैसे सीडीएनबी के लिए माइकलिस-मेंटेन स्थिर (KM)का माप या नियोजित एंजाइम एकाग्रता का संकेत, एक परीक्षण यौगिक की निषेध शक्ति का आकलन करने के लिए महत्वपूर्ण पैरामीटर। इसलिए, इस प्रोटोकॉल के साथ, हम संभावित अवरोधकों के पुस्तकालयों को स्क्रीन करने के लिए एक अनुकूलित स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक जीएसटी एंजाइम परख के प्रत्येक चरण का वर्णन करते हैं। हम आधा अधिकतम अवरोधक एकाग्रता (IC50) और अवरोध के निरंतर (K i) की गणना की व्याख्याकरते हैं-एंजाइम अवरोधक की शक्ति को मापने के लिए उपयोग की जाने वाली दो विशेषताएं। वर्णित विधि को कोशिकाओं या शुद्ध पुनर्संयोजन मानव जीटीएस से निकाले गए जीटीएस के पूल का उपयोग करके लागू किया जा सकता है, नामत जीएसटी अल्फा 1 (जीएसटीए1), जीएसटी म्यू 1 (जीएसटीएम1) या जीएसटी पीआई 1 (जीएसटीपी1)। हालांकि, इस प्रोटोकॉल को जीएसटी थीटा 1 (जीएसटीटी1) पर लागू नहीं किया जा सकता है, क्योंकि सीडीएनबी इस आइसोफॉर्म के लिए सब्सट्रेट नहीं है। इस विधि का उपयोग घोड़े के जिगर से जीटीएस का उपयोग करके करक्यूमिन की निषेध शक्ति का परीक्षण करने के लिए किया गया था। करक्यूमिन कैंसर विरोधी गुणों का प्रदर्शन करने वाला एक अणु है और सिलिको डॉकिंग भविष्यवाणियों के बाद जीएसटी आइसोफॉर्म के प्रति आत्मीयता दिखाई। हमने दिखा दिया कि करक्यूमिन एक शक्तिशाली प्रतिस्पर्धी जीएसटी अवरोधक है, जिसमें 31.6 ± 3.6 माइक्रोनएमका आईसी50 और 23.2 ± 3.2 माइक्रोन की एक के आई है। करक्यूमिन में अपनी प्रभावकारिता में सुधार करने के लिए इलेक्ट्रोफिलिक कीमोथेरेपी दवा के साथ संयुक्त होने की क्षमता है।

Watch this Scientific Journal Video about Spectrophotometric Screening for Potential Inhibitors of Cytosolic Glutathione S-Transferases at JoVE.com

Spectrophotometric Screening for Potential Inhibitors of Cytosolic Glutathione S-Transferases

साइटोसोलिक ग्लूटाथिएक एस-ट्रांसफरास के संभावित अवरोधकों के लिए स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक स्क्रीनिंग

ग्लूटाथिएक एस-ट्रांसफरेस (जीटीएस) कई कीमोथेर्यूटिक दवाओं के मेटाबोलिज्म में शामिल विषहरण एंजाइम हैं। जीटीएस का अतिव्यवसंबंध कैंसर कीमोथेरेपी प्रतिरोध से सहसंबद्ध है। इस फेनोटाइप का मुकाबला करने का एक तरीका अवरोधकों का उपयोग करना है। यह प्रोटोकॉल संभावित जीएसटी अवरोधकों के लिए स्क्रीन करने के लिए स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक परख का उपयोग करके एक विधि का वर्णन करता है।

Glutathione S-transferases (GSTs) are metabolic enzymes responsible for the elimination of endogenous or exogenous electrophilic compounds by glutathione ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Method for Identifying Small Molecule Inhibitors of the Protein-protein Interaction Between HCN1 and TRIP8b

HCN1 और TRIP8b बीच प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत के छोटे अणु inhibitors की पहचान के लिए विधि

Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated (HCN) channels are expressed ubiquitously throughout the brain, where they function to regulate the ...

Bacterial Inner-membrane Display for Screening a Library of Antibody Fragments

एंटीबॉडी टुकड़े की एक लाइब्रेरी स्क्रीनिंग के लिए बैक्टीरियल इनर-झिल्ली प्रदर्शन

Antibodies engineered for intracellular function must not only have affinity for their target antigen, but must also be soluble and correctly folded in ...

Spectrophotometric Determination of Phycobiliprotein Content in Cyanobacterium Synechocystis

Spectrophotometric Determination of Phycobiliprotein Content in Cyanobacterium Synechocystis

Cyanobacterium Synechocystis में Phycobiliprotein सामग्री का स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक निर्धारण

This is a simple protocol for the quantitative determination of phycobiliprotein content in the model cyanobacterium Synechocystis. Phycobiliproteins are ...

Single-Molecule Tracking Microscopy - A Tool for Determining the Diffusive States of Cytosolic Molecules

एकल अणु ट्रैकिंग माइक्रोस्कोपी - Cytosolic अणु के विविध राज्यों का निर्धारण करने के लिए एक उपकरण

Single-molecule localization microscopy probes the position and motions of individual molecules in living cells with tens of nanometer spatial and ...

Kinase Inhibitor Screening In Self-assembled Human Protein Microarrays

Kinase अवरोधक स्क्रीनिंग में स्वयं इकट्ठे मानव प्रोटीन Microarrays

The screening of kinase inhibitors is crucial for better understanding properties of a drug and for the identification of potentially new targets with ...

Kinetic Screening of Nuclease Activity using Nucleic Acid Probes

न्यूक्लिक एसिड जांच का उपयोग कर न्यूक्लीज गतिविधि का काइनेटिक स्क्रीनिंग

Nucleases are a class of enzymes that break down nucleic acids by catalyzing the hydrolysis of the phosphodiester bonds that link the ribose sugars. ...

A Semi-High-Throughput Adaptation of the NADH-Coupled ATPase Assay for Screening Small Molecule Inhibitors

स्क्रीनिंग छोटे अणु अवरोधकों के लिए NADH-युग्मित ATPase परख के एक अर्द्ध उच्च Throughput अनुकूलन

ATPase enzymes utilize the free energy stored in adenosine triphosphate to catalyze a wide variety of endergonic biochemical processes in vivo that would ...

Screening for Thermotoga maritima Membrane-Bound Pyrophosphatase Inhibitors

Screening for Thermotoga maritima Membrane-Bound Pyrophosphatase Inhibitors

थर्मोटोगा मैरिटिमा झिल्ली-बाउंड पायरोफोस्फेटेसे अवरोधकों के लिए स्क्रीनिंग

Membrane-bound pyrophosphatases (mPPases) are dimeric enzymes that occur in bacteria, archaea, plants, and protist parasites. These proteins cleave ...

Nano-Differential Scanning Fluorimetry for Screening in Fragment-based Lead Discovery

टुकड़ा आधारित लीड डिस्कवरी में स्क्रीनिंग के लिए नैनो-अंतर स्कैनिंग फ्लोरीमीटर

Thermal shift assays (TSAs) examine how the melting temperature (Tm) of a target protein changes in response to changes in its environment (e.g., buffer ...

Continuous Fluorescence-Based Endonuclease-Coupled DNA Methylation Assay to Screen for DNA Methyltransferase Inhibitors

डीएनए मेथिलट्रांसफेरेज़ इनहिबिटर के लिए स्क्रीन करने के लिए निरंतर फ्लोरेसेंस-आधारित एंडोन्यूक्लिज़-युग्मित डीएनए मिथाइलेशन परख

DNA methylation, a form of epigenetic gene regulation, is important for normal cellular function. In cells, proteins called DNA methyltransferases (DNMTs) ...