פרוטוקול זה מאפשר לחתוך זרעים ללא פגע כדי שלא יתפוררו, ומאפשר הדמיה של גרגירי עמילן בכל זרע שיכול להתאים לקצה פיפטה. חרוט הפלסטיק הנגוע תומך במבנה המקורי של הרקמות והאיברים היבשים, כך שסעפת זולה וקלה זו מאפשרת לעבד דגימות רבות תוך זמן קצר. כדי להמשיך מהיתרון המיקרוסקופי המשפטי כאן, עמילן עמיד, משהו שכולנו מחפשים, נגישות של אנזימים לעמילן הגולמין, האמילוליזה, האינדקס הגליקמי, וקוצים גלוקוז, אלה הם פרמטרים מרכזיים לגידול זני אורז טובים יותר להילחם בסוכרת מסוג 2 ברחבי העולם כיום.
ועכשיו זה תענוג גדול להציג בפניכם את ד"ר קיה ברטון. ד"ר ברטון היא מהמעבדה שלנו והיא תשתמש במתקן הדמיית הליבה של הפקולטה כדי להראות לך איך טכניקה זו נפרסת. התחל על ידי דה-husking הגרעינים היבשים.
מניחים גרעין יחיד על פקק גומי שטוח על ספסל עבודה, וודאו כי פקק זה נשאר נייח. השתמש פקק גומי שטוח שני כדי לשחט את הקרנל על ידי פיתול אותו נגד פקק הגומי הראשון, ולאחר מכן להסיר קליפות מן הקרנל, דואג לא לנפץ את endosperm ולא לטחון את הזרעים באגרסיביות רבה מדי בין שני bungs גומי. הסר את כל הקליפים הנותרים באמצעות מלקחיים עדינים ולהכניס גרעין קליפה בודדים לתוך קצה פיפטה 250 מיקרוליטר פלסטיק.
ודא כי קצה העובר של הקרנל פונה לכיוון הקצה החרוט של קצה הפיפטה. הכנס טיפ פיפטה 250 מיקרוליטר שני כדי לכפות על הקרנל את קצה הפיפטה הראשון ולשמור על חוסר תנועה של הליבה במהלך החתך, תוך שמירה על כך שלא לפגוע בליבה או לכופף את קצה הפיפטה השני. מניחים את הרכבת קצה הפיפטה שטוחה על שולחן עבודה ומחזיקים אותה במקומה ביד.
עם היד השנייה, להשתמש להב אזמל חד לפרוס דרך מרכז הליבה, חיתוך את הקצה של קצה פיפטה. פרוס כלפי מטה דרך ההרכבה ולאחר מכן כוון את להב האזמל אנכית כך ששני הפרצופים החשופים החדשים של קטע היד מקבילים. לאחר מכן להשתמש באזמל כדי לחתוך חלקים עבים מילימטר אחד של גרעין האורז.
כדי לבצע מיקרוסקופיה קלה משתקפת, מניחים את מקטעי האורז הרוחביים על פיסת נייר שחור מד כבד. השג תמונות קלות של המקטעים הרוחביים באמצעות מיקרוסקופ סטריאו עם עור ברווז רכוב לתאורה עקשנית, תוך שימוש בהגדלה של לפחות פי 10. מקטעי ניפונברה ו-ssg1 מסוג פראי נבדקו תחת 260 פעמים, 920 פעמים ופי 4,200.
כאשר מוכן כראוי, קטעי האורז היו בעובי של כ -0.9 מילימטרים עם ניפוץ מינימלי של האנוספרם ושכבות pericarp ואלורון שלמות. טכניקה זו מאפשרת הכנת חלקים באיכות מספקת כדי לצפות בתא האנוספרם כולו, גרגירי עמילן מורכבים, ותת-גרגירים בודדים. יצרני גרעין שקופים, כגון הקו ההיברידי עמילן עמיד מסוג בר, Zhehui 7954 וקובלט שנוצר מוטציה RS111, מיוצרים גרגירי עמילן פוליהדרלי ארוז היטב, שהוא פנוטיפ אנדוספרם האורז הרגיל.
תמונות ה- SEM של יצרני גרעין גיר, המגוון המסחרי Ye Tang ו- RS4, הציגו גרגירי עמילן שהיו עגולים ונארזים באופן רופף. ל-Xiushiu 11 ולמוטציה שלו KMD1, שבאה לידי ביטוי בגן Cry1Ab כדי לעכב את טרפת החרקים, היו קטעים ומורפוטיפים אנדוספרמים הדומים לקווי העמילן העמידים בשקוף. טכניקה זו יכולה להיות מיושמת על זרעים של מינים אחרים.
המונוקוט של הדגם, ברכיפודיום דיסטכיון, מייצר זרעים קשים מאוד, אך עדיין ניתן היה להשיג קטע רוחבי שלם. חלקים רוחביים שלמים הופקו גם מחיטה רכה ולבנה בחורף. שיטת סינון מהירה וזולה זו להסתכל בתוך מבנים ביולוגיים יכולה להיות מיושמת על רגלי חרקים, קוצים של עצי לוקוס, עוזררים, קוצי דגים, או כל תחום של מיקרוסקופיה משפטית שיכול להרוויח ממערך תמיכה מדגם זה.
לאחר ביצוע פרוטוקול זה, ציפוי sputter עבור אלקטרומיקרומיקרוסקופיה, כתמים עם צבעים פלואורסצנטיים ספציפיים, ויישום של calcafluor להכתים עבור עובי דופן תא בטא גלוקן בקווי שיבולת שועל שעורה מוטנטיים הם כמה דרכים מהירות להתקרב לגידול צמחים עם הקרנת פנוטיפ מהירה.
