Name: a capsule-based model for immature hard tick stages infestation on laboratory mice
Uploaded: 2020-07-09T14:00:00
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我々は、アラン・ベルニエ・フランス農業研究所(INRAE)とオセアン・ル・ビデル(ANSES)の技術支援を認める。この研究は、DIM One Health - レギオン・イル・ド・フランス(プロジェクトの頭字語:NeuroPaTick)によってサポートされました。マウスはANSESによって購入した。ジェフリー・L・ブレア博士は、以前のバージョンの原稿を見直したことで認められています。

この議定書は、すべての福祉および安全対策が実験室で満たされている場合にのみ適用できることに注意してください。このプロトコルは、動物実験のための倫理委員会ComEth Anses/ENVA/UPEC、許可番号E 94 046 08によってダニの餌付けのためにマウスを使用する許可を受けました。エンドポイントについては、動物をそれぞれ4分および5分の2つの段階で9分間CO2 にさらした。
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	<li>Sonenshine, D. E., Roe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of Ticks. , (2014).</li><li>Kr&#246;ber, T., Guerin, P. 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J., Kamler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+tortoise+tick+Hyalomma+aegyptium+under+laboratory+conditions.">Life cycle of tortoise tick Hyalomma aegyptium under laboratory conditions.</a> Experimental and Applied Acarology. 54, 277-284 (2011).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+Haemaphysalis+doenitzi+(Acari:+Ixodidae)+under+laboratory+conditions+and+its+phylogeny+based+on+mitochondrial+16S+rDNA.">Life cycle of Haemaphysalis doenitzi (Acari: Ixodidae) under laboratory conditions and its phylogeny based on mitochondrial 16S rDNA.</a> Experimental and Applied Acarology. 56, 143-150 (2012).</li><li>Jin, S. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+of+the+Asian+longhorned+tick,+Haemaphysalis+longicornis,+to+serve+as+an+experimental+vector+of+the+Lyme+disease+spirochete,+Borrelia+burgdorferi+sensu+stricto.">Failure of the Asian longhorned tick, Haemaphysalis longicornis, to serve as an experimental vector of the Lyme disease spirochete, Borrelia burgdorferi sensu stricto.</a> Ticks Tick Borne Diseases. 11 (1), 101311 (2020).</li></ol>

プロトコルの最も重要なステップは、マウスの皮膚にカプセルの固い接着です。したがって、ラテックス接着剤は、カプセルのEVA-フォーム表面全体に均一に適用されるべきであり、特にカプセルの左右に3分間一定の圧力を適用する必要があります。また、後足を使用してマウスによる除去を避けるために、できるだけ前方にカプセルを背面に配置することをお勧めします。我々の実験では?...

ダニは、いくつかの病原体の重要なベクターであり、動物および人間の健康に深刻なリスクを表す1.効果的な給餌システムの設定は、生物学、ダニ-宿主と病原体の相互作用を研究する際、または効果的な制御手段を確立する際に重要です。現在、生きている動物の使用を避けるいくつかの人工的な給餌システムは、ティック22、3、43のために利用可能であり、4これらは実験的条件が許すたびに利用されるべきである。しかし、様々な実験環境では、これらのシステムは特定の生理学的特徴を適切に模倣できず、関連する結果を達成するために生きている動物の使用が必要である。
実験室用マウスは、多くの生物学的システムの研究に一般的に使用され、ダニ,,95、6、7、8、96,7を供給するための宿主として日常的に利用されている。58マウスに未熟なダニを供給する2つの最も一般的な方法には、遊離感染とマウスに取り付けられた閉じ込めチャンバーの使用が含まれる。無料の出没は主に幼虫段階に使用され、魅惑的なダニは回復できる領域に落ちることができます。監禁室は、通常、マウスの背中に接着されたアクリルまたはポリプロピレンキャップで構成されています。最初の技術は、ダニの供給のための効果的な自然システムですが、個々のダニがホスト体の異なる部分に分散しているため、実験中に綿密な監視を行うことは許可されません。さらに、回復領域に落ちるエンゴージドダニは、ダニの適性に深刻な影響を与える可能性のある便および尿10、11、12、13、14で汚染され、動物と回復領域10,11,12,13,1415との間に分離がない場合にはマウスによって損傷または食べられる可能性がある。チャンバーベースのシステムは、定義された領域へのティックの閉じ込めを可能にしますが、接着プロセスは面倒であり、キャップはしばしば接着剤に弱く付着し、実験16、17、18、19,17,18,19の間にしばしば取り外されます。キャップはまた、硬く、不快であり、皮膚反応を引き起こし、マウスの再利用を防ぎ、実験後に安楽死を必要とする。
我々の前の研究では、実験室のウサギ20にダニを供給するためのエチレンビニル酢酸(EVA)フォームで作られたチャンバーを使用して効果的なシステムを開発することに成功しました。本明細書では、このシステムをマウスモデルに適合させ、EVA-foamから作られた閉じたカプセルに未熟なハードティック段階を供給する簡単でクリーンな方法を提案する。具体的には、当社のシステムは、急速な乾燥(3分)、非刺激ラテックス接着剤で剃ったマウスに接着弾性EVAフォームカプセルを使用しています。この技術は実験マウスへのカプセルの堅固で長持ちする付着、ならびに実験の全過程の間に有効なダニの侵入/収集を可能にする。平らなカプセルは、柔軟な材料から作られており、採血やその他の目的のためにマウスの操作を妨げません。このシステムは主にニンフモルチック段階に適していますが、わずかな変更で幼虫の餌付けにも使用できます。この方法は、1人の経験豊富な人が完了することができ、広範なトレーニングは必要ありません。

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	</tbody>
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a capsule-based model for immature hard tick stages infestation on laboratory mice

ダニは、発達のすべての段階(卵を除く)で必須の血液供給寄生虫であり、様々な病原体のベクターとして認識されています。ダニ研究におけるマウスモデルの使用は、生物学とダニ宿主と病原体の相互作用を理解するために重要です。ここでは、実験室用マウスの硬いダニの未熟な段階の供給のための非骨作業の技術を実証する。この方法の利点は、そのシンプルさ、短い期間、および実験のさまざまな時点でのティックを監視または収集する機能です。さらに、この技術は、同じマウス上の2つの個々のカプセルの取り付けが可能であり、同じ動物を餌に2つの異なるグループのダニが必要な様々な実験に有益である。非刺激性および柔軟なカプセルは容易にアクセス可能な材料からなされ、実験動物の不快感を最小にする。さらに、安楽死は必要なく、マウスは実験後に完全に回復し、再利用が可能である。

マウスの背中に塗布したEVA-foamカプセルに未熟なハードティックステージを供給するための詳細なステップバイステップ法を提案する(図2)。この面倒でないプロトコルは、正確なティック監視と収集が必要な場合に、さまざまなタイプの実験に適しています。この方法の主な利点は、そのシンプルさ、簡単にアクセスできる費用対効果の高い材料、および短い期間です?...

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A Capsule-Based Model for Immature Hard Tick Stages Infestation on Laboratory Mice

本研究では、実験用マウスに付着したカプセルを用いて、硬ダニのニンファルおよび幼虫段階の給餌システムを開発した。供給カプセルは、柔軟な材料から作られ、少なくとも1週間はしっかりとマウスに取り付けられたままで、ダニの供給の快適なモニタリングを可能にします。

実験室マウスにおける未熟なハードティックステージのカプセルベースモデル

Ticks are obligatory blood feeding parasites at all stages of development (except eggs) and are recognized as vectors of various pathogens. The use of ...

我々の技術は様々な種類の実験に適しているが、私達のマウスモデルはダニを供給するために必要であり、容易な収集および監視のために囲まれた区域でダニを保つために必要である。この単純な方法の利点は、効率、短い期間、および実験のさまざまな時点でのティックを監視または収集する機能です。私たちのシステムは、ダニ生物学、宿主-ベクター病原体相互作用を研究したり、これらの医学的に重要な節足動物の異なる制御尺度を評価するのに適しています。この方法は、未熟なダニの段階が小さく、マウスにそれらを供給するために、数日間マウスにしっかりと取り付けられるように封じられたカプセルを必要とするので、細部に正確さと注意が必要です。2ミリメートルEVAフォーム、接着剤二重粘着性の泡を一緒に貼り付けて開始します。直径20ミリメートルのレザーホールパンチを使用して、泡片から円をカットします。その後、12ミリメートルの穴パンチを使用して内部をカットします。粘着状の二重粘着性の泡から保護紙のストリップを剥がし、20ミリメートル透明なプラスチックサークルを泡に取り付けます。幼虫を授乳する場合は、保護紙を粘着フォームから取り外せず、カプセルを取り付けて直接進んでください。透明なプラスチックに1センチのスリットを作り、その後、実験中に水分蒸発のための少なくとも10の小さな穴を作成するために、内膜ピンを使用してください。マウスが麻酔された後、操作パッド上に置き、連続イオブルラン供給のために鼻コーンを取り付けます。イオブルランのレベルを調整して、呼吸数が毎分80回未満であることを確認します。肩甲骨の後ろから、耳のすぐ後ろの部分までマウスの前部を剃り、カプセル表面よりも大きい剃った領域を作ります。カプセルのEVAフォームサイト全体に非刺激ラテックス接着剤を塗布し、1分間待ちます。マウスの背中にカプセルを置き、特にカプセルの左右に3分間一定の圧力を加えます。カプセルを少し持ち上げて、皮膚への付着を視覚的に確認します。カプセルのしっかりとしたアタッチメントを確保するために、特にカプセルの左右に指でわずか3分間の一定圧力を加えます。アタッチされていない領域が見つかった場合は、へらでさらに接着剤を塗布し、さらに3分間押します。実験中に添付ファイル以外の領域が形成される場合は、同じ方法で修正します。1センチのスリットを介してカプセルに個々のニンフを導入します。カプセルを両面から少し絞って透明なプラスチックを曲げ、カプセルの中にニンフを押します。鉗子を90度回して引き出します。幼虫の侵入の場合は、付属のカプセルから紙のスリップを取り出し、注射器を幼虫と一緒に直接中に置きます。注射器プランジャーを押してダニを堆積させ、プランジャーを皮膚に向かってそっと回して残りの幼虫を取り除きます。幼虫が皮膚に沈着したら、透明なプラスチック円を取り付けることでカプセルを閉じます。保護プラスチックバンドの3.5ミリメートルストリップをカットし、カプセルの周りに保護プラスチックバンドを適用し、ケージにマウスを返します。ダニを収集するには、メスでプラスチックに十字架のカットを作成し、ティックを収集するために鉗子を使用します。必要に応じて、透明プラスチックに粘着プラスチックパッチを貼り付けてカプセルを再閉してください。複数のタイム ポイントでのティックの収集が必要な場合は、同じプラスチック パッチを使用できます。あるいは、マウスを安楽死させ、カチマを回収したり、カプセルを取り外した後に手動で取り外すことができます。マウスの回復を成功させるために、さらに1週間ケージに入れておき、カプセルを自然に取り外します。カプセルがオフになったら、皮膚の異常な反応がないか確認します。刺激がある場合は、任意のエモリエントローションを適用します。このプロトコルはマウスの背に適用されるEVA泡のカプセルの未熟な堅いダニを供給することを可能にする。速い乾燥および非刺激ラテックスの接着剤の使用は、カプセルが3分以内にしっかりと取り付けられ、少なくとも7日間取り付けられたままであることを保証する。2つのカプセルを取り付けると、同じ動物に2つの異なるダニのグループを供給することが可能になります。さらに、実験後のマウスの完全な回復は、動物を再利用し、安楽死を避けることを可能にする。このシステムは、イコデス・リシヌス・ニンフを供給するために正常に使用されています。2種類の異なるマウス株で中程度から高いエングレージェント成功率が達成された。両方の株では、すべてのニンフは4〜5日以内に給餌を終え、大多数は4日目に降板しました。このプロトコルを試みるとき、マウスの皮膚の十分な領域を剃り、実験中に偶発的な剥離を避けるためにカプセルを効果的に取り付けることが重要です。基本的なダニ生物学の研究に加えて、この方法は、ダニからホストまたはホストに病原体の伝達を探索するために使用することができます。さらに、マウスを再利用するオプションは、免疫学的研究や異なるダニ媒介病原体の伝染を調査するのに有益であり得る複数の再出入の可能性を提供する。

Research

JoVE Journal

Biology

Genetic Studies of Human DNA Repair Proteins Using Yeast as a Model System 

人間のDNA修復タンパク質の遺伝的研究は、モデルシステムとして酵母を使用

Understanding the roles of human DNA repair proteins in genetic pathways is a formidable challenge to many researchers.  Genetic studies in mammalian ...

生物学

Xenopus laevis as a Model to Identify Translation Impairment

Xenopus laevis as a Model to Identify Translation Impairment

アフリカツメガエルは、翻訳減損を識別するためのモデルとして、 アフリカツメガエル

Protein synthesis is a fundamental process to gene expression impacting diverse biological processes notably adaptation to environmental conditions. The ...

Measurement and Analysis of Extracellular Acid Production to Determine Glycolytic Rate

外酸生産の測定と解析は、解糖速度を決定するために

Extracellular measurement of oxygen consumption and acid production is a simple and powerful way to monitor rates of respiration and glycolysis1. Both ...

Visualizing the Early Stages of Phagocytosis

食作用の初期段階の可視化

The mammalian body is equipped with various layers of mechanisms that help to defend itself from pathogen invasions. Professional phagocytes of the immune ...

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

無脊椎動物モデル システムとしてショウジョウバエを使用して毒性を実験室でテストするための実験プロトコル

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits

ウサギに寄生したマダニの汎用性の高いモデル

The use of live animals in tick research is crucial for a variety of experimental purposes including the maintenance of hard tick colonies in the ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

EYFP タグ付き CENP-A (EYFP-CENP-A) のユビキタス性を同定するための質量分析分析

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology

Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology

昆虫農業と無脊椎動物の生理学のための汎用性の高いオルソプテランモデルである Gryllus bimaculatusの実験室培養の維持

Gryllus bimaculatus (De Geer)&#160;is a large-bodied cricket distributed throughout Africa and Southern Eurasia where it is often wild-harvested as human ...

Isolation of microRNAs from Tick Ex Vivo Salivary Gland Cultures and Extracellular Vesicles

Isolation of microRNAs from Tick Ex Vivo Salivary Gland Cultures and Extracellular Vesicles

ダニ Ex Vivo 唾液腺培養物および細胞外小胞からのマイクロRNAの単離

Ticks are important ectoparasites that can vector multiple pathogens. The salivary glands of ticks are essential for feeding as their saliva contains many ...

A Simple and Inexpensive Running Wheel Model for Progressive Resistance Training in Mice

マウスの漸進的レジスタンストレーニングのためのシンプルで安価なランニングホイールモデル

Previously developed rodent resistance-based exercise models, including synergistic ablation, electrical stimulation, weighted-ladder climbing, and most ...