Name: a capsule-based model for immature hard tick stages infestation on laboratory mice
Uploaded: 2020-07-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Capsule-Based Model for Immature Hard Tick Stages Infestation on Laboratory Mice at JoVE.com

우리는 알랭 버니어 프랑스 국립 농업 연구소 (INRAE) 및 오세안 르 비델 (ANSES)의 기술 지원을 인정합니다. 연구 결과는 DIM One 건강에 의해 지원되었습니다 - 레기온 일 드 프랑스 (프로젝트의 약어: NeuroPaTick). 마우스는 ANSES에 의해 구입하였다. 제프리 엘 블레어 박사는 원고의 이전 버전을 검토한 것으로 인정됩니다.

이 프로토콜은 실험실에서 모든 복지 및 안전 조치를 충족할 때만 적용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 동물 실험에 대한 윤리위원회에 의해 진드기 공급에 마우스를 사용하는 권한을 받았다ComEth Anses / ENVA / UPEC, 허가 번호 E 94 046 08. 종점에 대해, 동물들은 각각 4분과 5분의 2단계로 9분 동안CO2에 노출되었다.
1. 캡슐 의 준비
<ol><li>2mm 두께의 EVA 폼과 접착제 더블 끈적 ?...

<ol>
	<li>Sonenshine, D. E., Roe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of Ticks. , (2014).</li><li>Kr&#246;ber, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+feeding+assays+for+hard+ticks.">In vitro feeding assays for hard ticks.</a> Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).</li><li>Bonnet, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transstadial+and+transovarial+persistence+of+Babesia+divergens+DNA+in+Ixodes+ricinus+ticks+fed+on+infected+blood+in+a+new+skin-feeding+technique.">Transstadial and transovarial persistence of Babesia divergens DNA in Ixodes ricinus ticks fed on infected blood in a new skin-feeding technique.</a> Parasitology. 134 (2), 197-207 (2007).</li><li>Bonnet, S., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+artificial+infection+of+hard+ticks:+A+tool+for+the+analysis+of+tick-borne+pathogen+transmission.">Laboratory artificial infection of hard ticks: A tool for the analysis of tick-borne pathogen transmission.</a> Acarologia. 52 (4), 453-464 (2012).</li><li>Kohls, G. M., Galtsoff, P. S., Lutz, F. E., Welch, P. S., Needham, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick+rearing+methods+with+special+reference+to+the+Rocky+Mountain+wood+tick,+Dermacentor+andersoni.">Tick rearing methods with special reference to the Rocky Mountain wood tick, Dermacentor andersoni.</a> Culture methods for invertebrate animals. , 246-256 (1937).</li><li>Faccini, J. L. H., Chacon, S. C., Labruna, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbits+(Oryctolagus+cuniculus)+as+experimental+hosts+for+Amblyomma+dubitatum.+Neumann+(Acari:+Ixodidae).">Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum. Neumann (Acari: Ixodidae).</a> Arquivo Brasileiro de Medicina Veterin&#225;ria e Zootecnia. 58 (6), 1236-1239 (2006).</li><li>Chacon, S. C., Freitas, L. H. T., Barbieri, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+weight+and+number+of+engorged+Amblyomma+cooperi.+Nuttal+(sic.)+and+Warburton,+1908+(Acari:+Ixodidae)+larvae+and+nymphs+and+eggs+from+experimental+infestations+on+domestic+rabbit.">Relationship between weight and number of engorged Amblyomma cooperi. Nuttal (sic.) and Warburton, 1908 (Acari: Ixodidae) larvae and nymphs and eggs from experimental infestations on domestic rabbit.</a> Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 13, 6-12 (2004).</li><li>Sonenshine, D. E., Maramorsch, K., Mahmood, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+ticks+in+the+laboratory.">Maintenance of ticks in the laboratory.</a> Maintenance of Human, Animal, and Plant Pathogen Vectors. , 57-82 (1999).</li><li>Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+for+maintenance+of+multi-host+ixodid+ticks+in+the+laboratory.">Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory.</a> Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).</li><li>Almaz&#225;n, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+protective+antigens+for+the+control+of+Ixodes+scapularis+infestations+using+cDNA+expression+library+immunization.">Identification of protective antigens for the control of Ixodes scapularis infestations using cDNA expression library immunization.</a> Vaccine. 21 (13-14), 1492-1501 (2003).</li><li>Banks, C. W., Oliver, J. H., Hopla, C. E., Dotson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+life+cycle+of+Ixodes+woodi.+(Acari:Ixodidae).">Laboratory life cycle of Ixodes woodi. (Acari:Ixodidae).</a> Journal of Medical Entomology. 35, 177-179 (1998).</li><li>Almaz&#225;n, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+three+Ixodes+scapularis+cDNAs+protective+against+tick+infestations.">Characterization of three Ixodes scapularis cDNAs protective against tick infestations.</a> Vaccine. 23 (35), 4403-4416 (2005).</li><li>Levin, M. L., Ross, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquisition+of+different+isolates+of+Anaplasma+phagocytophilum+by+Ixodes+scapularis+from+a+model+animal.">Acquisition of different isolates of Anaplasma phagocytophilum by Ixodes scapularis from a model animal.</a> Vector Borne Zoonotic Diseases. 4 (1), 53-59 (2004).</li><li>Heinze, D. M., Wikel, S. K., Thangamani, S., Alarcon-Chaidez, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+profiling+of+the+murine+cutaneous+response+during+initial+and+subsequent+infestations+with+Ixodes+scapularis+nymphs.">Transcriptional profiling of the murine cutaneous response during initial and subsequent infestations with Ixodes scapularis nymphs.</a> Parasites &amp; Vectors. 6 (5), 26 (2012).</li><li>Nuss, A. B., Mathew, M. G., Gulia-Nuss, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rearing,+Ixodes+scapularis,+the+Black-legged+Tick:+Feeding+Immature+Stages+on+Mice.">Rearing, Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55286 (2017).</li><li>Wada, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+ablation+of+basophils+in+mice+reveals+their+nonredundant+role+in+acquired+immunity+against+ticks.">Selective ablation of basophils in mice reveals their nonredundant role in acquired immunity against ticks.</a> Journal of Clinical Investigation. 120 (8), 2867-2875 (2010).</li><li>Saito, T. B., Walker, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Tick+Vector+Transmission+Model+of+Monocytotropic+Ehrlichiosis.">A Tick Vector Transmission Model of Monocytotropic Ehrlichiosis.</a> The Journal of Infectious Diseases. 212 (6), 968-977 (2015).</li><li>Boppana, V. D., Thangamani, S., Alarcon-Chaidez, F. J., Adler, A. J., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+feeding+by+the+Rocky+Mountain+spotted+fever+vector,+Dermacentor+andersoni,+induces+interleukin-4+expression+by+cognate+antigen+responding+CD4++T+cells.">Blood feeding by the Rocky Mountain spotted fever vector, Dermacentor andersoni, induces interleukin-4 expression by cognate antigen responding CD4+ T cells.</a> Parasites &amp; Vectors. 2 (1), 47 (2009).</li><li>Gargili, A., Thangamani, S., Bente, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+laboratory+animal+hosts+on+the+life+cycle+of+Hyalomma+marginatum+and+implications+for+an+in+vivo+transmission+model+for+Crimean-Congo+hemorrhagic+fever+virus.">Influence of laboratory animal hosts on the life cycle of Hyalomma marginatum and implications for an in vivo transmission model for Crimean-Congo hemorrhagic fever virus.</a> Frontiers in Cell and Infection Microbiology. 20 (3), 39 (2013).</li><li>Almaz&#225;n, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Versatile+Model+of+Hard+Tick+Infestation+on+Laboratory+Rabbits.">A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits.</a> Journal of Visualized Experiments. (140), e57994 (2018).</li><li>Zhijun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life+cycle+and+biological+characteristics+of+Dermacentor+silvarum+Olenev+(Acari:+Ixodidae)+under+field+conditions.">The life cycle and biological characteristics of Dermacentor silvarum Olenev (Acari: Ixodidae) under field conditions.</a> Veterinary Parasitology. 168 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Ahmed, B. M., Taha, K. M., El Hussein, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+Hyalomma+anatolicum+Koch,+1844+(Acari:+Ixodidae)+fed+on+rabbits,+sheep+and+goats.">Life cycle of Hyalomma anatolicum Koch, 1844 (Acari: Ixodidae) fed on rabbits, sheep and goats.</a> Veterinary Parasitology. 177 (3-4), 353-358 (2011).</li><li>&#352;irok&#253;, P., Erhart, J., Petr&#382;elkov&#225;, K. J., Kamler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+tortoise+tick+Hyalomma+aegyptium+under+laboratory+conditions.">Life cycle of tortoise tick Hyalomma aegyptium under laboratory conditions.</a> Experimental and Applied Acarology. 54, 277-284 (2011).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+Haemaphysalis+doenitzi+(Acari:+Ixodidae)+under+laboratory+conditions+and+its+phylogeny+based+on+mitochondrial+16S+rDNA.">Life cycle of Haemaphysalis doenitzi (Acari: Ixodidae) under laboratory conditions and its phylogeny based on mitochondrial 16S rDNA.</a> Experimental and Applied Acarology. 56, 143-150 (2012).</li><li>Jin, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+Cycle+of+Dermacentor+everestianus+Hirst,+1926+(Acari:+Ixodidae)+under+Laboratory+Conditions.">Life Cycle of Dermacentor everestianus Hirst, 1926 (Acari: Ixodidae) under Laboratory Conditions.</a> Korean Journal of Parasitology. 55 (2), 193-196 (2017).</li><li>Labruna, M. B., Fugisaki, E. Y., Pinter, A., Duarte, J. M., Szab&#243;, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+and+host+specificity+of+Amblyomma+triste+(Acari:+Ixodidae)+under+laboratory+conditions.">Life cycle and host specificity of Amblyomma triste (Acari: Ixodidae) under laboratory conditions.</a> Experimental and Applied Acarology. 30 (4), 305-316 (2003).</li><li>Breuner, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+of+the+Asian+longhorned+tick,+Haemaphysalis+longicornis,+to+serve+as+an+experimental+vector+of+the+Lyme+disease+spirochete,+Borrelia+burgdorferi+sensu+stricto.">Failure of the Asian longhorned tick, Haemaphysalis longicornis, to serve as an experimental vector of the Lyme disease spirochete, Borrelia burgdorferi sensu stricto.</a> Ticks Tick Borne Diseases. 11 (1), 101311 (2020).</li></ol>

프로토콜에서 가장 중요한 단계는 캡슐을 마우스 피부에 단단히 붙이는 것입니다. 따라서 라텍스 접착제는 캡슐의 전체 EVA-foam 표면에 균질하게 적용되어야 하며 3분 동안 일정한 압력을 가해야 하며, 특히 캡슐의 왼쪽과 오른쪽에 적용되어야 한다. 또한 후면 발을 사용하여 마우스에 의한 제거를 피하기 위해 가능한 한 앞으로 캡슐을 배치하는 것이 좋습니다. 실험에서 EVA 폼과 라텍스 접착제가 ?...

진드기는 몇몇 병원체의 중요한 벡터이고 동물과 인간 건강에 심각한 리스크를 나타냅니다1. 효과적인 공급 시스템을 설정하는 것은 생물학, 진드기 숙주 병원체 상호 작용을 연구하거나 효과적인 통제 조치를 수립할 때 중요합니다. 현재, 살아있는 동물의 사용을 피하는 몇몇 인공 공급 시스템은 진드기2,,3,,4에 유효하며 실험 조건이 허용할 때마다 활용되어야 합니다. 그러나, 다양한 실험 환경에서 이러한 시스템은 특정 생리적 특징을 적절히 모방하지 못하며 살아있는 동물의 사용은 관련 결과를 얻기 위해 필요하다.
실험실 마우스는 일반적으로 많은 생물학적 시스템의 연구에 사용되며 정기적으로 진드기 를 공급하기위한 호스트로활용5,,6,,7,,8,,9. 마우스에 미숙한 진드기를 공급하는 두 가지 가장 일반적인 방법은 무료 감염과 마우스에 부착 된 감금 챔버의 사용을 포함한다. 무료 감염은 주로 애벌레 단계에 사용되며, engorged 진드기는 복구 할 수있는 영역으로 떨어질 수 있습니다. 감금 챔버는 일반적으로 마우스의 뒷면에 붙어 아크릴 또는 폴리 프로필렌 캡으로 구성되어 있습니다. 첫 번째 기술은 진드기 공급에 효과적인 자연 시스템이지만 개별 진드기가 숙주 신체의 다른 부분에 분산되기 때문에 실험 중에 면밀한 모니터링을 허용하지 않습니다. 또한, 회복부위에 떨어뜨리는 진드기는 대변과,,소변(10,11,12,,13,,14)으로 오염되어 진드기의 체력에 심각한 영향을 미칠 수 있거나 동물과 회복영역(15)의 분리가 없는 경우 마우스에 의해 손상되거나 먹을 수 있다.15 챔버 기반 시스템은 정의된 영역에 진드기의 감금을 허용하지만, 접착제 공정은 힘들고 캡은 종종 접착제를 약하게 부착하여 실험16,,17,,18,,19동안 종종 분리된다. 캡은 또한 뻣뻣하고 불편하며 피부 반응으로 이어지므로 마우스의 재사용을 방지하고 실험 후 안락사를 필요로합니다.
이전 연구에서는 실험실 토끼20에진드기를 먹이기 위한 에틸렌 비닐 아세테이트(EVA) 폼으로 만든 챔버를 사용하여 효과적인 시스템을 성공적으로 개발했습니다. 본 원에서, 우리는 마우스 모델에이 시스템을 적응하고 EVA-폼으로 만든 폐쇄 캡슐에 미숙한 하드 틱 단계를 공급하는 간단하고 깨끗한 방법을 제안한다. 특히, 당사시스템은 면도된 마우스에 접착된 탄성 EVA-foam 캡슐을 빠른 건조(3분) 비자극성 라텍스 접착제로 사용합니다. 이 기술은 실험 마우스에 캡슐의 단단하고 오래 지속되는 부착뿐만 아니라 실험의 전체 과정에서 효과적인 진드기 감염 / 수집을 할 수 있습니다. 플랫 캡슐은 유연한 재료로 만들어졌으며 혈액 수집 또는 기타 목적을 위해 마우스조작을 방해하지 않습니다. 이 시스템은 주로 님프 틱 단계에 적합하지만 약간의 수정으로 유충을 먹이는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법은 경험이 풍부한 한 사람이 완료 할 수 있으며 광범위한 교육이 필요하지 않습니다.

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		<tr>
			<td>EVA-foam 2 mm thick, (low density)</td>
			<td>Cosplay Shop</td>
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		<tr>
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		</tr>
		<tr>
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		</tr>
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		</tr>
	</tbody>
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a capsule-based model for immature hard tick stages infestation on laboratory mice

진드기는 발달의 모든 단계에서 의무적인 혈액 공급 기생충 (계란 제외) 및 각종 병원체의 벡터로 인식됩니다. 진드기 연구에서 마우스 모델의 사용은 그들의 생물학 및 진드기 호스트 병원체 상호 작용을 이해하기 위해 중요합니다. 여기서 우리는 실험실 마우스에 단단한 진드기의 미숙한 단계의 공급에 대한 비 힘든 기술을 보여줍니다. 이 방법의 장점은 단순성, 짧은 기간 및 실험의 다른 시점에서 진드기를 모니터링하거나 수집하는 기능입니다. 또한, 이 기술은 동일한 마우스에 두 개의 개별 캡슐을 부착할 수 있으며, 이는 두 개의 서로 다른 진드기 그룹이 동일한 동물에게 먹이를 주도록 요구되는 다양한 실험에 유익합니다. 자극적이지 않고 유연한 캡슐은 쉽게 접근할 수 있는 재료로 만들어졌으며 실험 동물의 불편함을 최소화합니다. 더욱이, 안락사는 필요하지 않으며, 마우스는 실험 후에 완전히 회복되고 재사용이 가능합니다.

마우스 뒷면에 적용된 EVA-foam 캡슐에서 미숙한 하드 틱 스테이지를 공급하기 위한 상세한 단계별 방법을 제안합니다(그림2). 이 비힘든 프로토콜은 정밀한 진드기 모니터링 및 수집이 필요할 때 다양한 유형의 실험에 적합합니다. 이 방법의 주요 장점은 단순성, 쉽게 접근 할 수있는 비용 효율적인 재료 및 짧은 기간입니다. 또한, 동일한 동물에 두 개의 서로 다른 진드기 그?...

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A Capsule-Based Model for Immature Hard Tick Stages Infestation on Laboratory Mice

이 연구에서는 실험실 마우스에 부착된 캡슐을 사용하여 하드 틱의 님프및 애벌레 단계를 위한 먹이 시스템이 개발되었습니다. 수유 캡슐은 유연한 재료로 만들어졌으며 적어도 일주일 동안 마우스에 단단히 부착되어 있어 진드기 공급에 대한 편안한 모니터링을 가능하게 합니다.

실험실 마우스에 미숙한 하드 진드기 단계 감염에 대 한 캡슐 기반 모델

Ticks are obligatory blood feeding parasites at all stages of development (except eggs) and are recognized as vectors of various pathogens. The use of ...

우리의 기술은 다양한 유형의 실험에 적합하지만 마우스 모델은 진드기를 먹이기 위해 필요하며 쉽게 수집 및 모니터링을 위해 밀폐 된 영역에 진드기를 유지하는 데 필요합니다. 이 간단한 방법의 장점은 효율성, 짧은 기간 및 실험의 다른 시점에서 진드기를 모니터링하거나 수집하는 기능입니다. 우리의 시스템은 진드기 생물학, 호스트 벡터 병원체 상호 작용을 연구하거나 이 의학적으로 중요한 절지동물의 다른 통제 측정을 평가하기에 적합합니다.이 방법은 미숙한 진드기 단계가 작기 때문에 세부 사항에 대한 정확성과 주의가 필요하며 마우스에 먹이를 주려면 밀폐 된 캡슐을 며칠 동안 마우스에 단단히 부착해야합니다. 접착제 이중 끈적 끈적한 거품인 2밀리미터 EVA 폼을 한데 모으세요. 직경 20mm의 가죽 구멍 펀치를 사용하여 폼 조각에서 원을 자른다.그런 다음 12mm 홀 펀치를 사용하여 내부를 잘라냅니다. 접착제 이중 끈적 끈적한 거품에서 보호 용지 스트립을 껍질을 벗기고 20mm 투명 플라스틱 원을 폼에 부착합니다. 유충을 먹이는 경우 접착제 폼에서 보호 용지 스트립을 제거하고 캡슐 부착으로 직접 진행하십시오.투명 플라스틱에 1센티미터 슬릿을 만든 다음 곤충 학적 핀을 사용하여 실험 중에 수분 증발을 위해 적어도 10 개의 작은 구멍을 만듭니다. 마우스가 마취된 후 조작 패드에 배치하고 연속 이소플루란 공급을 위해 코 콘을 부착한다. 호흡 속도가 분당 80회 미만인지 확인하여 이소플루란 수준을 조정합니다.어깨 블레이드 뒤에서 마우스의 앞쪽 부분을 면도하여 귀 바로 뒤에 있는 영역까지 면도하여 캡슐 표면보다 더 큰 면도 부위를 만듭니다. 캡슐의 전체 EVA 폼 부위에 자극적이지 않은 라텍스 접착제를 바르고 1분 동안 기다립니다. 캡슐을 마우스 뒷면에 놓고 캡슐의 왼쪽과 오른쪽에 3 분 동안 일정한 압력을 가하십시오.캡슐을 약간 들어 올려 피부에 부착된 것을 시각적으로 확인합니다. 캡슐의 단단한 부착을 보장하기 위해 특히 캡슐의 왼쪽과 오른쪽에 손가락으로 약간의 3 분 일정한 압력을 가합니다. 부착되지 않은 영역이 발견되면 주걱으로 더 많은 접착제를 바르고 3분 동안 누릅니다.실험 중에 첨부되지 않은 영역이 형성되면 동일한 방식으로 수정합니다. 1센티미터 슬릿을 통해 캡슐에 개별 님프를 소개합니다. 투명 플라스틱이 구부러지는 다음 캡슐 내부의 님프를 밀어 넣을 수 있도록 캡슐을 양면에서 약간 짜냅니다.집게를 90도 돌리고 꺼냅니다. 유충 감염의 경우 부착된 캡슐에서 종이 전표를 제거하고 주사기를 애벌레와 함께 직접 내부에 놓습니다. 주사기 플런저를 밀어 진드기를 데우고 플런저를 피부쪽으로 부드럽게 돌려 나머지 부착된 애벌레를 제거합니다.애벌레가 피부에 증착되면 투명한 플라스틱 원을 부착하여 캡슐을 닫습니다. 보호 플라스틱 밴드의 3.5 밀리미터 스트립을 자르고 캡슐 주위에 보호 플라스틱 밴드를 적용한 다음 마우스를 케이지로 돌려줍니다. 진드기를 수집하려면 메스가 있는 플라스틱에 십자가 모양의 컷을 만들고 집게를 사용하여 진드기를 수집합니다.필요한 경우 투명 플라스틱에 접착제 플라스틱 패치를 부착하여 캡슐을 다시 닫습니다. 여러 시간 지점에서 진드기를 수집해야 하는 경우 동일한 플라스틱 패치를 사용할 수 있습니다. 또는, 마우스는 캡슐 제거 후 수집되거나 수동으로 분리된 진드기를 안락사시킬 수 있다.마우스의 성공적인 회복을 위해, 1 주일 동안 케이지에 보관하고 캡슐이 자연스럽게 분리할 수 있도록하십시오. 캡슐이 꺼지면 피부에 비정상적인 반응을 확인하십시오. 자극이 있는 경우 연화제로션을 바르는다.이 프로토콜을 사용하면 마우스 뒷면에 적용되는 EVA 폼 캡슐에서 미숙한 하드 틱을 공급할 수 있습니다. 빠른 건조 및 자극적이지 않은 라텍스 접착제를 사용하면 캡슐이 3 분 이내에 단단히 부착되어 적어도 7 일 동안 부착 되어 있습니다. 두 캡슐을 부착하면 동일한 동물에 두 개의 서로 다른 진드기 그룹을 공급할 수 있습니다.더욱이, 실험 후 마우스의 완전한 회복은 동물을 재사용하고 안락사를 피할 수 있게 한다. 이 시스템은 성공적으로 익소드 리시누스 님프를 공급하는 데 사용되었습니다. 중등도에서 높은 engorgement 성공률은 두 개의 다른 마우스 균주에서 달성되었다.두 균주에서, 모든 님프는 4 ~ 5 일 이내에 먹이를 완료하고 대다수는 네 번째 날에 떨어졌다. 이 프로토콜을 시도할 때, 마우스의 피부의 충분한 영역을 면도하고 효과적으로 실험 도중 우발적인 분리를 피하기 위하여 캡슐을 붙이는 것이 중요합니다. 기본적인 진드기 생물학의 연구 이외에, 이 방법은 진드기에서 호스트또는 진드기에 호스트에 병원체 전송을 탐구하기 위하여 이용될 수 있습니다.또한 마우스를 재사용하는 옵션은 면역 학적 연구 또는 다른 진드기 매개 병원체 전달에 도움이 될 수있는 다중 재 감염가능성을 제공합니다.

Research

JoVE Journal

Biology

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