Name: a capsule-based model for immature hard tick stages infestation on laboratory mice
Uploaded: 2020-07-09T14:00:00
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Reconhecemos a assistência técnica do Instituto Nacional de Pesquisas Agrícolas Da França Alain Bernier (INRAE) e da Océane Le Bidel (ANSES). O estudo foi apoiado pelo DIM One Health - Région Île-de-France (Acrônimo do projeto: NeuroPaTick). Os ratos foram comprados pela ANSES. Dr. Jeffrey L. Blair é reconhecido por revisar a versão anterior do manuscrito.

Observe que este protocolo só pode ser aplicado quando todas as medidas de bem-estar e segurança forem atendidas em laboratório. Este protocolo recebeu permissão para usar camundongos para alimentação de carrapatos pelo Comitê de Ética para Experimentos AnimaisComEth Anses/ENVA/UPEC, Números de Permissão E 94 046 08. Para o ponto final, os animais foram expostos ao CO2 por 9 minutos em duas fases de 4 e 5 min cada.
1. Preparação da cápsula
<ol><li>Coloque 2 mm de espe...

<ol>
	<li>Sonenshine, D. E., Roe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of Ticks. , (2014).</li><li>Kr&#246;ber, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+feeding+assays+for+hard+ticks.">In vitro feeding assays for hard ticks.</a> Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).</li><li>Bonnet, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transstadial+and+transovarial+persistence+of+Babesia+divergens+DNA+in+Ixodes+ricinus+ticks+fed+on+infected+blood+in+a+new+skin-feeding+technique.">Transstadial and transovarial persistence of Babesia divergens DNA in Ixodes ricinus ticks fed on infected blood in a new skin-feeding technique.</a> Parasitology. 134 (2), 197-207 (2007).</li><li>Bonnet, S., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+artificial+infection+of+hard+ticks:+A+tool+for+the+analysis+of+tick-borne+pathogen+transmission.">Laboratory artificial infection of hard ticks: A tool for the analysis of tick-borne pathogen transmission.</a> Acarologia. 52 (4), 453-464 (2012).</li><li>Kohls, G. M., Galtsoff, P. S., Lutz, F. E., Welch, P. S., Needham, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick+rearing+methods+with+special+reference+to+the+Rocky+Mountain+wood+tick,+Dermacentor+andersoni.">Tick rearing methods with special reference to the Rocky Mountain wood tick, Dermacentor andersoni.</a> Culture methods for invertebrate animals. , 246-256 (1937).</li><li>Faccini, J. L. H., Chacon, S. C., Labruna, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbits+(Oryctolagus+cuniculus)+as+experimental+hosts+for+Amblyomma+dubitatum.+Neumann+(Acari:+Ixodidae).">Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum. Neumann (Acari: Ixodidae).</a> Arquivo Brasileiro de Medicina Veterin&#225;ria e Zootecnia. 58 (6), 1236-1239 (2006).</li><li>Chacon, S. C., Freitas, L. H. T., Barbieri, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+weight+and+number+of+engorged+Amblyomma+cooperi.+Nuttal+(sic.)+and+Warburton,+1908+(Acari:+Ixodidae)+larvae+and+nymphs+and+eggs+from+experimental+infestations+on+domestic+rabbit.">Relationship between weight and number of engorged Amblyomma cooperi. Nuttal (sic.) and Warburton, 1908 (Acari: Ixodidae) larvae and nymphs and eggs from experimental infestations on domestic rabbit.</a> Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 13, 6-12 (2004).</li><li>Sonenshine, D. E., Maramorsch, K., Mahmood, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+ticks+in+the+laboratory.">Maintenance of ticks in the laboratory.</a> Maintenance of Human, Animal, and Plant Pathogen Vectors. , 57-82 (1999).</li><li>Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+for+maintenance+of+multi-host+ixodid+ticks+in+the+laboratory.">Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory.</a> Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).</li><li>Almaz&#225;n, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+protective+antigens+for+the+control+of+Ixodes+scapularis+infestations+using+cDNA+expression+library+immunization.">Identification of protective antigens for the control of Ixodes scapularis infestations using cDNA expression library immunization.</a> Vaccine. 21 (13-14), 1492-1501 (2003).</li><li>Banks, C. W., Oliver, J. H., Hopla, C. E., Dotson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+life+cycle+of+Ixodes+woodi.+(Acari:Ixodidae).">Laboratory life cycle of Ixodes woodi. (Acari:Ixodidae).</a> Journal of Medical Entomology. 35, 177-179 (1998).</li><li>Almaz&#225;n, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+three+Ixodes+scapularis+cDNAs+protective+against+tick+infestations.">Characterization of three Ixodes scapularis cDNAs protective against tick infestations.</a> Vaccine. 23 (35), 4403-4416 (2005).</li><li>Levin, M. L., Ross, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquisition+of+different+isolates+of+Anaplasma+phagocytophilum+by+Ixodes+scapularis+from+a+model+animal.">Acquisition of different isolates of Anaplasma phagocytophilum by Ixodes scapularis from a model animal.</a> Vector Borne Zoonotic Diseases. 4 (1), 53-59 (2004).</li><li>Heinze, D. M., Wikel, S. K., Thangamani, S., Alarcon-Chaidez, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+profiling+of+the+murine+cutaneous+response+during+initial+and+subsequent+infestations+with+Ixodes+scapularis+nymphs.">Transcriptional profiling of the murine cutaneous response during initial and subsequent infestations with Ixodes scapularis nymphs.</a> Parasites &amp; Vectors. 6 (5), 26 (2012).</li><li>Nuss, A. B., Mathew, M. G., Gulia-Nuss, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rearing,+Ixodes+scapularis,+the+Black-legged+Tick:+Feeding+Immature+Stages+on+Mice.">Rearing, Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55286 (2017).</li><li>Wada, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+ablation+of+basophils+in+mice+reveals+their+nonredundant+role+in+acquired+immunity+against+ticks.">Selective ablation of basophils in mice reveals their nonredundant role in acquired immunity against ticks.</a> Journal of Clinical Investigation. 120 (8), 2867-2875 (2010).</li><li>Saito, T. B., Walker, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Tick+Vector+Transmission+Model+of+Monocytotropic+Ehrlichiosis.">A Tick Vector Transmission Model of Monocytotropic Ehrlichiosis.</a> The Journal of Infectious Diseases. 212 (6), 968-977 (2015).</li><li>Boppana, V. D., Thangamani, S., Alarcon-Chaidez, F. J., Adler, A. J., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+feeding+by+the+Rocky+Mountain+spotted+fever+vector,+Dermacentor+andersoni,+induces+interleukin-4+expression+by+cognate+antigen+responding+CD4++T+cells.">Blood feeding by the Rocky Mountain spotted fever vector, Dermacentor andersoni, induces interleukin-4 expression by cognate antigen responding CD4+ T cells.</a> Parasites &amp; Vectors. 2 (1), 47 (2009).</li><li>Gargili, A., Thangamani, S., Bente, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+laboratory+animal+hosts+on+the+life+cycle+of+Hyalomma+marginatum+and+implications+for+an+in+vivo+transmission+model+for+Crimean-Congo+hemorrhagic+fever+virus.">Influence of laboratory animal hosts on the life cycle of Hyalomma marginatum and implications for an in vivo transmission model for Crimean-Congo hemorrhagic fever virus.</a> Frontiers in Cell and Infection Microbiology. 20 (3), 39 (2013).</li><li>Almaz&#225;n, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Versatile+Model+of+Hard+Tick+Infestation+on+Laboratory+Rabbits.">A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits.</a> Journal of Visualized Experiments. (140), e57994 (2018).</li><li>Zhijun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life+cycle+and+biological+characteristics+of+Dermacentor+silvarum+Olenev+(Acari:+Ixodidae)+under+field+conditions.">The life cycle and biological characteristics of Dermacentor silvarum Olenev (Acari: Ixodidae) under field conditions.</a> Veterinary Parasitology. 168 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Ahmed, B. M., Taha, K. M., El Hussein, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+Hyalomma+anatolicum+Koch,+1844+(Acari:+Ixodidae)+fed+on+rabbits,+sheep+and+goats.">Life cycle of Hyalomma anatolicum Koch, 1844 (Acari: Ixodidae) fed on rabbits, sheep and goats.</a> Veterinary Parasitology. 177 (3-4), 353-358 (2011).</li><li>&#352;irok&#253;, P., Erhart, J., Petr&#382;elkov&#225;, K. J., Kamler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+tortoise+tick+Hyalomma+aegyptium+under+laboratory+conditions.">Life cycle of tortoise tick Hyalomma aegyptium under laboratory conditions.</a> Experimental and Applied Acarology. 54, 277-284 (2011).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+Haemaphysalis+doenitzi+(Acari:+Ixodidae)+under+laboratory+conditions+and+its+phylogeny+based+on+mitochondrial+16S+rDNA.">Life cycle of Haemaphysalis doenitzi (Acari: Ixodidae) under laboratory conditions and its phylogeny based on mitochondrial 16S rDNA.</a> Experimental and Applied Acarology. 56, 143-150 (2012).</li><li>Jin, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+Cycle+of+Dermacentor+everestianus+Hirst,+1926+(Acari:+Ixodidae)+under+Laboratory+Conditions.">Life Cycle of Dermacentor everestianus Hirst, 1926 (Acari: Ixodidae) under Laboratory Conditions.</a> Korean Journal of Parasitology. 55 (2), 193-196 (2017).</li><li>Labruna, M. B., Fugisaki, E. Y., Pinter, A., Duarte, J. M., Szab&#243;, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+and+host+specificity+of+Amblyomma+triste+(Acari:+Ixodidae)+under+laboratory+conditions.">Life cycle and host specificity of Amblyomma triste (Acari: Ixodidae) under laboratory conditions.</a> Experimental and Applied Acarology. 30 (4), 305-316 (2003).</li><li>Breuner, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+of+the+Asian+longhorned+tick,+Haemaphysalis+longicornis,+to+serve+as+an+experimental+vector+of+the+Lyme+disease+spirochete,+Borrelia+burgdorferi+sensu+stricto.">Failure of the Asian longhorned tick, Haemaphysalis longicornis, to serve as an experimental vector of the Lyme disease spirochete, Borrelia burgdorferi sensu stricto.</a> Ticks Tick Borne Diseases. 11 (1), 101311 (2020).</li></ol>

O passo mais crítico no protocolo é a colagem firme da cápsula na pele do rato. Portanto, a cola de látex deve ser aplicada de forma homogênea em toda a superfície de espuma EVA da cápsula e deve ser aplicada pressão constante por 3 minutos, especialmente no lado esquerdo e direito da cápsula. Também recomendamos a colocação da cápsula o mais longe possível na parte traseira para evitar sua remoção pelo mouse usando suas patas traseiras. Em nossos experimentos, apenas a adesão da cola eva-espuma e látex...

Carrapatos são vetores importantes de vários patógenos e representam um sério risco para a saúde animal e humana1. A criação de um sistema de alimentação eficaz é crucial ao estudar sua biologia, interações carrapato-hospedeiro-patógeno ou estabelecer medidas eficazes de controle. Atualmente, diversos sistemas de alimentação artificial, que evitam o uso de animais vivos, estão disponíveis para carrapatos2,,3,4 e estes devem ser utilizados sempre que as condições experimentais permitirem. No entanto, em várias configurações experimentais esses sistemas não conseguem imitar adequadamente as características fisiológicas específicas e o uso de animais vivos é necessário para alcançar resultados relevantes.
Camundongos de laboratório são comumente usados para o estudo de muitos sistemas biológicos e são rotineiramente utilizados como hospedeiros para alimentação carrapatos5,,6,7,,8,,9. Os dois métodos mais comuns de alimentação de carrapatos imaturos em camundongos incluem infestações gratuitas e o uso de câmaras de confinamento ligadas ao camundongo. Infestações gratuitas são usadas principalmente para estágios larvais e carrapatos engorgados podem cair para uma área onde podem ser recuperados. As câmaras de confinamento são geralmente compostas de tampas de acrílico ou polipropileno que são coladas nas costas do rato. A primeira técnica é um sistema natural eficaz para alimentação de carrapatos, mas não permite um monitoramento próximo durante o experimento porque os carrapatos individuais são dispersos em diferentes partes do corpo hospedeiro. Além disso, carrapatos engorgados que caem para uma área de recuperação podem se contaminar com fezes e urina10,11,12,13,14 que podem afetar severamente o condicionamento do carrapato ou podem ser danificados ou comidos pelo camundongo se não houver separação entre o animal e a área derecuperação 15. Os sistemas baseados em câmara permitem o confinamento de carrapatos em uma área definida, no entanto, o processo de colagem é trabalhoso e as tampas são muitas vezes fracamente aderentes à cola e, portanto, muitas vezes se desprendem durante o experimento16,17,,18,19. As tampas também são rígidas, desconfortáveis e levam a reações cutâneas, que impedem o reutilização dos camundongos e necessitam de sua eutanásia após o experimento.
Em nosso estudo anterior, desenvolvemos com sucesso um sistema eficaz usando câmaras feitas de espuma de acetato de vinil de etileno (EVA) para alimentar carrapatos em coelhos de laboratório20. Aqui, adaptamos este sistema a um modelo de mouse e propomos um método simples e limpo para alimentar estágios imaturos de carrapato duro em cápsulas fechadas feitas de espuma EVA. Especificamente, nosso sistema usa cápsulas elásticas de espuma EVA coladas nos camundongos raspados de volta com secagem rápida (3 min), cola de látex não irritante. Esta técnica permite uma fixação firme e duradoura de cápsulas ao camundongo experimental, bem como a efetiva infestação/coleta de carrapatos durante todo o curso do experimento. A cápsula plana é feita de materiais flexíveis e não impede a manipulação do camundongo para coleta de sangue ou outros fins. O sistema é adequado principalmente para os estágios do carrapato ninfa, mas com uma pequena modificação pode ser usado para alimentar larvas também. O método pode ser completado por uma única pessoa experiente e não é necessário treinamento extensivo.

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		</tr>
	</tbody>
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a capsule-based model for immature hard tick stages infestation on laboratory mice

Carrapatos são parasitas obrigatórios de alimentação sanguínea em todos os estágios de desenvolvimento (exceto ovos) e são reconhecidos como vetores de vários patógenos. O uso de modelos de camundongos na pesquisa de carrapatos é fundamental para entender suas interações biologia e carrapato-hogeno-patógeno. Aqui demonstramos uma técnica não laboriosa para a alimentação de estágios imaturos de carrapatos duros em ratos de laboratório. O benefício do método é sua simplicidade, curta duração e a capacidade de monitorar ou coletar carrapatos em diferentes pontos de tempo de um experimento. Além disso, a técnica permite o apego de duas cápsulas individuais no mesmo rato, o que é benéfico para uma variedade de experimentos onde dois grupos diferentes de carrapatos são necessários para se alimentar do mesmo animal. A cápsula não irritante e flexível é feita a partir de materiais de fácil acesso e minimiza o desconforto dos animais experimentais. Além disso, a eutanásia não é necessária, os camundongos se recuperam completamente após o experimento e estão disponíveis para reutilização.

Propomos o método passo a passo detalhado para alimentar estágios imaturos de carrapato duro em cápsulas de espuma EVA aplicadas nas costas de um rato(Figura 2). Este protocolo não trabalhoso é adequado para vários tipos de experimentos quando é necessário um monitoramento e coleta precisa de carrapatos. As principais vantagens deste método são sua simplicidade, materiais econômicos de fácil acesso e curta duração. Além disso, conseguimos anexar duas cápsulas a um indivíduo ...

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A Capsule-Based Model for Immature Hard Tick Stages Infestation on Laboratory Mice

Neste estudo, foi desenvolvido um sistema de alimentação para estágios ninfais e larvais de carrapato duro utilizando-se uma cápsula ligada ao rato de laboratório. A cápsula de alimentação é feita de materiais flexíveis e permanece firmemente presa ao mouse por pelo menos uma semana e permite um monitoramento confortável da alimentação do carrapato.

Um modelo baseado em cápsulas para infestação de estágios de carrapato duro imaturo em ratos de laboratório

Ticks are obligatory blood feeding parasites at all stages of development (except eggs) and are recognized as vectors of various pathogens. The use of ...

Nossa técnica é adequada para vários tipos de experimentos, mas nosso modelo de mouse é necessário para alimentar carrapatos e é necessário manter os carrapatos em área fechada para fácil coleta e monitoramento. O benefício deste método simples é a eficiência, a curta duração e a capacidade de monitorar ou coletar carrapatos em diferentes pontos de tempo de um experimento. Nosso sistema é adequado para estudar biologia do carrapato, interações de patógenos vetoriais hospedeiros ou avaliar diferentes medidas de controle desses artrópodes medicamente importantes.Este método requer precisão e atenção aos detalhes, pois os estágios imaturos do carrapato são pequenos e alimentá-los em camundongos requer que a cápsula fechada seja firmemente ligada ao mouse por vários dias. Comece por colocar juntos uma espuma EVA de dois milímetros, uma espuma adesiva dupla pegajosa. Use um furo de couro de 20 milímetros de diâmetro para cortar um círculo das peças de espuma.Em seguida, use um furo de 12 milímetros para cortar o interior. Retire a tira de papel protetor da espuma adesiva dupla pegajosa e conecte um círculo plástico transparente de 20 milímetros à espuma. Se alimentar larvas, não remova a tira de papel protetor da espuma adesiva e prossiga diretamente com a fixação da cápsula.Faça uma fenda de um centímetro no plástico transparente e use um pino entomológico para criar pelo menos 10 pequenos orifícios para evaporação da umidade durante o experimento. Depois que o mouse tiver sido anestesiado coloque-o na almofada de manipulação e conecte um cone de nariz para fornecimento contínuo de isoflurane. Certifique-se de que a taxa de respiração é inferior a 80 respirações por minuto, ajustando o nível isoflurane.Raspe a parte anterior do mouse por trás das omoplatas até a área logo atrás das orelhas criando uma área raspada que é maior que a superfície da cápsula. Aplique cola de látex não irritante em todo o local de espuma EVA da cápsula e espere por um minuto. Coloque a cápsula nas costas do mouse e aplique pressão constante por três minutos especialmente no lado esquerdo e direito da cápsula.Levante ligeiramente a cápsula para verificar visualmente seu apego à pele. Para garantir que o acessório firme da cápsula aplique uma leve pressão constante de três minutos com os dedos especialmente no lado esquerdo e direito da cápsula. Se forem encontradas regiões não anexadas, aplique mais cola com uma espátula e pressione por mais três minutos.Se uma região de não-anexação se formar durante o experimento fixá-la da mesma forma. Introduza ninfas individuais na cápsula através da fenda de um centímetro. Esprema ligeiramente a cápsula de dois lados para permitir que o plástico transparente dobre e empurre a ninfa dentro da cápsula.Vire os fórceps 90 graus e puxe-os para fora. Para infestação de larvas, remova o papel da cápsula anexada e coloque a seringa com as larvas diretamente dentro. Deposite os carrapatos empurrando o êmbolo da seringa e gire suavemente o êmbolo em direção à pele para remover as larvas presas restantes.Uma vez que as larvas são depositadas na pele feche a cápsula anexando o círculo plástico transparente. Corte uma tira de 3,5 milímetros da faixa de plástico protetora e aplique a faixa de plástico protetora ao redor da cápsula e, em seguida, devolva o mouse para a gaiola. Para coletar os carrapatos, crie um corte em forma de cruz no plástico com um bisturi e use fórceps para coletar os carrapatos.Se necessário, recue a cápsula colocando um adesivo de plástico no plástico transparente. o mesmo patch de plástico pode ser usado se a coleta de carrapatos em vários pontos de tempo for necessária. Alternativamente, o mouse pode ser eutanizado e os carrapatos coletados ou isolados manualmente após a remoção da cápsula.Para uma recuperação bem sucedida dos ratos, mantenha-os em uma gaiola por mais uma semana e deixe as cápsulas se soltarem naturalmente. Uma vez que a cápsula está desligada, verifique se há reações anormais na pele. Aplique qualquer loção emoliente se houver alguma irritação.Este protocolo permite alimentar carrapatos duros imaturos em cápsulas de espuma EVA aplicadas nas costas de um rato. O uso da secagem rápida e da cola de látex não irritante garante que a cápsula esteja firmemente presa dentro de três minutos e permaneça presa por pelo menos sete dias. Anexar duas cápsulas torna possível alimentar dois grupos diferentes de carrapatos no mesmo animal.Além disso, a recuperação completa dos camundongos após os experimentos, possibilita reutilizar os animais e evitar a eutanásia. Este sistema foi usado com sucesso para alimentar ninfas ixodes ricinus. Uma taxa de sucesso moderada a alta foi alcançada em duas cepas diferentes de camundongos.Em ambas as cepas, todas as ninfas terminaram a alimentação dentro de quatro a cinco dias, enquanto a maioria caiu no quarto dia. Ao tentar este protocolo, é importante raspar uma área suficiente da pele do rato e efetivamente anexar a cápsula para evitar seu desprendimento acidental durante o experimento. Além do estudo da biologia básica do carrapato, este método pode ser usado para explorar a transmissão de patógenos do carrapato ao hospedeiro ou hospedeiro para carrapatos.Além disso, a opção de reutilizar o camundongo oferece uma possibilidade de múltiplas re-infestações que podem ser benéficas para estudos imunológicos ou investigar diferentes transmissões de patógenos transmitidas por carrapatos.

Research

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Biology

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Visualizing the Early Stages of Phagocytosis

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The mammalian body is equipped with various layers of mechanisms that help to defend itself from pathogen invasions. Professional phagocytes of the immune ...

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Protocolo experimental para o uso de drosófila como um sistema modelo invertebrados para testes de toxicidade em laboratório

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits

Um modelo versátil de infestação de carrapato duro em coelhos de laboratório

The use of live animals in tick research is crucial for a variety of experimental purposes including the maintenance of hard tick colonies in the ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

Análise de espectrometria de massa para identificar a ubiquização do CENP-A marcado pelo EYFP (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology

Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology

Mantendo culturas laboratoriais de Gryllus bimaculatus, um modelo ortopéde versátil para agricultura de insetos e fisiologia de invertebrados

Gryllus bimaculatus (De Geer)&#160;is a large-bodied cricket distributed throughout Africa and Southern Eurasia where it is often wild-harvested as human ...

Isolation of microRNAs from Tick Ex Vivo Salivary Gland Cultures and Extracellular Vesicles

Isolation of microRNAs from Tick Ex Vivo Salivary Gland Cultures and Extracellular Vesicles

Isolamento de microRNAs de Tick Ex Vivo Culturas de Glândulas Salivares e Vesículos Extracelulares

Ticks are important ectoparasites that can vector multiple pathogens. The salivary glands of ticks are essential for feeding as their saliva contains many ...

A Simple and Inexpensive Running Wheel Model for Progressive Resistance Training in Mice

Um modelo de roda de corrida simples e barato para treinamento de resistência progressiva em camundongos

Previously developed rodent resistance-based exercise models, including synergistic ablation, electrical stimulation, weighted-ladder climbing, and most ...