Name: a capsule-based model for immature hard tick stages infestation on laboratory mice
Uploaded: 2020-07-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Capsule-Based Model for Immature Hard Tick Stages Infestation on Laboratory Mice at JoVE.com

Vi erkänner det tekniska biståndet från Alain Bernier Franska nationella institutet för jordbruksforskning (INRAE), och Océane Le Bidel (ANSES). Studien stöddes av DIM One Health - Région Île-de-France (Akronym för projektet: NeuroPaTick). Mössen köptes av ANSES. Dr Jeffrey L. Blair är erkänd för att ha granskat den tidigare versionen av manuskriptet.

Observera att detta protokoll endast kan tillämpas när alla välfärds- och säkerhetsåtgärder uppfylls i laboratoriet. Detta protokoll fick tillstånd att använda möss för fästingmatning av etikkommittén för djurexperimentComEth Anses/ENVA/UPEC, Tillståndsnummer E 94 046 08. För effektmåttet exponerades djuren för CO2 i 9 min i två faser av 4 och 5 min vardera.
1. Beredning av kapseln
<ol><li>Stick 2 mm tjockt EVA-skum och det självhäftande dubbla klibbiga skumme...

<ol>
	<li>Sonenshine, D. E., Roe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of Ticks. , (2014).</li><li>Kr&#246;ber, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+feeding+assays+for+hard+ticks.">In vitro feeding assays for hard ticks.</a> Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).</li><li>Bonnet, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transstadial+and+transovarial+persistence+of+Babesia+divergens+DNA+in+Ixodes+ricinus+ticks+fed+on+infected+blood+in+a+new+skin-feeding+technique.">Transstadial and transovarial persistence of Babesia divergens DNA in Ixodes ricinus ticks fed on infected blood in a new skin-feeding technique.</a> Parasitology. 134 (2), 197-207 (2007).</li><li>Bonnet, S., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+artificial+infection+of+hard+ticks:+A+tool+for+the+analysis+of+tick-borne+pathogen+transmission.">Laboratory artificial infection of hard ticks: A tool for the analysis of tick-borne pathogen transmission.</a> Acarologia. 52 (4), 453-464 (2012).</li><li>Kohls, G. M., Galtsoff, P. S., Lutz, F. E., Welch, P. S., Needham, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tick+rearing+methods+with+special+reference+to+the+Rocky+Mountain+wood+tick,+Dermacentor+andersoni.">Tick rearing methods with special reference to the Rocky Mountain wood tick, Dermacentor andersoni.</a> Culture methods for invertebrate animals. , 246-256 (1937).</li><li>Faccini, J. L. H., Chacon, S. C., Labruna, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbits+(Oryctolagus+cuniculus)+as+experimental+hosts+for+Amblyomma+dubitatum.+Neumann+(Acari:+Ixodidae).">Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum. Neumann (Acari: Ixodidae).</a> Arquivo Brasileiro de Medicina Veterin&#225;ria e Zootecnia. 58 (6), 1236-1239 (2006).</li><li>Chacon, S. C., Freitas, L. H. T., Barbieri, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+weight+and+number+of+engorged+Amblyomma+cooperi.+Nuttal+(sic.)+and+Warburton,+1908+(Acari:+Ixodidae)+larvae+and+nymphs+and+eggs+from+experimental+infestations+on+domestic+rabbit.">Relationship between weight and number of engorged Amblyomma cooperi. Nuttal (sic.) and Warburton, 1908 (Acari: Ixodidae) larvae and nymphs and eggs from experimental infestations on domestic rabbit.</a> Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 13, 6-12 (2004).</li><li>Sonenshine, D. E., Maramorsch, K., Mahmood, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+ticks+in+the+laboratory.">Maintenance of ticks in the laboratory.</a> Maintenance of Human, Animal, and Plant Pathogen Vectors. , 57-82 (1999).</li><li>Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+for+maintenance+of+multi-host+ixodid+ticks+in+the+laboratory.">Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory.</a> Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).</li><li>Almaz&#225;n, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+protective+antigens+for+the+control+of+Ixodes+scapularis+infestations+using+cDNA+expression+library+immunization.">Identification of protective antigens for the control of Ixodes scapularis infestations using cDNA expression library immunization.</a> Vaccine. 21 (13-14), 1492-1501 (2003).</li><li>Banks, C. W., Oliver, J. H., Hopla, C. E., Dotson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+life+cycle+of+Ixodes+woodi.+(Acari:Ixodidae).">Laboratory life cycle of Ixodes woodi. (Acari:Ixodidae).</a> Journal of Medical Entomology. 35, 177-179 (1998).</li><li>Almaz&#225;n, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+three+Ixodes+scapularis+cDNAs+protective+against+tick+infestations.">Characterization of three Ixodes scapularis cDNAs protective against tick infestations.</a> Vaccine. 23 (35), 4403-4416 (2005).</li><li>Levin, M. L., Ross, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquisition+of+different+isolates+of+Anaplasma+phagocytophilum+by+Ixodes+scapularis+from+a+model+animal.">Acquisition of different isolates of Anaplasma phagocytophilum by Ixodes scapularis from a model animal.</a> Vector Borne Zoonotic Diseases. 4 (1), 53-59 (2004).</li><li>Heinze, D. M., Wikel, S. K., Thangamani, S., Alarcon-Chaidez, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+profiling+of+the+murine+cutaneous+response+during+initial+and+subsequent+infestations+with+Ixodes+scapularis+nymphs.">Transcriptional profiling of the murine cutaneous response during initial and subsequent infestations with Ixodes scapularis nymphs.</a> Parasites &amp; Vectors. 6 (5), 26 (2012).</li><li>Nuss, A. B., Mathew, M. G., Gulia-Nuss, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rearing,+Ixodes+scapularis,+the+Black-legged+Tick:+Feeding+Immature+Stages+on+Mice.">Rearing, Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55286 (2017).</li><li>Wada, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+ablation+of+basophils+in+mice+reveals+their+nonredundant+role+in+acquired+immunity+against+ticks.">Selective ablation of basophils in mice reveals their nonredundant role in acquired immunity against ticks.</a> Journal of Clinical Investigation. 120 (8), 2867-2875 (2010).</li><li>Saito, T. B., Walker, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Tick+Vector+Transmission+Model+of+Monocytotropic+Ehrlichiosis.">A Tick Vector Transmission Model of Monocytotropic Ehrlichiosis.</a> The Journal of Infectious Diseases. 212 (6), 968-977 (2015).</li><li>Boppana, V. D., Thangamani, S., Alarcon-Chaidez, F. J., Adler, A. J., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+feeding+by+the+Rocky+Mountain+spotted+fever+vector,+Dermacentor+andersoni,+induces+interleukin-4+expression+by+cognate+antigen+responding+CD4++T+cells.">Blood feeding by the Rocky Mountain spotted fever vector, Dermacentor andersoni, induces interleukin-4 expression by cognate antigen responding CD4+ T cells.</a> Parasites &amp; Vectors. 2 (1), 47 (2009).</li><li>Gargili, A., Thangamani, S., Bente, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+laboratory+animal+hosts+on+the+life+cycle+of+Hyalomma+marginatum+and+implications+for+an+in+vivo+transmission+model+for+Crimean-Congo+hemorrhagic+fever+virus.">Influence of laboratory animal hosts on the life cycle of Hyalomma marginatum and implications for an in vivo transmission model for Crimean-Congo hemorrhagic fever virus.</a> Frontiers in Cell and Infection Microbiology. 20 (3), 39 (2013).</li><li>Almaz&#225;n, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Versatile+Model+of+Hard+Tick+Infestation+on+Laboratory+Rabbits.">A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits.</a> Journal of Visualized Experiments. (140), e57994 (2018).</li><li>Zhijun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life+cycle+and+biological+characteristics+of+Dermacentor+silvarum+Olenev+(Acari:+Ixodidae)+under+field+conditions.">The life cycle and biological characteristics of Dermacentor silvarum Olenev (Acari: Ixodidae) under field conditions.</a> Veterinary Parasitology. 168 (3-4), 323-328 (2010).</li><li>Ahmed, B. M., Taha, K. M., El Hussein, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+Hyalomma+anatolicum+Koch,+1844+(Acari:+Ixodidae)+fed+on+rabbits,+sheep+and+goats.">Life cycle of Hyalomma anatolicum Koch, 1844 (Acari: Ixodidae) fed on rabbits, sheep and goats.</a> Veterinary Parasitology. 177 (3-4), 353-358 (2011).</li><li>&#352;irok&#253;, P., Erhart, J., Petr&#382;elkov&#225;, K. J., Kamler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+tortoise+tick+Hyalomma+aegyptium+under+laboratory+conditions.">Life cycle of tortoise tick Hyalomma aegyptium under laboratory conditions.</a> Experimental and Applied Acarology. 54, 277-284 (2011).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+Haemaphysalis+doenitzi+(Acari:+Ixodidae)+under+laboratory+conditions+and+its+phylogeny+based+on+mitochondrial+16S+rDNA.">Life cycle of Haemaphysalis doenitzi (Acari: Ixodidae) under laboratory conditions and its phylogeny based on mitochondrial 16S rDNA.</a> Experimental and Applied Acarology. 56, 143-150 (2012).</li><li>Jin, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+Cycle+of+Dermacentor+everestianus+Hirst,+1926+(Acari:+Ixodidae)+under+Laboratory+Conditions.">Life Cycle of Dermacentor everestianus Hirst, 1926 (Acari: Ixodidae) under Laboratory Conditions.</a> Korean Journal of Parasitology. 55 (2), 193-196 (2017).</li><li>Labruna, M. B., Fugisaki, E. Y., Pinter, A., Duarte, J. M., Szab&#243;, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+and+host+specificity+of+Amblyomma+triste+(Acari:+Ixodidae)+under+laboratory+conditions.">Life cycle and host specificity of Amblyomma triste (Acari: Ixodidae) under laboratory conditions.</a> Experimental and Applied Acarology. 30 (4), 305-316 (2003).</li><li>Breuner, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+of+the+Asian+longhorned+tick,+Haemaphysalis+longicornis,+to+serve+as+an+experimental+vector+of+the+Lyme+disease+spirochete,+Borrelia+burgdorferi+sensu+stricto.">Failure of the Asian longhorned tick, Haemaphysalis longicornis, to serve as an experimental vector of the Lyme disease spirochete, Borrelia burgdorferi sensu stricto.</a> Ticks Tick Borne Diseases. 11 (1), 101311 (2020).</li></ol>

Det mest kritiska steget i protokollet är fast limning av kapseln till mushuden. Därför bör latexlimmet homogent appliceras på hela EVA-skumytan på kapseln och konstant tryck i 3 minuter bör appliceras, särskilt på vänster och höger sida av kapseln. Vi rekommenderar också placering av kapseln så långt framåt på baksidan som möjligt för att undvika att den avlägsnas av musen med hjälp av dess bakre tassar. I våra experiment har endast vidhäftningen av EVA-skum och latexlim till mushuden validerats oc...

Fästingar är viktiga vektorer av flera patogener och utgör en allvarlig risk för djurs och människors hälsa1. Att inrätta ett effektivt utfodringssystem är avgörande när man studerar deras biologi, tick-host-pathogen interaktioner, eller upprätta effektiva kontrollåtgärder. För närvarande, flera artificiella utfodringssystem, som undviker användning av levande djur finns förfästingar 2,3,4 och dessa bör utnyttjas när experimentella förhållanden tillåter. Men i olika experimentella inställningar dessa system misslyckas med att på lämpligt sätt efterlikna de specifika fysiologiska funktioner och användning av levande djur är nödvändigt att uppnå relevanta resultat.
Laboratoriemöss används vanligen för studier av många biologiska system och utnyttjas rutinmässigt som värdar för utfodring fästingar5,6,7,8,9. De två vanligaste metoderna för utfodring av omogna fästingar på möss inkluderar fria angrepp och användning av instängdhetskammare som är fästa vid musen. Fria angrepp används främst för larvstadierna och engorged fästingar kan sjunka till ett område där de kan återvinnas. Inneslutningskammare är vanligtvis sammansatta av akryl eller polypropylen mössor som är limmade på musens rygg. Den första tekniken är ett effektivt naturligt system för tickmatning men tillåter inte noggrann övervakning under experimentet eftersom de enskilda fästingarna sprids i olika delar av värdkroppen. Dessutom kan engorged fästingar som sjunker till ett återhämtningsområde bli förorenade med avföring och urin10,11,12,13,14 som kan allvarligt påverka fästingen kondition eller de kan skadas eller ätas av musen om det inte finns någon separation mellan djuret och återhämtningsområdet15. Kammare-baserade system tillåter inspärrning av fästingar till ett definierat område, dock limningsprocessen är mödosam och mössorna är ofta svagt vidhäftande till limmet och därmed de ofta lossnar underexperimentet 16,17,18,19. Locken är också stela, obekväma och leder till hudreaktioner, vilket förhindrar återanvändning av mössen och kräver deras dödshjälp efter experimentet.
I vår tidigare studie utvecklade vi framgångsrikt ett effektivt system med hjälp av kammare gjorda av eten-vinylacetat (EVA) skum för utfodring fästingar på laboratoriekaniner20. Häri, Vi anpassade detta system till en mus modell och föreslå en enkel och ren metod för att mata omogna hårda fästingsteg i slutna kapslar gjorda av EVA-skum. Specifikt använder vårt system elastiska EVA-skumkapslar limmade till de rakade mössen tillbaka med snabb torkning (3 min), icke-irriterande latexlim. Denna teknik möjliggör fast och långvarig fastsättning av kapslar till den experimentella musen, samt effektiv fästingangrepp / samling under hela experimentets gång. Den platta kapseln är tillverkad av flexibla material och hindrar inte manipulation av musen för blodinsamling eller andra ändamål. Systemet är lämpligt främst för nymphal fästingen stadier, men med liten modifiering kan det användas för utfodring av larver också. Metoden kan fyllas i av en enda erfaren person och omfattande utbildning krävs inte.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EVA-foam 2 mm thick, (low density)</td>
			<td>Cosplay Shop</td>
			<td>EVA-45kg (950/450/2 mm)</td>
			<td>It can be ordered also via Amazon (ref. no. B07BLMJDXD)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Shrink Tubing Electric Wire Wrap Sleeve</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B014GMT1AM</td>
			<td>Different diameters of Heat Shrink Tubing are available via Amazon.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice BALB/cByJ</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>Strain code 627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice C57BL/6</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>Strain code 664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No-toxic Latex Glue</td>
			<td>Tear mender</td>
			<td>Fabric &#38; Leather Adhesive</td>
			<td>Also available also via Amazon (ref. no. B001RQCTUU)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Punch Tool Hand Art Tool</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07QPWNGBF</td>
			<td>Saled by amazon as Leather Working Tools 1-25mm Round Steel Leather Craft Cutter Working for Belt Strap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVC Binding Covers Transparent</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B078BNLSNP</td>
			<td>Any transparent PVC sheet of ticknes between 0.150 mm to 0.180 mm is suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self Adhesive Pad Sponge Double Coated Foam Tape</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07RHDZ35J</td>
			<td>Saled by amazon as 2 Rolls Double Sided Foam Tape, Super Strong White Mounting Tape Foam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparent seal stickers (20 mm diameter circles)</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B01DAA6X66</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a capsule-based model for immature hard tick stages infestation on laboratory mice

Fästingar är obligatoriska blod utfodring parasiter i alla utvecklingsstadier (utom ägg) och erkänns som vektorer av olika patogener. Användningen av musmodeller i fästingforskning är avgörande för att förstå deras biologi och tick-host-patogeninteraktioner. Här visar vi en icke-mödosam teknik för utfodring av omogna stadier av hårda fästingar på laboratoriemöss. Fördelen med metoden är dess enkelhet, kort varaktighet, och möjligheten att övervaka eller samla fästingar vid olika tidpunkter för ett experiment. Dessutom tillåter tekniken fastsättning av två enskilda kapslar på samma mus, vilket är fördelaktigt för en mängd olika experiment där två olika grupper av fästingar krävs för att livnära sig på samma djur. Den icke-irriterande och flexibla kapseln är tillverkad av lättillgängliga material och minimerar besväret hos försöksdjuren. Dessutom är dödshjälp inte nödvändigt, möss återhämta sig helt efter experimentet och är tillgängliga för återanvändning.

Vi föreslår den detaljerade steg-för-steg-metoden för utfodring omogna hårda fästingsteg i EVA-skum kapslar tillämpas på en mus rygg (Figur 2). Detta icke-arbetsliga protokoll är lämplig för olika typer av experiment när exakt tick övervakning och insamling krävs. De främsta fördelarna med denna metod är dess enkelhet, lättillgängliga kostnadseffektiva material, och kort varaktighet. Dessutom lyckades vi fästa två kapslar till en mus individ (Figur 2...

Watch this Scientific Journal Video about A Capsule-Based Model for Immature Hard Tick Stages Infestation on Laboratory Mice at JoVE.com

A Capsule-Based Model for Immature Hard Tick Stages Infestation on Laboratory Mice

I denna studie utvecklades ett utfodringssystem för nymphal- och larvstadium av hård fästing med hjälp av en kapsel fäst vid laboratoriemus. Matningskapseln är tillverkad av flexibla material och förblir fastsatt på musen i minst en vecka och möjliggör bekväm övervakning av fästingmatning.

En kapselbaserad modell för omogna Hard Tick Stages angrepp på laboratoriemöss

Ticks are obligatory blood feeding parasites at all stages of development (except eggs) and are recognized as vectors of various pathogens. The use of ...

Vår teknik är lämplig för olika typer av experiment men vår musmodell krävs för utfodring fästingar och är nödvändigt för att hålla fästingarna i slutet område för enkel insamling och övervakning. Fördelen med denna enkla metod är det effektivitet, kort varaktighet, och förmågan att övervaka eller samla fästingar vid olika tidpunkter för ett experiment. Vårt system är lämpligt för att studera tick biologi, värd-vektor patogen interaktioner eller utvärdera olika kontrollåtgärd av dessa medicinskt viktiga leddjur.Denna metod kräver noggrannhet och uppmärksamhet på detaljer som omogna fästingsteg är små och mata dem på möss kräver den bifogade kapseln att vara fast fäst vid musen i flera dagar. Börja med att hålla ihop en två millimeter EVA skum, en självhäftande dubbel klibbigt skum. Använd en 20 millimeter diameter läder hålslag för att skära en cirkel från skumbitarna.Använd sedan en 12 millimeter hålslag för att skära interiören. Skala skyddspappersremsan från det självhäftande dubbla klibbiga skummet och fäst en 20 millimeter transparent plastcirkel på skummet. Om utfodring larver, ta inte bort skyddspapper remsan från den självhäftande skum och fortsätt direkt med kapsel fästa.Gör en en centimeter slits i den genomskinliga plasten sedan använda en entomologisk stift för att skapa minst 10 små hål för fukt avdunstning under experimentet. Efter att musen har sövts placera den på manipulation pad och bifoga en näsa kon för kontinuerlig isofluran leverans. Se till att andningshastigheten är mindre än 80 andetag per minut genom att justera isoflurannivån.Raka musens främre del från bakom skulderbladen upp till området precis bakom öronen vilket skapar ett rakat område som är större än kapselytan. Applicera icke irriterande latexlim på hela EVA-skumstället på kapseln och vänta i en minut. Placera kapseln på musens rygg och applicera konstant tryck i tre minuter speciellt på vänster och höger sida av kapseln.Lyft lätt kapseln för att visuellt kontrollera dess fästning på huden. För att säkerställa den fasta fastsättning av kapseln tillämpa en liten tre minuters konstant tryck med fingrarna speciellt på vänster och höger sida av kapseln. Om grupplösa regioner hittas, applicera mer lim med en spatel och tryck i ytterligare tre minuter.Om en region som inte är bifogad fil bildas under experimentet åtgärda det på samma sätt. Införa enskilda nymfer i kapseln via en centimeter slits. Krama lätt kapseln från två sidor så att den genomskinliga plasten kan böjas och tryck sedan in nymfen inuti kapseln.Vrid tytorna 90 grader och dra ut dem. För larver angrepp, ta bort pappersslien från den bifogade kapseln och placera sprutan med larverna direkt inuti. Deponera fästingarna genom att trycka på sprutkolven och vrid sedan försiktigt kolven mot huden för att avlägsna de återstående bifogade larverna.När larverna deponeras på huden stäng kapseln genom att fästa den genomskinliga plastcirkeln. Skär en 3,5 millimeter remsa av skyddande plastbandet och applicera det skyddande plastbandet runt kapseln och återsända sedan musen till buren. För att samla fästingarna, skapa ett korsformat snitt i plasten med en skalpell och använd tärningar för att samla fästingarna.Om det behövs, omsluta kapseln genom att sticka ett självhäftande plastplåster på den genomskinliga plasten. samma plastlapp kan användas om insamling av fästingar vid flera tidpunkter krävs. Alternativt kan musen avlivas och fästingarna samlas upp eller lossas manuellt efter kapselborttagning.För framgångsrik återhämtning av mössen, hålla dem i en bur för ytterligare en vecka och låt kapslarna lossna naturligt. När kapseln är avstängd, kontrollera om det finns onormala reaktioner på huden. Applicera någon uppmjukande lotion om det finns någon irritation.Detta protokoll gör det möjligt att mata omogna hårda fästingar i EVA skum kapslar appliceras på en mus rygg. Användningen av det snabbtorkande och icke irriterande latexlimmet säkerställer att kapseln är ordentligt fastsatt inom tre minuter och förblir fastsatt i minst sju dagar. Att fästa två kapslar gör det möjligt att mata två olika grupper av fästingar på samma djur.Vidare gör fullständig återhämtning av mössen efter experimenten, det möjligt att återanvända djuren och undvika dödshjälp. Detta system har framgångsrikt använts för att mata Ixodes ricinus nymfer. En måttlig till hög engorgement framgång uppnåddes i två olika mus stammar.I båda stammarna avslutade alla nymfer utfodring inom fyra till fem dagar medan majoriteten föll av på den fjärde dagen. När du försöker detta protokoll, Det är viktigt att raka ett tillräckligt område av musens hud och effektivt bifoga kapseln för att undvika det oavsiktliga lossnar under experimentet. Förutom studiet av grundläggande tick biologi, kan denna metod användas för att utforska patogenöverföring från fästing till värd eller värd till fästingar.Dessutom erbjuder möjligheten att återanvända musen en möjlighet för flera återangrepp som kan vara till nytta för immunologiska studier eller undersöka olika fästingburna patogenöverföringar.

Research

JoVE Journal

Biology

Genetic Studies of Human DNA Repair Proteins Using Yeast as a Model System 

Genetiska studier av människans proteiner DNA Repair använder jäst som modellsystem

Understanding the roles of human DNA repair proteins in genetic pathways is a formidable challenge to many researchers.  Genetic studies in mammalian ...

Xenopus laevis as a Model to Identify Translation Impairment

Xenopus laevis as a Model to Identify Translation Impairment

Xenopus laevis som en modell för att identifiera Översättning Nedskrivningar

Protein synthesis is a fundamental process to gene expression impacting diverse biological processes notably adaptation to environmental conditions. The ...

Measurement and Analysis of Extracellular Acid Production to Determine Glycolytic Rate

Mätning och analys av extracellulärt Acid Production att bestämma glykolytisk Rate

Extracellular measurement of oxygen consumption and acid production is a simple and powerful way to monitor rates of respiration and glycolysis1. Both ...

Visualizing the Early Stages of Phagocytosis

Visualisera de tidiga stadierna av Fagocytos

The mammalian body is equipped with various layers of mechanisms that help to defend itself from pathogen invasions. Professional phagocytes of the immune ...

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Experimentellt protokoll för att använda Drosophila som en ryggradslösa modellsystem för toxicitetstester i laboratoriet

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits

En mångsidig modell av hårt tickande Infestation på laboratoriet kaniner

The use of live animals in tick research is crucial for a variety of experimental purposes including the maintenance of hard tick colonies in the ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

Masspektrometri analys för att identifiera Ubiquitylation av EYFP-märkt CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology

Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology

Upprätthålla laboratoriekulturer av Gryllus bimaculatus, en mångsidig Orthopteran-modell för insektsjordbruk och ryggradslös fysiologi

Gryllus bimaculatus (De Geer)&#160;is a large-bodied cricket distributed throughout Africa and Southern Eurasia where it is often wild-harvested as human ...

Isolation of microRNAs from Tick Ex Vivo Salivary Gland Cultures and Extracellular Vesicles

Isolation of microRNAs from Tick Ex Vivo Salivary Gland Cultures and Extracellular Vesicles

Isolering av mikroRNA från Tick Ex Vivo spottkörtelkulturer och extracellulära vesiklar

Ticks are important ectoparasites that can vector multiple pathogens. The salivary glands of ticks are essential for feeding as their saliva contains many ...

A Simple and Inexpensive Running Wheel Model for Progressive Resistance Training in Mice

En enkel och billig löphjulsmodell för progressiv motståndsträning hos möss

Previously developed rodent resistance-based exercise models, including synergistic ablation, electrical stimulation, weighted-ladder climbing, and most ...