Name: injection of hydrogel biomaterial scaffolds to the brain after stroke
Uploaded: 2020-10-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Injection of Hydrogel Biomaterial Scaffolds to The Brain After Stroke at JoVE.com

Ulusal Sağlık Enstitüleri ve Ulusal Nörolojik Bozukluklar ve İnme Enstitüsü'nü finanse etmek için kabul etmek istiyoruz (R01NS079691).

Deneyler Duke Üniversitesi ve Kaliforniya Los Angeles Üniversitesi'nde IUCAC'ye uygun olarak gerçekleştirildi. Bu çalışmada 8 ila 12 haftalık erkek C57Bl/6J fareler kullanılmıştır. Hayvanlar kontrollü sıcaklık (22 ± 2 °C) altında, 12 saat açık-karanlık döngü süresi ve peletlenmiş yiyecek ve su reklam libitum erişimi ile yerleştirildi. Analjezi ve sedasyon protokolleri IUCAC tarafından onaylanmış olarak tanımlanır, ancak diğer laboratuvarlarda kullanılan protokollerden farklı olabilir.</...

<ol>
	<li>National Center for Health Statistics. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Health, United States, 2015: With Special Feature on Racial and Ethnic Health Disparities. , (2016).</li><li>Benjamin, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics-2017+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics-2017 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 135 (10), 229 (2017).</li><li>Rosamond, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2007+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.">Heart Disease and Stroke Statistics-2007 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 115 (5), 69 (2017).</li><li>Ovbiagele, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forecasting+the+future+of+stroke+in+the+united+states:+A+policy+statement+from+the+American+heart+association+and+American+stroke+association.">Forecasting the future of stroke in the united states: A policy statement from the American heart association and American stroke association.</a> Stroke. 44 (8), 2361-2375 (2013).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Themes+and+strategies+for+studying+the+biology+of+stroke+recovery+in+the+poststroke+epoch.">Themes and strategies for studying the biology of stroke recovery in the poststroke epoch.</a> Stroke. 39 (4), (2008).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx: the journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2 (3), (2005).</li><li>Qin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+adaptive+role+for+BDNF+Val66Met+polymorphism+in+motor+recovery+in+chronic+stroke.">An adaptive role for BDNF Val66Met polymorphism in motor recovery in chronic stroke.</a> Journal of Neuroscience. 34 (7), 2493-2502 (2014).</li><li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinshnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research.">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Design, Development and Therapy. 9, 3445-3454 (2015).</li><li>Talley Watts, L., Zheng, W., Garling, R. J., Frohlich, V. C., Lechleiter, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rose+Bengal+Photothrombosis+by+Confocal+Optical+Imaging+In+Vivo:+A+Model+of+Single+Vessel+Stroke.">Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo: A Model of Single Vessel Stroke.</a> Journal of Visualized Experiments. (100), e52794 (2015).</li><li>Tuladhar, A., Payne, S. L., Scoichet, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harnessing+the+potential+of+biomaterials+for+brain+repair+after+stroke.">Harnessing the potential of biomaterials for brain repair after stroke.</a> Frontiers. 5, 14 (2018).</li><li>Nih, L. R., Sideris, E., Carmicahel, S. T., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injection+of+microporous+annealing+particle+(MAP)+hydrogels+in+the+stoke+cavity+reduces+gliosis+and+inflammation+and+promotes+NPC+migration+to+the+lesion.">Injection of microporous annealing particle (MAP) hydrogels in the stoke cavity reduces gliosis and inflammation and promotes NPC migration to the lesion.</a> Advance Materials. 29 (32), (2017).</li><li>Nih, L. R., Gojgini, S., Carmichael, S. T., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duel-function+injectable+angiogenic+biomaterial+for+the+repair+of+brain+tissue+following+stroke.">Duel-function injectable angiogenic biomaterial for the repair of brain tissue following stroke.</a> Nature Materials. 17, 642-651 (2018).</li><li>Cook, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogel-delivered+brain-derived+neurotrophic+factor+promotes+tissue+repair+and+recovery+after+stroke.">Hydrogel-delivered brain-derived neurotrophic factor promotes tissue repair and recovery after stroke.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 37, 1030-1045 (2017).</li><li>Lam, J., Lowry, W. E., Carmichael, S. T., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+iPS-NPCs+to+the+stroke+cavity+within+a+hyaluronic+acid+matrix+promotes+the+differentiation+of+transplanted+cells.">Delivery of iPS-NPCs to the stroke cavity within a hyaluronic acid matrix promotes the differentiation of transplanted cells.</a> Advance Functional Materials. 24, 7053-7062 (2015).</li><li>Nih, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+HA+hydrogel+for+stem+cell+transplantation+in+the+brain:+Biocompatibility+data+using+a+design+of+experiment+approach.">Engineered HA hydrogel for stem cell transplantation in the brain: Biocompatibility data using a design of experiment approach.</a> Data in Brief. 10, 202-209 (2016).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3+Rs+of+Stroke+Biology:+Radial,+Relayed,+and+Regenerative.">The 3 Rs of Stroke Biology: Radial, Relayed, and Regenerative.</a> Neurotherapeutics. 13, 348-359 (2016).</li><li>Caicco, M. J., Cooke, M. J., Wang, Y., Tuladhar, A., Morshead, C. M., Shoichet, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hydrogel+composite+system+for+sustained+epi-cortical+delivery+of+Cyclosporin+A+to+the+brain+for+treatment+of+stroke.">A hydrogel composite system for sustained epi-cortical delivery of Cyclosporin A to the brain for treatment of stroke.</a> Journal of Controlled Release. 166 (3), 197-202 (2013).</li><li>Moshayedi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+optimization+of+an+engineered+hydrogel+allows+for+selective+control+of+human+neural+stem+cell+survival+and+differentiation+after+transplantation+in+the+stroke+brain.">Systematic optimization of an engineered hydrogel allows for selective control of human neural stem cell survival and differentiation after transplantation in the stroke brain.</a> Biomaterials. 105, 145-155 (2016).</li><li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamic+effects+of+intraoperative+anesthetics+administration+in+photothrombotic+stroke+model:+a+study+using+laser+speckle+imaging.">Hemodynamic effects of intraoperative anesthetics administration in photothrombotic stroke model: a study using laser speckle imaging.</a> BMC Neuroscience. 18 (10), (2017).</li><li>Wiersma, A. M., Winship, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Photothrombotic+Stroke+in+the+Sensorimotor+Cortex+of+Rats+and+Preparation+of+Tissue+for+Analysis+of+Stroke+Volume+and+Topographical+Cortical+Localization+of+Ischemic+Infarct.">Induction of Photothrombotic Stroke in the Sensorimotor Cortex of Rats and Preparation of Tissue for Analysis of Stroke Volume and Topographical Cortical Localization of Ischemic Infarct.</a> Bio-protocol. 8 (10), (2018).</li><li>Liang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Region-specific+and+activity-dependent+regulation+of+SVZ+neurogenesis+and+recovery+after+stroke.">Region-specific and activity-dependent regulation of SVZ neurogenesis and recovery after stroke.</a> PNAS. 116 (27), 13621-13630 (2019).</li><li>Payne, S. L., Anandakumaran, P. N., Varga, B. V., Morshead, C. M., Nagy, A., Shoichet, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+maturation+of+human+iPSC-derived+neuroepithelial+cells+influences+transplant+survival+in+the+stroke-injured+rat+brain.">In vitro maturation of human iPSC-derived neuroepithelial cells influences transplant survival in the stroke-injured rat brain.</a> Tissue Engineering Part A. 24, 351-360 (2018).</li><li>Lee, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+epidural+transplantation+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+neural+progenitors+enhances+functional+recovery+after+stroke.">Delayed epidural transplantation of human induced pluripotent stem cell-derived neural progenitors enhances functional recovery after stroke.</a> Science Reports. 7, 1943 (2017).</li><li>Somaa, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide-based+scaffolds+support+human+cortical+progenitor+graft+integration+to+reduce+atrophy+and+promote+functional+repair+in+a+model+of+stroke.">Peptide-based scaffolds support human cortical progenitor graft integration to reduce atrophy and promote functional repair in a model of stroke.</a> Cell Reports. 20, 1964-1977 (2017).</li><li>Griffin, D. R., Weaver, W. M., Scumpia, P., Di Carlo, D., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+wound+healing+by+injectable+microporous+gel+scaffolds+assembled+from+annealed+building+blocks.">Accelerated wound healing by injectable microporous gel scaffolds assembled from annealed building blocks.</a> Nature Materials. 14 (7), 737-744 (2016).</li><li>Sideris, E. Y., Aaron, C. J., Carmichael, S. T., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronic+acid+particle+hydrogels+decrease+cerebral+atrophy+and+promote+pro-reparative+astrocyte/axonal+infiltration+in+the+core+after+ischemic+stroke.">Hyaluronic acid particle hydrogels decrease cerebral atrophy and promote pro-reparative astrocyte/axonal infiltration in the core after ischemic stroke.</a> bioRxiv. , (2019).</li><li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinated+Transplantation+of+Neural+Stem+Cells+and+Collagen+Type+I+Promote+Functional+Recovery+After+Cerebral+Ischemia+in+Rats.">Combinated Transplantation of Neural Stem Cells and Collagen Type I Promote Functional Recovery After Cerebral Ischemia in Rats.</a> The Anatomical Record. 293 (5), 911-917 (2010).</li><li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+Human+Neural+Precursor+Cells+in+Matrigel+Scaffolding+Improves+Outcome+from+Focal+Cerebral+Ischemia+after+Delayed+Postischemic+Treatment+in+Rats.">Transplantation of Human Neural Precursor Cells in Matrigel Scaffolding Improves Outcome from Focal Cerebral Ischemia after Delayed Postischemic Treatment in Rats.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 30 (3), 534-544 (2009).</li><li>Gelderblom, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+and+spatial+dynamics+of+cerebral+immune+cell+accumulation+in+stroke.">Temporal and spatial dynamics of cerebral immune cell accumulation in stroke.</a> Stroke. 40 (5), 1849-1857 (2009).</li><li>Wei, L., Erinjeri, J. P., Rovainen, C. M., Woolsey, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collateral+growth+and+angiogenesis+around+cortical+stroke.">Collateral growth and angiogenesis around cortical stroke.</a> Stroke. 32 (9), 2179-2184 (2001).</li><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+Neural+Stem+Cells+Contribute+to+Stroke-Induced+Neurogenesis+and+Neuroblast+Migration+toward+the+Infarct+Boundary+in+Adult+Rats.">Activated Neural Stem Cells Contribute to Stroke-Induced Neurogenesis and Neuroblast Migration toward the Infarct Boundary in Adult Rats.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 24 (4), 441-448 (2004).</li></ol>

Burada kolayca tekrarlanabilir, minimal invaziv, kalıcı bir inme modeli gösteriyoruz ve inmeden beş gün sonra enfarktüse nasıl biyomalzeme enjekte edeceğimizi açıklıyoruz. Fototropombotik boya Rose Bengal ve stereotaksik cihaza bağlı 520 nm kolimli lazer kullanımı bize inmeyi farenin motor korteksine gelişmiş hassasiyetle konumlandırma yeteneği verir. İnmeden beş gün sonra, enfarktüsün yeri ışınlamanın merkezinde gözle görülebilir, bregma için 2.0 mm vasat yanal. Hidrojel daha sonra şır?...

İnme, amerika Birleşik Devletleri'nde engelliliğin önde gelen nedeni ve beşinci ölüm nedenidir1. Tüm inmelerin yaklaşık% 87'si iskemiktir, geri kalan% 13'ünün çoğunluğu hemorajik2 'dir. İskemik inme, bir arterdeki kan akışının çevre dokuya tıkanması olarak tanımlanır. Bu tıkanıklık, hayatta kalan hastalarda sıklıkla kalıcı sakatlığa yol açan oksijen yoksunluğu ve sonraki nekroz ile sonuçlanır. İnme ölüm oranında bir azalma olsa da3, yaygınlığının 2030 yılına kadar 3,4 milyon kişiye çıkması bekleniyor4. Engelli hayatta kalanlardaki bu artış ve buna bağlı olarak ekonomik yük, sinirsel onarım mekanizmalarına odaklanan inme araştırmaları için bir itmeye yol açmıştır. İnmenin ardından, nekrotik bölgenin genişlemesini önleyen bir yara izi oluşumuna yol açan enflamatuar bir dönem vardır. Nekrotik çekirdeği çevreleyen bölge "peri-enfarktüs" olarak ad altındadır ve artan anjiogenez, nörogenez ve aksonal filizlenmeyi içeren bu bölgedeki plastisitenin hayvan modellerinde ve insanlarda gözlenen iyileşme ile doğrudan bağlantılı olduğuna dair güçlü bir kanıt vardır5. İnmeden sonraki karmaşık etkileşimleri düzgün bir şekilde kopyalayabilen in vitro modeller olmadığından, inme araştırmaları için hayvan modelleri gereklidir.
İskemik inme üretmek için kullanılabilecek birkaç in vivo model vardır. Farelerde kullanılan en yaygın modellerden biri, distal veya proksimal (intra-arteriyel filament yoluyla) tıkanıklık yoluyla orta serebral arter tıkanıklığı veya MCAo'dur. Filament MCAo (fMCAo) olarak da bilinen proksimal model, tipik olarak, faktör sayısına bağlı olarak, serebral yarımkürenin% 5 ila% 50'sini kapsayan büyük iskemik inmelerle sonuçlanır6. Bu modellerde, bir dikiş veya filament iç şahdamarından orta serebral arterin (MCA) tabanına ilerletilir ve belirli bir süre yerinde tutulur. Geçici veya kalıcı hale getirilebilen bu tıkanıklık yöntemi, striatum merkezli bir enfarktüs üretir ve korteksin aşırıya bulaştırılmasını içerebilir veya içermeyebilir6. Elde edilen kontur boyutu oldukça değişkendir ve her farede prosedürün etkinliğini doğrulamak için lazer doppler gibi görüntüleme teknikleri gereklidir. 30 dakikadan uzun süren intra-arteriyel veya intra-luminal filament tıkanıklığı, boyut aralığının daha büyük ucunda vuruşlar üretir. Bazı araştırmacılar, önemli deneysel odaklanma ve laboratuvar doğrulaması gerektiren daha kısa filament tıkanma sürelerine odaklanmıştır7. Farelerdeki Filament MCAo modelleri, insan inme vakalarında görüldüğü gibi hücre ölümünün, iskemik ilerlemenin ve peri-enfarktüs bölgesinin oluşumunun benzer aşamalarını izler; bununla birlikte, daha büyük inmeler, daha az yaygın, daha az tedavi edilebilir insan inmeleri olan malign serebral enfarktüslerin hastalık durumuna daha yakından benzer6. Bu arada distal MCA tıkanıklığı daha ilgili bir ameliyat ve kraniektomi gerektirir. Bu modelde, MCA'nın beynin yüzeyi boyunca uzanan distal kısmı doğrudan bir dikiş bağı veya koterizasyon ile tıkanır. Tekniğin bazı varyasyonlarında, şahdamarları tek taraflı veya geçici olarak çift taraflı olarak tıkanır. Distal MCAo'nun bir yararı, filament modelinden daha az değişken boyutta kortikal tabanlı bir inme üretmesidir. Bununla birlikte, distal model, fMCAo6ile de ilgili bir endişe olan dış şahdamarının (ECA) transeksiyon nedeniyle daha zayıf davranışsal çıktı üretir.
Daha az invaziv olmasıyla bilinen alternatif bir kontur modeli fototropombotik (PT) modeldir. PT modeli iyi tanımlanmış bir iskemi yeri ile sonuçlanır ve yüksek sağkalım oranı8ile ilişkilidir. Teknik, intraperitoneal olarak enjekte edilen ve intravasküler foto-oksidasyona izin veren ışığa duyarlı bir boyaya dayanır, sadece istenen dokuyu bir ışık veya lazerle ışınlayarak9. Eksitasyondan sonra, ışınlanan bölgede trombosit toplama ve pıhtı oluşumunu aktive eden endotel hasarına neden olan oksijen radikalleri oluşur8,9. Strok boyutu ve konumu üzerindeki sıkı kontrolün yanı sıra PT modelinin yüksek tekrarlanabilirliği, biyomalzemelerin incelenmesi için idealdir. Lazer ve stereotaksik koordinatlar kullanılarak hassasiyet mümkün olsa da, bu modeli birkaç çalışma için daha az ideal hale getirebilecek bazı dezavantajlar vardır. fMCAo modelinin aksine, PT kontur modeli yeniden çürütülemez. Bu nedenle, reperfüzyondan sonraki hasarlara veya reperfüzyonu takip eden mekanizmalara özgü nöroprotektif ajanların araştırılması için malzemeler burada yararlı olmayacaktır8. Ek olarak, PT modelinin mikrovasküler hakareti nedeniyle nispeten küçük iskemik penumbra görülür. Bunun yerine, insan inmesi için karakteristik olmayan lokal vazojenik ödem oluşur, bu da bu modeli peri-enfarktüs alanı6,8'eodaklanan preklinik ilaç çalışmaları için istenmeyen hale getirir.
İnmede biyomalzeme stratejilerinin genel amacı ya biyoaktif ajanlar sunmak ya da beyin dokusu büyümesi için hücre dışı bir matris olarak hareket etmektir. Yöntemlerimizi kullanarak araştıracağımız bir strateji, birçok mevcut hücre tedavilerinin verildiği peri-enfarktüs dokusunun aksine, hidrojel'i doğrudan inme çekirdeğine teslim etmektir10. Bu yaklaşımın gerekçesi, çekirdekte bulunan nekrotik dokuya doğumun çevredeki sağlıklı veya iyileşen dokuyu bozmaktan kaçınacağıdır. Biyomalzemeye dahil olan herhangi bir aktif ajanın difüzyonunun çekirdekten peri-enfarktüse ulaşabileceğini varsayıyoruz, özellikle hidrojel biyomalzemelerin teslimatının glial skarın kalınlığını azalttığını bulduğumuz için11. Peri-enfarktüs bölgesinin inmeden sonra nöroplastisite gösterdiği ve çekici bir hedef haline getirdiği için bu önemlidir. Ayrıca, inme çekirdeğine bir taşıyıcı matrisin teslimi, yeni dokunun oluşumuna rehberlik etmek için anjiyojenik12 veya nörojenik13 faktörle ve doğum için hücrelerle yüklenebilir14. Hücre teslimi bir matris kullanılarak büyük ölçüde geliştirilmiştir, çünkü hücreleri teslimat sırasında mevcut olan sert enjeksiyon kuvvetlerinden ve yerel ortamdan korur, ayrıca farklılaşmayı ve engraftment15'iteşvik eder.
Bu enjekte edilebilir terapötik biyomalzemeler inme uygulamalarında klinik öneme sahiptir, çünkü şu anda inmeden sonra nöronal iyileşmeyi uyaran tıbbi tedaviler yoktur. İyileşmede yer alan altta yatan sinir devreleri inme çekirdeğine bitişik beyin dokusunda yatmaktadır16İnme çekirdeğinin kendisi canlı sinir dokusundan yoksundur. Nekrotik inme çekirdeğine biyomalzeme verilmesinin, büyüme faktörlerinin depo salınımı 13 , büyümedeki dokunun uyarılması ve iyileşen beyin dokusu gelişiminin teşviki11 , 12, immün yanıtların değiştirilmesi17ve kök hücre türevi terapötiklerin verilmesi14, 18. Bununla birlikte, bu uygulamaların olasılığını etkili bir şekilde incelemek için, inmeyi teşvik etmek ve biyomalzeme enjekte etmek için tutarlı ve tekrarlanabilir bir yönteme ihtiyaç vardır. PT kontur modeli, konturun yönü ve konumu üzerinde hassas kontrol sağlayan teknikler kullanır. Stereotaksik cihaza bağlı bir lazer yönlendirmelere rehberlik eder ve stereotaksik cihazlara bağlı pompalar, ek görüntüleme formlarına gerek kalmadan malzemenin enjeksiyon oranını kontrol eder. Bu nedenle, farelerin motor kortekslerinde PT inme yapma ve inme çekirdeğine biyomalzeme enjekte etme yöntemlerini tanımlamayı seçtik. Burada, ilave hücre veya büyüme faktörü olmadan enjeksiyon için biyomalzeme olarak mikro gözenekli tavlanmış parçacık (MAP) hidrojelleri kullanıyoruz. Ek olarak, beynin sağlam biyomalzeme ile nasıl başarılı bir şekilde alınacağını açıklıyoruz ve inme sonucunu biyomalzeme enjeksiyonu ile ve enjeksiyonu olmadan analiz etmek için kullanılan immün entrika testlerini tartışıyoruz.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Normal Goat Serum</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100504-028</td>
			<td>For blocking buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-ply alcohol pre pad, Sterile, Medium</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MDS090735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25uL Hamilton Syringe 702RN, no needle</td>
			<td>Fishcer Scientific</td>
			<td>14824663</td>
			<td>Syringes used to inject biomaterials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25uL Positive displacement pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>M-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x Beam Expander, 400-650nm</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>GBE02-A</td>
			<td>Laser beam expander</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adjustable Stage Platform</td>
			<td>Kopf Instruments</td>
			<td>901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Glucose Transporter GLUT1 antibody, rabbit</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab113435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Iba1 Antibody, goat</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab5076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Vacutainer Safety-Lok Blood Collection Sets. 25G, 12&#34;</td>
			<td>Medsupply</td>
			<td>367294</td>
			<td>For perfusions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BKF12- Matte Black Aluminum Foil</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>BKF12</td>
			<td>To cover anything that is reflective when using laser.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone Iris Mini Scissors - 3-1/2&#34;</td>
			<td>Sklar surgical instruments</td>
			<td>64-2035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 Mice</td>
			<td>Jackson Laboratory</td>
			<td>000664</td>
			<td>8-12 weeks of age</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cage Assembly Rob</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>ER3-P4</td>
			<td>3&#34; Long, diameter 6mm, 4 pack - for attaching laser to sterotax</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon Steel Burrs -0.5mm Diameter</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>19007-05</td>
			<td>For creating burr hole</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromium(III) potassium sulfate dodecahydrate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>EM1.01036.0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Controller for pigtailed lasers</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>CLD1010LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swabs</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89031-288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CP 25 pipette tips</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F148012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-goat IgG H&#38;L (488)</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab150129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey Anti-rabbit IgG H&#38;L (647)</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab150075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey Anti-rat IgG H&#38;L (555)</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab150154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMS DPX Mountant</td>
			<td>Elecron Microscopy Sciences</td>
			<td>13512</td>
			<td>Mounting solution for slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMS Gelatin Powder Type A 300 Bloom</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>16564</td>
			<td>For gelatin coating slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMS Paraformaldehyde, Granular</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100504-162</td>
			<td>For making 45 PFA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ESD Worstation kit</td>
			<td>Elmstat</td>
			<td>WSKK5324SB</td>
			<td>Need for setting up the laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber Bench Wall Plate, unthreaded</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>HCA3</td>
			<td>Need for connecting laser to Kopf shaft</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FiberPort</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>PAF-X-5-A</td>
			<td>FC/APC&#38; APC, f=4.6mm, 350-700nm, diameter 0.75mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors - straight/sharp-blunt/10cm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14028-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFAP Antibody, rat</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-0300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Plate</td>
			<td>Kopf Instruments</td>
			<td>HP-4M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmEdge Hydrophobic Barrier Pen</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-4000</td>
			<td>For staining slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMPAC 6-Integrated Multi Patient Anesthesia Center</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>901808</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine Prep Pads</td>
			<td>Medx Supple</td>
			<td>MED MDS093917H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jewlers Forceps #5</td>
			<td>GFS chemicals</td>
			<td>46085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Safety Glasses</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>LG10B</td>
			<td>Amber Lenses, 35% Visible light (googles versions available too)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M27-1084 Powerful LED Dual Goose-neck</td>
			<td>United Scope</td>
			<td>LED-11C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical USP Grade Oxygen</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>OX USP250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Miltex Adson Dressing Forceps, Disecting-grade</td>
			<td>Intefra Miltex</td>
			<td>V96-118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Cord/Cordless Small Animal Trimmer</td>
			<td>Harvard aparatus</td>
			<td>72-6110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-pump variable flow</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>70730-064</td>
			<td>Pump for perfusions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Brain Matrices, Coronal Slices, 1mm</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>RBMA-200c</td>
			<td>For TTC slices</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Gas Anethesia Head Holder</td>
			<td>Kopf Instruments</td>
			<td>923-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanojet Control Box</td>
			<td>Chemyx</td>
			<td>10050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanojet pump header</td>
			<td>Chemxy</td>
			<td>10051</td>
			<td>Attach to stereotaxic device for injecting biomaterial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle RN 30G PT STY 3, 0.5 inch</td>
			<td>Fishcer Scientific</td>
			<td>NC9459562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-rupture ear bars 60&#186;</td>
			<td>Kopf Instruments</td>
			<td>922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer pH 7.4</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062 338</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pigtaled laser 520 nm, 100mW, 5G Pin</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>LP520-MF100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Positive charge glass slides</td>
			<td>Hareta</td>
			<td>AHS90-WH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power engergy meter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>PM100D</td>
			<td>Used to measure your mW laser output</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Vet Ointment</td>
			<td>Dr. Foster Smith</td>
			<td>9N-76855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal Probe Mouse</td>
			<td>kopf Instruments</td>
			<td>Ret-3-ISO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rose Bengal Dye 95%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>330000-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaft Modified 8-32 threaded hole 1/2&#34; depth</td>
			<td>Kopf Instruments</td>
			<td>1770-02</td>
			<td>For connecting laser to sterotaxic device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slim photodiode power sensor</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>S130VC</td>
			<td>Used with power energy meter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SM1-Threaed 30 mm Cage Plate 0.35&#34; thick 2 Retaining</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>CP02</td>
			<td>For connecting laser expander</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sol-M U-100 Insuline syringe with 1/2 unit markings 0.5 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10002-726</td>
			<td>To inject rose bengal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StainTray Slide Staining System</td>
			<td>Simport Scientific</td>
			<td>M920-2</td>
			<td>For staining slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterotaxic device</td>
			<td>Kopf Instruments</td>
			<td>940</td>
			<td>Small Animal Stereotaxic Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Adson Forceps -1x2 teeth</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91127-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Fine Forceps - straight/broad Shanks</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91113-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature Controller</td>
			<td>Kopf Instruments</td>
			<td>TCAT-2LV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek OCT compound</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97063-864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upper Bracket Clamp</td>
			<td>Kopf Instruments</td>
			<td>1770-c</td>
			<td>For connecting laser to sterotaxic device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond Tissue Adhessive 3mL</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-361931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vogue Professional My Manicurist</td>
			<td>Bargin Source</td>
			<td>6400</td>
			<td>For Burrs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Bead Sterilizers</td>
			<td>VWR</td>
			<td>75999-328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Tek OCT compound</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td>For tissue embeding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

injection of hydrogel biomaterial scaffolds to the brain after stroke

İnme, amerika birleşik devletleri'nde engelliliğin ve beşinci önde gelen ölüm nedeninin başındadır. Tüm inmelerin yaklaşık % 87'si iskemik inmelerdir ve beyne kan sağlayan bir damarın ani tıkanma olarak tanımlanır. Tıkanmaya dakikalar kala hücreler ölmeye başlar ve onarılamaz doku hasarına neden olarak ortaya çıkan hücrelerdir. Mevcut terapötik tedaviler, reperfüzyona izin vermek ve daha ciddi beyin hasarını önlemek için pıhtı giderme veya lizise odaklanır. Geçici beyin plastisitesi zamanla hasarlı dokunun bir kısmını kurtarsa da, hastaların önemli bir kısmı asla çözülmeyecek nörolojik eksikliklerle baş başa kalır. İnmenin neden olduğu nörolojik açıkları tedavi etmek için terapötik seçeneklerin eksikliği vardır ve bu artan hasta popülasyonunun tedavisi için yeni stratejiler geliştirilmesi gerektiğini vurgular. Enjekte edilebilir biyomalzemeler şu anda aktif ajanların veya kök hücrelerin teslimi yoluyla beyin plastisitesini artırmak ve endojen onarımı iyileştirmek için tasarlanmıştır. Bu yaklaşımları test etmek için bir yöntem, bir kemirgen inme modeli kullanmak, biyomalzemeyi inme çekirdeğine enjekte etmek ve onarımı değerlendirmektir. İnme sonrası doğru tedavi için inme çekirdeğinin kesin yerini bilmek zorunludur, bu nedenle enjeksiyondan önce görüntüleme ihtiyacını önlemek için öngörülebilir bir inme konumu ile sonuçlanan bir inme modeli tercih edilir. Aşağıdaki protokol, fototropotik inmenin nasıl teşvik edeceğini, bir hidrojenin kontrollü ve hassas bir şekilde nasıl enjekte edeceğini ve biyomalzemeyi sağlam tutarken beynin nasıl çıkarılacağını ve kriyoseksiyon yapılacağını kapsayacaktır. Ek olarak, bu aynı hidrojel malzemelerin kök hücrelerin birlikte teslimi için nasıl kullanılabileceğini vurgulayacağız. Bu protokol, inme çekirdeğine diğer enjekte edilebilir biyomalzemelerin kullanımına genelleştirilebilir.

Bu yöntemin amacı inmeden sonra beyne biyomalzemelerin nasıl enjekte edildiğini göstermekti. İnme lezyonunun hem boyut hem de mekanda kontrollü bir şekilde yönlendirilmesi için gül bengal ve 520 nm lazerli fototropotik bir model kullanılmıştır. İnmeden beş gün sonra enfarktüs ameliyat sırasında(Şekil 1B)ve TTC ve görüntüleme IHC lekeli slaytlar (Şekil 2)ile görselleştirilebilir. 2x lens ile lazer çapındaki artış, inme lezyonunda 2...

Watch this Scientific Journal Video about Injection of Hydrogel Biomaterial Scaffolds to The Brain After Stroke at JoVE.com

Injection of Hydrogel Biomaterial Scaffolds to The Brain After Stroke

İnme, minimal tedavi seçenekleri olan ve kaybedilen beyin dokusunu yenilemek için mevcut klinik tedavinin olmadığı küresel bir sorundur. Burada kemirgenlerin motor korteksinde hassas fototropotik inme oluşturma yöntemlerini ve daha sonra inmeden sonra doku yenilenmesi üzerindeki etkilerini incelemek için hidrojel biyomalzemelerin enjeksiyonunu açıklıyoruz.

İnme Sonrası Beyne Hidrojel Biyomalzeme İskelelerinin Enjeksiyonu

Stroke is the leading cause of disability and the fifth-leading cause of death in the United States. Approximately 87% of all strokes are ischemic strokes ...

The reproducible injection of hydrogel scaffolds into a rodent ischemic stroke model allows for the study of how materials and other deliver therapeutics affect brain repair, regeneration and behavioral improvement. The main advantages of using the photothrombotic stroke model to study brain material interactions are the reproducible location and size. Which allow injection of materials into the stroke core without imaging.The photothrombotic stroke model is designed to be a relevant model for ischemic stroke, in a region of the brain, the motor cortex, that is commonly affected by stroke in humans. And to provide a relevant behavioral readout for stroke, which is motor control of the limb. So as to evaluate a candidate therapeutic, like a biopolymer hydrogel.Confirm a lack of response to toe pinch in an anesthetized mouse. Then weigh the mouse to determine how much Rose bengal dye to inject, and secure it to a stereotaxic device equipped with a laser. After shaving and disinfecting the surgical area, use forceps to tent the skin between the ears and eyes, and insert a blade into the raised skin to make a lateral one to two centimeter midline incision in the skin.Separate the skin and press the forceps lightly onto the parietal bones to locate the bregma. Use a surgical marker to label the bregma with a dot. And wearing laser safety goggles, move the laser over the skull of the mouse, fixing the stereotaxic device at a 90 degree angle.Select the 10 milli watt preset and turn on the laser. Adjust to the X and Y axis until the laser is directly over the bregma. Reset the X and Y on the digital display console, and move the laser 1.8 millimeters left of the bregma.Bring the laser as close to the skull as possible without letting the laser touch the skull. When the laser is in position, turn it off and use a disposable 29 gauge needle to intra peritoneally inject the appropriate volume of Rose bengal dye. Immediately start a timer to allow the dye to circulate systemically for seven minutes.While the dye is circulating, select the preset for 40 milliwatts without turning on the laser. When the timer goes off, turn on the laser and set the timer for 13 minutes. When the timer goes off again, change the laser back to 10 milliwatts.Mark this spot with the surgical marker and turn off the laser. Lift the laser and unlock it from the 90 degree angle, so it can be moved away from the mouse. Use cotton to apply sterile saline to the surgical area as necessary, and drill at the mark in small bursts, perpendicular to the surface of the skull.Place a small wipe next to the mouse and use the forceps to pull the skin close together and upward. Dab any large drops of surgical glue at the end of the tip on the wipe, and despairingly apply surgical glue to the skin. Hold skin together with forceps for 10 seconds, then continue to apply glue until no additional openings are visible in the skin.For hydro gel injection into the stroke region, attach injection pumps to the stereotaxic device. Then set the flow rate to one microliter per minute and volume to the desired injection amount in microliters. Reopen the incision over the brain, and use saline soaked cotton to clean any debris from the skull.A white, yellow circle of tissue, and the burr hole from the drill will be visible. Lock the injection pump at 90 degrees over the mouse. Clean the glass syringe with sterile saline.And remove the needle. Use a 25 microliter positive displacement pipette to back load the syringe with 10 microliters of hydrogel, and use the plunger to push the gel all the way to the front of the syringe. Reassemble the syringe.And continue pushing until the gel visibly exudes from the needle. Load the syringe onto the pump, and move the pump and the X and Y directions to orient the syringe over the burr hole. Move the pump in the Z direction until the needle touches the top of the hole.And reset the Z on the digital display console. Move the syringe 0.75 millimeters in the Z direction and press start on the pump console to inject four to six microliters of the hydrogel at a one microliter per minute flow rate. When all of the hydro gel has been delivered, set a five minute timer to allow the gel to begin cross-linking.After five minutes, turn the Z knob to slowly pull up the syringe. When the needle is far enough away from the skull, unlock and remove the pump. Then close the skin over the skull, and place the mouse in a clean cage with monitoring until it has recovered from the anesthesia.At the appropriate experimental end point, use blunt thin forceps to carefully remove pieces of the skull to expose the brain. Using small surgical scissors to cut away the bone over the stroke site as necessary. After harvesting, place the brain in 10 to 15 milliliters of 4%para formaldehyde overnight for 16 to 24 hours, before placing the tissue into 30%sucrose.The brain will be ready for cryo section when it sinks to the bottom of the tube. Five days after a stroke induction, the infarct can be visualized during surgery and by TTC and immunohistochemically stained slides imaging. An increase in the laser diameter with a two X lens leads to a visual increase in stroke lesion that spans over 2.5 millimeters versus a single one millimeter section using the laser only.Hyaluronic acid based hydrogel microparticle injection into the stroke lesion five days after a stroke, results in the formation of micro and annealed particles with a porous scaffold that facilitates cell migration into the stroke core. The tissue that are as scaffolds can be retrieved and used for molecular cellular or tissue level analysis. So it's a single cell RNA-seq.Flow cytometry or clarity. Also behavioral analysis can be performed to assess behavioral improvement. This approach delivers a candidate therapeutic, a biopolymer hydrogel, into the stroke cavity.Which is a potential cavity in stroke. An area of dead tissue that can accept a transplant. Additionally, this cavity is adjacent to the area of the brain that undergoes the most plasticity after stroke, the peri infarct tissue.So a candidate therapeutic like a biopolymer hydrogel can deliver cells or small molecules to the part of the brain that is really the target for recovery and stroke.

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

Kaliks Patch Kelepçe Kapasitans Kayıtlar Yöntemleri

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Biyoloji

Intravitreous Injection for Establishing Ocular Diseases Model

Oküler Hastalıkları Model kurulması için intravitreal enjeksiyon

Intravitreous injection is a widely used technique in visual sciences research. It can be used to establish animal models with ocular diseases or as ...

Microfabrication of Chip-sized Scaffolds for Three-dimensional Cell cultivation

Üç boyutlu Hücre ekimi için Chip-ölçekli Yapı iskeleleri mikroimalat

Using microfabrication technologies is a prerequisite to create scaffolds of reproducible geometry and constant quality for three-dimensional cell ...

Zebrafish Brain Ventricle Injection

Zebra balığı Beyin Ventrikül Enjeksiyon

Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved ...

The Gateway to the Brain: Dissecting the Primate Eye

Beyin Ağ Geçidi: Primate Göz Diseksiyon

The visual system in humans is considered the  gateway  to the world and plays a principal role in the plethora of sensory, perceptual and cognitive ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

Yetişkin Zebra balığı içine intraperitoneal enjeksiyon

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Mapping the After-effects of Theta Burst Stimulation on the Human Auditory Cortex with Functional Imaging

Theta sonrası etkileri Haritalama Fonksiyonel Görüntüleme ile İnsan İşitsel korteks üzerine Stimülasyon Burst

Auditory cortex pertains to the processing of sound, which is at the basis of speech or music-related processing1. However, despite considerable recent ...

Intraductal Injection for Localized Drug Delivery to the Mouse Mammary Gland

Fare meme bezi Lokalize İlaç Teslim Intradüktal Enjeksiyon

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of ...

Reconstitution of a Transmembrane Protein, the Voltage-gated Ion Channel, KvAP, into Giant Unilamellar Vesicles for Microscopy and Patch Clamp Studies

Bir transmembran proteinin yeniden oluşturulması, Mikroskop ve yama kelepçe Çalışmaları Dev tek-katmanlı keseler içine Voltaj kapılı iyon kanalı, KvAP,

Giant Unilamellar Vesicles (GUVs) are a popular biomimetic system for studying membrane associated phenomena. However, commonly used protocols to grow ...

Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat

Rat Yanal Kuyruk Ven gelen Kan Örnekleme

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, ...