Name: a murine model of fetal exposure to maternal inflammation to study the effects of acute chorioamnionitis on newborn intestinal development
Uploaded: 2020-06-24T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل جزئيا من خلال المعاهد الوطنية للصحة (DK097335 و T32AI007260) وقسم الأسرة في جامعة أيوا ستيد لطب الأطفال.

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل لجنة العناية والاستخدام المؤسسية للحيوانات في جامعة أيوا (البروتوكول #8041401). تم إيواء جميع الحيوانات في جمعية لتقييم واعتماد رعاية الحيوانات المختبرية (AALAC) وافقت vivarium في جامعة أيوا. وكانت جميع الفئران سلالة نوع البرية C57Bl/6J.
1. ?...

يؤثر التهاب المشيمة على 2٪، و25٪، من حالات الولادة قبل الأوان8،9. ومع ذلك ، فإن تأثير التهاب المشيمة يمكن أن يمتد لفترة طويلة بعد الولادة حيث ثبت أن له تأثيرات كبيرة على الجنين والوليد10،11،12،13<...

تلعب الأغشية المشيمية دورا أساسيا في حمل الثدييات. وهي تشمل المشيمة و amnion، والتي تخدم وظائف متعددة. فهي تحيط وتحمي الجنين ، وتسهيل إشارات الباراكورين بين مقصورات الأم والجنين1، وخلق حلقات التغذية المرتدة المحلية داخل الأغشية المشيمية ، والتي قد تشارك في بدء الولادة1. الفهم الحالي للأغشية يشير إلى أن amnion يوفر وظيفة الحاجز الهيكلي ، ويوفر المشيمة حاجزا مناعيا في المقام الأول لحماية الجنين النامي من الجهاز المناعي للأم2. التهاب هذه الأغشية يعرف باسم التهاب المشيمة. تاريخيا، تم تشخيص التهاب المشيمة السريرية بعد وجود حمى الأم بالإضافة إلى واحد أو أكثر من النتائج السريرية الجنينية أو الأمومية3،4. ومع ذلك ، في حين أن هذا التعريف مفيد سريريا ، إلا أن افتقاره إلى الدقة جعل أبحاث التهاب المشيمة صعبة. في عام 2015 ، في محاولة لتوضيح التشخيص ، عرفت ورشة عمل فريق خبراء من قبل معهد يونيس كينيدي شرايفر الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية التهاب المشيمة بأنه التهاب داخل الرحم ، أو العدوى ، أو كليهما (الثلاثي I)3. هذا التوضيح مهم لأنه في حين أن العدوى الناجمة عن الميكروبات هي سبب مهم لالتهاب الرحم / السلى ، فإنه يحدث بشكل أقل شيوعا من التهاب الرحم / السلوي العقيم5،6،7. عموما، لا يزال التهاب المشيمة مشكلة صحية عامة كبيرة، كما هو واضح في 2٪من الولادات الأجل و 25٪\ 25 ٪ من الولادات قبل الأوان8،9.
يمكن أن يكون لالتهاب المشيمة آثار كبيرة على الجنين والمواليد لحديثي الولادة. وقد تم توثيقه جيدا في الأدب أن التهاب المشيمة يرتبط بزيادة خطر العديد من المراضات الخداج، بما في ذلك خلل التنسج القصبيالرئوي 10، إصابةالمادة البيضاءالدماغية 11،نزيف داخل البطين12،اعتلال الشبكية من الخداج13،وكلا يشتبه وأكد بداية مبكرة تعفن الدم الوليدي14،15. كما أننا مهتمون في آليات الإصابة والإصلاح من الأمعاء غير ناضجة, من المهم أن نلاحظ أن يرتبط أيضا التهاب المشيمة مع التنمية في وقت لاحق من التهاب الأمعاء النخري (NEC)15,16. NEC هو مرض معوي مدمر للرضع الخدج يؤدي إلى استجابة مضيفة غير خصية للالتهاب ونخر الأمعاء اللاحق17. كل عام، NEC يصيب أكثر من 4000 الرضع في الولايات المتحدة، ويموت ما يصل إلى ثلث هؤلاء الرضع من المرض18. من المرجح أن ينطوي الإمراض في NEC على مزيج من عدم النضج المعوي ، وخلل تنظيم الجهاز المناعي غير الناضج ، والتهاب الأمعاء ، ونقل الجرثومية19، وبلغت ذروتها في مسار مشترك نهائي لنخر الأمعاء. الأهم من ذلك ، فإن بداية NEC غالبا ما يحدث بعد أسابيع من الولادة والتعرض المحتمل لالتهاب المشيمة ، مما يجعل الصلة الميكانيكية بين التهاب المشيمة والتنمية اللاحقة لل NEC غيرواضحة 20. إحدى الآليات المحتملة التي يمكن من خلالها أن يساهم التهاب المشيمة في الفيزيولوجيا المرضية في NEC هي من خلال تنظيم الجهاز المناعي للأم ، مما ينتج لاحقا استجابة التهابية جنينية قوية قد تعطل أنماط نمو الجنين الطبيعية21و22و23.
نماذج الثدييات متعددة من التهاب المشيمة موجودة في القوارض والأغنام24،25،26،27،28،29،30،31،32. ومع ذلك، توجد بيانات قليلة تتعلق بتطور الجهاز المعوي بعد فترة حديثي الولادة الأولية بعد تعرض الجنين الناجم عن التهاب المشيمة لالتهاب الأمهات (FEMI). من أجل استكشاف العلاقة بين FEMI والتطور اللاحق لإصابة الجهاز المعوي غير الناضج ، قمنا بتكييف نموذج FEMI الناجم عن الليبوبوليساكريد (LPS). شواريد الليبوبوليساكريد هي عنصر رئيسي من السطح خارج الخلية على البكتيريا السلبية غرام وهي منبه قوي للجهاز المناعي الفطري من الأنواع eukaryotic متعددة، بما في ذلك البشر33. الأم LPS حقن النتائج في سلسلة التهابات معقمة دون آثار محيرة من البكتيريا الحية, وهو نموذج راسخ لتحريض الولادة المبتسرة34, فضلا عن نموذج لالتهاب المشيمية الحاد ومتلازمة الاستجابة الالتهابية الجنينية (FIRS), وهو الشكل الأكثر حدة من التهاب المشيمة24,35. كما ثبت للحث على حد سواء إصابة المادة البيضاء والرمادية الدماغية في نموذج الأغنام36 ونموذج مورين37,38,39,40. ومع ذلك، على حد علمنا، ونحن أول من استخدم هذا النموذج من التهاب المشيمة وFEMI للتحقيق في آثاره على تطوير الجهاز الهضمي الولادة الماضية، وكذلك للتحقيق في وجود صلة ميكانيكية محتملة بين التهاب المشيمة والتنمية في وقت لاحق من NEC41،42.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian blue stain</td>
			<td>Newcomer supply</td>
			<td>1003A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl6/J mice</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td>664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon labs</td>
			<td>2701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H1758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin stain</td>
			<td>Leica</td>
			<td>381562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LPS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse Ni-U Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>2CE-MQVJ-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Periodic Acid</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>H5106</td>
			<td>CAS# 10450-59-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>Am7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schiff&#39;s reagent</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secor Imager 2400</td>
			<td>Meso Scale Discovery (MSD)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V-Plex Assay</td>
			<td>Meso Scale Discovery (MSD)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>534056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of fetal exposure to maternal inflammation to study the effects of acute chorioamnionitis on newborn intestinal development

التهاب المشيمة هو أحد الأمراض الشائعة المبكرة للولادة المبتسرة ويرتبط بالعديد من أمراض الخداج ، بما في ذلك التهاب الأمعاء المعوي النخري (NEC). ومع ذلك، لا يزال يتعين اكتشاف صلة ميكانيكية بين هذين الشرطين. لقد اعتمدنا نموذج مورين لالتهاب المشيمة الذي ينطوي على التعرض للدهون (LPS) الناجم عن تعرض الجنين لالتهاب الأم (FEMI). هذا النموذج من FEMI يحفز الأم العقيمة، المشيمة، وتتالي التهاب الجنين، والذي هو أيضا موجود في كثير من الحالات من التهاب المشيمة السريرية. على الرغم من وجود نماذج تستخدم البكتيريا الحية وتقليد أكثر دقة الفيزيولوجيا المرضية للعدوى الصاعدة مما يؤدي إلى التهاب المشيمة ، قد تسبب هذه الطرق آثارا غير مباشرة على تطور الجهاز المعوي غير الناضج والميكروبيوم النامي المرتبط به. باستخدام هذا البروتوكول، أثبتنا أن FEMI الناجم عن LPS يؤدي إلى زيادة تعتمد على الجرعة في فقدان الحمل والولادة المبتسرة، فضلا عن اضطراب النمو المعوي الطبيعي في النسل. علاوة على ذلك ، أثبتنا أن FEMI يزيد بشكل كبير من الإصابة المعوية والسيتوكينات المصلية في النسل ، مع تقليل الكؤوس وخلايا Paneth في وقت واحد ، وكلاهما يوفر الخط الأول من المناعة الفطرية ضد التهاب الأمعاء. على الرغم من أن نموذجا مماثلا من FEMI الناجم عن LPS قد استخدمت لنموذج الارتباط بين التهاب المشيمة والتشوهات اللاحقة للجهاز العصبي المركزي، على حد علمنا، وهذا البروتوكول هو الأول في محاولة لتوضيح وجود صلة ميكانيكية بين التهاب المشيمة والاضطرابات في وقت لاحق في التنمية المعوية كحلقة وصل محتملة بين التهاب المشيمة والأمعاء.

التعرض لFEMI في اليوم الجنيني 15 يؤدي إلى فقدان الجرعة تعتمد على الحمل ومعدل الجرعة تعتمد على المخاض قبل الأوان (الشكل 1)42. بالنسبة للتجارب ، اخترنا استخدام جرعة LPS من 100 ميكروغرام / كجم لتقليل فقدان الحمل والخداج (50٪ فقدان بين كل من الخداج وزوال الجنين داخل الرحم) م?...

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development at JoVE.com

A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

طورنا نموذجا لالتهاب المشيمة لمحاكاة تعرض الجنين لالتهاب الأم (FEMI) دون مضاعفات الكائنات الحية لدراسة آثار FEMI على تطور القناة المعوية للذرية. وهذا يسمح لدراسة الأسباب الميكانيكية لتطوير الإصابة المعوية بعد التهاب المشيمة.

نموذج مورين للتعرض الجنين لالتهاب الأم لدراسة آثار التهاب المشيمة الحاد على نمو الأمعاء حديثي الولادة

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

زرع مثلي الأورطي : نموذج الفأر لدراسة تطوير المزمنة اعتلال وعائي

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

تقييم التغييرات المشوهة في نموذج الزرد من التعرض الكحول الجنينية

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Fetal Echocardiography and Pulsed-wave Doppler Ultrasound in a Rabbit Model of Intrauterine Growth Restriction

ضربات القلب الجنين ودوبلر نابض موجة الموجات فوق الصوتية في نموذج الأرنب من تقييد النمو داخل الرحم

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ...

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

الفئران زرع القرنية: نموذج لدراسة الشكل الأكثر شيوعا من الصلبة زراعة الأعضاء

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

A Murine Model of Irreversible and Reversible Unilateral Ureteric Obstruction

وهناك نموذج من الفئران لا رجعة فيه وعكسها من جانب واحد الحالبي إعاقة

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

مسحوق جاف ومرذذ الهباء استنشاق الصيدلة تسليمها الى الفئران باستخدام فقط الأنف نظام التعرض

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

A Primary Human Trophoblast Model to Study the Effect of Inflammation Associated with Maternal Obesity on Regulation of Autophagy in the Placenta

نموذج تروفوبلست بشرية الأولية لدراسة تأثير التهاب المرتبطة بالسمنة الأمهات على تنظيم أوتوفاجي في المشيمة

Maternal obesity is associated with an increased risk of adverse perinatal outcomes that are likely mediated by compromised placental function that can be ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

متساوي القياس كونتراكتيليتي القياس الشريان المساريقي العلوي الماوس باستخدام أسلاك ميوجرافي

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Design and Development of a Model to Study the Effect of Supplemental Oxygen on the Cystic Fibrosis Airway Microbiome

تصميم وتطوير نموذج لدراسة تأثير الأكسجين التكميلي على ميكروبيوم مجرى الهواء التليف الكيسي

Airway microbial communities are thought to play an important role in the progression of cystic fibrosis (CF) and other chronic pulmonary diseases. ...

Standardized Tuina Manipulation for Knee Osteoarthritis in Rats

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Understanding the Mechanism of Tuina Manipulation in Rats (Video) | JoVE

التلاعب Tuina للحد من الالتهاب وفقدان الغضروف في الفئران هشاشة العظام في الركبة

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...