Name: a murine model of fetal exposure to maternal inflammation to study the effects of acute chorioamnionitis on newborn intestinal development
Uploaded: 2020-06-24T13:30:00
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이 작품은 건강의 국립 연구소 (DK097335 및 T32AI007260)와 아이오와 스테드 소아과의 대학을 통해 부분적으로 지원되었다.

모든 동물 절차는 아이오와 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (프로토콜 #8041401)에 의해 승인되었다. 모든 동물은 아이오와 대학에서 승인 된 실험실 동물 관리 (AALAC)의 평가 및 인증 협회에 보관되었습니다. 모든 마우스는 야생 형 균주 C57Bl/6J였다.
1. 임신 한 쥐에 FEMI의 설립
<ol><li>LPS 준비<ol>
<li>에샤리치아 대장균 O55:B5(재고 농도 2 mg/mL)에서 파생된 LPS를 사용하십시...

Chorioamnionitis 영향 2\u20124% 기간의 및 25\u201230% preterm 납품의8,9. 그러나, 초리오암니온염의 영향은 태아와신생아10,11,12,13,14,15,16에중요한 영향을 미치는 것으로 나타났기 때문에 ?...

융경막은 포유류 임신에 필수적인 역할을 합니다. 그들은 여러 기능을 제공하는 초리온과 양상을 포함한다. 그들은 태아를 둘러싸고 보호하고, 모계와 태아 구획1사이의 파라크리니 신호를 용이하게하고, 파리오닉 멤브레인 내에서 로컬 피드백 루프를 생성하여 parturition1을시동하는 데 관여할 수 있다. 멤브레인의 현재 이해는 양막이 구조적 장벽 기능을 제공한다는 것을 나타내며, 초리온은 주로 모계 면역 계통2로부터발전하는 태아를 보호하기 위해 면역학적 완충제를 제공한다. 이 막의 염증은 chorioamnionitis로 알려져 있습니다. 역사적으로, 임상 초리오암니온염의 진단은 모계 열플러스 하나 이상의 태아 또는 모계 임상발견의존재에 따라 만들어졌으며3,4. 그러나, 이 정의는 임상적으로 유용하지만, 정밀도의 부족은 chorioamnionitis 연구를 도전하게 했습니다. 2015년, 진단을 명확히 하기 위해 유니스 케네디 슈리버 국립아동보건연구원의 전문가 패널 워크숍은 충야염염을 자궁내 염증 또는 감염 또는 둘 다(트리플 I)3로정의했다. 이러한 설명은 미생물 유도 감염이 자궁/양수 염증의 중요한 원인이지만 멸균 자궁/양수 염증5,6,7보다덜 일반적으로 발생하기 때문에 중요하다. 전반적으로, chorioamnionitis는 기간 납품의 2\u20124%와 조산 납품의 25\u201230%에서 볼 수 있듯이 중요한 공중 위생 문제점 남아 있습니다8,9.
Chorioamnionitis 태아와 신천에 중요 한 영향을 미칠 수 있습니다. 그것은 잘 충진성 측량 이형성증을 포함하여 미숙아의 많은 이환의 증가 리스크와 연관된다는 것을 문헌에서 잘 문서화되었습니다10,뇌백색 물질 상해11,정맥 내 출혈12,미숙아 출혈13의망막 출혈, 및 모두 의외및 신생아14, 14의초기확인. 미숙한 장내 부상 및 수리 메커니즘에 관심이 있기 때문에, 초리오암니온염은 또한 괴사장염(NEC)15,16의나중에 개발과 연관된다는 점에 유의하는 것이 중요하다. NEC는 염증 및 후속 장 괴사(17)에대한 난독증 숙주 반응을 초래하는 조산 유아의 치명적인 위장 질환이다. NEC는 매년 미국에서 4,000명 이상의 유아에게 영향을 미치고 있으며, 이들 유아의 3분의 1은18세질병으로 사망합니다. NEC의 발병기는 아마도 장 미성숙의 조합을 포함, 미성숙 면역 체계의 dysregulation, 장 염증, 세균성 전좌19,장 괴사의 최종 일반적인 경로에 절정. 중요한 것은, NEC의 개시는 수시로 출생 후에 주 및 chorioamnionitis에 잠재적인 노출을, chorioamnionitis와 NEC의 후속 발달 사이 기계론링크를 불분명하게만듭니다. chorioamnionitis가 NEC의 병리 생리학에 기여할 수 있는 1개의 잠재적인 기계장치는 모계 면역 계통의 강화 조절을 통해서, 그 후에 정상 태아 발달 패턴을 방해할 수 있는 강한 태아 선동반응을생성합니다(21,22,23).
초리오암니온염의 다중 포유류 모델은 설치류 및 양24,25,26,27,28,29,30,31,32에존재한다. 그러나, 모성 염증에 대한 초암니염 유도 태아 노출(FEMI)에 이어 초기 신생아 기간을 넘어 장내 발병에 관한 몇 가지 데이터가 존재한다. FEMI와 미숙한 장의 부상의 후속 개발 사이의 관계를 탐구하기 위해, 우리는 리포 폴리사카라이드 (LPS)유도 FEMI 모델을 적응했다. 리포폴리사카라이드는 그람 음성 박테리아에 세포 외 표면의 주요 구성 요소이며 인간을 포함한 다중 진핵종의 타고난 면역 계통의 강력한자극제(33)이다. 모계 LPS 주사는 살아있는 박테리아의 혼동 효과 없이 멸균 염증 폭포를 초래하고, 조산34의유도를 위한 잘 확립된 모델일 뿐만 아니라 급성 초리암니온염 및 태아 염증 반응 증후군(FIRS)의 모델, 이는 가장 심한 형태의 초리오암니온염(24,35)이다. 또한 양모델(36)과 뮤린모델(37, 38,39,40)에서대뇌 백색 및 회색 물질 상해를 유도하는 것으로 나타났다. 그러나, 우리의 지식에, 우리는 chorioamnionitis와 FEMI의이 모델을 사용하여 출생 과거 위장의 발달에 미치는 영향을 조사하고, chorioamnionitis및 NEC41의나중에 개발 사이의 가능한 기계론적 링크를 조사하기위해.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian blue stain</td>
			<td>Newcomer supply</td>
			<td>1003A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl6/J mice</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td>664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon labs</td>
			<td>2701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H1758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin stain</td>
			<td>Leica</td>
			<td>381562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LPS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse Ni-U Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>2CE-MQVJ-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Periodic Acid</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>H5106</td>
			<td>CAS# 10450-59-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>Am7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schiff&#39;s reagent</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secor Imager 2400</td>
			<td>Meso Scale Discovery (MSD)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V-Plex Assay</td>
			<td>Meso Scale Discovery (MSD)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>534056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of fetal exposure to maternal inflammation to study the effects of acute chorioamnionitis on newborn intestinal development

Chorioamnionitis는 조산의 일반적인 침전물이고 괴사 장염 (NEC)을 포함하여 미숙아의 이환의 많은 것과 연관됩니다. 그러나, 이 두 조건 사이 기계적인 링크는 아직 발견되지 않았습니다. 우리는 모성 염증 (FEMI)에 리포 폴리삭차라이드 (LPS)유도 태아 노출을 포함하는 chorioamnionitis의 뮤린 모델을 채택했습니다. FEMI의 이 모형은 또한 임상 chorioamnionitis의 많은 경우에 존재하는 멸균 모계, 태반 및 태아 선동적인 폭포를 유도합니다. 살아있는 박테리아를 이용하고 더 정확하게 chorioamnionitis의 결과로 상승 감염의 병리 생리학을 모방하는 모형이 존재하더라도, 이 방법은 미숙한 창자 및 관련 개발 microbiome의 발달에 간접적인 효력을 일으키는 원인이 될 수 있습니다. 이 프로토콜을 사용하여, 우리는 LPS 유도 FEMI가 임신 손실및 조산에 있는 복용량 의존적인 증가, 뿐만 아니라 자손에 있는 일반적인 장 발달의 중단에 초래한다는 것을 보여주었습니다. 또한, 우리는 FEMI가 자손에 있는 장 상해 및 혈청 사이토카인을 현저하게 증가시키는 것을 보여주었습니다, 동시에 진보와 Paneth 세포를 감소시키면서, 둘 다 장 염증에 대하여 선천적인 면역의 첫번째 줄을 제공하는. LPS 유도 FEMI의 유사한 모형은 chorioamnionitis와 중추 신경계의 후속 이상 사이 협회를 모델링하기 위하여 이용되었지만, 우리의 지식에, 이 프로토콜은 chorioamnionitis와 NEC 사이 잠재적인 링크로 chorioamnionitis 및 NEC 사이 기계적인 링크를 해명하기 위하여 시도하는 첫번째입니다.

배아 일째에 FEMI에 노출15 임신의 용량 의존손실과 조산 노동의 투여 의존율로 이어집니다(그림 1)42. 실험을 위해, 우리는 중요한 선동적인 모욕에 태아를 드러내면서 임신 손실 및 미숙아 (미숙아와 자궁 내 태아 죽음 둘 다 사이 50% 손실)를 극소화하기 위하여 100 μg/kg의 LPS 복용량을 사용하기로 결정했습니다.
이 방법을 사용하여, 우리...

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A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

우리는 살아있는 유기체의 합병증 없이 모계 염증에 태아 노출을 시뮬레이션하기 위하여 chorioamnionitis의 모형을 개발했습니다 자손의 창자 발달에 FEMI의 효력을 검토합니다. 이것은 chorioamnionitis 다음 장 상해의 발달을 위한 기계론적인 원인의 연구를 허용합니다.

신생아 장 발달에 급성 chorioamnionitis의 효력을 연구하기 위하여 모성 염증에 태아 노출의 Murine 모형

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing ...

Research

JoVE Journal

Medicine

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연구

의학

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