DC-ERG-teknikken kan brukes til ikke-unnvikende evaluering av retinal pigmentepitetelfunksjon for å overvåke aldersrelaterte endringer eller sykdomsprogresjon og for å vurdere farmakologiske intervensjonseffekter. Denne teknikken forbedrer dc-ERG reprodusere evne og enkel bruk ved å forenkle kapillær elektrode forberedelse. Det kan også suppleres med en standard ohm program for å lette analysen.
Begynn med å forsiktig skyve en 25-gauge sprøytenål gjennom silikongummipakningen til bakveggen på elektrodeholderen. Fyll bunnen av elektrodeholderen med avgassede HBSS mens du sakte trekker nålen, pass på at du ikke introduserer bobler, og skift ut gjengehetten uten å stramme. Sett sprøytenålen tilbake for å fylle det tomme rommet innenfor gapet med HBSS og hold kapillæren horisontalt mens du fyller for å hindre at oppløsningen rømmer fra den andre enden.
Ta tak i det fylte kapillæret i den bøyde enden, sett den andre enden langsomt inn gjennom den løsnede hetten og trekk skrukorken på plass. Vipp elektrodeholderne med kapillære elektrodene vendt opp slik at eventuelle bobler kan strømme ut og degas kapillærene i et vakuumkammer i fem til 10 minutter. Deretter slipper du langsomt vakuumet og fyller elektrodeholderne og glasskapillærer, som vist.
For å lage et tilpasset stativ for mikroelektrodholderen, fjern de svarte polyacetalklemmene fra den ene siden av en nummer åtte T-klips og bruk en sylinderbase med magnetiske kuleledd maskinert i to for å justere høyden. Fest de modifiserte T-klipsene til de magnetiske kulemonteringsskruene med M3-størrelsesmuttere og et lysbilde i ca. en-tommers konisk trehåndtak, modifisert fra en bomullsspiss rengjøringspinne, inn i stativet i en vinkel for å feste mikroelektrorodholderen inn i det skreddersydde T-klips magnetiske kuleleddstativet. Deretter bruker du den sjeldne jordmagneter sylinder base for å sikkert plassere den tilpassede elektrodeholderen stå på metallplaten på scenen, slik at en 360-graders rotasjon på en 180-graders akse.
For å utføre en elektrodetest må du først senke de ferdigmonterte HBSS-fylte kapillære mikroelektrodene i en liten beholder med HBSS. Plasser nålebakken elektroden og sølv, sølvklorid sentrert pellet referanse elektrode i samme HBSS for å fullføre kretsen og velge eller lage en passende identifikator for å beskrive musen som skal testes. Hvis du vil velge den direkte sammenknede elektroretinogramprotokollen som skal utføres, klikker du protokoller og velger DC-ERG.
Klikk kjør. En dialogboks vil dukke opp med pasientinformasjonen. Hvis informasjonen er riktig, klikker du ja og går videre til trinn én av seks.
Lukk dørene til Faraday-buret og klikk impedans for å vise impedansmodusen. Kontroller at verdiene for munnreferansen, halebakken og opptakselektrodene er akseptable, og klikk trinn for å gå videre til trinn fire av seks for å teste grunnlinjestabiliteten. Klikk forhåndsvisning for å begynne å vise sporene.
Sporene skal være lav støy med en topp-til-topp amplitude på mindre enn 200 mikrovolt. For å plassere musen og elektrodene for et eksperiment, bedøve hornhinnen til en bedøvet mus med en dråpe 5% proparacaine saltsyre før du utvider hornhinnen med en dråpe på 2,5% fenylefrin HCL og 5% tropicamid. Kontroller at riktig pasient er valgt i ERG-systemprogramvaren.
Klikk på protokoller. Velg DC-ERG under protokollbeskrivelse, og klikk kjør. Klikk ja for å kontrollere at den riktige testen utføres.
Bruk trinn én av seks til å slå på et svakt rødt lys inne i kuppelen og plasser musen på et oppvarmet opptaksbord. Bruk tang til å nøye telt huden på bakbenet. Og bruk den ene hånden til å holde nåleelektroden fast, bruk den andre hånden til å sette elektroden subkutant inn i bakbenet for å feste elektroden på plass.
Plasser referansesølv, sølvkloridelektrode i dyrets munn slik at den sentrerte pellet hviler langs bakkinnet og holdes på plass bak tennene. Før kapillærelektrodene plasseres på øyet, plasserer du elektrodeholderen med glasskapillene orientert vertikalt og knips elektrodeholderen med en pekefinger for å fjerne eventuelle bobler som kan ha blitt introdusert. Bruk en 25-gauge nål til å fylle kapillærspissene med HBSS og inspiser kapillærene for å sikre at det ikke er noen luftbobler fanget i tuppene.
Plasser elektrodeholderstativet slik at de åpne tuppene på de HBSS-fylte kapillærene er i skånsom kontakt med hornhinnen. Og ta vare på å unngå å introdusere bobler, inverter smøremiddel øye gel dispenser for å kaste de første dråpene. Deretter plasserer du en dråpe smøremiddel øyegel på hvert øye for å opprettholde konduktiviteten og for å forhindre utskalking under opptaket.
Hvis du vil registrere DC-ERGs, klikker du trinn for å velge trinn fem av seks og klikker impedans for å bruke impedanskontrollskjermen til å undersøke motstandene til venstre og høyre øyne. Impedansverdiene for opptakselektrodene ved hvert øye bør være like. Og impedansverdiene for både bakken og referanseelektrodene bør være mindre enn 10 kilohms.
Klikk forhåndsvisning for å vise sporene for venstre og høyre øyne, og vent opptil 10 minutter på at en stabil grunnlinje skal oppnås. Klikk deretter stopp for å avslutte sporingsforhåndsvisningen og klikke Kjør for å starte opptaket. Her vises et eksempeldatasett fra betinget knockout og villtypemus.
I denne analysen led sporet av små bobler i elektroden. Det økte topp-til-topp støy i sporet. I en egen analyse ble boblene eliminert ved hjelp av vakuumkammeret før de monterte mikroelektrodene i elektrodeholderstativene.
De beste tilpasningslinjene til de første 25 sekundene kan beregnes, slik at de drift-korrigerte svarene kan replottes og amplitudene til DC-ERG-komponentene som skal identifiseres. Som forventet demper redusert uttrykk for kur 7,1 kaliumkanaler i RPE sterkt c-bølgen og rask oscillasjon, noe som indikerer en betydelig svekkelse av retinal pigment epitel elektriske egenskaper. Her vises de relative amplitudene til DC-ERG-komponentene, normalisert til villtype og plottet mot de relativt to største lysfremkallede abølgea amplitudene.
Denne form for analyse kan avgjøre om de reduserte elektriske svarene til RPE kan redegjøres for ved reduksjon av fotoreseptoraktivitet alene. Eller hvis det er en underliggende feil som kommer fra RPE. Husk å oppnå en stabil grunnlinje før du går videre til museopptaket og for å sette elektrodene regelmessig tilbake for bobler som kan ha blitt introdusert.
Mørktilpassede ERGs kan registreres før DC-ERG for å måle den kjegledrevne retinale funksjonen. Lystilpassede ERG-er kan også utføres etter DC-ERG for å evaluere de kjegledrevne retinale responsene.