Name: sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice
Uploaded: 2021-06-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

الكتاب بفضل برنامج ما بعد التخرج في العيادة الطبية في جامعة ساو باولو; كلية الطب بجامعة ساو باولو

تمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل لجنة الأخلاقيات لاستخدام الحيوانات من كلية الطب USP، Num. المشروع: 1343/2019-CEUA: FMUSP. لهذا البروتوكول، استخدمت الفئران C57BL/6، الذين تتراوح أعمارهم بين 6 أسابيع، وزنها 20 ± 2 غرام (ن = 9/group).
1. استئصال البطن
<ol><li>تخدير الحيوانات مع xylazine (10 ملغ / كغ) وال?...

<ol>
	<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significantly+different+clinical+features+between+hypertriglyceridemia+and+biliary+acute+pancreatitis:+A+retrospective+study+of+730+patients+from+a+tertiary+center.">Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center.</a> BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).</li><li>Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+antioxidant+mechanisms+in+lung+during+experimental+pancreatitis+in+rats.">Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).</li><li>T, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraductal+infusion+of+taurocholate+followed+by+distal+common+bile+duct+ligation+leads+to+a+severe+necrotic+model+of+pancreatitis+in+mice.">Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 44 (3), (2015).</li><li>Botoi, G., Andercou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+17-prognostic+marker+of+severe+acute+pancreatitis.">Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis.</a> Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).</li><li>Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+IL-1beta,+IL-8,+and+IL-10+polymorphisms+and+risk+of+acute+pancreatitis.">Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis.</a> Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).</li><li>Feng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+peritoneal+lavage+with+ulinastatin+on+the+expression+of+NF-kappaB+and+TNF-alpha+in+multiple+organs+of+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).</li><li>Fang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sildenafil+on+inflammatory+injury+of+the+lung+in+sodium+taurocholate-induced+severe+acute+pancreatitis+rats.">Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats.</a> International Immunopharmacology. 80, (2020).</li><li>Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+acute+pancreatitis.">Experimental models of acute pancreatitis.</a> Post&#281;py Higieny i Medycyny Do&#347;wiadczalnej(Online). 69, 264-269 (2015).</li><li>Wan, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+experimental+animal+models+of+biliary+acute+pancreatitis+and+recent+advances+in+basic+research.">Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research.</a> HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).</li><li>Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretagogue+(Caerulein)+induced+pancreatitis+in+rodents.">Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).</li><li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+protects+against+L-arginine-induced+acute+necrotizing+pancreatitis+in+mice+by+enhancing+SIRT1-mediated+deacetylation+of+p53+and+heat+shock+factor+1.">Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1.</a> International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).</li><li>Ma, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+resveratrol+on+peritoneal+macrophages+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis.</a> Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).</li><li>Souza, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+effects+of+peritoneal+lavage+in+acute+pancreatitis.">Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis.</a> Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).</li><li>Perides, G., Acker, G. J. v., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct.">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).</li><li>Wittel, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taurocholate-induced+pancreatitis:+a+model+of+severe+necrotizing+pancreatitis+in+mice.">Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).</li><li>Tao, L., Reese, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+mouse+models+that+reflect+human+immune+responses.">Making mouse models that reflect human immune responses.</a> Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).</li><li>Vandamme, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+rodents+as+models+of+human+diseases.">Use of rodents as models of human diseases.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).</li><li>Song, H. K., Hwang, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+C57BL/6N+mice+on+the+variety+of+immunological+researches.">Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches.</a> Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).</li><li>Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -. V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition. (1), (2010).</li><li>Ray, A., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mouse+peritoneal+cavity+cells.">Isolation of mouse peritoneal cavity cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (35), e1488 (2010).</li><li>Schmidt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+better+model+of+acute+pancreatitis+for+evaluating+therapy.">A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.</a> Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).</li><li>Liu, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+improves+the+therapeutic+efficacy+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis.</a> International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).</li><li>Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+bile+acids+on+pancreatic+ductal+cells.">The effects of bile acids on pancreatic ductal cells.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).</li><li>Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+acute+pancreatitis:+impact+of+social+deprivation,+alcohol+consumption,+seasonal+and+demographic+factors.">The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors.</a> Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).</li><li>Lerch, M. M., Gorelick, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+acute+and+chronic+pancreatitis.">Models of acute and chronic pancreatitis.</a> Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).</li><li>Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immune-modulating+formula+comprising+whey+peptides+and+fermented+milk+improves+inflammation-related+remote+organ+injuries+in+diet-induced+acute+pancreatitis+in+mice.">An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice.</a> Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).</li><li>Kui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+methodolgy+of+L-Arginine-induced+acute+pancreatitis.">New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis.</a> PLoS One. 10 (2), 011758 (2015).</li><li>Xue, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternatively+activated+macrophages+promote+pancreatic+fibrosis+in+chronic+pancreatitis.">Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis.</a> Nature Communication. 6, 7158 (2015).</li><li>Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+in+inflammatory+and+malignant+diseases+of+the+pancreas.">Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas.</a> Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).</li><li>Rao, S. A., Kunte, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6:+An+early+predictive+marker+for+severity+of+acute+pancreatitis.">Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis.</a> Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).</li></ol>

وقد ثبت بالفعل طريقة الحث على التهاب البنكرياس الحاد عن طريق ضخ توروتشولات الصوديوم إلى الوراء في rats22,23,24. وكانت ثلاثة أعمال مماثلة، نشرت في ال أعوام 2008 و2010 و2015، بمثابة مرجع للبروتوكول 3,14,15</...

في البشر ، وجود حصى في المرارة هو السبب الأكثر شيوعا لالتهاب البنكرياس بسبب انسداد الجزء النهائي من choledochal ، مما يقطع تدفق إفرازات البنكرياس ويسبب عملية التهابية مكثفة في البنكرياس ، مع زيادة في تركيز الإنزيمات الهضمية في المصل والوسطاء الالتهابيين1،2.
وقد اقترحت نظريتين مختلفتين لشرح تطور التهاب البنكرياس الحاد (ا ف ب). تشير نظرية "القناة الشائعة" إلى أن الأحجار الموجودة في المرارة تعوق نظام القناة الصفراوية المشتركة البعيدة ، مما يسمح للإفراز الصفراوي بالتدفق إلى الوراء في قناة البنكرياس. النظرية الثانية (نظرية "انسداد القناة") تشير إلى أن انسداد القناة البنكرياسية عن طريق حصى في المرارة الزائدة يسبب انسدادا في تدفق إفراز البنكرياس إلى الاثني عشر ، مما يسبب ارتفاع ضغط الدم القناة3. على الرغم من أن الآليات التي تؤدي إلى التهاب البنكرياس الصفراوي الحاد غير مفهومة تماما ، إلا أن النتيجة هي عملية التهابية مكثفة. يؤدي ثوران إنزيم الجهاز الهضمي والهضم الذاتي للبنكرياس إلى تغيرات في الهسطولوجيا ، وزيادة في السيتوكينات الالتهابية (IL-1β ، IL-6 ، TNF-α) في السائل المؤانس والمصل ، وزيادة في بروتينات المرحلة الحادة4،5،6.
التهاب البنكرياس الحاد الحاد هو حالة تستحق الاهتمام السريري بسبب مشاركة أعضاء متعددة وارتفاع خطر الوفيات. النماذج الحيوانية لتكاثر التهاب البنكرياس الحاد (AP) مهمة لأن هذه تشرح الآليات المرضية المرضية للمرض وتساعد في رصد تطور الأحداث الالتهابية ، بدءا من المراحل الأولية للمرض. هذا عادة غير ممكن في العيادات2,7. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الوصول إلى أنسجة البنكرياس أمر سهل في الدراسات قبل السريرية ، ويفضل توضيح التغيرات المرتبطة بالظروف السريرية8 إلى جانب إمكانية العمل مع الأنواع متساوية المنشأ ، والقضاء على المتغيرات غير المرغوب فيها ، وعكس التشابه السريري مع النتائج الملاحظة في الحالة البشرية9.
وقد درست نماذج الصفراوية وغير الصفراوية لتحريض التهاب البنكرياس الحاد في الفئران والجرذان الأنواع في كثير من الأحيان في الأدبيات العلمية. وتشمل الأساليب غير الصفراوية للتحريض إعطاء جرعات تحفيز فوق ماكسيمال من المرارة سيكريتاغوجي أو cerulein10 التناظرية; إعطاء جرعات قاتلة تقريبا من ارجينين; أو إدارة نظام غذائي نقص الكولين تكملها ethionine11. على الرغم من أن هذه الأساليب سهلة التكاثر وتؤدي إلى التهاب البنكرياس ، إلا أنها لا تكرر الآليات التي تؤدي نظريا إلى AP (أي ارتجاع إفراز الصفراء في قناة البنكرياس). تعتمد التقنية التي تعالج النموذج الصفراوي على التسريب الرجعي للأحماض الصفراوية في قناة البنكرياس وتتطلب باحثين مدربين تدريبا جيدا لتنفيذ هذا البروتوكول. وقد نشرت عدة دراسات باستخدام هذه الطريقة في الفئران (لأسباب تقنية على ما يبدو لأن هذه التجارب تنطوي على العمليات الجراحية)12,13. ومع ذلك ، فإن النهج في الفئران قد يقدم نتائج أكثر إثارة للاهتمام في دراسة الالتهاب3،14،15. في هذه الدراسة، سوف نعرض قائمة مرجعية من الخطوات التي يتعين اتباعها لتكاثر التهاب البنكرياس الحاد الشديد عن طريق ضخ توروتشولات الصوديوم في الفئران المخدرة C57BL/6.
بالنسبة للأعمال التي تنطوي على الحاجة إلى تجارب مع الأجسام المضادة وتحليل التعبير الجيني والبروتيني ، فإن استخدام الفئران هو الأفضل بسبب الترسانة الأكبر من المواد لهذه الحيوانات وإمكانية العمل مع الأنواع المتساوية وال بالضربة القاضية ، من بين أمور أخرى يمكن استخدامها ذات الصلة بالدراسات16. الفئران C57BL/6 هو سلالة أصيلة من الفئران وضعت أصلا لدراسة نشاط مضاد للورم وعلم المناعة. ويفضل الباحثون هذه السلالة بشكل متزايد لكونها متساوية المنشأ، مما يسمح بإعادة إنتاج أكبر للنتائج، مما قد يعني استخدام عدد أقل من الحيوانات في تجربة وأقل تقلبا في النتائج بين نفس المجموعة 17,18.
بيريدس وآخرون (2010)14 نشر بروتوكولا للتحريض AP في الفئران عن طريق ضخ تاوروشولات الصوديوم. هنا نقوم بتحديث هذا النموذج باستخدام تركيز taurocholate الصوديوم أعلى (2.5٪) في الفئران C57BL/6، مع حجم محدد وسرعة التسريب (الشكل 1). يتم الوصول إلى المستوى الأقصى من الشدة في غضون 12 ساعة من التعريفي في الفئران. يرتبط ارتفاع تركيز IL-6 في كل من المصل وفي التجويف البريتوني مع تطور AP. مع الممارسة ، فإن إجمالي الوقت المقدر من تحريض التخدير إلى الانتهاء من التسريب ، هو 25 دقيقة لكل. من الضروري أن يقوم باحث مدرب بإجراء هذه التجربة. لضمان حقن المحلول بشكل صحيح في القناة الصفراوية الشائعة ، قم بإجراء العديد من الدورات التدريبية التجريبية باستخدام الميثيلين الأزرق بدلا من تاوروشولات الصوديوم.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.4 mm needle</td>
			<td>INTRAG MEDICAL TECH</td>
			<td>90183210</td>
			<td>30G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;0.54 mm polyethylene tube</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>730010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam block</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>masking tape for mounting the mouse</td>
			<td>Missner</td>
			<td>1236</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion pump scheduled to 10&#181;L / min.</td>
			<td>Havard aparatus-Peristaltic Pump Series</td>
			<td>MA1 55-7766</td>
			<td>&#160;Model 66 Small Peristaltic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors and forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antiseptic providine iodine</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>12086OR</td>
			<td>antisepsis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>459836</td>
			<td>Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Lord</td>
			<td>bdk9a1ghk6</td>
			<td>For trichotomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium taurocholate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>86339- 1G</td>
			<td>CAS NUMBER- 345909-26-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microvessel clip</td>
			<td>Medicon Surgical</td>
			<td>56.87.35</td>
			<td>Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 -&#160;40 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 prolene</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>5162</td>
			<td>Suture line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL</td>
			<td>Crist&#225;lia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xilazine 2%</td>
			<td>Syntec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline)</td>
			<td>Farmace</td>
			<td>105851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemicals</td>
			<td>M5528</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MILLIPLEX&#160;MAP&#160;Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>MCYTOMAG-70K</td>
			<td>Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amylase Assay</td>
			<td>Labtest</td>
			<td>11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desmarres retractor 13-mm 
			width</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-6672</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice

وقد تم استخدام التهاب البنكرياس الحاد الصفراوي عن طريق ضخ تاوروشولات الصوديوم على نطاق واسع من قبل المجتمع العلمي بسبب تمثيل الحالة السريرية البشرية وتكاثر الأحداث الالتهابية المقابلة لبداية التهاب البنكرياس الصفراوي السريري. يمكن تقييم شدة تلف البنكرياس عن طريق قياس تركيز وسرعة وحجم حمض الصفراء المشبع. تقدم هذه الدراسة قائمة محدثة بالمواد والأساليب المستخدمة في تكاثر البروتوكول وتظهر النتائج الرئيسية لهذا النموذج الحاد لالتهاب البنكرياس (AP). وقد اقتصرت معظم المنشورات السابقة على استنساخ هذا النموذج في الفئران. وقد طبقنا هذه الطريقة على الفئران، التي توفر مزايا إضافية (أي توافر ترسانة من الكواشف والأجسام المضادة لهذه الحيوانات إلى جانب إمكانية العمل مع سلالات الفئران المعدلة وراثيا) التي قد تكون ذات صلة بالدراسة. بالنسبة لتحريض التهاب البنكرياس الحاد في الفئران ، نقدم بروتوكولا منهجيا ، بجرعة محددة من taurocholate الصوديوم بنسبة 2.5٪ بسرعة ضخ 10 ميكرولتر / دقيقة لمدة 3 دقائق في C57BL /6 الفئران التي تصل إلى مستواها الأقصى من الشدة في غضون 12 ساعة من الحث وتسليط الضوء على النتائج مع النتائج التي تثبت صحة الطريقة. مع الممارسة والتقنية ، فإن إجمالي الوقت المقدر ، من تحريض التخدير إلى الانتهاء من التسريب ، هو 25 دقيقة لكل.

تم تسجيل شدة التهاب البنكرياس بين 0-3 وفقا لمقياس شميدت21 حيث يتوافق الصفر مع الغياب ، و1 يتوافق مع وجود خفيف (<25٪) ، و2 يتوافق مع وجود معتدل (بين 25 و 50٪) و 3 يتوافق مع وجود مكثف (> 50٪) (الجدول 1). وكانت القياسات التي أجريت نشاط الأميليز البلازما, وذمة البنكريا?...

Watch this Scientific Journal Video about Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

نماذج حيوانية لالتهاب البنكرياس الحاد الشديد تمكن من دراسة التغيرات المرضية الفسيولوجية في المرحلة الأولية ، مما يسهل مراقبة تطور الأحداث الالتهابية. هنا نقدم بروتوكولا لتحريض التهاب البنكرياس الصفراوي الحاد الشديد عن طريق ضخ التوروتشولات الصوديوم إلى القناة البنكرياسية للفئران C57BL/6 المخدرة.

الصوديوم Taurocholate الناجم عن التهاب البنكرياس الحاد الحاد في C57BL/6 الفئران

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

يمكن استخدام هذه الطريقة لإعادة إنتاج الأحداث الالتهابية التي تحدث في التهاب البنكرياس الصفراوي الحاد. من الممكن دراسة التغيرات في أنسجة البنكرياس في مراحلها المبكرة ، وهو أمر غير ممكن بشكل عام في العيادة. المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي أنها سريعة وسهلة التكاثر للباحث المدرب ، وتقدم نتائج مماثلة لالتهاب البنكرياس الحاد في البشر.يمكن استخدام هذه الطريقة لدراسة الاستجابات المناعية الدوائية لجزيئات الدواء والتدخلات العلاجية الأخرى ، لأنها تسمح بدراسة الخلايا التوسطية الالتهابية في البنكرياس والأعضاء المجاورة. عند محاولة هذا البروتوكول، تحديد موقع الأعضاء وإنشاء منطقة العلبة أمر بالغ الأهمية. حفظ موقع الأعضاء وممارسة تطبيق الحقن أولا باستخدام محلول ملون مثل الميثيلين الأزرق.بعد التحقق من عمق التخدير مع قرصة إصبع القدم، وتنظيف منطقة البطن من الماوس تخدير مع محلول اليود 5٪povidone. باستخدام أداة تشذيب الشعر، قم بإزالة الشعر بين الصدر وأسفل البطن وانظف منطقة جراحية تبلغ مساحتها حوالي سنتيمترين مربعين مع الكحول بنسبة 70٪. شل حركة الحيوان على اللوحة الجراحية واستخدام مقص لقطع خمسة ملليمترات من الجلد أفقيا على الجزء العلوي من البطن وسنتيمتر واحد تحت عملية xiphoid.كرر قطع على الصفاق لإجراء استئصال البطن مع الحد الأدنى من التعرض لتجويف. باستخدام الراس، اسحب الكبد نحو الرأس على بعد سنتيمتر واحد تقريبا من الأمعاء وحدد موقع منطقة البنكرياس والاثني عشر. باستخدام ملقط، رفع الكبد نحو رأس الحيوان.عن طريق سحب بلطف جزء من الأمعاء الدقيقة، وإصلاح طرفي الجانبية مع خياطة البولي بروبلين 6-0 للحصول على رؤية أفضل للجزء البعيدة من القناة الصفراوية المشتركة أيضا. باستخدام مقطع وعاء صغير ، قم بعزل القناة الصفراوية الشائعة القريبة مؤقتا. كشف الجهاز من تجويف البطن.ثم جعل انسداد مؤقت من القناة الصفراوية المشتركة البعيدة مع 8-0 خياطه. للوصول إلى القناة الصفراوية الشائعة ، ثقب المنطقة periampullary ، والتي تظهر كجزء أبيض من جدار الأمعاء الدقيقة. مع إبرة 0.4 ملليمتر متصلة أنبوب البولي ايثيلين 0.54 ملليمتر، بدء ضخ مضخة ل2.5٪ حقن محلول توروتشولات الصوديوم بسرعة ثابتة من 10 ميكرولتر لكل 10 غراما من وزن الجسم لمدة ثلاث دقائق.بعد التسريب ، قم بإزالة مقطع السفينة الصغيرة ، المؤقت 8-0 خياطة، وإبرة الحقن من القناة الصفراوية البنكرياس. خياطة البطن مع 6-0 غير ماصة monofilament البولي بروبلين خياطة. يجب ألا يزيد الوقت بين استئصال البطن وخياطة النهاية عن 30 دقيقة.بعد الجراحة، إيواء الحيوانات في صناديق البولي ايثيلين اصطف مع حلق الخشب والماء والغذاء الإعلانية libitum. عقد بلطف الحيوان مع الجلد انسحبت، وتعزيز نتوء طفيف من مقلة العين، ووضع الحيوان مع العين التي تواجه صعودا. غرس قطرة من مرهم العين التي تحتوي على مخدر موضعي في عين الحيوان.ضع نهاية أنبوب شعري في الزاوية الوسيطة للعين وأدخله برفق تحت مقلة العين بزاوية تتراوح بين 30 و45 درجة تقريبا. تدوير أنبوب الشعرية حتى يبدأ تدفق الدم. بمجرد انتهاء المجموعة، تأكد من التوازن عن طريق الحفاظ على الجفون مغلقة مع ضغط الضوء.في وقت لاحق، وذلك باستخدام إبرة قياس 27، حقن أربعة ملليلتر من الجليد البارد PBS في تجويف الصفاق من الماوس. بعد الحقن، قم بتدليك الصفاق برفق لمدة 10 ثوان لإزالة الخلايا الملتزم بها. باستخدام مقص وملاقط، وجعل قطع صغيرة من 0.5 سم على الجلد الداخلي والعضلات لفضح تجويف البطن.إدراج ماصة لمبة في الصفاق وجمع أكبر قدر ممكن من السوائل، مع الحرص على عدم يستنشق الأنسجة الدهنية. جمع جزء من البنكرياس من منطقة الرأس لمزيد من المعالجة. إيداع السائل الذي تم جمعه في أنابيب أبقى على الجليد.ثم طرد السائل البريتوني في 250 مرة G لمدة خمس دقائق وتخزين supernatant للدوس interleukin-6. للحصول على المصل، والطرد المركزي عينات الدم التي تم جمعها في 700 مرة G لمدة 15 دقيقة وتخزين supernatant للأميلاز والدوس interleukin-6. أظهر تحليل أنسجة البنكرياس بعد 12 ساعة من تحريض التهاب البنكرياس الحاد التهابا شديدا في العضو المصاب بالمقارنة مع عينات الأنسجة من المجموعة الصورية.ومثلت نتائج مماثلة من خلال الفحص النسيجي بعد تلطيخ الهيماتوكسيلين إيوسين لعينات الأنسجة من صور وAPTA. وقدم تحليل مصل الدم زيادة كبيرة في تركيز الأميليز المصل وبينلوكين-6 السيتوكين في مجموعة AP مقارنة مع مجموعة صورية. وفي الوقت نفسه، كان تركيز إنترلوكين-6 أعلى بكثير في سائل التجويف الصفاقي في مجموعة AP.تعتمد شدة التهاب البنكرياس في هذا النموذج بشكل متناسب على التركيز وحجم وضغط التسريب ووقت تحريض التهاب البنكرياس الحاد. مع مساعدة من هذه التقنية, آثار اللافاج الصفاق المستمر على التهاب البنكرياس الحاد الشديد يمكن دراستها.

sodium-taurocholate-induced-severe-acute-pancreatitis-in-c57bl6-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

Carbon dioxide (CO2) along with oxygen (O2) share the role of being the most important gases in the human body. The measuring of expired CO2 at the mouth has solicited growing clinical interest among physicians in the emergency department for various indications: (1) surveillance et monitoring of the intubated patient; (2) verification of the correct positioning of an endotracheal tube; (3) monitoring of a patient in cardiac arrest; (4) achieving normocapnia in intubated head trauma patients; (5) monitoring ventilation during procedural sedation. The video allows physicians to familiarize themselves with the use of capnography and the text offers a review of the theory and principals involved. In particular, the importance of CO2 for the organism, the relevance of measuring expired CO2, the differences between arterial and expired CO2, the material used in capnography with their artifacts and traps, will be reviewed. Since the main reluctance in the use of expired CO2 measurement is due to lack of correct knowledge concerning the physiopathology of CO2 by the physician, we hope that this explanation and the video sequences accompanying will help resolve this limitation.

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

This video describes how to perform CO2 measurement in intubated as well as spontaneously breathing patients. The main clinical indications refer to emergency situations: (1) verifying adequate positioning of an endotracheal tube; (2) achieving normocapnia in trauma patients; (3) monitoring ventilation in the case of procedural sedation.

انتهت أول أكسيد الكربون 2 القياس في التنفس أو المرضى Intubated عفويا من قسم الطوارئ

Carbon dioxide (CO2) along with oxygen (O2) share the role of being the most important gases in the human body. The measuring of expired CO2 at the mouth ...

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged mechanical ventilation, contributes to morbidity and mortality of critical illness, and studies on novel genetic or pharmacological targets are areas of intense investigation (1-3, 5, 8, 26, 30, 33-36). ALI is defined by the acute onset of the disease, which leads to non-cardiac pulmonary edema and subsequent impairment of pulmonary gas exchange (36). We have developed a murine model of ALI by using a pressure-controlled ventilation to induce ventilator-induced lung injury (2). For this purpose, C57BL/6 mice are anesthetized and a tracheotomy is performed followed by induction of ALI via mechanical ventilation. Mice are ventilated in a pressure-controlled setting with an inspiratory peak pressure of 45 mbar over 1 - 3 hours. As outcome parameters, pulmonary edema (wet-to-dry ratio), bronchoalveolar fluid albumin content, bronchoalveolar fluid and pulmonary tissue myeloperoxidase content and pulmonary gas exchange are assessed (2). Using this technique we could show that it sufficiently induces acute lung inflammation and can distinguish between different treatment groups or genotypes (1-3, 5). Therefore this technique may be helpful for researchers who pursue molecular mechanisms involved in ALI using a genetic approach in mice with gene-targeted deletion.

A murine model for ventilator induced lung injury is an important tool to study an acute lung injury in vivo. Here, we report an easy applicable in situ model for acute lung injury using high-pressure mechanical ventilation to induce acute failure of the lung.

التهوية الضغط الشواهد للحث على إصابة الرئة الحادة في الفئران

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

نقص التروية-ضخه نموذج من إصابة الكلى الحاد والتليف آخر الاصابات في الفئران

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no effective treatment for it yet. Limitations of currently used animal models impede understanding of the pathology mechanism. Multiphoton microscopy allows studying cells and tissues within intact animal brains longitudinally under physiological and pathological conditions. Here, we describe two models of acute brain injury studied by means of two-photon imaging of brain cell behavior under posttraumatic conditions. A selected brain region is injured with a sharp needle to produce a trauma of a controlled width and depth in the brain parenchyma. Our method uses stereotaxic prick with a syringe needle, which can be combined with simultaneous drug application. We propose that this method can be used as an advanced tool to study cellular mechanisms of pathophysiological consequences of acute trauma in mammalian brain in vivo. In this video, we combine acute brain injury with two preparations: cranial window and skull thinning. We also discuss advantages and limitations of both preparations for multisession imaging of brain regeneration after trauma.

Acute brain trauma is a severe injury that has no adequate treatment to date. Multiphoton microscopy allows studying longitudinally the process of acute brain trauma development and probing therapeutical strategies in rodents. Two models of acute brain trauma studied with in vivo two-photon imaging of brain are demonstrated in this protocol.

الصدمة الحادة الدماغ في الفئران تليها الطولية التصوير ثنائي الفوتون

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible animal models mirror common components of human disease, including the bm12 transfer model. Upon transfer of bm12 splenocytes or purified CD4 T cells, C57BL/6 mice rapidly develop large frequencies of T follicular helper cells (Tfh), germinal center (GC) B cells, and plasma cells followed by high levels of circulating anti-nuclear antibodies. Since this model utilizes mice on a pure C57BL/6 background, researchers can quickly and easily study disease progression in transgenic or knockout mouse strains in a relatively short period of time. Here we describe protocols for the induction of the model and the quantitation Tfh, GC B cells, and plasma cells by multi-color flow cytometry. Importantly, these protocols can also be used to characterize disease in most mouse models of SLE and identify Tfh, GC B cells, and plasma cells in other disease models.

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

The transfer of bm12 lymphocytes into a C57BL/6 recipient is an established model of systemic lupus erythematosus. Here we describe how to initiate disease using this model and how to characterize T follicular helper cells, germinal center B cells and plasma cells by flow cytometry.

ومحرض نموذج bm12 من الذئبة الحمامية الجهازية (SLE) في C57BL / 6 الفئران

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

مورين كولوستومي القاصي، نموذجا جديداً من تسريب التهاب القولون في الفئران C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice

Acute myocardial infarction can lead to acute heart failure and cardiogenic shock. The evaluation of hemodynamics is critical for the evaluation of any potential therapeutic approach directed against acute left ventricular (LV) dysfunction. Current imaging modalities (e.g., echocardiography and magnetic resonance imaging) have several limitations since data on LV pressure cannot directly be measured. LV catheterization in mice undergoing coronary artery occlusion could serve as a novel method for a real-time evaluation of LV function.
At the beginning of the procedure, mice were anesthetized followed by endotracheal intubation. For LV catheterization, the right carotid artery was exposed via middle-neck incision. The catheter was introduced and placed into the LV cavity. Left thoracotomy was conducted and the left main coronary artery (LCA) was ligated. To induce reperfusion, the suture was released after 45 min. Pressure-volume data was recorded at all times.
Ligation of the LCA caused a decrease in LV systolic function as evidenced by a 30% reduction in stroke volume, LV ejection fraction (EF), and cardiac output. Maximum dP/dt as a parameter for LV contractility was also significantly reduced and diastolic function was severely impaired (minimum dP/dt -40%). Reperfusion over a period of 20 min did not lead to a complete recovery of LV function.
Real-time pressure-volume analysis served as a valid procedure for monitoring cardiac function during acute myocardial infarction in mice. Maintaining stable anesthesia and a standardized surgical approach was crucial to ensure valid results. As the early phase of acute myocardial infarction is critical for morbidity and mortality, the delineated method could be beneficial for preclinical evaluation of new strategies for cardioprotection.

Acute myocardial infarction in mice induces acute but incompletely characterized changes in left ventricular (LV) function. LV catheterization in mice undergoing coronary artery occlusion serves as a novel method for a real-time evaluation of LV function.

تحليل حجم الضغط في الوقت الحقيقي من احتشاء عضلة القلب الحاد في الفئران

Acute myocardial infarction can lead to acute heart failure and cardiogenic shock. The evaluation of hemodynamics is critical for the evaluation of any ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. Various approaches have been described, such as the inhalation of aerosolized LPS as well as nasal or intratracheal instillation. The presented protocol describes a detailed step-by-step procedure to induce ALI in mice by direct intratracheal LPS instillation and perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, and lung tissue. After intraperitoneal sedation, the trachea is exposed and LPS is administered via a 22 G venous catheter. A robust and reproducible inflammatory reaction with leukocyte invasion, upregulation of proinflammatory cytokines, and disruption of the alveolo-capillary barrier is induced within hours to days, depending on the LPS dosage used. Collection of blood samples, BAL fluid, and lung harvesting, as well as the processing for FACS analysis, are described in detail in the protocol. Although the use of the sterile LPS is not suitable to study pharmacologic interventions in infectious diseases, the described approach offers minimal invasiveness, simple handling, and good reproducibility to answer mechanistic immunological questions. Furthermore, dose titration as well as the use of alternative LPS preparations or mouse strains allow modulation of the clinical effects, which can exhibit different degrees of ALI severity or early vs. late onset of disease symptoms.

Presented here is a step-by-step procedure to induce acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation and to perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage fluid, and lung tissue. Minimal invasiveness, simple handling, good reproducibility, and titration of disease severity are advantages of this approach.

إحداث إصابات الرئة الحادة في الفئران عن طريق التبيل المباشر للكيس الشحمي داخل الرغامى

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Acute Kidney Injury Model Induced by Cisplatin in Adult Zebrafish

Cisplatin is commonly used as chemotherapy. Although it has positive effects in cancer-treated individuals, cisplatin can easily accumulate in the kidney due to its low molecular weight. Such accumulation causes the death of tubular cells and can induce the development of Acute Kidney Injury (AKI), which is characterized by a quick decrease in kidney function, tissue damage, and immune cells infiltration. If administered in specific doses cisplatin can be a useful tool as an AKI inducer in animal models. The zebrafish has appeared as an interesting model to study renal function, kidney regeneration, and injury, as renal structures conserve functional similarities with mammals. Adult zebrafish injected with cisplatin shows decreased survival, kidney cell death, and increased inflammation markers after 24 h post-injection (hpi). In this model, immune cells infiltration and cell death can be assessed by flow cytometry and TUNEL assay. This protocol describes the procedures to induce AKI in adult zebrafish by intraperitoneal cisplatin injection and subsequently demonstrates how to collect the renal tissue for flow cytometry processing and cell death TUNEL assay. These techniques will be useful to understand the effects of cisplatin as a nephrotoxic agent and will contribute to the expansion of AKI models in adult zebrafish. This model can also be used to study kidney regeneration, in the search for compounds that treat or prevent kidney damage and to study inflammation in AKI. Moreover, the methods used in this protocol will improve the characterization of tissue damage and inflammation, which are therapeutic targets in kidney-associated comorbidities.

This protocol describes the procedures to induce Acute Kidney Injury (AKI) in adult zebrafish using cisplatin as a nephrotoxic agent. We detailed the steps to evaluate the reproducibility of the technique and two techniques to analyze inflammation and cell death in the renal tissue, flow cytometry and TUNEL, respectively.

نموذج إصابة الكلى الحادة الناجمة عن سيسبلاتين في حمار وحشي الكبار

Cisplatin is commonly used as chemotherapy. Although it has positive effects in cancer-treated individuals, cisplatin can easily accumulate in the kidney ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, chemo- and radiation-therapies, as well as ovarian surgeries. In unmarried women with severe ovarian dysfunction, fertility preservation is important for future pregnancies. Although oocyte cryopreservation is an established method for fertility preservation, these patients could only preserve a limited number of oocytes even after ovarian hyperstimulation, leading to repeated stimulations to ensure sufficient oocytes to guarantee future pregnancy. To solve this issue, we have recently developed a drug-free in vitro activation (IVA) procedure, which enable us to stimulate early stages of ovarian follicles to develop to the preantral follicle stage. These preantral follicles can respond to the unique protocol of gonadotropin stimulation, resulting in increased number of retrieved oocytes per ovarian stimulation for cryopreservation. The drug-free IVA comprised from the surgical approach and ovarian stimulation. We removed a part of cortex from one or both ovaries from patients under laparoscopic surgery. The ovarian cortical tissues were cut into small cubes to disrupt the Hippo signaling pathway and stimulate the development of early stage follicles. These cubes were grafted orthotropically into remaining ovaries as well as beneath the serosa of both Fallopian tubes. We have already published the surgical procedure of the drug-free IVA and the protocol of subsequent ovarian stimulation, but herein we present the details of laboratory methods required for drug-free IVA.

We present details of laboratory procedures for drug-free in vitro activation (IVA) of ovarian follicles for patients with severe ovarian dysfunction. This method could increase the number of retrievable oocytes per ovarian hyperstimulation and benefit fertility preservation for those patients.

الحفاظ على الخصوبة في المرضى الذين يعانون من خلل حاد في المبيض

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...