Name: sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice
Uploaded: 2021-06-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Forfatterne tak til Post Graduation Program i Medicinsk Klinik ved Universitetet i São Paulo; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) og University of São Paulo Medical School (FMUSP).

Denne protokol blev godkendt af den etiske komité for brug af dyr fra USP Medicine School, Num. Project: 1343/2019-CEUA: FMUSP. Til denne protokol blev der anvendt C57BL/6 mus på 6 uger, der vejede 20 ± 2 g (n = 9/gruppe).
1. Laparotomi
<ol><li>Bedøve dyr med xylazin (10 mg/kg) og ketaminopløsning (80 mg/kg), subkutant (0,1 mL/10g kropsvægt) ved hjælp af en 1 mL sprøjte og 13x0,45 mm nål 26G 1/2. Kontroller for tilstrækkelig anæstesi dybde ved at klemme tåen. Styr kropstemperatur...

<ol>
	<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significantly+different+clinical+features+between+hypertriglyceridemia+and+biliary+acute+pancreatitis:+A+retrospective+study+of+730+patients+from+a+tertiary+center.">Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center.</a> BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).</li><li>Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+antioxidant+mechanisms+in+lung+during+experimental+pancreatitis+in+rats.">Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).</li><li>T, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraductal+infusion+of+taurocholate+followed+by+distal+common+bile+duct+ligation+leads+to+a+severe+necrotic+model+of+pancreatitis+in+mice.">Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 44 (3), (2015).</li><li>Botoi, G., Andercou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+17-prognostic+marker+of+severe+acute+pancreatitis.">Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis.</a> Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).</li><li>Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+IL-1beta,+IL-8,+and+IL-10+polymorphisms+and+risk+of+acute+pancreatitis.">Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis.</a> Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).</li><li>Feng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+peritoneal+lavage+with+ulinastatin+on+the+expression+of+NF-kappaB+and+TNF-alpha+in+multiple+organs+of+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).</li><li>Fang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sildenafil+on+inflammatory+injury+of+the+lung+in+sodium+taurocholate-induced+severe+acute+pancreatitis+rats.">Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats.</a> International Immunopharmacology. 80, (2020).</li><li>Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+acute+pancreatitis.">Experimental models of acute pancreatitis.</a> Post&#281;py Higieny i Medycyny Do&#347;wiadczalnej(Online). 69, 264-269 (2015).</li><li>Wan, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+experimental+animal+models+of+biliary+acute+pancreatitis+and+recent+advances+in+basic+research.">Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research.</a> HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).</li><li>Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretagogue+(Caerulein)+induced+pancreatitis+in+rodents.">Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).</li><li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+protects+against+L-arginine-induced+acute+necrotizing+pancreatitis+in+mice+by+enhancing+SIRT1-mediated+deacetylation+of+p53+and+heat+shock+factor+1.">Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1.</a> International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).</li><li>Ma, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+resveratrol+on+peritoneal+macrophages+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis.</a> Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).</li><li>Souza, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+effects+of+peritoneal+lavage+in+acute+pancreatitis.">Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis.</a> Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).</li><li>Perides, G., Acker, G. J. v., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct.">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).</li><li>Wittel, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taurocholate-induced+pancreatitis:+a+model+of+severe+necrotizing+pancreatitis+in+mice.">Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).</li><li>Tao, L., Reese, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+mouse+models+that+reflect+human+immune+responses.">Making mouse models that reflect human immune responses.</a> Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).</li><li>Vandamme, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+rodents+as+models+of+human+diseases.">Use of rodents as models of human diseases.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).</li><li>Song, H. K., Hwang, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+C57BL/6N+mice+on+the+variety+of+immunological+researches.">Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches.</a> Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).</li><li>Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -. V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition. (1), (2010).</li><li>Ray, A., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mouse+peritoneal+cavity+cells.">Isolation of mouse peritoneal cavity cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (35), e1488 (2010).</li><li>Schmidt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+better+model+of+acute+pancreatitis+for+evaluating+therapy.">A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.</a> Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).</li><li>Liu, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+improves+the+therapeutic+efficacy+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis.</a> International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).</li><li>Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+bile+acids+on+pancreatic+ductal+cells.">The effects of bile acids on pancreatic ductal cells.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).</li><li>Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+acute+pancreatitis:+impact+of+social+deprivation,+alcohol+consumption,+seasonal+and+demographic+factors.">The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors.</a> Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).</li><li>Lerch, M. M., Gorelick, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+acute+and+chronic+pancreatitis.">Models of acute and chronic pancreatitis.</a> Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).</li><li>Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immune-modulating+formula+comprising+whey+peptides+and+fermented+milk+improves+inflammation-related+remote+organ+injuries+in+diet-induced+acute+pancreatitis+in+mice.">An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice.</a> Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).</li><li>Kui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+methodolgy+of+L-Arginine-induced+acute+pancreatitis.">New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis.</a> PLoS One. 10 (2), 011758 (2015).</li><li>Xue, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternatively+activated+macrophages+promote+pancreatic+fibrosis+in+chronic+pancreatitis.">Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis.</a> Nature Communication. 6, 7158 (2015).</li><li>Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+in+inflammatory+and+malignant+diseases+of+the+pancreas.">Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas.</a> Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).</li><li>Rao, S. A., Kunte, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6:+An+early+predictive+marker+for+severity+of+acute+pancreatitis.">Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis.</a> Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).</li></ol>

Metoden til at fremkalde akut pancreatitis ved retrograd natrium taurocholat infusion er allerede blevet påvist hos rotter22,23,24. Tre lignende værker, der blev offentliggjort i 2008, 2010 og 2015, fungerede som reference for protokollen3,14,15. I dette arbejde opregner vi alle de kritiske trin til gengivelse af denne metode i C57BL/...

Hos mennesker er tilstedeværelsen af galdesten den mest almindelige årsag til bugspytkirtel på grund af obstruktionen af den terminale del af choledochal, afbryder strømmen af bugspytkirtelsekretioner og forårsager en intens inflammatorisk proces i bugspytkirtlen med en stigning i koncentrationen af fordøjelsesenzymer i serum og inflammatoriske mæglere1,2.
To forskellige teorier er blevet foreslået at forklare udviklingen af akut pancreatitis (AP). Den "fælles kanal" teori tyder på, at stenene til stede i galdeblæren hindre distal fælles galdegang system, så galde sekretion til at flyde tilbageskridt i bugspytkirtlen kanalen. Den anden teori ("kanal obstruktion" teori) tyder på, at obstruktion af bugspytkirtlen kanalen ved overskydende galdesten forårsager en blokering i strømmen af bugspytkirtel sekretion til duodenum, forårsager ductal hypertension3. Selv om de mekanismer, der fører til akut galde pancreatitis ikke er fuldt forstået, resultatet er en intens inflammatorisk proces. Fordøjelsesenzymudbrud og bugspytkirtel selvfordøjelse føre til histopatologiske ændringer, en stigning i inflammatoriske cytokiner (IL-1β, IL-6, TNF-α) i ascitisk væske og serum, og en stigning i akut fase proteiner4,5,6.
Alvorlig akut pancreatitis er en tilstand, der fortjener klinisk opmærksomhed på grund af inddragelse af flere organer og en høj dødelighed risiko. Dyremodeller til reproduktion af akut pancreatitis (AP) er vigtige, da disse forklarer sygdommens patofysiologiske mekanismer og hjælper med at overvåge udviklingen af inflammatoriske begivenheder, startende fra de indledende stadier af sygdommen. Dette er normalt ikke muligt i klinikkerne2,7. Derudover er adgang til bugspytkirtelvæv let i prækliniske undersøgelser, der favoriserer udredningen af ændringer forbundet med kliniske tilstande8 sammen med muligheden for at arbejde med isogene arter, eliminere uønskede variabler og spejle klinisk lighed med de resultater, der observeres i den menneskelige tilstand9.
Galde- og ikke-galdemodeller til induktion af akut pancreatitis hos rotter og mus arter er ofte blevet undersøgt i den videnskabelige litteratur. Ikke-galde metoder til induktion omfatter administration af supramaximal stimulerende doser af cholecystokinin secretagogue eller dens analoge cerulein10; administration af næsten dødelige doser af L-arginin; eller administration af en cholin-mangelfuld kost suppleret med ethionin11. Selv om disse metoder er nemme at reproducere og resultere i bugspytkirtelbetændelse, de ikke replikere de mekanismer, der i teorien udløser AP (dvs., refluks af galde sekretion i bugspytkirtlen kanalen). Den teknik, der adresserer galdemodellen er baseret på retrograd infusion af galdesyrer i bugspytkirtlen kanalen og kræver veluddannede forskere til at udføre denne protokol. Flere undersøgelser er blevet offentliggjort ved hjælp af denne metode hos rotter (tilsyneladende af tekniske årsager, da disse forsøg involverer kirurgiske procedurer)12,13. Men, tilgangen i mus kan tilbyde mere interessante resultater i studiet af inflammation3,14,15. I denne undersøgelse vil vi vise en tjekliste over de trin, der skal følges til reproduktion af alvorlig akut pancreatitis ved infusion af natrium taurocholat i C57BL/6 bedøvede mus.
For værker, der involverer behovet for forsøg med antistoffer og analyse af gen- og proteinekspressionen, er brugen af mus at foretrække på grund af det større arsenal af materialer til disse dyr og muligheden for at arbejde med isogen- og knockoutarter, blandt andre, der kan bruges relevante for undersøgelser16. Mus C57BL/6 er en indavlet stamme af mus, der oprindeligt blev udviklet til undersøgelse af antitumoraktivitet og immunologi. Denne stamme foretrækkes i stigende grad af forskere for at være isogen, hvilket giver mulighed for en større reproducerbarhed af resultater, hvilket kan indebære anvendelse af et mindre antal dyr i et forsøg og mindre variation i resultaterne mellem den samme gruppe17,18.
Perides et al. (2010)14 offentliggjorde en protokol for AP induktion hos mus ved natrium taurocholat infusion. Her opdaterer vi denne model ved hjælp af en højere natrium taurocholatkoncentration (2,5%) i C57BL/6 mus med et defineret volumen og infusionshastighed (figur 1). Det maksimale sværhedsgradsniveau nås inden for 12 timer efter induktion hos mus. Højden af koncentrationen af IL-6 både i serum og i bughulen er korreleret med progressionen af AP. Med praksis er den samlede anslåede tid fra induktion af anæstesi til afslutningen af infusionen 25 min pr. Dyr. Det er vigtigt, at en uddannet forsker udfører dette eksperiment. For at sikre, at opløsningen sprøjtes korrekt ind i den fælles galdegang, skal du udføre flere pilottræningssessioner ved hjælp af methylenblåt i stedet for natrium taurocholat.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.4 mm needle</td>
			<td>INTRAG MEDICAL TECH</td>
			<td>90183210</td>
			<td>30G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;0.54 mm polyethylene tube</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>730010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam block</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>masking tape for mounting the mouse</td>
			<td>Missner</td>
			<td>1236</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion pump scheduled to 10&#181;L / min.</td>
			<td>Havard aparatus-Peristaltic Pump Series</td>
			<td>MA1 55-7766</td>
			<td>&#160;Model 66 Small Peristaltic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors and forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antiseptic providine iodine</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>12086OR</td>
			<td>antisepsis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>459836</td>
			<td>Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Lord</td>
			<td>bdk9a1ghk6</td>
			<td>For trichotomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium taurocholate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>86339- 1G</td>
			<td>CAS NUMBER- 345909-26-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microvessel clip</td>
			<td>Medicon Surgical</td>
			<td>56.87.35</td>
			<td>Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 -&#160;40 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 prolene</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>5162</td>
			<td>Suture line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL</td>
			<td>Crist&#225;lia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xilazine 2%</td>
			<td>Syntec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline)</td>
			<td>Farmace</td>
			<td>105851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemicals</td>
			<td>M5528</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MILLIPLEX&#160;MAP&#160;Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>MCYTOMAG-70K</td>
			<td>Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amylase Assay</td>
			<td>Labtest</td>
			<td>11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desmarres retractor 13-mm 
			width</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-6672</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice

Galde akut betændelsesinduktion ved natrium taurocholatinfusion er blevet meget udbredt af det videnskabelige samfund på grund af repræsentationen af den menneskelige kliniske tilstand og reproduktion af inflammatoriske hændelser svarende til udbrud af klinisk galde pancreatitis. Sværhedsgraden af bugspytkirtelskader kan vurderes ved at måle koncentrationen, hastigheden og mængden af den infunderede galdesyre. Denne undersøgelse giver en opdateret tjekliste over de materialer og metoder, der anvendes i protokollen reproduktion og viser de vigtigste resultater fra denne akutte pancreatitis (AP) model. De fleste af de tidligere publikationer har begrænset sig til at reproducere denne model hos rotter. Vi har anvendt denne metode i mus, hvilket giver yderligere fordele (dvs. tilgængeligheden af et arsenal af reagenser og antistoffer til disse dyr sammen med muligheden for at arbejde med genetisk modificerede stammer af mus), der kan være relevante for undersøgelsen. For akut induktion af pancreatitis hos mus præsenterer vi en systematisk protokol med en defineret dosis på 2,5 % natrium taurocholat ved infusionshastighed 10 μL/min i 3 min i C57BL/6 mus, der når sit maksimale sværhedsgradsniveau inden for 12 timer efter induktion og fremhæver resultater med resultater, der validerer metoden. Med praksis og teknik er den samlede anslåede tid, fra induktion af anæstesi til afslutningen af infusionen, 25 min pr. Dyr.

Pancreatitis sværhedsgrad blev scoret mellem 0-3 i henhold til Schmidt's skala21 , hvor nul svarer til fraværet, 1 svarer til en mild tilstedeværelse (<25%), 2 svarer til en moderat tilstedeværelse (mellem 25 og 50%) og 3 svarer til en intens tilstedeværelse (> 50%) (tabel 1). De udførte målinger var plasma amylase aktivitet, bugspytkirtelødem, acinar celle, skade / nekrose, bugspytkirtelbetændelse (ved histologi analyse af H &E-farvede se...

Watch this Scientific Journal Video about Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

Dyremodeller for alvorlig akut pancreatitis muliggør undersøgelse af patofysiologiske ændringer i den indledende fase, hvilket letter observation af udviklingen af inflammatoriske begivenheder. Her giver vi en protokol for induktion af svær akut galde pancreatitis ved retrograd infusion af natrium taurocholat i bugspytkirtlen kanalen af bedøvet C57BL/6 mus.

Natrium taurocholat induceret svær akut pancreatitis i C57BL/6 Mus

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

Denne metode kan bruges til at reproducere de inflammatoriske hændelser, der opstår i akut galde pancreatitis. Det er muligt at studere ændringer i bugspytkirtelvæv i sine tidlige stadier, hvilket generelt ikke er muligt i klinikken. De vigtigste fordele ved denne teknik er, at det er hurtigt og nemt at reproducere for en uddannet forsker, og det giver lignende resultater til akut pancreatitis hos mennesker.Metoden kan bruges til at studere farmakologiske immunresponser af lægemiddelmolekyler og andre terapeutiske interventioner, da det gør det muligt at studere inflammatoriske medierende celler i bugspytkirtlen og tilstødende organer. Når du forsøger denne protokol, er det afgørende at lokalisere organerne og etablere cannulationsområdet. Huske placeringen af organerne og udøve injektionen ansøgning først ved hjælp af en farvet opløsning såsom methylenblå.Efter at have kontrolleret dybden af anæstesi med en tå knivspids, rengør abdominalområdet af en bedøvet mus med en 5% povidone jodopløsning. Brug en trimmer, fjern hår mellem brystet og underlivet og rengør et cirka to kvadratcentimeter kirurgisk område med 70% alkohol. Immobilisere dyret på det kirurgiske bord og bruge en saks til at skære fem millimeter af huden vandret på den øverste del af maven og en centimeter under xiphoid processen.Gentag snittet på bughinden for at udføre laparotomien med minimal eksponering af hulrummet. Brug en retraktor, træk leveren mod hovedet på ca. en centimeter fra tarmen og find området i bugspytkirtlen og duodenum. Ved hjælp af sammenkværn løfter du leveren mod dyrehovedet.Ved forsigtigt at trække den del af tyndtarmen, fastsætte de to laterale ender med en 6-0 polypropylen sutur for et bedre overblik over den distale del af den fælles galdegang også. Ved hjælp af et mikrokarclips skal den proksimale fælles galdegang midlertidigt udvande den proksimale fælles galdegang. Eksponer organet ud af bughulen.Derefter laves en midlertidig okklusion af den distale fælles galdegang med en 8-0 sutur. For at få adgang til den fælles galdegang punkteres den perampampullære region, der fremstår som en hvidlig del af tyndtarmens væg. Med en 0,4 millimeter nål forbundet til en 0,54 millimeter polyethylen rør, starte infusionspumpen for 2,5% natrium taurocholat opløsning infusion med en konstant hastighed på 10 mikroliters per 10 gram kropsvægt i tre minutter.Efter infusionen skal mikrobeholderclipsen fjernes, den midlertidige 8-0 og injektionsnålen fra galdegangen i bugspytkirtlen. Sutur maven med en 6-0 nonabsorbent monofilament polypropylen sutur. Tiden mellem laparotomi og ende sutur bør ikke være mere end 30 minutter.Efter operationen skal dyrene huses i polyethylenkasser foret med træspåner og vand og mad ad libitum. Hold forsigtigt dyret med huden trukket tilbage, fremme en lille fremspring af øjeæblet, og placere dyret med øjet vender opad. Indgyd en dråbe øjensalt, der indeholder lokalbedøvelse i dyrets øje.Placer enden af et kapillærrør i det mediale hjørne af øjet og indsæt det forsigtigt under øjeæblet i en vinkel på ca. 30 til 45 grader. Roter kapillærrøret, indtil blodgennemstrømningen begynder. Når samlingen er overstået, sikre homøostase ved at holde øjenlågene lukket med let kompression.Senere, ved hjælp af en 27 gauge nål, injicere fire milliliter iskold PBS i bughulen af musen. Efter injektionen skal du forsigtigt massere bughinden i 10 sekunder for at fjerne klæbede celler. Brug saks og pincet, lav et lille snit på 0,5 centimeter på den indre hud og muskulatur for at udsætte bughulen.Indsæt en pære pipette i bughinden og indsamle så meget væske som muligt, passe på ikke at aspirere fedtvæv. Saml en del af bugspytkirtlen fra hovedregionen til videre behandling. Sæt den indsamlede væske i rør, der holdes på is.Derefter centrifugere peritonealvæsken ved 250 gange G i fem minutter og lager supernatanten til interleukin-6 dosering. For at opnå serum centrifugere de indsamlede blodprøver ved 700 gange G i 15 minutter og lager supernatanten til amylase og interleukin-6 dosering. Analyse af bugspytkirtelvæv 12 timer efter induktion af akut pancreatitis viste intens betændelse i det berørte organ i forhold til vævsprøver fra falsk gruppe.Lignende resultater var repræsenteret ved histologisk undersøgelse efter hæmatoxylin eosin farvning af vævsprøver fra sham og APTA. Analyse af blodserum udgjorde en signifikant stigning i serum amylase og interleukin-6 cytokinkoncentration i AP-gruppen sammenlignet med falskgruppen. Samtidig var interleukin-6 koncentrationen betydeligt højere i bughulevæske i AP-gruppen.Sværhedsgraden af pancreatitis i denne model er proportionalt afhængig af koncentrationen, mængden og trykket af infusionen, og tidspunktet for akut pancreatitis induktion. Ved hjælp af denne teknik kan virkningerne af kontinuerlig peritoneal lavage på alvorlig akut pancreatitis undersøges.

Research

JoVE Journal

Medicine

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

Carbon dioxide (CO2) along with oxygen (O2) share the role of being the most important gases in the human body. The measuring of expired CO2 at the mouth ...

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Iskæmireperfusion Model akut nyreskade og Post Injury Fibrose i mus

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Akut Brain Trauma i Mus Efterfulgt af Longitudinal To-foton Imaging

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

Den bm12 Inducerbar Model af systemisk lupus erythematosus (SLE) i C57BL / 6-mus

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Murine distale kolostomi, en roman Model omledning colitis i C57BL/6 mus

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice

Real-time pres-binds analyse af akut myokardieinfarkt i mus

Acute myocardial infarction can lead to acute heart failure and cardiogenic shock. The evaluation of hemodynamics is critical for the evaluation of any ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Inducerende akut lungeskade i mus ved direkte Intratracheal Lipopolysaccharid instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Acute Kidney Injury Model Induced by Cisplatin in Adult Zebrafish

Akut nyreskade model induceret af Cisplatin hos voksne zebrafisk

Cisplatin is commonly used as chemotherapy. Although it has positive effects in cancer-treated individuals, cisplatin can easily accumulate in the kidney ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Fertilitetsbevarelse hos patienter med svær dysfunktion i æggestokkene

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...