Name: sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice
Uploaded: 2021-06-28T13:00:00
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Die Autoren danken dem Postgraduiertenprogramm in der Medizinischen Klinik der Universität von São Paulo; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) und University of São Paulo Medical School (FMUSP).

Dieses Protokoll wurde von der Ethikkommission für die Verwendung von Tieren der USP Medicine School, Nr. Projekt: 1343/2019-CEUA: FMUSP genehmigt. Für dieses Protokoll wurden C57BL/6-Mäuse im Alter von 6 Wochen mit einem Gewicht von 20 ± 2 g verwendet (n = 9/Gruppe).
1. Laparotomie
<ol><li>Tiere mit Xylazin (10 mg/kg) und Ketaminlösung (80 mg/kg) subkutan (0,1 ml/10 g Körpergewicht) mit einer 1 ml Spritze und einer 13x0,45 mm Nadel 26G 1/2 betäuben. Überprüfen Sie auf ausreichende ...

<ol>
	<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significantly+different+clinical+features+between+hypertriglyceridemia+and+biliary+acute+pancreatitis:+A+retrospective+study+of+730+patients+from+a+tertiary+center.">Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center.</a> BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).</li><li>Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+antioxidant+mechanisms+in+lung+during+experimental+pancreatitis+in+rats.">Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).</li><li>T, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraductal+infusion+of+taurocholate+followed+by+distal+common+bile+duct+ligation+leads+to+a+severe+necrotic+model+of+pancreatitis+in+mice.">Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 44 (3), (2015).</li><li>Botoi, G., Andercou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+17-prognostic+marker+of+severe+acute+pancreatitis.">Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis.</a> Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).</li><li>Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+IL-1beta,+IL-8,+and+IL-10+polymorphisms+and+risk+of+acute+pancreatitis.">Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis.</a> Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).</li><li>Feng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+peritoneal+lavage+with+ulinastatin+on+the+expression+of+NF-kappaB+and+TNF-alpha+in+multiple+organs+of+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).</li><li>Fang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sildenafil+on+inflammatory+injury+of+the+lung+in+sodium+taurocholate-induced+severe+acute+pancreatitis+rats.">Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats.</a> International Immunopharmacology. 80, (2020).</li><li>Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+acute+pancreatitis.">Experimental models of acute pancreatitis.</a> Post&#281;py Higieny i Medycyny Do&#347;wiadczalnej(Online). 69, 264-269 (2015).</li><li>Wan, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+experimental+animal+models+of+biliary+acute+pancreatitis+and+recent+advances+in+basic+research.">Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research.</a> HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).</li><li>Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretagogue+(Caerulein)+induced+pancreatitis+in+rodents.">Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+effects+of+peritoneal+lavage+in+acute+pancreatitis.">Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis.</a> Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).</li><li>Perides, G., Acker, G. J. v., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct.">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).</li><li>Wittel, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taurocholate-induced+pancreatitis:+a+model+of+severe+necrotizing+pancreatitis+in+mice.">Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).</li><li>Tao, L., Reese, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+mouse+models+that+reflect+human+immune+responses.">Making mouse models that reflect human immune responses.</a> Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).</li><li>Vandamme, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+rodents+as+models+of+human+diseases.">Use of rodents as models of human diseases.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).</li><li>Song, H. K., Hwang, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+C57BL/6N+mice+on+the+variety+of+immunological+researches.">Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches.</a> Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).</li><li>Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -. V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition. (1), (2010).</li><li>Ray, A., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mouse+peritoneal+cavity+cells.">Isolation of mouse peritoneal cavity cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (35), e1488 (2010).</li><li>Schmidt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+better+model+of+acute+pancreatitis+for+evaluating+therapy.">A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.</a> Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).</li><li>Liu, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+improves+the+therapeutic+efficacy+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis.</a> International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).</li><li>Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+bile+acids+on+pancreatic+ductal+cells.">The effects of bile acids on pancreatic ductal cells.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).</li><li>Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+acute+and+chronic+pancreatitis.">Models of acute and chronic pancreatitis.</a> Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).</li><li>Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immune-modulating+formula+comprising+whey+peptides+and+fermented+milk+improves+inflammation-related+remote+organ+injuries+in+diet-induced+acute+pancreatitis+in+mice.">An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice.</a> Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).</li><li>Kui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+methodolgy+of+L-Arginine-induced+acute+pancreatitis.">New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis.</a> PLoS One. 10 (2), 011758 (2015).</li><li>Xue, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternatively+activated+macrophages+promote+pancreatic+fibrosis+in+chronic+pancreatitis.">Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis.</a> Nature Communication. 6, 7158 (2015).</li><li>Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+in+inflammatory+and+malignant+diseases+of+the+pancreas.">Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas.</a> Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).</li><li>Rao, S. A., Kunte, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6:+An+early+predictive+marker+for+severity+of+acute+pancreatitis.">Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis.</a> Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).</li></ol>

Die Methode zur Induktion einer akuten Pankreatitis durch retrograde Natriumtaurocholat-Infusion wurde bereits bei Ratten gezeigt22,23,24. Drei ähnliche Werke, die 2008, 2010 und 2015 veröffentlicht wurden, dienten als Referenz für das Protokoll3,14,15. In dieser Arbeit listen wir alle kritischen Schritte zur Reproduktion dieser Meth...

Beim Menschen ist das Vorhandensein von Gallensteinen die häufigste Ursache für eine Pankreatitis aufgrund der Obstruktion des terminalen Teils des Choledochals, die den Fluss der Pankreassekrete unterbricht und einen intensiven Entzündungsprozess in der Bauchspeicheldrüse verursacht, mit einer Erhöhung der Konzentration von Verdauungsenzymen im Serum und Entzündungsmediatoren1,2.
Zwei verschiedene Theorien wurden vorgeschlagen, um die Entwicklung einer akuten Pankreatitis (AP) zu erklären. Die Theorie des "gemeinsamen Kanals" legt nahe, dass die in der Gallenblase vorhandenen Steine das distale gemeinsame Gallengangssystem behindern, so dass die Gallensekretion retrograd in den Pankreasgang fließen kann. Die zweite Theorie (die Theorie der "Gangobstruktion") legt nahe, dass die Obstruktion des Pankreasgangs durch überschüssige Gallensteine eine Blockade im Fluss der Pankreassekretion zum Zwölffingerdarm verursacht, was zu einer duktalen Hypertonie führt3. Obwohl die Mechanismen, die zu einer akuten biliären Pankreatitis führen, nicht vollständig verstanden sind, ist das Ergebnis ein intensiver Entzündungsprozess. Der Ausbruch des Verdauungsenzyms und die Selbstverdauung der Bauchspeicheldrüse führen zu histopathologischen Veränderungen, einem Anstieg der entzündlichen Zytokine (IL-1β, IL-6, TNF-α) in der Aszitflüssigkeit und im Serum sowie zu einem Anstieg der Proteine in der akuten Phase4,5,6.
Schwere akute Pankreatitis ist eine Erkrankung, die aufgrund der Beteiligung mehrerer Organe und eines hohen Mortalitätsrisikos klinische Aufmerksamkeit verdient. Tiermodelle für die Reproduktion der akuten Pankreatitis (AP) sind wichtig, da sie die pathophysiologischen Mechanismen der Krankheit erklären und bei der Überwachung der Entwicklung von Entzündungsereignissen ab den Anfangsstadien der Krankheit helfen. Dies ist in den Kliniken in der Regel nicht möglich2,7. Darüber hinaus ist der Zugang zu Pankreasgewebe in präklinischen Studien einfach, was die Aufklärung von Veränderungen im Zusammenhang mit klinischen Bedingungen8 sowie die Möglichkeit der Arbeit mit isogenen Spezies, die Beseitigung unerwünschter Variablen und die Spiegelung der klinischen Ähnlichkeit mit den im menschlichen Zustand beobachteten Ergebnissen begünstigt9.
Biliäre und nicht-biliäre Modelle für die Induktion einer akuten Pankreatitis bei Ratten und Mäusen wurden in der wissenschaftlichen Literatur häufig untersucht. Nicht-biliäre Induktionsmethoden umfassen die Verabreichung von supramaximalen stimulierenden Dosen des Cholecystokinin-Sekretagogue oder seines analogen Cerulein10; Verabreichung von fast tödlichen Dosen von L-Arginin; oder Verabreichung einer cholinarmen Diät, die mit Ethionin11 ergänzt wird. Obwohl diese Methoden leicht zu reproduzieren sind und zu einer Bauchspeicheldrüsenentzündung führen, replizieren sie nicht die Mechanismen, die theoretisch AP auslösen (dh den Rückfluss von Gallensekretion in den Pankreasgang). Die Technik, die das Gallenmodell anspricht, basiert auf der retrograden Infusion von Gallensäuren in den Pankreasgang und erfordert gut ausgebildete Forscher, um dieses Protokoll durchzuführen. Mehrere Studien wurden mit dieser Methode an Ratten veröffentlicht (offenbar aus technischen Gründen, da diese Experimente chirurgische Eingriffe beinhalten)12,13. Der Ansatz bei Mäusen könnte jedoch interessantere Ergebnisse in der Studie über Entzündungen liefern3,14,15. In dieser Studie zeigen wir eine Checkliste der Schritte, die für die Reproduktion einer schweren akuten Pankreatitis durch Infusion von Natriumtaurocholat in C57BL/6 anästhesierten Mäusen zu befolgen sind.
Für Arbeiten, die Experimente mit Antikörpern und die Analyse der Gen- und Proteinexpression erfordern, ist die Verwendung von Mäusen vorzuziehen, da das Materialarsenal für diese Tiere größer ist und die Möglichkeit besteht, unter anderem mit isogenen und Knockout-Spezies zu arbeiten, die für Studien relevant sind16. Mäuse C57BL/6 ist ein Inzuchtstamm von Mäusen, der ursprünglich für das Studium der Antitumoraktivität und Immunologie entwickelt wurde. Dieser Stamm wird von den Forschern zunehmend bevorzugt, da er isogen ist, was eine größere Reproduzierbarkeit der Ergebnisse ermöglicht, was die Verwendung einer kleineren Anzahl von Tieren in einem Versuch und eine geringere Variabilität der Ergebnisse zwischen derselben Gruppe bedeuten kann17,18.
Perides et al. (2010)14 veröffentlichten ein Protokoll für die AP-Induktion bei Mäusen durch Natriumtaurocholat-Infusion. Hier aktualisieren wir dieses Modell unter Verwendung einer höheren Natriumtaurocilatkonzentration (2,5%) in C57BL/6-Mäusen mit einem definierten Volumen und einer definierten Infusionsgeschwindigkeit (Abbildung 1). Der maximale Schweregrad wird bei Mäusen innerhalb von 12 h nach der Induktion erreicht. Die Erhöhung der Konzentration von IL-6 sowohl im Serum als auch in der Peritonealhöhle korreliert mit dem Fortschreiten der AP. In der Praxis beträgt die geschätzte Gesamtzeit von der Einleitung der Anästhesie bis zum Abschluss der Infusion 25 Minuten pro Tier. Es ist wichtig, dass ein ausgebildeter Forscher dieses Experiment durchführt. Um sicherzustellen, dass die Lösung ordnungsgemäß in den gemeinsamen Gallengang injiziert wird, führen Sie mehrere Pilottrainingseinheiten mit Methylenblau anstelle von Natriumtaurocholat durch.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.4 mm needle</td>
			<td>INTRAG MEDICAL TECH</td>
			<td>90183210</td>
			<td>30G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;0.54 mm polyethylene tube</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>730010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam block</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>masking tape for mounting the mouse</td>
			<td>Missner</td>
			<td>1236</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion pump scheduled to 10&#181;L / min.</td>
			<td>Havard aparatus-Peristaltic Pump Series</td>
			<td>MA1 55-7766</td>
			<td>&#160;Model 66 Small Peristaltic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors and forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antiseptic providine iodine</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>12086OR</td>
			<td>antisepsis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>459836</td>
			<td>Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Lord</td>
			<td>bdk9a1ghk6</td>
			<td>For trichotomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium taurocholate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>86339- 1G</td>
			<td>CAS NUMBER- 345909-26-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microvessel clip</td>
			<td>Medicon Surgical</td>
			<td>56.87.35</td>
			<td>Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 -&#160;40 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 prolene</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>5162</td>
			<td>Suture line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL</td>
			<td>Crist&#225;lia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xilazine 2%</td>
			<td>Syntec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline)</td>
			<td>Farmace</td>
			<td>105851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemicals</td>
			<td>M5528</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MILLIPLEX&#160;MAP&#160;Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>MCYTOMAG-70K</td>
			<td>Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amylase Assay</td>
			<td>Labtest</td>
			<td>11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desmarres retractor 13-mm 
			width</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-6672</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice

Die Induktion einer biliären akuten Pankreatitis durch Natriumtautolett-Infusion wurde von der wissenschaftlichen Gemeinschaft aufgrund der Darstellung des klinischen Zustands des Menschen und der Reproduktion entzündlicher Ereignisse, die dem Beginn der klinischen biliären Pankreatitis entsprechen, weit verbreitet verwendet. Die Schwere der Pankreasschädigung kann durch Messung der Konzentration, Geschwindigkeit und des Volumens der infundierten Gallensäure beurteilt werden. Diese Studie bietet eine aktualisierte Checkliste der Materialien und Methoden, die bei der Protokollreproduktion verwendet werden, und zeigt die wichtigsten Ergebnisse dieses akuten Pankreatitis (AP) -Modells. Die meisten früheren Veröffentlichungen haben sich darauf beschränkt, dieses Modell bei Ratten zu reproduzieren. Wir haben diese Methode bei Mäusen angewendet, die zusätzliche Vorteile bietet (d.h. die Verfügbarkeit eines Arsenals von Reagenzien und Antikörpern für diese Tiere zusammen mit der Möglichkeit, mit genetisch veränderten Mäusstämmen zu arbeiten), die für die Studie relevant sein könnten. Für die Induktion einer akuten Pankreatitis bei Mäusen präsentieren wir ein systematisches Protokoll mit einer definierten Dosis von 2,5% Natriumtarocholat bei einer Infusionsgeschwindigkeit von 10 μL/min für 3 min bei C57BL/6-Mäusen, die ihren maximalen Schweregrad innerhalb von 12 h nach der Induktion erreichen, und heben Ergebnisse mit Ergebnissen hervor, die die Methode validieren. Mit Übung und Technik beträgt die geschätzte Gesamtzeit von der Einleitung der Anästhesie bis zum Abschluss der Infusion 25 Minuten pro Tier.

Der Schweregrad der Pankreatitis wurde nach der Schmidt-Skala21 zwischen 0-3 bewertet, wobei Null der Abwesenheit, 1 einer leichten Präsenz (<25%), 2 einer moderaten Präsenz (zwischen 25 und 50%) und 3 einer intensiven Präsenz (> 50%) entspricht (Tabelle 1). Die durchgeführten Messungen waren Plasma-Amylase-Aktivität, Pankreasödem, Azinuszellen, Verletzungen/Nekrose, Pankreasentzündungen (durch histologische Analyse von H &E-gefärbten Absch...

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Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

Tiermodelle für schwere akute Pankreatitis ermöglichen die Untersuchung pathophysiologischer Veränderungen im Anfangsstadium und erleichtern die Beobachtung der Evolution von Entzündungsereignissen. Hier stellen wir ein Protokoll für die Induktion einer schweren akuten biliären Pankreatitis durch retrograde Infusion von Natriumtaurocholat in den Pankreasgang von anästhesierten C57BL/6-Mäusen zur Verfügung.

Natriumtaurocolat induzierte schwere akute Pankreatitis bei C57BL/6 Mäusen

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

Diese Methode kann zur Reproduktion der entzündlichen Ereignisse verwendet werden, die bei akuter biliärer Pankreatitis auftreten. Es ist möglich, Veränderungen im Pankreasgewebe in seinen frühen Stadien zu untersuchen, was in der Klinik im Allgemeinen nicht möglich ist. Die Hauptvorteile dieser Technik sind, dass sie für einen ausgebildeten Forscher schnell und einfach zu reproduzieren ist und ähnliche Ergebnisse wie eine akute Pankreatitis beim Menschen bietet.Die Methode kann verwendet werden, um pharmakologische Immunantworten von Wirkstoffmolekülen und andere therapeutische Interventionen zu untersuchen, da sie die Untersuchung von entzündungsvermittelenden Zellen in der Bauchspeicheldrüse und angrenzenden Organen ermöglicht. Beim Versuch dieses Protokolls ist es wichtig, die Organe zu lokalisieren und die Kanülregion zu etablieren. Merken Sie sich die Lage der Organe und üben Sie die Injektionsanwendung zuerst mit einer farbigen Lösung wie Methylenblau aus.Nachdem Sie die Tiefe der Anästhesie mit einer Zehenklemme überprüft haben, reinigen Sie den Bauchbereich einer anästhesierten Maus mit einer 5% Povidon-Jodlösung. Entfernen Sie mit einem Trimmer die Haare zwischen Brust und Unterbauch und reinigen Sie einen etwa zwei Quadratzentimeter großen Operationsbereich mit 70% Alkohol. Immobilisieren Sie das Tier auf dem Operationsbrett und schneiden Sie mit einer Schere fünf Millimeter der Haut horizontal auf dem oberen Teil des Abdomens und einen Zentimeter unter dem Xiphoid-Prozess.Wiederholen Sie den Schnitt am Peritoneum, um die Laparotomie mit minimaler Exposition der Höhle durchzuführen. Ziehen Sie die Leber mit einem Retraktor etwa einen Zentimeter vom Darm entfernt in Richtung Kopf und lokalisieren Sie die Region der Bauchspeicheldrüse und des Zwölffingerdarms. Heben Sie die Leber mit einer Pinzette in Richtung Tierkopf an.Indem Sie den Teil des Dünndarms vorsichtig ziehen, fixieren Sie die beiden seitlichen Enden mit einer 6-0 Polypropylennaht, um auch den distalen Teil des gemeinsamen Gallengangs besser zu sehen. Mit einem Mikrogefäßclip verschließen Sie vorübergehend den proximalen gemeinsamen Gallengang. Legen Sie das Organ aus der Bauchhöhle frei.Dann machen Sie einen vorübergehenden Verschluss des distalen gemeinsamen Gallengangs mit einem 8-0 Naht. Um Zugang zum gemeinsamen Gallengang zu erhalten, punktieren Sie die periampulläre Region, die als weißlicher Teil der Dünndarmwand erscheint. Starten Sie mit einer 0,4-Millimeter-Nadel, die mit einem 0,54-Millimeter-Polyethylenröhrchen verbunden ist, die Infusionspumpe für die Infusion von 2,5% Natriumtarocholatlösung mit einer konstanten Geschwindigkeit von 10 Mikrolitern pro 10 Gramm Körpergewicht für drei Minuten.Entfernen Sie nach der Infusion den Mikrogefäßclip, den temporären 8-0 Naht und die Injektionsnadel aus dem Pankreasgallengang. Nähen Sie den Bauch mit einer 6-0 nichtabsorbierenden monofilen Polypropylennaht. Die Zeit zwischen der Laparotomie und der Endnaht sollte nicht mehr als 30 Minuten betragen.Nach der Operation bringen Sie die Tiere in Polyethylenboxen unter, die mit Holzspänen und Wasser und Futter ad libitum ausgekleidet sind. Halten Sie das Tier vorsichtig mit zurückgezogener Haut, fördern Sie einen leichten Vorsprung des Augapfels und positionieren Sie das Tier mit dem Auge nach oben. Geben Sie dem Tier einen Tropfen Augensalbe mit Lokalanästhetikum ein.Positionieren Sie das Ende eines Kapillarrohrs im medialen Augenwinkel und führen Sie es vorsichtig in einem Winkel von etwa 30 bis 45 Grad unter den Augapfel ein. Drehen Sie das Kapillarrohr, bis der Blutfluss beginnt. Sobald die Sammlung vorbei ist, stellen Sie die Homöostase sicher, indem Sie die Augenlider mit leichter Kompression geschlossen halten.Später werden mit einer 27-Gauge-Nadel vier Milliliter eiskaltes PBS in die Peritonealhöhle der Maus injiziert. Nach der Injektion das Peritoneum 10 Sekunden lang sanft einmassieren, um die anhaftenden Zellen zu entfernen. Machen Sie mit einer Schere und einer Pinzette einen kleinen Schnitt von 0,5 Zentimetern auf der Innenhaut und der Muskulatur, um die Bauchhöhle freizulegen.Führen Sie eine Zwiebelpipette in das Peritoneum ein und sammeln Sie so viel Flüssigkeit wie möglich, wobei darauf zu achten ist, dass fettes Gewebe nicht abgesaugt wird. Sammeln Sie einen Teil der Bauchspeicheldrüse aus der Kopfregion zur weiteren Verarbeitung. Deponieren Sie die gesammelte Flüssigkeit in Schläuchen, die auf Eis aufbewahrt werden.Dann zentrifugieren Sie die Peritonealflüssigkeit bei 250 mal G für fünf Minuten und lagern Sie den Überstand für die Dosierung von Interleukin-6. Um Serum zu erhalten, zentrifugieren Sie die gesammelten Blutproben bei 700 mal G für 15 Minuten und lagern Sie den Überstand für Amylase und Interleukin-6 Dosierung. Die Analyse des Pankreasgewebes 12 Stunden nach Induktion einer akuten Pankreatitis zeigte im Vergleich zu Gewebeproben aus der Scheingruppe eine intensive Entzündung im betroffenen Organ.Ähnliche Ergebnisse wurden durch histologische Untersuchungen nach Hämatoxylin-Eosin-Färbung von Gewebeproben aus Schein und APTA dargestellt. Die Analyse des Blutserums zeigte einen signifikanten Anstieg der Serum-Amylase- und Interleukin-6-Zytokinkonzentration in der AP-Gruppe im Vergleich zur Scheingruppe. Gleichzeitig war die Interleukin-6-Konzentration in der Peritonealhöhlenflüssigkeit in der AP-Gruppe signifikant höher.Der Schweregrad der Pankreatitis in diesem Modell hängt proportional von der Konzentration, dem Volumen und dem Druck der Infusion und dem Zeitpunkt der akuten Pankreatitisinduktion ab. Mit Hilfe dieser Technik können die Auswirkungen einer kontinuierlichen Peritonealspülung auf eine schwere akute Pankreatitis untersucht werden.

Research

JoVE Journal

Medicine

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

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Abgelaufene CO 2 Messung bei intubierten oder spontan atmenden Patienten aus der Notaufnahme

Carbon dioxide (CO2) along with oxygen (O2) share the role of being the most important gases in the human body. The measuring of expired CO2 at the mouth ...

Forschung

Medizin

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

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Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischämie-Reperfusion-Modell des akuten Nierenschädigung und nach der Verletzung Fibrose bei Mäusen

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Akute Brain Trauma in Mäusen Gefolgt durch Längs Zwei-Photonen-Imaging

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

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Das BM12 Inducible Modell des systemischen Lupus erythematodes (SLE) in C57BL / 6-Mäuse

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

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Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice

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Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Induzieren akute Lungenschädigung bei Mäusen durch direkte intratracheale Lipopolysaccharid-Instillation

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Acute Kidney Injury Model Induced by Cisplatin in Adult Zebrafish

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Cisplatin is commonly used as chemotherapy. Although it has positive effects in cancer-treated individuals, cisplatin can easily accumulate in the kidney ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Fruchtbarkeitserhaltung bei Patientinnen mit schwerer Ovarialfunktionsstörung

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...