המחברים הודות לתוכנית לאחר סיום הלימודים במרפאה של אוניברסיטת סאו פאולו; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) ואוניברסיטת סאו פאולו בית הספר לרפואה (FMUSP).

פרוטוקול זה אושר על ידי ועדת האתיקה לשימוש בבעלי חיים של בית הספר לרפואה USP, מספר פרויקט: 1343/2019-CEUA: FMUSP. עבור פרוטוקול זה, עכברי C57BL/6, בגילאי 6 שבועות, במשקל 20 ± 2 גרם שימשו (n = 9/קבוצה).
1. לפרוסטומיה
<ol><li>בעלי חיים מרדים עם קסילאצין (10 מ"ג/ק"ג) ופתרון קטמין (80 מ"ג/ק"ג), באופן תת עורי (0.1 מ"...

<ol>
	<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significantly+different+clinical+features+between+hypertriglyceridemia+and+biliary+acute+pancreatitis:+A+retrospective+study+of+730+patients+from+a+tertiary+center.">Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center.</a> BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).</li><li>Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+antioxidant+mechanisms+in+lung+during+experimental+pancreatitis+in+rats.">Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).</li><li>T, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraductal+infusion+of+taurocholate+followed+by+distal+common+bile+duct+ligation+leads+to+a+severe+necrotic+model+of+pancreatitis+in+mice.">Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 44 (3), (2015).</li><li>Botoi, G., Andercou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+17-prognostic+marker+of+severe+acute+pancreatitis.">Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis.</a> Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).</li><li>Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+IL-1beta,+IL-8,+and+IL-10+polymorphisms+and+risk+of+acute+pancreatitis.">Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis.</a> Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).</li><li>Feng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+peritoneal+lavage+with+ulinastatin+on+the+expression+of+NF-kappaB+and+TNF-alpha+in+multiple+organs+of+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).</li><li>Fang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sildenafil+on+inflammatory+injury+of+the+lung+in+sodium+taurocholate-induced+severe+acute+pancreatitis+rats.">Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats.</a> International Immunopharmacology. 80, (2020).</li><li>Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+acute+pancreatitis.">Experimental models of acute pancreatitis.</a> Post&#281;py Higieny i Medycyny Do&#347;wiadczalnej(Online). 69, 264-269 (2015).</li><li>Wan, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+experimental+animal+models+of+biliary+acute+pancreatitis+and+recent+advances+in+basic+research.">Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research.</a> HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).</li><li>Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretagogue+(Caerulein)+induced+pancreatitis+in+rodents.">Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).</li><li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+protects+against+L-arginine-induced+acute+necrotizing+pancreatitis+in+mice+by+enhancing+SIRT1-mediated+deacetylation+of+p53+and+heat+shock+factor+1.">Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1.</a> International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).</li><li>Ma, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+resveratrol+on+peritoneal+macrophages+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis.</a> Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).</li><li>Souza, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+effects+of+peritoneal+lavage+in+acute+pancreatitis.">Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis.</a> Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).</li><li>Perides, G., Acker, G. J. v., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct.">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).</li><li>Wittel, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taurocholate-induced+pancreatitis:+a+model+of+severe+necrotizing+pancreatitis+in+mice.">Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).</li><li>Tao, L., Reese, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+mouse+models+that+reflect+human+immune+responses.">Making mouse models that reflect human immune responses.</a> Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).</li><li>Vandamme, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+rodents+as+models+of+human+diseases.">Use of rodents as models of human diseases.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).</li><li>Song, H. K., Hwang, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+C57BL/6N+mice+on+the+variety+of+immunological+researches.">Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches.</a> Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).</li><li>Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -. V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition. (1), (2010).</li><li>Ray, A., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mouse+peritoneal+cavity+cells.">Isolation of mouse peritoneal cavity cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (35), e1488 (2010).</li><li>Schmidt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+better+model+of+acute+pancreatitis+for+evaluating+therapy.">A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.</a> Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).</li><li>Liu, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+improves+the+therapeutic+efficacy+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis.</a> International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).</li><li>Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+bile+acids+on+pancreatic+ductal+cells.">The effects of bile acids on pancreatic ductal cells.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).</li><li>Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+acute+pancreatitis:+impact+of+social+deprivation,+alcohol+consumption,+seasonal+and+demographic+factors.">The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors.</a> Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).</li><li>Lerch, M. M., Gorelick, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+acute+and+chronic+pancreatitis.">Models of acute and chronic pancreatitis.</a> Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).</li><li>Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immune-modulating+formula+comprising+whey+peptides+and+fermented+milk+improves+inflammation-related+remote+organ+injuries+in+diet-induced+acute+pancreatitis+in+mice.">An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice.</a> Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).</li><li>Kui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+methodolgy+of+L-Arginine-induced+acute+pancreatitis.">New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis.</a> PLoS One. 10 (2), 011758 (2015).</li><li>Xue, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternatively+activated+macrophages+promote+pancreatic+fibrosis+in+chronic+pancreatitis.">Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis.</a> Nature Communication. 6, 7158 (2015).</li><li>Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+in+inflammatory+and+malignant+diseases+of+the+pancreas.">Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas.</a> Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).</li><li>Rao, S. A., Kunte, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6:+An+early+predictive+marker+for+severity+of+acute+pancreatitis.">Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis.</a> Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).</li></ol>

השיטה של גרימת דלקת לבלב חריפה על ידי עירוי נתרן taurocholate מדרדר כבר הוצג חולדות22,23,24. שלוש יצירות דומות, שפורסמו בשנים 2008, 2010 ו-2015, שימשו התייחסות לפרוטוקול3,14,15. בעבודה זו, אנו מפרטים את כל הש...

אצל בני אדם, נוכחות של אבני מרה היא הגורם הנפוץ ביותר לדלקת הלבלב עקב חסימת החלק הסופי של choledochal, הפרעה לזרימה של הפרשות הלבלב וגרימת תהליך דלקתי אינטנסיבי בלבלב, עם עלייה בריכוז אנזימי העיכול בסרום ומתווכים דלקתיים1,2.
שתי תיאוריות שונות הוצעו כדי להסביר את ההתפתחות של דלקת לבלב חריפה (AP). תיאוריית "הערוץ המשותף" מציעה כי האבנים הנמצאות בכיס המרה חוסמות את מערכת צינור המרה הנפוצה הדיסטלית, ומאפשרות להפרשת מרה לזרום מדרדרות לתוך צינור הלבלב. התיאוריה השנייה (תיאוריית "חסימת צינור") מציעה כי חסימת צינור הלבלב על ידי אבני מרה עודפות גורמת לחסימה בזרימת הפרשת הלבלב לתריסריון, וגורמת ליתר לחץ דם דביק3. למרות המנגנונים המובילים דלקת לבלב מרה חריפה אינם מובנים במלואם, התוצאה היא תהליך דלקתי אינטנסיבי. התפרצות אנזימי עיכול ועיכול עצמי בלבלב מובילים לשינויים היסטופתולוגיים, לעלייה בציטוקינים דלקתיים (IL-1β, IL-6, TNF-α) בנוזל אסיטי ובנסיוב, ולעלייה בחלבוני פאזה חריפים4,5,6.
דלקת לבלב חריפה חמורה היא מצב שראוי לתשומת לב קלינית בשל מעורבות של איברים מרובים וסיכון תמותה גבוה. מודלים בעלי חיים להתרבות של דלקת לבלב חריפה (AP) חשובים כמו אלה להסביר את המנגנונים הפתופיזיולוגיים של המחלה ולעזור ניטור האבולוציה של אירועים דלקתיים, החל מהשלבים הראשונים של המחלה. זה בדרך כלל לא אפשרי במרפאות2,7. בנוסף, גישה לרקמות הלבלב קלה במחקרים פרה-קליניים, לטובת ההבהרה של שינויים הקשורים לתנאים קליניים8 יחד עם האפשרות לעבוד עם מינים איזוגניים, ביטול משתנים לא רצויים, ושיקוף דמיון קליני עם התוצאות שנצפו במצב האנושי9.
מודלים מרה ולא מרה עבור אינדוקציה של דלקת לבלב חריפה בחולדות ומינים של עכברים נחקרו לעתים קרובות בספרות המדעית. שיטות אינדוקציה שאינן מרה כוללות מתן מינונים מגרה סופרמקימליים של סודהוג cholecystokinin או cerulein אנלוגי שלה10; ניהול של מינונים כמעט קטלניים של L-ארגנין; או ניהול של דיאטה כולין לקוי בתוספת אתionine11. למרות שיטות אלה קל להתרבות ולגרום דלקת הלבלב, הם אינם לשכפל את המנגנונים כי בתיאוריה לעורר AP (כלומר, ריפלוקס של הפרשת מרה לתוך צינור הלבלב). הטכניקה המטפלת במודל המרה מבוססת על עירוי מדרדר של חומצות מרה לתוך צינור הלבלב ודורש חוקרים מאומנים היטב לבצע פרוטוקול זה. מספר מחקרים פורסמו בשיטה זו בחולדות (ככל הנראה מסיבות טכניות מאז ניסויים אלה כרוכים בהליכים כירורגיים)12,13. עם זאת, הגישה בעכברים עשויה להציע תוצאות מעניינות יותר בחקר דלקת3,14,15. במחקר זה, אנו מראים רשימה של השלבים שיש לעקוב אחר להתרבות של דלקת לבלב חריפה חמורה על ידי עירוי של נתרן taurocholate ב C57BL / 6 עכברים מרדים.
עבור עבודות הכרוכות בצורך בניסויים בנוגדנים וניתוח של ביטוי הגן והחלבון, השימוש בעכברים עדיף בגלל הארסנל הגדול יותר של חומרים עבור בעלי חיים אלה והאפשרות לעבוד עם מינים איזוגניים ונוקאאוט, בין היתר שניתן להשתמש בהם רלוונטיים למחקרים16. עכברים C57BL/6 הוא זן לידה של עכברים שפותח במקור לחקר פעילות אנטי-טמור ואימונולוגיה. זן זה מועדף יותר ויותר על ידי החוקרים על היותו איזוגני, ומאפשר רבייה גדולה יותר של תוצאות, אשר עשוי לרמוז על שימוש במספר קטן יותר של בעלי חיים בניסוי ופחות שונות של תוצאות בין אותה קבוצה17,18.
Perides et al. (2010)14 פרסם פרוטוקול עבור אינדוקציה AP בעכברים על ידי עירוי נתרן taurocholate. כאן אנו מעדכנים את המודל הזה בריכוז נתרן טאורוכולאט גבוה יותר (2.5%) בעכברים C57BL/6, עם נפח ומהירות מוגדרים של עירוי (איור 1). הרמה המקסימלית של חומרה מגיעה בתוך 12 שעות של אינדוקציה בעכברים. העלאת הריכוז של IL-6 הן בסרום והן בחלל הצפק מתואמת עם ההתקדמות של AP. עם תרגול, הזמן המשוער הכולל מן אינדוקציה של הרדמה עד השלמת עירוי, הוא 25 דקות לכל חיה. זה חיוני כי חוקר מיומן מבצע את הניסוי הזה. כדי להבטיח כי הפתרון מוזרק כראוי לתוך צינור המרה המשותף, לבצע מספר אימונים פיילוט באמצעות מתילן כחול במקום נתרן taurocholate.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.4 mm needle</td>
			<td>INTRAG MEDICAL TECH</td>
			<td>90183210</td>
			<td>30G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;0.54 mm polyethylene tube</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>730010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam block</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>masking tape for mounting the mouse</td>
			<td>Missner</td>
			<td>1236</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion pump scheduled to 10&#181;L / min.</td>
			<td>Havard aparatus-Peristaltic Pump Series</td>
			<td>MA1 55-7766</td>
			<td>&#160;Model 66 Small Peristaltic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors and forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antiseptic providine iodine</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>12086OR</td>
			<td>antisepsis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>459836</td>
			<td>Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Lord</td>
			<td>bdk9a1ghk6</td>
			<td>For trichotomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium taurocholate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>86339- 1G</td>
			<td>CAS NUMBER- 345909-26-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microvessel clip</td>
			<td>Medicon Surgical</td>
			<td>56.87.35</td>
			<td>Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 -&#160;40 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 prolene</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>5162</td>
			<td>Suture line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL</td>
			<td>Crist&#225;lia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xilazine 2%</td>
			<td>Syntec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline)</td>
			<td>Farmace</td>
			<td>105851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemicals</td>
			<td>M5528</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MILLIPLEX&#160;MAP&#160;Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>MCYTOMAG-70K</td>
			<td>Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amylase Assay</td>
			<td>Labtest</td>
			<td>11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desmarres retractor 13-mm 
			width</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-6672</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice

אינדוקציה דלקת לבלב חריפה מרה על ידי עירוי נתרן taurocholate כבר בשימוש נרחב על ידי הקהילה המדעית בשל ייצוג של המצב הקליני האנושי רבייה של אירועים דלקתיים המתאימים לתחלת דלקת הלבלב המרה קלינית. ניתן להעריך את חומרת הנזק בלבלב על ידי מדידת הריכוז, המהירות והנפח של חומצת המרה המושרשת. מחקר זה מספק רשימת פעולות לביצוע מעודכנת של החומרים והשיטות המשמשים ברביית הפרוטוקול ומראה את התוצאות העיקריות ממודל דלקת הלבלב החריפה (AP). רוב הפרסומים הקודמים הגבילו את עצמם לשחזור מודל זה בחולדות. יישמנו שיטה זו בעכברים, המספקת יתרונות נוספים (כלומר, הזמינות של ארסנל של ריאגנטים ונוגדנים עבור בעלי חיים אלה יחד עם האפשרות לעבוד עם זנים מהונדסים גנטית של עכברים) שעשויים להיות רלוונטיים למחקר. עבור אינדוקציה דלקת לבלב חריפה בעכברים, אנו מציגים פרוטוקול שיטתי, עם מנה מוגדרת של 2.5% נתרן taurocholate במהירות עירוי 10 μL / min במשך 3 דקות C57BL / 6 עכברים שמגיע לרמה המקסימלית של חומרה בתוך 12 שעות של אינדוקציה ולהדגיש תוצאות עם תוצאות המאמתות את השיטה. עם תרגול וטכניקה, הזמן המשוער הכולל, מן האינדוקציה של הרדמה עד השלמת עירוי, הוא 25 דקות לכל חיה.

חומרת דלקת הלבלב קיבלה ציון בין 0-3 על פי סולם שמידט21 שבו אפס מתאים להיעדרות, 1 מתאים לנוכחות קלה (<25%), 2 מתאים לנוכחות מתונה (בין 25 ל -50%) ו -3 תואמת לנוכחות אינטנסיבית (> 50%) (טבלה 1). המדידות שבוצעו היו פעילות עמילאז פלזמה, בצקת הלבלב, תא acinar, פציעה / נמק, דלקת ?...

Watch this Scientific Journal Video about Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

מודלים של בעלי חיים לדלקת לבלב חריפה חמורה מאפשרים לחקור שינויים פתופיציולוגיים בשלב הראשוני, ומאפשרים התבוננות בהתפתחות של אירועים דלקתיים. כאן אנו מספקים פרוטוקול עבור אינדוקציה של דלקת לבלב מרה חריפה חמורה על ידי עירוי מדרדר של נתרן taurocholate לתוך צינור הלבלב של עכברי C57BL/6 מרדים.

נתרן Taurocholate המושרה חמור דלקת לבלב חריפה ב C57BL/6 עכברים

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

שיטה זו יכולה לשמש לשחזור האירועים הדלקתיים המתרחשים בדלקת לבלב מרה חריפה. ניתן ללמוד שינויים ברקמת הלבלב בשלביה המוקדמים, אשר בדרך כלל לא אפשרי במרפאה. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם כי זה מהיר וקל להתרבות עבור חוקר מאומן, והוא מציע תוצאות דומות דלקת לבלב חריפה בבני אדם.השיטה יכולה לשמש לחקר תגובות חיסוניות פרמקולוגיות של מולקולות סמים והתערבויות טיפוליות אחרות, שכן היא מאפשרת לחקור תאים דלקתיים בתיווך בלבלב ובאיברים סמוכים. בעת ניסיון פרוטוקול זה, איתור האיברים והקמת אזור cannulation הוא חיוני. לשנן את המיקום של האיברים ולתרגל את יישום ההזרקה הראשון באמצעות פתרון צבעוני כגון מתילן כחול.לאחר בדיקת עומק ההרדמה עם צביטת בוהן, לנקות את אזור הבטן של עכבר מורדם עם פתרון יוד פובידון 5%. באמצעות גוזם, להסיר שיער בין החזה והבטן התחתונה ולנקות אזור כירורגי של כשני סנטימטרים רבועים עם 70% אלכוהול. לשתק את החיה על הלוח הכירורגי ולהשתמש במספריים כדי לחתוך חמישה מילימטרים של העור אופקית על החלק העליון של הבטן וסנטימטר אחד מתחת לתהליך xiphoid.חזור על החתך על הצפק כדי לבצע את לפרוסטומיה עם חשיפה מינימלית של החלל. באמצעות מפסק, למשוך את הכבד לכיוון הראש בערך סנטימטר אחד מן המעי ולאתר את האזור של הלבלב ואת התריסריון. באמצעות מלקחיים, להרים את הכבד לכיוון ראש החיה.על ידי משיכה עדינה של החלק של המעי הדק, לתקן את שני הקצוות לרוחב עם תפיר פוליפרופילן 6-0 לתצוגה טובה יותר של החלק הדיסטלי של צינור המרה המשותף מדי. באמצעות קליפ כלי מיקרו, לאכום את צינור המרה המשותף הפרוקסימלי באופן זמני. לחשוף את האיבר מתוך חלל הבטן.ואז לעשות חסם זמני של צינור המרה המשותף דיסטלי עם 8-0 תפר. כדי לגשת לצינור המרה המשותף, לנקב את אזור periampullary, אשר מופיע כחלק לבנבן של קיר המעי הדק. עם מחט 0.4 מילימטר מחובר צינור פוליאתילן 0.54 מ"מ, להתחיל את משאבת עירוי עבור 2.5% נתרן taurocholate פתרון עירוי במהירות קבועה של 10 microliters לכל 10 גרם של משקל הגוף במשך שלוש דקות.לאחר עירוי, להסיר את קליפ כלי מיקרו, זמני 8-0 תפיל, ומחט ההזרקה מצינור מרת הלבלב. לתפירת הבטן עם 6-0 פוליפרופילן מונו-פסורנטי. הזמן בין לפרוסטומיה לתפר הסופי לא צריך להיות יותר מ -30 דקות.לאחר הניתוח, לשכן את בעלי החיים בקופסאות פוליאתילן מרופדים שבבי עץ ומים ומזון ad libitum. החזק בעדינות את החיה עם העור משך לאחור, קידום בלייה קלה של גלגל העין, ומקם את החיה עם העין פונה כלפי מעלה. להחדיר טיפה של משחת עיניים המכילה הרדמה מקומית בעין החיה.מקם את קצה צינור נימי בפינה המשיונית של העין והכנס אותו בעדינות מתחת לגלגל העין בזווית של כ 30 עד 45 מעלות. סובב את הצינור הנימי עד שזרימת הדם תתחיל. לאחר שהאוסף נגמר, ודא הומאוסטזיס על ידי שמירה על העפעפיים סגורים עם דחיסת אור.מאוחר יותר, באמצעות מחט 27 מד, להזריק ארבעה מיליליטר של PBS קר קרח לתוך חלל הצפק של העכבר. לאחר ההזרקה, לעסות בעדינות את הצפק במשך 10 שניות כדי להסיר תאים דבקים. באמצעות מספריים ופינצטה, לעשות חתך קטן של 0.5 ס"מ על העור הפנימי והשרירים כדי לחשוף את חלל הבטן.הכנס פיפטה נורה בצפק ולאסוף נוזלים רבים ככל האפשר, דואג לא לשאוף רקמת שומן. לאסוף חלק מהלבלב מאזור הראש לעיבוד נוסף. להפקיד את הנוזל שנאסף לתוך צינורות נשמר על קרח.ואז צנטריפוגה נוזל הצפק ב 250 פעמים G במשך חמש דקות ומלא את supernatant עבור מינון interleukin-6. כדי להשיג סרום, צנטריפוגה דגימות הדם שנאספו ב 700 פעמים G במשך 15 דקות ולמלא את supernatant עבור עמילאז ואינטרלוקין-6 מינון. ניתוח של רקמת הלבלב 12 שעות לאחר אינדוקציה של דלקת לבלב חריפה הראה דלקת אינטנסיבית באיבר המושפע בהשוואה לדגימות רקמה מקבוצת הזיוף.תוצאות דומות יוצגו על ידי בדיקה היסטולוגית לאחר הכתמת אאוזין המטוקסילין של דגימות רקמה מ מזויף ו APTA. ניתוח של סרום דם הציג עלייה משמעותית עמילאז בסרום וריכוז ציטוקינים אינטרלוקין-6 בקבוצת AP בהשוואה לקבוצת הזיוף. יחד עם זאת, ריכוז interleukin-6 היה גבוה באופן משמעותי בנוזל חלל הצפק בקבוצת AP.חומרת דלקת הלבלב במודל זה תלויה באופן יחסי בריכוז, בנפח ובלחץ של העירוי, ובזמן האינדוקציה החריפה של דלקת הלבלב. בעזרת טכניקה זו, ניתן ללמוד את ההשפעות של שטיפת צפק מתמשכת על דלקת לבלב חריפה חמורה.

sodium-taurocholate-induced-severe-acute-pancreatitis-in-c57bl6-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

3.7K Views.  University of São Paulo Medical School. This method can be used for reproducing the inflammatory events that occur in acute biliary pancreatitis. It is possible to study changes in pancreatic tissue in its early stages, which is generally not possible in the clinic. The main advantages of this technique are that it is quick and easy to reproduce for a trained researcher, and it offers similar outcomes to acute pancreatitis in humans.The method can be used to study pharmacological immune responses of drug molecules and other ...