Name: sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice
Uploaded: 2021-06-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Forfatterne takket være Post Graduation Program i Medical Clinic of University of São Paulo; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) og University of São Paulo Medical School (FMUSP).

Denne protokollen ble godkjent av Etikkkomiteen for bruk av dyr fra USP Medicine School, Num. Project: 1343/2019-CEUA: FMUSP. For denne protokollen ble C57BL/6 mus, i alderen 6 uker, som veide 20 ± 2 g brukt (n = 9/gruppe).
1. Laparotomi
<ol><li>Bedøv dyr med xylazin (10 mg/kg) og ketaminoppløsning (80 mg/kg), subkutant (0,1 ml/10 g kroppsvekt) ved hjelp av en 1 ml sprøyte og 13x0,45 mm nål 26G 1/2. Se etter tilstrekkelig anestesidybde ved å klemme tåen. Kontroller kroppstemperaturen ...

<ol>
	<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significantly+different+clinical+features+between+hypertriglyceridemia+and+biliary+acute+pancreatitis:+A+retrospective+study+of+730+patients+from+a+tertiary+center.">Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center.</a> BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).</li><li>Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+antioxidant+mechanisms+in+lung+during+experimental+pancreatitis+in+rats.">Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).</li><li>T, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraductal+infusion+of+taurocholate+followed+by+distal+common+bile+duct+ligation+leads+to+a+severe+necrotic+model+of+pancreatitis+in+mice.">Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 44 (3), (2015).</li><li>Botoi, G., Andercou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+17-prognostic+marker+of+severe+acute+pancreatitis.">Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis.</a> Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).</li><li>Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+IL-1beta,+IL-8,+and+IL-10+polymorphisms+and+risk+of+acute+pancreatitis.">Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis.</a> Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).</li><li>Feng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+peritoneal+lavage+with+ulinastatin+on+the+expression+of+NF-kappaB+and+TNF-alpha+in+multiple+organs+of+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).</li><li>Fang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sildenafil+on+inflammatory+injury+of+the+lung+in+sodium+taurocholate-induced+severe+acute+pancreatitis+rats.">Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats.</a> International Immunopharmacology. 80, (2020).</li><li>Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+acute+pancreatitis.">Experimental models of acute pancreatitis.</a> Post&#281;py Higieny i Medycyny Do&#347;wiadczalnej(Online). 69, 264-269 (2015).</li><li>Wan, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+experimental+animal+models+of+biliary+acute+pancreatitis+and+recent+advances+in+basic+research.">Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research.</a> HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).</li><li>Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretagogue+(Caerulein)+induced+pancreatitis+in+rodents.">Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).</li><li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+protects+against+L-arginine-induced+acute+necrotizing+pancreatitis+in+mice+by+enhancing+SIRT1-mediated+deacetylation+of+p53+and+heat+shock+factor+1.">Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1.</a> International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).</li><li>Ma, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+resveratrol+on+peritoneal+macrophages+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis.</a> Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).</li><li>Souza, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+effects+of+peritoneal+lavage+in+acute+pancreatitis.">Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis.</a> Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).</li><li>Perides, G., Acker, G. J. v., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct.">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).</li><li>Wittel, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taurocholate-induced+pancreatitis:+a+model+of+severe+necrotizing+pancreatitis+in+mice.">Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).</li><li>Tao, L., Reese, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+mouse+models+that+reflect+human+immune+responses.">Making mouse models that reflect human immune responses.</a> Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).</li><li>Vandamme, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+rodents+as+models+of+human+diseases.">Use of rodents as models of human diseases.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).</li><li>Song, H. K., Hwang, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+C57BL/6N+mice+on+the+variety+of+immunological+researches.">Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches.</a> Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).</li><li>Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -. V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition. (1), (2010).</li><li>Ray, A., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mouse+peritoneal+cavity+cells.">Isolation of mouse peritoneal cavity cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (35), e1488 (2010).</li><li>Schmidt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+better+model+of+acute+pancreatitis+for+evaluating+therapy.">A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.</a> Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).</li><li>Liu, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+improves+the+therapeutic+efficacy+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis.</a> International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).</li><li>Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+bile+acids+on+pancreatic+ductal+cells.">The effects of bile acids on pancreatic ductal cells.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).</li><li>Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+acute+pancreatitis:+impact+of+social+deprivation,+alcohol+consumption,+seasonal+and+demographic+factors.">The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors.</a> Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).</li><li>Lerch, M. M., Gorelick, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+acute+and+chronic+pancreatitis.">Models of acute and chronic pancreatitis.</a> Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).</li><li>Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immune-modulating+formula+comprising+whey+peptides+and+fermented+milk+improves+inflammation-related+remote+organ+injuries+in+diet-induced+acute+pancreatitis+in+mice.">An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice.</a> Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).</li><li>Kui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+methodolgy+of+L-Arginine-induced+acute+pancreatitis.">New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis.</a> PLoS One. 10 (2), 011758 (2015).</li><li>Xue, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternatively+activated+macrophages+promote+pancreatic+fibrosis+in+chronic+pancreatitis.">Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis.</a> Nature Communication. 6, 7158 (2015).</li><li>Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+in+inflammatory+and+malignant+diseases+of+the+pancreas.">Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas.</a> Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).</li><li>Rao, S. A., Kunte, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6:+An+early+predictive+marker+for+severity+of+acute+pancreatitis.">Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis.</a> Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).</li></ol>

Metoden for å indusere akutt pankreatitt ved retrograd natrium taurocholatinfusjon er allerede vist hos rotter22,23,24. Tre lignende verk, publisert i 2008, 2010 og 2015, fungerte som referanse for protokollen3,14,15. I dette arbeidet viser vi alle de kritiske trinnene for å reprodusere denne metoden i C57BL / 6 mus og noen muligheter...

Hos mennesker er tilstedeværelsen av gallestein den vanligste årsaken til pankreatitt på grunn av hindringen av den terminale delen av choledochal, forstyrrer strømmen av bukspyttkjertelsekretjoner og forårsaker en intens inflammatorisk prosess i bukspyttkjertelen, med en økning i konsentrasjonen av fordøyelsesenzymer i serumet og inflammatoriske mediatorer1,2.
To ulike teorier er foreslått for å forklare utviklingen av akutt pankreatitt (AP). Teorien om "felles kanal" antyder at steinene som er tilstede i galleblæren hindrer det distale vanlige gallekanalsystemet, slik at gallesekresjon kan strømme retrograd inn i bukspyttkjertelen. Den andre teorien (teorien om "kanalobstruksjon" antyder at hindringen av bukspyttkjertelkanalen ved overflødig gallestein forårsaker blokkering i strømmen av bukspyttkjertelsekresjon til tolvfingertarmen, forårsaker ductal hypertensjon3. Selv om mekanismene som fører til akutt gallepankreatitt ikke er fullt ut forstått, er utfallet en intens inflammatorisk prosess. Fordøyelsesenzymutbrudd og bukspyttkjertel selvfordøyelse fører til histopatologiske endringer, en økning i inflammatoriske cytokiner (IL-1β, IL-6, TNF-α) i ascitisk væske og serum, og en økning i akutte faseproteiner4,5,6.
Alvorlig akutt pankreatitt er en tilstand som fortjener klinisk oppmerksomhet på grunn av involvering av flere organer og høy dødelighetsrisiko. Dyremodeller for reproduksjon av akutt pankreatitt (AP) er viktige da disse forklarer sykdommens patofysiologiske mekanismer og hjelper til med å overvåke utviklingen av inflammatoriske hendelser, fra de første stadiene av sykdommen. Dette er vanligvis ikke mulig i klinikkene2,7. I tillegg er tilgang til bukspyttkjertelvev lett i prekliniske studier, favoriserer belysningen av endringer knyttet til kliniske forhold8 sammen med muligheten for å jobbe med isogene arter, eliminere uønskede variabler og speile klinisk likhet med resultatene observert i den menneskelige tilstanden9.
Biliære og ikke-biliære modeller for induksjon av akutt pankreatitt hos rotter og musarter har blitt studert ofte i den vitenskapelige litteraturen. Ikke-biliære induksjonsmetoder inkluderer administrering av supramaksimale stimulerende doser av cholecystokinin secretagogue eller dens analoge cerulein10; administrering av nesten dødelige doser av L-arginin; eller administrering av et kolinmangel diett supplert med etionin11. Selv om disse metodene er enkle å reprodusere og resulterer i bukspyttkjertelbetennelse, replikerer de ikke mekanismene som i teorien utløser AP (dvs. refluks av gallesekresjon i bukspyttkjertelen). Teknikken som adresserer biliærmodellen er basert på retrograd infusjon av gallsyrer i bukspyttkjertelen og krever godt trente forskere for å utføre denne protokollen. Flere studier har blitt publisert ved hjelp av denne metoden hos rotter (tilsynelatende av tekniske årsaker siden disse forsøkene involverer kirurgiske prosedyrer)12,13. Imidlertid kan tilnærmingen hos mus gi mer interessante resultater i studiet av betennelse3,14,15. I denne studien vil vi vise en sjekkliste over trinnene som skal følges for reproduksjon av alvorlig akutt pankreatitt ved infusjon av natrium taurocholat i C57BL/6 bedøvede mus.
For arbeider som involverer behovet for eksperimenter med antistoffer og analyse av gen- og proteinuttrykket, er bruk av mus å foretrekke på grunn av det større arsenalet av materialer for disse dyrene og muligheten for å jobbe med isogene og knockout-arter, blant annet som kan brukes relevante for studier16. Mus C57BL/6 er en innavlet stamme av mus som opprinnelig ble utviklet for studiet av antitumoraktivitet og immunologi. Denne stammen blir i økende grad foretrukket av forskere for å være isogene, noe som gir større reproduserbarhet av resultater, noe som kan innebære bruk av et mindre antall dyr i et eksperiment og mindre variasjon av resultater mellom samme gruppe 17,18.
Perides et al. (2010)14 publiserte en protokoll for AP-induksjon hos mus ved natriumtaurocholatinfusjon. Her oppdaterer vi denne modellen ved hjelp av en høyere natriumtaurocholatkonsentrasjon (2,5 %) hos C57BL/6-mus, med et definert volum og infusjonshastighet (figur 1). Det maksimale alvorlighetsgraden nås innen 12 timer etter induksjon hos mus. Forhøyningen av konsentrasjonen av IL-6 både i serumet og i bukhulen er korrelert med utviklingen av AP. Med praksis er den totale estimerte tiden fra induksjon av anestesi til ferdigstillelse av infusjonen, 25 min per dyr. Det er viktig at en utdannet forsker utfører dette eksperimentet. For å sikre at oppløsningen injiseres riktig i den vanlige gallekanalen, utfør flere pilottreningsøkter ved hjelp av metylenblå i stedet for natrium taurocholat.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.4 mm needle</td>
			<td>INTRAG MEDICAL TECH</td>
			<td>90183210</td>
			<td>30G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;0.54 mm polyethylene tube</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>730010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam block</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>masking tape for mounting the mouse</td>
			<td>Missner</td>
			<td>1236</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion pump scheduled to 10&#181;L / min.</td>
			<td>Havard aparatus-Peristaltic Pump Series</td>
			<td>MA1 55-7766</td>
			<td>&#160;Model 66 Small Peristaltic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors and forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antiseptic providine iodine</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>12086OR</td>
			<td>antisepsis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>459836</td>
			<td>Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Lord</td>
			<td>bdk9a1ghk6</td>
			<td>For trichotomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium taurocholate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>86339- 1G</td>
			<td>CAS NUMBER- 345909-26-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microvessel clip</td>
			<td>Medicon Surgical</td>
			<td>56.87.35</td>
			<td>Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 -&#160;40 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 prolene</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>5162</td>
			<td>Suture line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL</td>
			<td>Crist&#225;lia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xilazine 2%</td>
			<td>Syntec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline)</td>
			<td>Farmace</td>
			<td>105851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemicals</td>
			<td>M5528</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MILLIPLEX&#160;MAP&#160;Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>MCYTOMAG-70K</td>
			<td>Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amylase Assay</td>
			<td>Labtest</td>
			<td>11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desmarres retractor 13-mm 
			width</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-6672</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice

Biliær akutt pankreatittinduksjon ved natrium taurocholatinfusjon har blitt mye brukt av det vitenskapelige samfunnet på grunn av representasjon av den menneskelige kliniske tilstanden og reproduksjon av inflammatoriske hendelser som tilsvarer utbruddet av klinisk biliær pankreatitt. Alvorlighetsgraden av bukspyttkjertelskader kan vurderes ved å måle konsentrasjonen, hastigheten og volumet av den infunderte gallesyren. Denne studien gir en oppdatert sjekkliste over materialene og metodene som brukes i protokollgjengivelsen og viser hovedresultatene fra denne akutte pankreatitt (AP) modellen. De fleste av de tidligere publikasjonene har begrenset seg til å reprodusere denne modellen hos rotter. Vi har brukt denne metoden hos mus, noe som gir ytterligere fordeler (dvs. tilgjengeligheten av et arsenal av reagenser og antistoffer for disse dyrene sammen med muligheten for å jobbe med genetisk modifiserte stammer av mus) som kan være relevante for studien. For akutt pankreatittinduksjon hos mus presenterer vi en systematisk protokoll, med en definert dose på 2,5% natrium taurocholat ved en infusjonshastighet 10 μL / min i 3 min i C57BL / 6 mus som når sitt maksimale nivå av alvorlighetsgrad innen 12 timer induksjon og fremhever resultater med resultater som validerer metoden. Med praksis og teknikk er den totale estimerte tiden, fra induksjon av anestesi til ferdigstillelse av infusjonen, 25 min per dyr.

Pankreatitt alvorlighetsgrad ble scoret mellom 0-3 i henhold til Schmidts skala21 hvor null tilsvarer fraværet, 1 tilsvarer en mild tilstedeværelse (<25%), 2 tilsvarer en moderat tilstedeværelse (mellom 25 og 50%) og 3 tilsvarer en intens tilstedeværelse (> 50%) (Tabell 1). Målingene som ble utført var plasma amylase aktivitet, bukspyttkjertelen ødem, acinar celle, skade / nekrose, bukspyttkjertel betennelse (ved histologi analyse av H &E-fa...

Watch this Scientific Journal Video about Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

Dyremodeller for alvorlig akutt pankreatitt muliggjør studiet av patofysiologiske endringer i utgangspunktet, noe som letter observasjon av utviklingen av inflammatoriske hendelser. Her gir vi en protokoll for induksjon av alvorlig akutt gallepankreatitt ved retrograd infusjon av natrium taurocholat i bukspyttkjertelen av bedøvede C57BL / 6 mus.

Natrium taurocholat indusert alvorlig akutt pankreatitt hos C57BL/6 mus

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

Denne metoden kan brukes til å reprodusere de inflammatoriske hendelsene som oppstår ved akutt gallepankreatitt. Det er mulig å studere endringer i bukspyttkjertelvev i sine tidlige stadier, noe som generelt ikke er mulig i klinikken. De viktigste fordelene med denne teknikken er at den er rask og enkel å reprodusere for en utdannet forsker, og den tilbyr lignende resultater til akutt pankreatitt hos mennesker.Metoden kan brukes til å studere farmakologiske immunresponser av legemiddelmolekyler og andre terapeutiske inngrep, da det tillater studiet av inflammatoriske medieringsceller i bukspyttkjertelen og tilstøtende organer. Når du prøver denne protokollen, er det avgjørende å finne organene og etablere kannasjonsområdet. Husk plasseringen av organene og utøv injeksjonsapplikasjonen først ved hjelp av en farget løsning som metylenblå.Etter å ha sjekket dybden av anestesi med en tåklemme, rengjør bukområdet til en bedøvet mus med en 5% povidon jodoppløsning. Bruk en trimmer, fjern håret mellom brystet og underlivet og rengjør et omtrent to kvadratcentimeter kirurgisk område med 70% alkohol. Immobiliser dyret på operasjonsbrettet og bruk saks til å kutte fem millimeter av huden horisontalt på den øvre delen av magen og en centimeter under xiphoid-prosessen.Gjenta kuttet på bukhinnen for å utføre laparotomi med minimal eksponering av hulrommet. Ved hjelp av en retraktor trekker du leveren mot hodet på omtrent en centimeter fra tarmen og finner bukspyttkjertelen og tolvfingertarmen. Bruk tang, løft leveren mot dyrehodet.Ved å forsiktig trekke den delen av tynntarmen, fest de to laterale endene med en 6-0 polypropylen sutur for bedre visning av den distale delen av den vanlige gallekanalen også. Bruk en mikrokarklemme til å okkludere den proksimale vanlige gallekanalen midlertidig. Utsett orgelet ut av bukhulen.Lag deretter en midlertidig okklusjon av den distale vanlige gallekanalen med en 8-0 Sutur. For å få tilgang til den vanlige gallekanalen, punkter periampullærområdet, som vises som en hvitaktig del av tynntarmens vegg. Med en 0,4 millimeter nål koblet til et 0,54 millimeter polyetylenrør, start infusjonspumpen for 2,5% natriumtaurocholatoppløsningsinfusjon med en konstant hastighet på 10 mikroliter per 10 gram kroppsvekt i tre minutter.Etter infusjonen fjerner du mikrobeholderklemmen, den midlertidige 8-0 og injeksjonsnålen fra gallekanalen i bukspyttkjertelen. Suturer magen med en 6-0 nonabsorbent monofilament polypropylen sutur. Tiden mellom laparotomi og slutt sutur bør ikke være mer enn 30 minutter.Etter operasjonen, hus dyrene i polyetylen bokser foret med trespon og vann og mat ad libitum. Hold forsiktig dyret med huden trukket tilbake, fremme et lite fremspring av øyebollet, og plasser dyret med øyet vendt oppover. Innpod en dråpe øyesalve som inneholder lokalbedøvelse i dyrets øye.Plasser enden av et kapillærrør i øyets medialhjørne og sett det forsiktig under øyebollet i en vinkel på ca. 30 til 45 grader. Roter kapillærrøret til blodstrømmen begynner. Når kolleksjonen er over, sørg for homeostase ved å holde øyelokkene lukket med lyskompresjon.Senere, ved hjelp av en 27 gauge nål, injiser fire milliliter iskald PBS i musens bukhule. Etter injeksjonen masserer du forsiktig bukhinnen i 10 sekunder for å fjerne festede celler. Bruk saks og pinsett, lag et lite kutt på 0,5 centimeter på den indre huden og muskulaturen for å eksponere bukhulen.Sett inn en pærepipette i bukhinnen og samle så mye væske som mulig, pass på at du ikke aspirerer fettvev. Samle en del av bukspyttkjertelen fra hodeområdet for videre behandling. Deponer den oppsamlede væsken i rør som holdes på is.Sentrifuger deretter peritonealvæsken ved 250 ganger G i fem minutter og lager supernatanten for interleukin-6 dosering. For å få serum, sentrifuger de innsamlede blodprøvene ved 700 ganger G i 15 minutter og lager supernatanten for amylase og interleukin-6 dosering. Analyse av bukspyttkjertelvev 12 timer etter induksjon av akutt pankreatitt viste intens betennelse i det berørte organet sammenlignet med vevsprøver fra skamgruppen.Lignende resultater ble representert ved histologisk undersøkelse etter hematoksylin eosinfarging av vevsprøver fra sham og APTA. Analyse av blodserum presenterte en betydelig økning i serum amylase og interleukin-6 cytokinkonsentrasjon i AP-gruppen sammenlignet med sham-gruppen. Samtidig var interleukin-6-konsentrasjonen betydelig høyere i bukhulevæske i AP-gruppen.Alvorlighetsgraden av pankreatitt i denne modellen er proporsjonalt avhengig av konsentrasjonen, volumet og trykket av infusjonen, og tidspunktet for akutt pankreatittinduksjon. Ved hjelp av denne teknikken kan effekten av kontinuerlig bukhinneskylling på alvorlig akutt pankreatitt studeres.

Research

JoVE Journal

Medicine

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

Carbon dioxide (CO2) along with oxygen (O2) share the role of being the most important gases in the human body. The measuring of expired CO2 at the mouth ...

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Iskemi-reperfusjon Modell av akutt nyreskade og Post Injury fibrose i Mus

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Akutt Brain Trauma i Mus fulgt av Langsgående To-foton Imaging

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

Den bm12 Induserbare Modell av systemisk lupus erythematosus (SLE) i C57BL / 6 Mus

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Murine distale Colostomy, en ny modell av avledning kolitt i C57BL/6 mus

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice

Sanntid press volum analyse av akutt hjerteinfarkt i mus

Acute myocardial infarction can lead to acute heart failure and cardiogenic shock. The evaluation of hemodynamics is critical for the evaluation of any ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Inducing akutt lungeskade i mus ved direkte Intratrakeal lipopolysakkarid drypping

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Acute Kidney Injury Model Induced by Cisplatin in Adult Zebrafish

Akutt nyreskademodell indusert av Cisplatin i voksen sebrafisk

Cisplatin is commonly used as chemotherapy. Although it has positive effects in cancer-treated individuals, cisplatin can easily accumulate in the kidney ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Ufrivillig bevaring hos pasienter med alvorlig ovarial dysfunksjon

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...