Name: sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice
Uploaded: 2021-06-28T13:00:00
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Os autores agradecem ao Programa de Pós-Graduação em Clínica Médica da Universidade de São Paulo; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (FMUSP).

Este protocolo foi aprovado pelo Comitê de Ética para o uso de animais da Faculdade de Medicina da USP, Num. Projeto: 1343/2019-CEUA: FMUSP. Para este protocolo, foram utilizados camundongos C57BL/6, com idade de 6 semanas, pesando 20 ± 2 g (n = 9/grupo).
1. Laparotomia
<ol><li>Anestesize animais com xilazina (10 mg/kg) e solução de cetamina (80 mg/kg), subcutânea (0,1 mL/10g de peso corporal) utilizando uma seringa de 1 mL e agulha de 13x0,45mm 26G 1/2. Verifique se há profundidade d...

<ol>
	<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significantly+different+clinical+features+between+hypertriglyceridemia+and+biliary+acute+pancreatitis:+A+retrospective+study+of+730+patients+from+a+tertiary+center.">Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center.</a> BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).</li><li>Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+antioxidant+mechanisms+in+lung+during+experimental+pancreatitis+in+rats.">Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).</li><li>T, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraductal+infusion+of+taurocholate+followed+by+distal+common+bile+duct+ligation+leads+to+a+severe+necrotic+model+of+pancreatitis+in+mice.">Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 44 (3), (2015).</li><li>Botoi, G., Andercou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+17-prognostic+marker+of+severe+acute+pancreatitis.">Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis.</a> Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).</li><li>Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+IL-1beta,+IL-8,+and+IL-10+polymorphisms+and+risk+of+acute+pancreatitis.">Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis.</a> Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).</li><li>Feng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+peritoneal+lavage+with+ulinastatin+on+the+expression+of+NF-kappaB+and+TNF-alpha+in+multiple+organs+of+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).</li><li>Fang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sildenafil+on+inflammatory+injury+of+the+lung+in+sodium+taurocholate-induced+severe+acute+pancreatitis+rats.">Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats.</a> International Immunopharmacology. 80, (2020).</li><li>Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+acute+pancreatitis.">Experimental models of acute pancreatitis.</a> Post&#281;py Higieny i Medycyny Do&#347;wiadczalnej(Online). 69, 264-269 (2015).</li><li>Wan, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+experimental+animal+models+of+biliary+acute+pancreatitis+and+recent+advances+in+basic+research.">Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research.</a> HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).</li><li>Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretagogue+(Caerulein)+induced+pancreatitis+in+rodents.">Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+effects+of+peritoneal+lavage+in+acute+pancreatitis.">Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis.</a> Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).</li><li>Perides, G., Acker, G. J. v., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct.">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).</li><li>Wittel, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taurocholate-induced+pancreatitis:+a+model+of+severe+necrotizing+pancreatitis+in+mice.">Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).</li><li>Tao, L., Reese, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+mouse+models+that+reflect+human+immune+responses.">Making mouse models that reflect human immune responses.</a> Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).</li><li>Vandamme, T. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+improves+the+therapeutic+efficacy+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis.</a> International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).</li><li>Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+bile+acids+on+pancreatic+ductal+cells.">The effects of bile acids on pancreatic ductal cells.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).</li><li>Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. 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M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+in+inflammatory+and+malignant+diseases+of+the+pancreas.">Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas.</a> Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).</li><li>Rao, S. A., Kunte, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6:+An+early+predictive+marker+for+severity+of+acute+pancreatitis.">Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis.</a> Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).</li></ol>

O método de indução de pancreatite aguda por infusão de taurocholate de sódio retrógrado já foi mostrado em ratos22,23,24. Três trabalhos semelhantes, publicados em 2008, 2010 e 2015, serviram de referência para o protocolo3,14,15. Neste trabalho, listamos todas as etapas críticas para a reprodução deste método em camundong...

Em humanos, a presença de cálculos biliares é a causa mais comum de pancreatite devido à obstrução da porção terminal do choledochal, interrompendo o fluxo de secreções pancreáticas e causando um intenso processo inflamatório no pâncreas, com aumento da concentração de enzimas digestivas no soro e mediadores inflamatórios1,2.
Duas teorias diferentes foram propostas para explicar o desenvolvimento de pancreatite aguda (AP). A teoria do "canal comum" sugere que as pedras presentes na vesícula biliar obstruem o sistema de ducto biliar comum distal, permitindo que a secreção biliar flua retrógrada para o ducto pancreático. A segunda teoria (a teoria da "obstrução do ducto") sugere que a obstrução do ducto pancreático por excesso de cálculos biliares causa um bloqueio no fluxo de secreção pancreática para o duodeno, causando hipertensão ductal3. Embora os mecanismos que levam à pancreatite biliar aguda não sejam totalmente compreendidos, o resultado é um processo inflamatório intenso. Erupção de enzima digestiva e auto-digestão do pâncreas levam a alterações histopatológicas, aumento de citocinas inflamatórias (IL-1β, IL-6, TNF-α) em fluido ascético e soro, e aumento de proteínas de fase aguda4,5,6.
A pancreatite aguda grave é uma condição que merece atenção clínica devido ao envolvimento de múltiplos órgãos e a um alto risco de mortalidade. Modelos animais para a reprodução de pancreatite aguda (AP) são importantes, pois explicam os mecanismos fisiodicosiológicos da doença e ajudam no acompanhamento da evolução dos eventos inflamatórios, a partir dos estágios iniciais da doença. Isso geralmente não é possível nas clínicas2,7. Além disso, o acesso a tecidos pancreáticos é fácil em estudos pré-clínicos, favorecendo a elucidação de alterações ligadas às condições clínicas8, juntamente com a possibilidade de trabalhar com espécies isogênicas, eliminando variáveis indesejáveis e espelhando a semelhança clínica com os desfechos observados na condição humana9.
Modelos biliares e não biliares para a indução de pancreatite aguda em espécies de ratos e camundongos têm sido frequentemente estudados na literatura científica. Os métodos não biliares de indução incluem a administração de doses estimulantes supramaximais da colecistocina secretagogue ou sua cerulein analógica10; administração de doses quase letais de L-arginina; ou administração de uma dieta deficiente de colina suplementada com ethionine11. Embora esses métodos sejam fáceis de reproduzir e resultem em inflamação pancreática, eles não replicam os mecanismos que, em teoria, desencadeiam AP (ou seja, o refluxo da secreção bile no ducto pancreático). A técnica que aborda o modelo biliar baseia-se na infusão retrógrada de ácidos biliares no ducto pancreático e requer pesquisadores bem treinados para realizar este protocolo. Vários estudos foram publicados utilizando esse método em ratos (aparentemente por razões técnicas, uma vez que esses experimentos envolvem procedimentos cirúrgicos)12,13. No entanto, a abordagem em camundongos pode oferecer resultados mais interessantes no estudo da inflamação3,14,15. Neste estudo, mostraremos uma lista dos passos a serem seguidos para a reprodução de pancreatite aguda grave por infusão de taurocolato de sódio em camundongos anestocás C57BL/6.
Para trabalhos que envolvem a necessidade de experimentos com anticorpos e análise da expressão genética e proteica, o uso de camundongos é preferível devido ao maior arsenal de materiais para esses animais e à possibilidade de trabalhar com espécies isogênicas e eliminatórias, entre outras que podem ser utilizadas relevantes para estudos16. Camundongos C57BL/6 é uma variedade de camundongos originalmente desenvolvida para o estudo da atividade antitumoral e imunologia. Essa cepa está cada vez mais sendo preferida pelos pesquisadores por ser isogênica, permitindo uma maior reprodutibilidade de resultados, o que pode implicar o uso de um número menor de animais em um experimento e menor variabilidade dos resultados entre o mesmo grupo17,18.
Perides et al. (2010)14 publicaram um protocolo para indução de AP em camundongos por infusão de taurochoola de sódio. Aqui atualizamos este modelo utilizando uma maior concentração de taurocholate de sódio (2,5%) em camundongos C57BL/6, com volume e velocidade definidos de infusão (Figura 1). O nível máximo de gravidade é alcançado dentro de 12 h de indução em camundongos. A elevação da concentração de IL-6 tanto no soro quanto na cavidade peritoneal está correlacionada com a progressão da AP. Com a prática, o tempo total estimado desde a indução da anestesia até a conclusão da infusão, é de 25 minutos por animal. É essencial que um pesquisador treinado conduza esse experimento. Para garantir que a solução seja injetada corretamente no ducto biliar comum, realize várias sessões de treinamento piloto usando azul de metileno em vez de taurocolato de sódio.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.4 mm needle</td>
			<td>INTRAG MEDICAL TECH</td>
			<td>90183210</td>
			<td>30G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;0.54 mm polyethylene tube</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>730010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam block</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>masking tape for mounting the mouse</td>
			<td>Missner</td>
			<td>1236</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion pump scheduled to 10&#181;L / min.</td>
			<td>Havard aparatus-Peristaltic Pump Series</td>
			<td>MA1 55-7766</td>
			<td>&#160;Model 66 Small Peristaltic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors and forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antiseptic providine iodine</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>12086OR</td>
			<td>antisepsis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>459836</td>
			<td>Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Lord</td>
			<td>bdk9a1ghk6</td>
			<td>For trichotomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium taurocholate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>86339- 1G</td>
			<td>CAS NUMBER- 345909-26-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microvessel clip</td>
			<td>Medicon Surgical</td>
			<td>56.87.35</td>
			<td>Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 -&#160;40 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 prolene</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>5162</td>
			<td>Suture line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL</td>
			<td>Crist&#225;lia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xilazine 2%</td>
			<td>Syntec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline)</td>
			<td>Farmace</td>
			<td>105851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemicals</td>
			<td>M5528</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MILLIPLEX&#160;MAP&#160;Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>MCYTOMAG-70K</td>
			<td>Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amylase Assay</td>
			<td>Labtest</td>
			<td>11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desmarres retractor 13-mm 
			width</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-6672</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice

A indução de pancreatite aguda biliar por infusão de taurocoolato de sódio tem sido amplamente utilizada pela comunidade científica devido à representação da condição clínica humana e à reprodução de eventos inflamatórios correspondentes ao aparecimento de pancreatite biliar clínica. A gravidade dos danos pancreáticos pode ser avaliada medindo a concentração, velocidade e volume do ácido biliar infundido. Este estudo fornece uma lista atualizada dos materiais e métodos utilizados na reprodução do protocolo e mostra os principais resultados deste modelo de pancreatite aguda (AP). A maioria das publicações anteriores limitou-se a reproduzir esse modelo em ratos. Aplicamos esse método em camundongos, o que proporciona vantagens adicionais (ou seja, a disponibilidade de um arsenal de reagentes e anticorpos para esses animais, juntamente com a possibilidade de trabalhar com cepas geneticamente modificadas de camundongos) que podem ser relevantes para o estudo. Para indução aguda de pancreatite em camundongos, apresentamos um protocolo sistemático, com uma dose definida de 2,5% de taurocolato de sódio a uma velocidade de infusão de 10 μL/min por 3 min em camundongos C57BL/6 que atinge seu nível máximo de gravidade dentro de 12 h de indução e destacam resultados com resultados que validam o método. Com a prática e a técnica, o tempo total estimado, desde a indução da anestesia até a conclusão da infusão, é de 25 minutos por animal.

A gravidade da pancreatite foi pontuada entre 0-3 de acordo com a escala de Schmidt21 , onde zero corresponde à ausência, 1 corresponde a uma presença leve (<25%), 2 corresponde a uma presença moderada (entre 25 e 50%) e 3 corresponde a uma presença intensa (> 50%) (Tabela 1). As medidas realizadas foram atividade de amilase plasmática, edema pancreático, célula acinar, lesão/necrose, inflamação pancreática (por análise histologia de s...

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Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

Modelos animais para pancreatite aguda grave permitem o estudo de alterações fisiodicosiológicas no estágio inicial, facilitando a observação da evolução dos eventos inflamatórios. Aqui fornecemos um protocolo para a indução de pancreatite biliar aguda grave por infusão retrógrada de taurocholate de sódio no ducto pancreático de camundongos C57BL/6 anestesiados.

Taurocholate de sódio induziu pancreatite aguda grave em C57BL/6 camundongos

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

Este método pode ser usado para reproduzir os eventos inflamatórios que ocorrem na pancreatite biliar aguda. É possível estudar alterações no tecido pancreático em seus estágios iniciais, o que geralmente não é possível na clínica. As principais vantagens dessa técnica são que ela é rápida e fácil de reproduzir para um pesquisador treinado, e oferece resultados semelhantes à pancreatite aguda em humanos.O método pode ser usado para estudar respostas imunes farmacológicas de moléculas de drogas e outras intervenções terapêuticas, pois permite o estudo de células inflamatórias mediadores no pâncreas e órgãos adjacentes. Ao tentar esse protocolo, localizar os órgãos e estabelecer a região de cannulação é crucial. Memorize a localização dos órgãos e exerça a aplicação da injeção primeiro usando uma solução colorida como azul metileno.Depois de verificar a profundidade da anestesia com uma pitada de dedo do dedo do dedo, limpe a área abdominal de um rato anestesiado com uma solução de iodo povidone de 5%. Usando um aparador, remova o cabelo entre o peito e o abdômen inferior e limpe uma área cirúrgica de aproximadamente dois centímetros quadrados com 70% de álcool. Imobilize o animal na placa cirúrgica e use uma tesoura para cortar cinco milímetros da pele horizontalmente na parte superior do abdômen e um centímetro abaixo do processo xifoide.Repita o corte no peritônio para realizar a laparotomia com exposição mínima da cavidade. Usando um retrátil, puxe o fígado em direção à cabeça a aproximadamente um centímetro do intestino e localize a região do pâncreas e do duodeno. Usando fórceps, levante o fígado em direção à cabeça do animal.Puxando suavemente a porção do intestino delgado, fixar as duas extremidades laterais com uma sutura de polipropileno 6-0 para uma melhor visão da porção distal do ducto biliar comum também. Usando um clipe de micro vaso, oclui temporariamente o ducto biliar comum proximal. Expor o órgão da cavidade abdominal.Em seguida, faça uma oclusão temporária do ducto biliar comum distal com um 8-0 sutura. Para acessar o ducto biliar comum, perfure a região periampulária, que aparece como uma parte esbranquiçada da parede do intestino delgado. Com uma agulha de 0,4 milímetros conectada a um tubo de polietileno de 0,54 milímetros, inicie a bomba de infusão para infusão de 2,5% de infusão de solução taurocholate de sódio a uma velocidade constante de 10 microliters por 10 gramas de peso corporal por três minutos.Após a infusão, remova o clipe do micro vaso, o 8-0 temporário sutura, ea agulha de injeção do ducto biliar pancreático. Sutura o abdômen com uma sutura de polipropileno monoboxileno nãoabsorbente 6-0. O tempo entre a laparotomia e a sutura final não deve ser superior a 30 minutos.Após a cirurgia, abriga os animais em caixas de polietileno forradas com aparas de madeira e água e ad libitum alimentar. Segure suavemente o animal com a pele puxada para trás, promovendo uma leve saliência do globo ocular, e posicione o animal com o olho voltado para cima. Incutir um gota de pomada ocular contendo anestésico local no olho do animal.Posicione a extremidade de um tubo capilar no canto medial do olho e insira-o suavemente sob o globo ocular em um ângulo de aproximadamente 30 a 45 graus. Gire o tubo capilar até que o fluxo sanguíneo comece. Uma vez que a coleção acabou, certifique-se de homeostase mantendo as pálpebras fechadas com compressão leve.Mais tarde, usando uma agulha calibre 27, injete quatro mililitros de PBS gelado na cavidade peritoneal do rato. Após a injeção, massageie suavemente o peritônio por 10 segundos para remover as células aderidas. Usando tesouras e pinças, faça um pequeno corte de 0,5 centímetros na pele interna e musculatura para expor a cavidade abdominal.Insira uma pipeta de bulbo no peritônio e colete o máximo de fluido possível, tomando cuidado para não aspirar tecido gorduroso. Recolhe uma parte do pâncreas da região principal para posterior processamento. Deposite o fluido coletado em tubos mantidos no gelo.Em seguida, centrifugar o fluido peritoneal a 250 vezes G por cinco minutos e estocar o supernatante para dosagem interleucina-6. Para obter soro, centrifugar as amostras de sangue coletadas a 700 vezes G durante 15 minutos e estocar o sobrenatante para amilase e dosagem interleucina-6. A análise do tecido pancreático 12 horas após a indução de pancreatite aguda mostrou inflamação intensa no órgão afetado quando comparada com amostras de tecido do grupo sham.Resultados semelhantes foram representados por exame histológico após a coloração de eosina de hematoxilina de amostras de tecido de sham e APTA. A análise do soro sanguíneo apresentou um aumento significativo na concentração de amilase sérico e interleucina-6 no grupo AP em comparação com o grupo sham. Ao mesmo tempo, a concentração interleucina-6 foi significativamente maior no fluido de cavidade peritoneal no grupo AP.A gravidade da pancreatite neste modelo depende proporcionalmente da concentração, do volume e da pressão da infusão e do tempo de indução aguda da pancreatite. Com a ajuda dessa técnica, podem ser estudados os efeitos da lavagem peritoneal contínua na pancreatite aguda grave.

Research

JoVE Journal

Medicine

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

CO expirado 2 Medição em pacientes entubados com respiração espontânea ou do Departamento de Emergência

Carbon dioxide (CO2) along with oxygen (O2) share the role of being the most important gases in the human body. The measuring of expired CO2 at the mouth ...

Medicina

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Ventilação a pressão controlada para induzir lesão pulmonar aguda em ratos

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Isquemia-reperfusão modelo de lesão renal aguda e Pós Lesão fibrose em camundongos

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Aguda Cérebro Trauma em camundongos seguiu por Longitudinal dois fótons de imagem

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

O Inducible Modelo BM12 de Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) em camundongos C57BL / 6

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Murino colostomia Distal, um novo modelo de colite de diversão em camundongos C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice

Análise em tempo real de pressão-volume de infarto agudo do miocárdio em ratos

Acute myocardial infarction can lead to acute heart failure and cardiogenic shock. The evaluation of hemodynamics is critical for the evaluation of any ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Induzindo lesão pulmonar aguda em camundongos por instilação de lipopolissacárido intratraqueal direto

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Acute Kidney Injury Model Induced by Cisplatin in Adult Zebrafish

Modelo de lesão renal aguda induzida por cisplatina em zebrafish adulto

Cisplatin is commonly used as chemotherapy. Although it has positive effects in cancer-treated individuals, cisplatin can easily accumulate in the kidney ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Preservação da fertilidade em pacientes com disfunção ovariana grave

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...