Name: sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice
Uploaded: 2021-06-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Авторы благодарят программу последипломного образования в медицинской клинике Университета Сан-Паулу; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) и Медицинская школа Университета Сан-Паулу (FMUSP).

Этот протокол был одобрен Комитетом по этике использования животных Медицинской школы USP, Num. Проект: 1343/2019-CEUA: FMUSP. Для этого протокола использовали мышей C57BL/6 в возрасте 6 недель с массой тела 20 ± 2 г (n = 9/группа).
1. Лапаротомия
<ol><li>Обезболивать животных ксилазином (10 мг/кг) и...

<ol>
	<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significantly+different+clinical+features+between+hypertriglyceridemia+and+biliary+acute+pancreatitis:+A+retrospective+study+of+730+patients+from+a+tertiary+center.">Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center.</a> BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).</li><li>Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+antioxidant+mechanisms+in+lung+during+experimental+pancreatitis+in+rats.">Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).</li><li>T, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraductal+infusion+of+taurocholate+followed+by+distal+common+bile+duct+ligation+leads+to+a+severe+necrotic+model+of+pancreatitis+in+mice.">Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 44 (3), (2015).</li><li>Botoi, G., Andercou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+17-prognostic+marker+of+severe+acute+pancreatitis.">Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis.</a> Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).</li><li>Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+IL-1beta,+IL-8,+and+IL-10+polymorphisms+and+risk+of+acute+pancreatitis.">Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis.</a> Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).</li><li>Feng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+peritoneal+lavage+with+ulinastatin+on+the+expression+of+NF-kappaB+and+TNF-alpha+in+multiple+organs+of+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).</li><li>Fang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sildenafil+on+inflammatory+injury+of+the+lung+in+sodium+taurocholate-induced+severe+acute+pancreatitis+rats.">Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats.</a> International Immunopharmacology. 80, (2020).</li><li>Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+acute+pancreatitis.">Experimental models of acute pancreatitis.</a> Post&#281;py Higieny i Medycyny Do&#347;wiadczalnej(Online). 69, 264-269 (2015).</li><li>Wan, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+experimental+animal+models+of+biliary+acute+pancreatitis+and+recent+advances+in+basic+research.">Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research.</a> HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).</li><li>Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretagogue+(Caerulein)+induced+pancreatitis+in+rodents.">Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).</li><li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+protects+against+L-arginine-induced+acute+necrotizing+pancreatitis+in+mice+by+enhancing+SIRT1-mediated+deacetylation+of+p53+and+heat+shock+factor+1.">Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1.</a> International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).</li><li>Ma, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+resveratrol+on+peritoneal+macrophages+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis.</a> Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).</li><li>Souza, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+effects+of+peritoneal+lavage+in+acute+pancreatitis.">Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis.</a> Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).</li><li>Perides, G., Acker, G. J. v., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct.">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).</li><li>Wittel, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taurocholate-induced+pancreatitis:+a+model+of+severe+necrotizing+pancreatitis+in+mice.">Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).</li><li>Tao, L., Reese, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+mouse+models+that+reflect+human+immune+responses.">Making mouse models that reflect human immune responses.</a> Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).</li><li>Vandamme, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+rodents+as+models+of+human+diseases.">Use of rodents as models of human diseases.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).</li><li>Song, H. K., Hwang, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+C57BL/6N+mice+on+the+variety+of+immunological+researches.">Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches.</a> Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).</li><li>Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -. V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition. (1), (2010).</li><li>Ray, A., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mouse+peritoneal+cavity+cells.">Isolation of mouse peritoneal cavity cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (35), e1488 (2010).</li><li>Schmidt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+better+model+of+acute+pancreatitis+for+evaluating+therapy.">A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.</a> Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).</li><li>Liu, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+improves+the+therapeutic+efficacy+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis.</a> International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).</li><li>Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+bile+acids+on+pancreatic+ductal+cells.">The effects of bile acids on pancreatic ductal cells.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).</li><li>Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+acute+pancreatitis:+impact+of+social+deprivation,+alcohol+consumption,+seasonal+and+demographic+factors.">The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors.</a> Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).</li><li>Lerch, M. M., Gorelick, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+acute+and+chronic+pancreatitis.">Models of acute and chronic pancreatitis.</a> Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).</li><li>Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immune-modulating+formula+comprising+whey+peptides+and+fermented+milk+improves+inflammation-related+remote+organ+injuries+in+diet-induced+acute+pancreatitis+in+mice.">An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice.</a> Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).</li><li>Kui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+methodolgy+of+L-Arginine-induced+acute+pancreatitis.">New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis.</a> PLoS One. 10 (2), 011758 (2015).</li><li>Xue, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternatively+activated+macrophages+promote+pancreatic+fibrosis+in+chronic+pancreatitis.">Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis.</a> Nature Communication. 6, 7158 (2015).</li><li>Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+in+inflammatory+and+malignant+diseases+of+the+pancreas.">Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas.</a> Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).</li><li>Rao, S. A., Kunte, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6:+An+early+predictive+marker+for+severity+of+acute+pancreatitis.">Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis.</a> Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).</li></ol>

Способ индуцирования острого панкреатита ретроградной инфузией таурохолата натрия уже показан у крыс22,23,24. Три подобные работы, опубликованные в 2008, 2010 и 2015 годах, послужили справочным материалом для протокола3,14,15.<su...

У человека наличие желчных камней является наиболее частой причиной панкреатита из-за непроходимости терминального участка холедохала, прерывая течение выделений поджелудочной железы и вызывая интенсивный воспалительный процесс в поджелудочной железе, с повышением концентрации пищеварительных ферментов в сыворотке крови и медиаторов воспаления1,2.
Для объяснения развития острого панкреатита (АП) были предложены две различные теории. Теория «общего канала» предполагает, что камни, присутствующие в желчном пузыре, препятствуют дистальной системе общих желчных протоков, позволяя секреции желчи течь ретроградно в проток поджелудочной железы. Вторая теория (теория «обструкции протоков») предполагает, что обструкция протока поджелудочной железы избытком желчных камней вызывает закупорку потока секреции поджелудочной железы в двенадцатиперстную кишку, вызывая протоковую гипертензию3. Хотя механизмы, приводящие к острому билиарному панкреатиту, до конца не изучены, исходом является интенсивный воспалительный процесс. Извержение пищеварительного фермента и самопереваривание поджелудочной железы приводят к гистопатологическим изменениям, увеличению воспалительных цитокинов (IL-1β, IL-6, TNF-α) в асцитической жидкости и сыворотке крови, увеличению белков острой фазы4,5,6.
Тяжелый острый панкреатит – это состояние, которое заслуживает клинического внимания из-за вовлечения нескольких органов и высокого риска смертности. Животные модели для размножения острого панкреатита (АП) важны, поскольку они объясняют патофизиологические механизмы заболевания и помогают в мониторинге эволюции воспалительных событий, начиная с начальных стадий заболевания. Обычно это невозможно в клиниках2,7. Кроме того, доступ к тканям поджелудочной железы прост в доклинических исследованиях, что способствует выяснению изменений, связанных с клиническими условиями8, наряду с возможностью работы с изогенными видами, устранения нежелательных переменных и отражения клинического сходства с результатами, наблюдаемыми в человеческом состоянии9.
Билиарные и небилиарные модели индукции острого панкреатита у видов крыс и мышей часто изучались в научной литературе. Небилиарные методы индукции включают введение супрамаксимальных стимулирующих доз холецистокинина секретагога или его аналога церулеина10; введение практически летальных доз L-аргинина; или введение диеты с дефицитом холина, дополненной этионином11. Хотя эти методы легко воспроизвести и привести к воспалению поджелудочной железы, они не воспроизводят механизмы, которые теоретически запускают АП (то есть рефлюкс секреции желчи в проток поджелудочной железы). Метод, который обращается к билиарной модели, основан на ретроградной инфузии желчных кислот в проток поджелудочной железы и требует хорошо подготовленных исследователей для выполнения этого протокола. Было опубликовано несколько исследований с использованием этого метода на крысах (по-видимому, по техническим причинам, поскольку эти эксперименты включают хирургические процедуры)12,13. Тем не менее, подход на мышах может предложить более интересные результаты в исследовании воспаления3,14,15. В этом исследовании мы покажем контрольный список шагов, которые необходимо соблюдать для размножения тяжелого острого панкреатита путем инфузии таурохолата натрия у обезболенных мышей C57BL/6.
Для работ, которые предполагают необходимость экспериментов с антителами и анализа экспрессии гена и белка, использование мышей предпочтительнее из-за большего арсенала материалов для этих животных и возможности работы с изогенными и нокаутирующими видами, среди прочих, которые могут быть использованы в отношении исследований16. Мыши C57BL/6 — инбредный штамм мышей, первоначально разработанный для изучения противоопухолевой активности и иммунологии. Этот штамм все чаще предпочитается исследователями за то, что он изогенен, что обеспечивает большую воспроизводимость результатов, что может подразумевать использование меньшего количества животных в эксперименте и меньшую изменчивость результатов между одной и той же группой17,18.
Perides et al. (2010)14 опубликовали протокол индукции АП у мышей путем инфузии таурохолата натрия. Здесь мы обновляем эту модель, используя более высокую концентрацию таурохолата натрия (2,5%) у мышей C57BL/6 с определенным объемом и скоростью инфузии (рисунок 1). Максимальный уровень тяжести достигается в течение 12 ч после индукции у мышей. Повышение концентрации IL-6 как в сыворотке крови, так и в брюшной полости коррелирует с прогрессированием АП. При практике общее расчетное время от индукции анестезии до завершения инфузии, составляет 25 мин на животное. Важно, чтобы этот эксперимент проводил обученный исследователь. Чтобы убедиться, что раствор правильно введен в общий желчный проток, выполните несколько пилотных тренировок с использованием метиленового синего вместо таурохолата натрия.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.4 mm needle</td>
			<td>INTRAG MEDICAL TECH</td>
			<td>90183210</td>
			<td>30G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;0.54 mm polyethylene tube</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>730010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam block</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>masking tape for mounting the mouse</td>
			<td>Missner</td>
			<td>1236</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion pump scheduled to 10&#181;L / min.</td>
			<td>Havard aparatus-Peristaltic Pump Series</td>
			<td>MA1 55-7766</td>
			<td>&#160;Model 66 Small Peristaltic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors and forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antiseptic providine iodine</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>12086OR</td>
			<td>antisepsis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>459836</td>
			<td>Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Lord</td>
			<td>bdk9a1ghk6</td>
			<td>For trichotomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium taurocholate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>86339- 1G</td>
			<td>CAS NUMBER- 345909-26-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microvessel clip</td>
			<td>Medicon Surgical</td>
			<td>56.87.35</td>
			<td>Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 -&#160;40 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 prolene</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>5162</td>
			<td>Suture line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL</td>
			<td>Crist&#225;lia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xilazine 2%</td>
			<td>Syntec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline)</td>
			<td>Farmace</td>
			<td>105851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemicals</td>
			<td>M5528</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MILLIPLEX&#160;MAP&#160;Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>MCYTOMAG-70K</td>
			<td>Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amylase Assay</td>
			<td>Labtest</td>
			<td>11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desmarres retractor 13-mm 
			width</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-6672</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice

Индукция билиарного острого панкреатита путем инфузии таурохолата натрия широко используется научным сообществом благодаря представлению клинического состояния человека и воспроизведению воспалительных событий, соответствующих наступлению клинического билиарного панкреатита. Тяжесть повреждения поджелудочной железы может быть оценена путем измерения концентрации, скорости и объема введенной желчной кислоты. Это исследование предоставляет обновленный контрольный список материалов и методов, используемых в воспроизведении протокола, и показывает основные результаты этой модели острого панкреатита (АП). Большинство предыдущих публикаций ограничились воспроизведением этой модели на крысах. Мы применили этот метод на мышах, что дает дополнительные преимущества (т.е. наличие арсенала реагентов и антител для этих животных наряду с возможностью работы с генетически модифицированными штаммами мышей), которые могут иметь отношение к исследованию. Для индукции острого панкреатита у мышей мы представляем систематический протокол с определенной дозой 2,5% таурохолата натрия со скоростью инфузии 10 мкл / мин в течение 3 мин у мышей C57BL / 6, которая достигает максимального уровня тяжести в течение 12 ч после индукции и выделяет результаты с результатами, которые подтверждают метод. При практике и технике общее расчетное время, от индукции анестезии до завершения инфузии, составляет 25 минут на животное.

Тяжесть панкреатита была оценена между 0-3 по шкале Шмидта21, где ноль соответствует отсутствию, 1 соответствует мягкому присутствию (<25%), 2 соответствует умеренному присутствию (от 25 до 50%) и 3 соответствует интенсивному присутствию (> 50%) (таблица 1). В?...

Watch this Scientific Journal Video about Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

Животные модели тяжелого острого панкреатита позволяют изучать патофизиологические изменения на начальной стадии, облегчая наблюдение за эволюцией воспалительных явлений. Здесь мы приводим протокол индукции тяжелого острого билиарного панкреатита ретроградной инфузией таурохолата натрия в проток поджелудочной железы анестезированных мышей C57BL/6.

Вызванный таурохолатом натрия тяжелый острый панкреатит у мышей C57BL/6

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

Этот метод может быть использован для воспроизведения воспалительных явлений, возникающих при остром билиарном панкреатите. Возможно изучение изменений ткани поджелудочной железы на ранних стадиях, что в клинике, как правило, невозможно. Основные преимущества этой методики заключаются в том, что она быстро и легко воспроизводится для обученного исследователя, и она предлагает результаты, аналогичные острому панкреатиту у людей.Метод может быть использован для изучения фармакологических иммунных реакций молекул лекарственных средств и других терапевтических вмешательств, так как позволяет изучать воспалительно-опосредующие клетки в поджелудочной железе и прилегающих органах. При попытке этого протокола обнаружение органов и установление области канюляции имеет решающее значение. Запомните расположение органов и сначала выполните инъекционное применение, используя цветной раствор, такой как метиленовый синий.После проверки глубины анестезии щипцом пальца ноги очистите брюшную область обезболенной мыши 5%-ным раствором повидонового йода. Используя триммер, удалите волосы между грудью и нижней частью живота и очистите хирургическую область площадью около двух квадратных сантиметров 70% спиртом. Обездвижить животное на хирургической доске и с помощью ножниц разрезать пять миллиметров кожи горизонтально на верхней части живота и на один сантиметр ниже мечевидного отростка.Повторите разрез на брюшине для выполнения лапаротомии с минимальным обнажением полости. Используя ретрактор, потяните печень к голове примерно на один сантиметр от кишечника и найдите область поджелудочной железы и двенадцатиперстной кишки. Используя щипцы, поднимите печень по направлению к голове животного.Осторожно потянув часть тонкой кишки, зафиксируйте два боковых конца полипропиленовым швом 6-0 для лучшего обзора дистальной части общего желчного протока. Используя микрозажим сосуда, временно закупорите проксимальный общий желчный проток. Обнажите орган вне брюшной полости.Затем сделать временную окклюзию дистального общего желчного протока с 8-0 шов. Чтобы получить доступ к общему желчному протоку, проколите периампулярную область, которая выглядит как беловатая часть стенки тонкой кишки. С помощью 0,4-миллиметровой иглы, соединенной с 0,54-миллиметровой полиэтиленовой трубкой, запустите инфузионный насос для инфузии 2,5% раствора таурохолата натрия с постоянной скоростью 10 микролитров на 10 грамм массы тела в течение трех минут.После инфузии удалите микрозажим сосуда, временный 8-0 шов, а также инъекционная игла из желчного протока поджелудочной железы. Зашить брюшную полость 6-0 неабсорбирующим монофиламентным полипропиленовым швом. Время между лапаротомией и торцевым швом не должно быть более 30 минут.После операции поместите животных в полиэтиленовые коробки, выложенные древесной стружкой и водой и пищей ad libitum. Осторожно удерживайте животное с оттянутой назад кожей, способствуя небольшому выпячиванию глазного яблока, и расположите животное лицом вверх. Заложить в глаз животного каплю глазной мази, содержащей местный анестетик.Поместите конец капиллярной трубки в медиальный угол глаза и аккуратно вставьте его под глазное яблоко под углом примерно от 30 до 45 градусов. Вращайте капиллярную трубку до тех пор, пока не начнется кровоток. Как только сбор закончится, обеспечьте гомеостаз, держа веки закрытыми при легком сжатии.Позже, используя иглу 27 калибра, ввести четыре миллилитра ледяного холода PBS в брюшинную полость мыши. После инъекции аккуратно массируйте брюшину в течение 10 секунд, чтобы удалить прилипшие клетки. С помощью ножниц и пинцета сделайте небольшой разрез в 0,5 сантиметра на внутренней коже и мускулатуре для обнажения брюшной полости.Вставьте луковичную пипетку в брюшину и соберите как можно больше жидкости, следя за тем, чтобы не аспирировать жировую ткань. Соберите часть поджелудочной железы из области головы для дальнейшей обработки. Поместите собранную жидкость в трубки, хранящиеся на льду.Затем центрифугируют перитонеальную жидкость в 250 раз больше G в течение пяти минут и сохраняют супернатант для дозирования интерлейкина-6. Для получения сыворотки центрифугируют собранные образцы крови в 700 раз больше G в течение 15 минут и запасают супернатант для дозирования амилазы и интерлейкина-6. Анализ ткани поджелудочной железы через 12 часов после индукции острого панкреатита показал интенсивное воспаление в пораженном органе по сравнению с образцами тканей из фиктивной группы.Аналогичные результаты были представлены гистологическим исследованием после окрашивания гематоксилиновым эозином образцов тканей из фикции и АПТА. Анализ сыворотки крови показал значительное повышение концентрации амилазы и интерлейкина-6 в группе АП по сравнению с фиктивной группой. В то же время концентрация интерлейкина-6 была достоверно выше в жидкости перитонеальной полости в группе АП.Тяжесть панкреатита в данной модели пропорционально зависит от концентрации, объема и давления инфузии, а также времени индукции острого панкреатита. С помощью этой методики можно изучить влияние непрерывного промывания брюшины на тяжелый острый панкреатит.

Research

JoVE Journal

Medicine

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

Истекший CO 2 Измерение в интубированных или спонтанно Дыхание Пациенты из отделения неотложной помощи

Carbon dioxide (CO2) along with oxygen (O2) share the role of being the most important gases in the human body. The measuring of expired CO2 at the mouth ...

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Давление контролируемой вентиляции, чтобы вызвать острого повреждения легких у мышей

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ишемии-реперфузии Модель острого почечного повреждения и фиброза после травмы у мышей

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Острая травма мозга у мышей с последующим продольного двухфотонного изображений

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

BM12 Индуцибельная Модель волчанка (СКВ) в C57BL / 6 мышей

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Мышиных дистальной колостомы, Роман модель колита утечки в мышей C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice

Анализ реального времени давления объем острого инфаркта миокарда у мышей

Acute myocardial infarction can lead to acute heart failure and cardiogenic shock. The evaluation of hemodynamics is critical for the evaluation of any ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Индуцирование острая травма легких у мышей путем прямого внутричехального липополисахарида интиллация

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Acute Kidney Injury Model Induced by Cisplatin in Adult Zebrafish

Острая модель травмы почек, вызванная Цисплатином у взрослых зебрафиш

Cisplatin is commonly used as chemotherapy. Although it has positive effects in cancer-treated individuals, cisplatin can easily accumulate in the kidney ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Сохранение фертильности у пациенток с тяжелой дисфункцией яичников

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...