Name: sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice
Uploaded: 2021-06-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Författarna tack vare Post Graduation Program i Medical Clinic of University of São Paulo; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) och University of São Paulo Medical School (FMUSP).

Detta protokoll godkändes av etikkommittén för användning av djur vid USP Medicine School, Num. Project: 1343/2019-CEUA: FMUSP. För detta protokoll användes C57BL/6 möss, i åldern 6 veckor, som väger 20 ± 2 g (n = 9/grupp).
1. Laparotomi
<ol><li>Bedöva djur med xylazin (10 mg/kg) och ketaminlösning (80 mg/kg), subkutant (0,1 ml/10 g kroppsvikt) med en 1 ml spruta och 13x0,45 mm nål 26 G 1/2. Kontrollera om det finns tillräckligt med anestesidjup genom att nypa ihop toen. Kontro...

<ol>
	<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significantly+different+clinical+features+between+hypertriglyceridemia+and+biliary+acute+pancreatitis:+A+retrospective+study+of+730+patients+from+a+tertiary+center.">Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center.</a> BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).</li><li>Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+antioxidant+mechanisms+in+lung+during+experimental+pancreatitis+in+rats.">Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).</li><li>T, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraductal+infusion+of+taurocholate+followed+by+distal+common+bile+duct+ligation+leads+to+a+severe+necrotic+model+of+pancreatitis+in+mice.">Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 44 (3), (2015).</li><li>Botoi, G., Andercou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+17-prognostic+marker+of+severe+acute+pancreatitis.">Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis.</a> Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).</li><li>Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+IL-1beta,+IL-8,+and+IL-10+polymorphisms+and+risk+of+acute+pancreatitis.">Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis.</a> Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).</li><li>Feng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+peritoneal+lavage+with+ulinastatin+on+the+expression+of+NF-kappaB+and+TNF-alpha+in+multiple+organs+of+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).</li><li>Fang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sildenafil+on+inflammatory+injury+of+the+lung+in+sodium+taurocholate-induced+severe+acute+pancreatitis+rats.">Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats.</a> International Immunopharmacology. 80, (2020).</li><li>Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+acute+pancreatitis.">Experimental models of acute pancreatitis.</a> Post&#281;py Higieny i Medycyny Do&#347;wiadczalnej(Online). 69, 264-269 (2015).</li><li>Wan, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+experimental+animal+models+of+biliary+acute+pancreatitis+and+recent+advances+in+basic+research.">Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research.</a> HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).</li><li>Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretagogue+(Caerulein)+induced+pancreatitis+in+rodents.">Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).</li><li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+protects+against+L-arginine-induced+acute+necrotizing+pancreatitis+in+mice+by+enhancing+SIRT1-mediated+deacetylation+of+p53+and+heat+shock+factor+1.">Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1.</a> International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).</li><li>Ma, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+resveratrol+on+peritoneal+macrophages+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis.</a> Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).</li><li>Souza, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+effects+of+peritoneal+lavage+in+acute+pancreatitis.">Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis.</a> Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).</li><li>Perides, G., Acker, G. J. v., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct.">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).</li><li>Wittel, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taurocholate-induced+pancreatitis:+a+model+of+severe+necrotizing+pancreatitis+in+mice.">Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).</li><li>Tao, L., Reese, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+mouse+models+that+reflect+human+immune+responses.">Making mouse models that reflect human immune responses.</a> Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).</li><li>Vandamme, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+rodents+as+models+of+human+diseases.">Use of rodents as models of human diseases.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).</li><li>Song, H. K., Hwang, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+C57BL/6N+mice+on+the+variety+of+immunological+researches.">Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches.</a> Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).</li><li>Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -. V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition. (1), (2010).</li><li>Ray, A., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mouse+peritoneal+cavity+cells.">Isolation of mouse peritoneal cavity cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (35), e1488 (2010).</li><li>Schmidt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+better+model+of+acute+pancreatitis+for+evaluating+therapy.">A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.</a> Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).</li><li>Liu, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+improves+the+therapeutic+efficacy+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis.">Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis.</a> International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).</li><li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis.">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).</li><li>Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+bile+acids+on+pancreatic+ductal+cells.">The effects of bile acids on pancreatic ductal cells.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).</li><li>Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+acute+pancreatitis:+impact+of+social+deprivation,+alcohol+consumption,+seasonal+and+demographic+factors.">The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors.</a> Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).</li><li>Lerch, M. M., Gorelick, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+acute+and+chronic+pancreatitis.">Models of acute and chronic pancreatitis.</a> Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).</li><li>Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immune-modulating+formula+comprising+whey+peptides+and+fermented+milk+improves+inflammation-related+remote+organ+injuries+in+diet-induced+acute+pancreatitis+in+mice.">An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice.</a> Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).</li><li>Kui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+methodolgy+of+L-Arginine-induced+acute+pancreatitis.">New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis.</a> PLoS One. 10 (2), 011758 (2015).</li><li>Xue, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternatively+activated+macrophages+promote+pancreatic+fibrosis+in+chronic+pancreatitis.">Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis.</a> Nature Communication. 6, 7158 (2015).</li><li>Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+in+inflammatory+and+malignant+diseases+of+the+pancreas.">Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas.</a> Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).</li><li>Rao, S. A., Kunte, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6:+An+early+predictive+marker+for+severity+of+acute+pancreatitis.">Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis.</a> Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).</li></ol>

Metoden för att inducera akut pankreatit genom retrograd natriumtaurokolatinfusion har redan visats hos råttor22,23,24. Tre liknande verk, publicerade 2008, 2010 och 2015, fungerade som referens för protokollet3,14,15. I detta arbete listar vi alla kritiska steg för att reproducera denna metod i C57BL / 6 möss och några möjlighet...

Hos människor är närvaron av gallsten den vanligaste orsaken till pankreatit på grund av obstruktion av den terminala delen av choledochal, avbryta flödet av bukspottskörteln sekret och orsaka en intensiv inflammatorisk process i bukspottkörteln, med en ökning av koncentrationen av matsmältningsenzymer i serumet och inflammatoriska mediatorer1,2.
Två olika teorier har föreslagits för att förklara utvecklingen av akut pankreatit (AP). Teorin om "gemensamma kanaler" tyder på att stenarna som finns i gallblåsan hindrar distala gemensamma gallgångssystemet, vilket gör det möjligt gallutsöndring att flöda bakåt i bukspottskörteln trumman. Den andra teorin ("trumman obstruktion" teorin) föreslår att obstruktion av bukspottskörteln trumman av överskott gallsten orsakar en blockering i flödet av bukspottskörteln utsöndring till tolvfingertarmen, orsakar duktal hypertoni3. Även om mekanismerna som leder till akut gallkörtelkreatit inte är helt förstådda, är resultatet en intensiv inflammatorisk process. Matsmältningsenzymutbrott och bukspottkörtelns självrötning leder till histopatologiska förändringar, en ökning av inflammatoriska cytokiner (IL-1β, IL-6, TNF-α) i ascitisk vätska och serum och en ökning av akutfasproteiner4,5,6.
Svår akut bukspottkörtelinflammation är ett tillstånd som förtjänar klinisk uppmärksamhet på grund av medverkan av flera organ och en hög dödlighetsrisk. Djurmodeller för reproduktion av akut pankreatit (AP) är viktiga eftersom dessa förklarar sjukdomens patofysiologiska mekanismer och hjälper till att övervaka utvecklingen av inflammatoriska händelser, med början från de första stadierna av sjukdomen. Detta är vanligtvis inte möjligt på klinikerna2,7. Dessutom är tillgång till bukspottskörteln vävnader lätt i prekliniska studier, vilket gynnar klargörandet av förändringar kopplade till kliniska villkor8 tillsammans med möjligheten att arbeta med isogenic arter, eliminera oönskade variabler och spegla klinisk likhet med de resultat som observerats i människans tillstånd9.
Gall- och icke-gallmodeller för induktion av akut pankreatit hos råttor och mössarter har ofta studerats i den vetenskapliga litteraturen. Icke-galliska induktionsmetoder inkluderar administrering av supramaximala stimulerande doser av cholecystokinin secretagogue eller dess analoga cerulein10; administrering av nästan dödliga doser av L-arginin; eller administrering av en kolin-bristfällig kost kompletterad med etionin11. Även om dessa metoder är lätta att reproducera och resultera i bukspottskörteln inflammation, replikerar de inte de mekanismer som i teorin utlöser AP (dvs reflux av gallsekreation i bukspottskörteln trumman). Tekniken som adresserar gallmodellen är baserad på den bakåtsträvande infusionen av gallsyror i bukspottskörtelkanalen och kräver välutbildade forskare för att utföra detta protokoll. Flera studier har publicerats med denna metod på råttor (uppenbarligen av tekniska skäl eftersom dessa experiment involverar kirurgiska ingrepp)12,13. Metoden hos möss kan dock erbjuda mer intressanta resultat i studien av inflammation3,14,15. I denna studie kommer vi att visa en checklista över de steg som ska följas för reproduktion av svår akut bukspottkörtelinflammation genom infusion av natriumtaurokolat i C57BL/6 sövda möss.
För arbeten som innefattar behov av experiment med antikroppar och analys av gen- och proteinuttrycket är användningen av möss att föredra på grund av den större arsenalen av material för dessa djur och möjligheten att arbeta med bland annat isogena och knockoutarter som kan användas relevanta för studier16. Möss C57BL/6 är en inavlad stam av möss som ursprungligen utvecklades för studier av antitumöraktivitet och immunologi. Denna stam föredras alltmer av forskare för att vara isogen, vilket möjliggör en större reproducerbarhet av resultat, vilket kan innebära användning av ett mindre antal djur i ett experiment och mindre variationer av resultat mellan samma grupp17,18.
(2010)14 publicerade ett protokoll för AP-induktion hos möss genom natriumtaurokolatinfusion. Här uppdaterar vi denna modell med en högre natriumtaurokolatkoncentration (2, 5%) hos C57BL/6 möss, med en definierad volym och infusionshastighet (figur 1). Den maximala svårighetsgraden uppnås inom 12 timmar från induktion hos möss. Höjningen av koncentrationen av IL-6 både i serumet och i peritonealhålan är korrelerad med utvecklingen av AP. Med övning är den totala uppskattade tiden från induktion av anestesi till slutförandet av infusionen 25 min per djur. Det är viktigt att en utbildad forskare utför detta experiment. För att säkerställa att lösningen injiceras ordentligt i den gemensamma gallgången, utför flera pilotutbildningar med metylenblått istället för natriumtaurokolit.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.4 mm needle</td>
			<td>INTRAG MEDICAL TECH</td>
			<td>90183210</td>
			<td>30G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;0.54 mm polyethylene tube</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>730010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam block</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>masking tape for mounting the mouse</td>
			<td>Missner</td>
			<td>1236</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion pump scheduled to 10&#181;L / min.</td>
			<td>Havard aparatus-Peristaltic Pump Series</td>
			<td>MA1 55-7766</td>
			<td>&#160;Model 66 Small Peristaltic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors and forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antiseptic providine iodine</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>12086OR</td>
			<td>antisepsis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>459836</td>
			<td>Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Lord</td>
			<td>bdk9a1ghk6</td>
			<td>For trichotomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium taurocholate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>86339- 1G</td>
			<td>CAS NUMBER- 345909-26-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microvessel clip</td>
			<td>Medicon Surgical</td>
			<td>56.87.35</td>
			<td>Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 -&#160;40 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 prolene</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>5162</td>
			<td>Suture line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL</td>
			<td>Crist&#225;lia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xilazine 2%</td>
			<td>Syntec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline)</td>
			<td>Farmace</td>
			<td>105851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemicals</td>
			<td>M5528</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MILLIPLEX&#160;MAP&#160;Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>MCYTOMAG-70K</td>
			<td>Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amylase Assay</td>
			<td>Labtest</td>
			<td>11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desmarres retractor 13-mm 
			width</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-6672</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sodium taurocholate induced severe acute pancreatitis in c57bl/6 mice

Gallans akuta pankreatit induktion genom natrium taurocholate infusion har använts i stor utsträckning av det vetenskapliga samfundet på grund av representation av mänskliga kliniska tillstånd och reproduktion av inflammatoriska händelser som motsvarar uppkomsten av klinisk galla bukspottkörtelinflammation. Svårighetsgraden av bukspottkörtelskador kan bedömas genom att mäta koncentrationen, hastigheten och volymen av den infunderade gallsyran. Denna studie ger en uppdaterad checklista över de material och metoder som används i protokollet reproduktion och visar de viktigaste resultaten från denna akut pankreatit (AP) modell. De flesta av de tidigare publikationerna har begränsat sig till att reproducera denna modell hos råttor. Vi har tillämpat denna metod på möss, vilket ger ytterligare fördelar (dvs. tillgången till en arsenal av reagenser och antikroppar för dessa djur tillsammans med möjligheten att arbeta med genetiskt modifierade stammar av möss) som kan vara relevanta för studien. För akut pankreatit induktion hos möss presenterar vi ett systematiskt protokoll, med en definierad dos av 2,5% natrium taurocholate vid en infusionshastighet 10 μL/min i 3 min i C57BL/6 möss som når sin maximala svårighetsgrad inom 12 h från induktion och belyser resultat med resultat som validerar metoden. Med övning och teknik är den totala uppskattade tiden, från induktion av anestesi till slutförandet av infusionen, 25 min per djur.

Pankreatit svårighetsgraden poängsattes mellan 0-3 enligt Schmidts skala21 där noll motsvarar frånvaron, 1 motsvarar en mild närvaro (<25%), 2 motsvarar en måttlig närvaro (mellan 25 och 50%) och 3 motsvarar en intensiv närvaro (> 50%) (tabell 1). De mätningar som utfördes var plasma amylas aktivitet, bukspottskörteln ödem, acinar cell, skada/nekros, bukspottskörteln inflammation (genom histologi analys av H&E-färgade sektioner) och I...

Watch this Scientific Journal Video about Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

Djurmodeller för svår akut bukspottkörtelinflammation möjliggör studier av patofysiologiska förändringar i det inledande skedet, vilket underlättar observation av utvecklingen av inflammatoriska händelser. Här tillhandahåller vi ett protokoll för induktion av allvarliga akut galla bukspottkörtelinflammation genom bakåtsträvande infusion av natrium taurocholate i bukspottskörteln trumman av bedövda C57BL/6 möss.

Natriumtaurokolat inducerad svår akut pankreatit hos C57BL/6 möss

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

Denna metod kan användas för att reproducera de inflammatoriska händelser som förekommer i akut gallkörtelkreatit. Det är möjligt att studera förändringar i bukspottskörteln vävnad i dess tidiga skeden, vilket i allmänhet inte är möjligt i kliniken. De främsta fördelarna med denna teknik är att den är snabb och lätt att reproducera för en utbildad forskare, och det erbjuder liknande resultat som akut pankreatit hos människor.Metoden kan användas för att studera farmakologiska immunsvar av läkemedelsmolekyler och andra terapeutiska interventioner, eftersom det möjliggör studier av inflammatoriska medierande celler i bukspottkörteln och angränsande organ. När man försöker detta protokoll, lokalisera organen och upprätta kannulation regionen är avgörande. Memorera organens placering och träna injektionsapplikationen först med en färgad lösning som metylenblått.Efter att ha kontrollerat anestesidjupet med en tånypa, rengör bukområdet hos en sövd mus med en 5% povidone jodlösning. Använd en trimmer, ta bort hår mellan bröstet och underlivet och rengör ett cirka två kvadratcentimeter kirurgiskt område med 70%alkohol. Immobilisera djuret på operationsbrädan och använd sax för att skära fem millimeter av huden horisontellt på övre delen av buken och en centimeter under xiphoidprocessen.Upprepa snittet på bukhinnan för att utföra laparotomin med minimal exponering av håligheten. Använd en upprullningsdon, dra levern mot huvudet på ungefär en centimeter från tarmarna och lokalisera bukspottkörtelns och tolvfingertarmens region. Lyft levern mot djurhuvudet med tång.Genom att försiktigt dra delen av tunntarmen, fixa de två laterala ändarna med en 6-0 polypropylen sutur för en bättre bild av den distala delen av den gemensamma gallgången också. Använd ett mikrokärlsklämma och ockludera den proximala gemensamma gallgången tillfälligt. Exponera organet ut ur bukhålan.Gör sedan en tillfällig ocklusion av den distala gemensamma gallgången med en 8-0 sutur. För att komma åt den gemensamma gallgången, punktera periampullary regionen, som visas som en vitaktig del av tunntarmens vägg. Med en 0,4 millimeters nål ansluten till ett 0,54 millimeters polyetenrör, starta infusionspumpen för 2,5% natriumtaurokollösningsinfusion med en konstant hastighet av 10 mikroliter per 10 gram kroppsvikt i tre minuter.Efter infusionen, ta bort mikrokärlsklämman, den tillfälliga 8-0 och injektionsnålen från gallgången i bukspottskörteln. Suturera buken med en 6-0 ickeabsorberande monofilament polypropylen sutur. Tiden mellan laparotomin och ändsyssen bör inte vara mer än 30 minuter.Efter operationen, hus djuren i polyetenlådor fodrade med träspån och vatten och mat ad libitum. Håll försiktigt djuret med hud som dras tillbaka, främja en liten utskjutning av ögongloben och placera djuret med ögat vänt uppåt. Ingjut en droppe ögonsalva som innehåller lokalbedövning i djurets öga.Placera änden av ett kapillärrör i ögats mediala hörn och för in det försiktigt under ögongloben i en vinkel på cirka 30 till 45 grader. Rotera kapillärröret tills blodflödet börjar. När kollektionen är över, se till att homeostasen hålls stängda med lätt komprimering.Senare, med hjälp av en 27 gauge nål, injicera fyra milliliter iskall PBS i musens peritoneal hålighet. Efter injektionen masserar du försiktigt bukhinnan i 10 sekunder för att ta bort vidhäftade celler. Använd sax och pincett, gör ett litet snitt på 0,5 centimeter på den inre huden och muskulaturen för att exponera bukhålan.Sätt in en glödlampa pipetter i bukhinnan och samla så mycket vätska som möjligt, var försiktig så att du inte aspirera fettvävnad. Samla en del av bukspottkörteln från huvudregionen för vidare bearbetning. Deponera den insamlade vätskan i rör som hålls på is.Centrifugera sedan peritonealvätskan vid 250 gånger G i fem minuter och lagra supernatanten för interleukin-6 dosering. För att erhålla serum, centrifugera de insamlade blodproverna vid 700 gånger G i 15 minuter och lagra supernatanten för amylas och interleukin-6 dosering. Analys av bukspottskörteln vävnad 12 timmar efter induktion av akut bukspottkörtelinflammation visade intensiv inflammation i det drabbade organet jämfört med vävnad prover från bluff gruppen.Liknande resultat representerades av histologiska undersökning efter hematoxylin eosin färgning av vävnad prover från bluff och APTA. Analys av blod serum presenterade en betydande ökning av serum amylas och interleukin-6 cytokin koncentration i AP gruppen jämfört med bluff gruppen. Samtidigt var interleukin-6 koncentrationen betydligt högre i peritoneal hålighet vätska i AP gruppen.Svårighetsgraden av pankreatit i denna modell är proportionellt beroende av infusionens koncentration, volym och tryck och tiden för akut pankreatitinduktion. Med hjälp av denna teknik kan effekterna av kontinuerlig peritoneal lavage på svår akut bukspottkörtelinflammation studeras.

Research

JoVE Journal

Medicine

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

Expired CO2 Measurement in Intubated or Spontaneously Breathing Patients from the Emergency Department

Förfallna CO 2 Mätning i intuberade eller spontanandning Patienter från akutmottagningen

Carbon dioxide (CO2) along with oxygen (O2) share the role of being the most important gases in the human body. The measuring of expired CO2 at the mouth ...

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Tryckstyrd ventilation för att framkalla akut lungskada hos möss

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemi-reperfusion modell av akut Kidneyskadan och efter skada Fibros i möss

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Akut Brain Trauma hos möss följt av Longitudinal Två-foton Imaging

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

Den bm12 inducerbara Modell av systemisk lupus erythematosus (SLE) i C57BL / 6 möss

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Murina distala kolostomi, en ny modell av avledning kolit i C57BL/6 möss

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice

Realtid tryck-volym analys av akut hjärtinfarkt hos möss

Acute myocardial infarction can lead to acute heart failure and cardiogenic shock. The evaluation of hemodynamics is critical for the evaluation of any ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Inducera akut lung skada hos möss genom direkt Intratracheal Lipopolysaccharide instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Acute Kidney Injury Model Induced by Cisplatin in Adult Zebrafish

Modell för akut njurskada inducerad av Cisplatin hos vuxna zebrafiskar

Cisplatin is commonly used as chemotherapy. Although it has positive effects in cancer-treated individuals, cisplatin can easily accumulate in the kidney ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Fertilitetsbevarande hos patienter med svår äggstocksdysfunktion

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...