Name: detrusor underactivity model in rats by conus medullaris transection
Uploaded: 2020-08-28T13:00:00
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Todos os ratos foram utilizados de acordo com protocolos aprovados pelo Comitê Experimental Animal do Beijing Friendship Hospital, Capital Medical University.
1. Preparação cirúrgica, anestesia e técnicas cirúrgicas
NOTA: Um total de 40 ratas Wistar, pesando 200–220 g, foram obtidas comercialmente para o presente estudo. Dos 40 ratos, 10 foram selecionados aleatoriamente como o grupo controle, e o restante foi tratado como o grupo teste. Todos os animais foram...

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	<li>van Koeveeringe, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrusor+underactivity:+Pathophysiological+considerations,+models+and+proposals+for+future+research.">Detrusor underactivity: Pathophysiological considerations, models and proposals for future research.</a> Neurourology and Urodynamics. 33 (5), 591-596 (2014).</li><li>Osman, N. I., Esperto, F., Chapple, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrusor+Underactivity+and+the+Underactive+Bladder:+A+Systematic+Review+of+Preclinical+and+Clinical+Studies.">Detrusor Underactivity and the Underactive Bladder: A Systematic Review of Preclinical and Clinical Studies.</a> European Urology. 74 (5), 633-643 (2018).</li><li>Osman, N. I., Chapple, C. 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O DU é uma causa comum de sintomas do trato urinário inferior em homens e mulheres. É uma constelação complexa de sintomas com poucas opções de tratamento que podem diminuir significativamente a qualidade de vida (QV) dos acometidos18. Embora se acredite que o DU seja multifatorial, a compreensão de sua patogênese permanece rudimentar. Estudos têm demonstrado que a patogênese do DU pode estar relacionada a fatores miogênicos e neurogênicos.
Nas hipóteses m...

A subatividade do detrusor (UD) é uma disfunção típica do trato urinário inferior que permaneceu sob estudo. Embora a DU tenha sido definida pela International Continence Society (ICS)1, inúmeras terminologias diferentes são usadas para se referir a essa doença, por exemplo, "falha do detrusor", "bexiga acontrátil", "arreflexia do detrusor"2. A DU, conforme definida pela International Continence Society (ICS) em 2002, é uma contração de força e duração reduzidas, o que resulta em aumento prolongado no tempo de esvaziamento da bexiga, resultando assim na incapacidade de alcançar o esvaziamento completo da bexiga dentro de um período normal.
A DU pode acometer 48% dos homens e 12% das mulheres (com idade entre >70 anos)3 com sintomas do trato urinário inferior. Parece ser multifatorial, e não existe tratamento eficaz. É relatado que o DU é onipresente em pacientes com disfunção vesical neurogênica, como esclerose múltipla4, diabetes mellitus5, doença de Parkinson6 ou acidente vascular cerebral7. A DU também pode ser causada por danos nos nervos iatrogênicos, como histerectomia laparoscópica, prostatectomia ou outras intervenções cirúrgicas na pequena pelve8. As alterações fisiopatológicas e os tratamentos disponíveis de DU ainda são confusos devido à falta de um modelo animal apropriado para estudo.
O reflexo miccional é controlado por vias espino-bulboespinhais que combinam o centro de micção pontina, o núcleo parassimpático sacral e os centros do córtex mais sênior9. A ativação e a manutenção do reflexo da micção dependem principalmente do transporte regular de sinais sensoriais da bexiga para os centros do córtex mais sênior. Pode-se postular que a disfunção sensorial contribui para a UD.
A maioria dos estudos experimentais em animais relacionados a disfunções do trato urinário inferior tem se concentrado em modelos de bexiga hiperativa (OAB)10. Esses modelos fornecem uma compreensão razoável da fisiopatologia e do prognóstico da OAB. No entanto, apenas alguns modelos de DU foram relatados, por exemplo, lesão supraespinhal (lesões locais, descerebração e oclusão da artéria cerebral média), transecção ou lesão por contusão da medula espinhal, administração sistêmica (por exemplo, ciclofosfamida) ou intravesical de agentes irritantes ou inflamatórios (por exemplo, ácido, acroleína e lipopolissacarídeo)11,12,13,14 . Dentre esses métodos, apenas o método de transecção da medula espinhal ou lesão por contusão pode ser utilizado no estabelecimento de um modelo animal de DU13. Tentativas envolvendo a lesão do centro de micção pontino e dos centros do córtex superior foram abandonadas por causa do trauma grave. Assim, uma maior atenção está sendo dada para encontrar uma localização precisa no centro reflexo da micção para induzir o DU com efeitos colaterais mínimos.
Como mencionado anteriormente, um dos mecanismos de indução de DU é ferir a medula espinhal para danificar a via de sinalização do reflexo miccional. O método de queda de peso de Allen foi desenvolvido para estabelecer animais de laboratório com medula espinhal lesada15. No entanto, não existem mais dados experimentais disponíveis sobre este método. Além disso, uma vez que partes dos animais recuperaram a função espinhal após acidente vascular cerebral sem UD, não pode ser considerado como um método perfeito para gerar um modelo animal de DU16.
Em 1987, Bregman excogitou um processo de transectação da medula espinhal para geração do modelo animal de DU e adquiriu dados experimentais17. No entanto, esse método não foi aplicado para estabelecer o modelo animal de urânio empobrecido. Naquela época, os pesquisadores ainda estavam confusos sobre a patogênese da DU. Como os locais na medula espinhal associados à indução de OAB ou DU são adjacentes entre si, eles não conseguiram encontrar o local exato de dano à medula espinhal para induzir o DU17. A OAB e o DU foram introduzidos em conjunto ou separadamente por este método. Assim, embora esse método tenha introduzido a UD, ela era imprecisa e não podia ser usada para a compreensão da ocorrência e do processamento da UD.
Como dito acima, a falta de um modelo animal adequado de DU é um dos principais obstáculos para o estudo de DU. Os pesquisadores estão continuamente procurando um modelo preciso e gerenciável que possa simular a patologia da DU. Mesmo as opções de tratamento para DU não melhoraram significativamente durante os últimos 20 anos. Coletivamente, há uma grande necessidade de descrever um protocolo padrão para estabelecer um modelo animal de DU.
Assim, neste artigo, descrevemos um método para estabelecer com sucesso um modelo de DU em ratos por transecção do cone medular. A transecção foi realizada no nível L4\u2012L5 para separar o cone medular. A capacidade cistométrica máxima (CCM), a pressão de abertura do detrusor (POD) e a complacência da bexiga foram registradas e analisadas para validação do protocolo. O protocolo a seguir combinado viabilidade e confiabilidade de forma padronizada para estabelecer o modelo animal de DU, simulando a ocorrência e o processamento de DU. O protocolo pode ser utilizado como técnica para posterior estudo da UD.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% saline</td>
			<td>Wuhan Prosai Company</td>
			<td>EY-C1178</td>
			<td>pump for urodynamic measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% chloral hydrate</td>
			<td>Shandong Yulong Co., Ltd</td>
			<td>H37022673</td>
			<td>3mL/kg&#65292;administered intraperitoneally</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine Hydrochloride Injection</td>
			<td>Tianjin Pharmaceutical Research Institute Pharmaceutical Co. LTD</td>
			<td>H12020275</td>
			<td>0.05mg/kg subcutaneously 24h and 48h postoperation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidural Catheter</td>
			<td>Shandong Xinghua Co, Ltd</td>
			<td>VABR3L</td>
			<td>for urodynamic measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin G</td>
			<td>Alta Technology Co., Ltd</td>
			<td>1ST5637</td>
			<td>50,000 unit/ml per animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pentobarbital</td>
			<td>Beijing solabo Technology Co., Ltd</td>
			<td>NK-WF0001</td>
			<td>40 mg/kg, administered intraperitoneally</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture line(4-0)</td>
			<td>ETHICON</td>
			<td>VCP422H</td>
			<td>suture the injury</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Three-limb tube</td>
			<td>Shandong Xinghua Co, Ltd</td>
			<td>VAB3T</td>
			<td>for urodynamic measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trace infusion pump</td>
			<td>Zhejiang Smith Medical Instrument Co., Ltd</td>
			<td>20162540335</td>
			<td>Pump the saline at a speed of 0.2ml/min for urodynamic measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urodynamic measurement equipment</td>
			<td>Medical Measurement SystemsB.V.</td>
			<td>08-0467</td>
			<td>urodynamic measurement equipment can not only help the diagnosis of dysuria, but also provide objective materials for treatment and therapeutic effect. It is the most commonly used examination method in clinical diagnosis and treatment of lower urinary tract functional diseases</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wistar Rats</td>
			<td>HFK Biotechnology Co.Ltd,Beijing ,China</td>
			<td>SCXK2012-0023</td>
			<td>200-220g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detrusor underactivity model in rats by conus medullaris transection

O objetivo do protocolo apresentado foi estabelecer um modelo de subatividade do detrusor (UD) em ratos através da transecção do cone medular. A laminectomia foi realizada em um total de 40 ratas Wistar (grupo controle: 10 ratos; grupo teste: 30 ratos) pesando 200–220 g, e o cone medular foi transectado no nível L4\u2012L5 no grupo teste. Todos os ratos foram alojados e alimentados sob as mesmas condições ambientais por seis semanas. No grupo teste, a micção da urina foi realizada duas vezes ao dia por seis semanas, e o volume residual médio de urina foi registrado. Um cistometrograma foi realizado em ambos os grupos. A capacidade cistométrica máxima (CCM), a pressão de abertura do detrusor (DOP) e a complacência da bexiga foram registradas e calculadas. O grupo teste apresentou retenção urinária significativa após a cirurgia, tanto durante quanto após o choque espinhal. No entanto, nenhuma anormalidade foi observada no grupo controle. Quando comparado ao grupo controle, o CCM e a complacência da bexiga no grupo teste foram significativamente maiores do que os do grupo teste (3,24 ± 2,261 mL versus 1,04 ± 0,571 mL; 0,43 ± 0,578 mL/cmH 2 O versus 0,032 ± 0,016 mL/cmH 2 O), enquanto o DOP no grupo teste foi menor que o controle (20,28 ± 14,022 cmH 2 O versus 35 ± 13,258 cmH2 O). Este método de estabelecer um modelo animal de DU pela transecção do cone medular oferece uma excelente oportunidade para entender a fisiopatologia da UD de uma maneira melhor.

Todo o procedimento da transecção do cone medular pode ser concluído dentro de 45 minutos por cirurgiões experientes. Nosso laboratório já realizou mais de 100 casos de cirurgias de transecção do cone medular. A taxa de sucesso é superior a 95%, conforme definido pela sobrevivência dos ratos e pela indução bem-sucedida de DU. O teste urodinâmico confirmou a indução de DU.
Com base em nossa experiência, a indução de DU pode ser avaliada preliminarmente pelo volume residual de ...

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Detrusor Underactivity Model in Rats by Conus Medullaris Transection

Apresentamos um método para estabelecer um modelo de subatividade do detrusor por transecção do cone medular em ratos. A subatividade do detrusor foi estimulada com sucesso nesses animais. O modelo pode ser usado para estudar a função do trato urinário.

Modelo de Subatividade do Detrusor em Ratos por Transecção de Conus Medullaris

The goal of the presented protocol was to establish a detrusor underactivity (DU) model in the rat through conus medullaris transection. Laminectomy was ...

Establishing an animal model of DU by conus medullaris transection offers an excellent opportunity for starting the pathophysiology of detrusor underactivity. Our protocol is the first to use conus medullaris transection to induce detrusor underactivity in an animal model. To perform a conus medullaris transection, First, make a three centimeter median skin incision on the back of the animal.Use surgical scissors to deepen the incision through the subcutaneous tissues and excise the muscles attached to the spine To expose the 13th rib. And carefully resect the muscles attached to the spine to expose the vertebral column. Resect the supraspinous, and interspinous ligaments.And use surgical scissors and forceps to expose the spine at L4 to L5.Use Kelly forceps to carefully remove the L4 to L5 vertebral spinous process and parts of the transverse process to expose the spinal cord. And completely expose the conus medullaris at L4 to L5.Use iridectomy scissors to completely transect the conus medullaris. And insert tissue packing to block the recovery of the spinal cord.Then use a 4-0 non-absorbable suture to close the overlying muscle and skin. And place the rat in a 37 degree Celsius incubator for the first hour post-procedure, with monitoring until the animal is sternal or actively moving. Urine retention is observed immediately after surgery, with the peak point of volume appearing on the second day post-operation, and gradually decreasing for about 10 days.Ten days after surgery, the retention volume reaches a steady level. Urodynamic testing reveals that the maximum cytometric capacity and bladder compliance are significantly higher in the test group, while the detrusor opening pressure in the test group decreases significantly compared to the control group. Correctly identifying the 13th rib is a key step for successful identification of the L4 to L5 vertebra.

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