Name: murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis
Uploaded: 2020-08-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis at JoVE.com

Vi er taknemmelige for alle de medlemmer af Dunnwald Lab, der har bidraget til optimering af denne protokol i årenes løb, og at Gina Schatteman hvis vedholdenhed i at fremme brugen af seriel sektionsopdelt til såranalyse gjort det muligt at skabe den. Dette arbejde blev støttet af støtte fra NIH/NIAMS til Martine Dunnwald (AR067739).

Alle eksperimenter blev afsluttet i overensstemmelse og overholdelse af føderale regler og University of Iowa politik og procedurer er blevet godkendt af University of Iowa IACUC.
1. Dyr og husdyrhold
<ol><li>Brug voksne mus af den ønskede muselinje ved 8-10 uger, når hårsækken fase er i telogen.</li>
	<li>På dagen for operationen, adskille mus i rene bure og individuelt hus for at minimere sår forstyrrelser.</li>
</ol>2. Kirurgi
BEMÆ...

<ol>
	<li>Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration:+mechanisms,+signaling,+and+translation.">Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation.</a> Science Translational Medicine. 6 (265), (2014).</li><li>Park, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-scale+coordination+of+cellular+behaviour+promotes+epidermal+wound+repair+in+live+mice.">Tissue-scale coordination of cellular behaviour promotes epidermal wound repair in live mice.</a> Nature Cell Biology. 19 (2), 155-163 (2017).</li><li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration.">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453 (7193), 314-321 (2008).</li><li>Ansell, D. M., Campbell, L., Thomason, H. A., Brass, A., Hardman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statistical+analysis+of+murine+incisional+and+excisional+acute+wound+models.">A statistical analysis of murine incisional and excisional acute wound models.</a> Wound Repair Regeneration. 22 (2), 281-287 (2014).</li><li>Elliot, S., Wikramanayake, T. C., Jozic, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modeling+Conundrum:+Murine+Models+for+Cutaneous+Wound+Healing.">A Modeling Conundrum: Murine Models for Cutaneous Wound Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 736-740 (2018).</li><li>Crowe, M. J., Doetschman, T., Greenhalgh, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+wound+healing+in+immunodeficient+TGF-beta+1+knockout+mice.">Delayed wound healing in immunodeficient TGF-beta 1 knockout mice.</a> Journal of Investigative Dermatology. 115 (1), 3-11 (2000).</li><li>Pietramaggiori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+cutaneous+healing+in+diabetic+mice+exposed+to+healthy+peripheral+circulation.">Improved cutaneous healing in diabetic mice exposed to healthy peripheral circulation.</a> Journal of Investigative Dermatology. 129 (9), 2265-2274 (2009).</li><li>Cold Spring Harbor. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraformaldehyde+in+PBS.">Paraformaldehyde in PBS.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 1 (1), (2006).</li><li>Gerharz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+analysis+of+murine+skin+wound+healing:+standardization+of+experimental+procedures+and+impact+of+an+advanced+multitissue+array+technique.">Morphometric analysis of murine skin wound healing: standardization of experimental procedures and impact of an advanced multitissue array technique.</a> Wound Repair Regeneration. 15 (1), 105-112 (2007).</li><li>Colwell, A. S., Krummel, T. M., Kong, W., Longaker, M. T., Lorenz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+wounds+in+the+MRL/MPJ+mouse+heal+with+scar.">Skin wounds in the MRL/MPJ mouse heal with scar.</a> Wound Repair Regeneration. 14 (1), 81-90 (2006).</li><li>Le, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor+beta+3+is+required+for+proper+excisional+wound+repair+in+vivo.">Transforming growth factor beta 3 is required for proper excisional wound repair in vivo.</a> PLoS One. 7 (10), 48040 (2012).</li><li>Sato, T., Yamamoto, M., Shimosato, T., Klinman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+wound+healing+mediated+by+activation+of+Toll-like+receptor+9.">Accelerated wound healing mediated by activation of Toll-like receptor 9.</a> Wound Repair Regeneration. 18 (6), 586-593 (2010).</li><li>Martin, P., Leibovich, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+cells+during+wound+repair:+the+good,+the+bad+and+the+ugly.">Inflammatory cells during wound repair: the good, the bad and the ugly.</a> Trends in Cell Biology. 15 (11), 599-607 (2005).</li><li>Shaw, T. J., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair:+a+showcase+for+cell+plasticity+and+migration.">Wound repair: a showcase for cell plasticity and migration.</a> Current Opinion in Cell Biology. 42, 29-37 (2016).</li><li>Hoffman, M., Monroe, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+intensity+laser+therapy+speeds+wound+healing+in+hemophilia+by+enhancing+platelet+procoagulant+activity.">Low intensity laser therapy speeds wound healing in hemophilia by enhancing platelet procoagulant activity.</a> Wound Repair Regeneration. 20 (5), 770-777 (2012).</li><li>Tomasek, J. J., Gabbiani, G., Hinz, B., Chaponnier, C., Brown, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblasts+and+mechano-regulation+of+connective+tissue+remodelling.">Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 3 (5), 349-363 (2002).</li><li>Uchiyama, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SOX2+Epidermal+Overexpression+Promotes+Cutaneous+Wound+Healing+via+Activation+of+EGFR/MEK/ERK+Signaling+Mediated+by+EGFR+Ligands.">SOX2 Epidermal Overexpression Promotes Cutaneous Wound Healing via Activation of EGFR/MEK/ERK Signaling Mediated by EGFR Ligands.</a> Journal of Investigative Dermatology. 139 (8), 1809-1820 (2019).</li><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).</li><li>Rhea, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+regulatory+factor+6+is+required+for+proper+wound+healing+in+vivo.">Interferon regulatory factor 6 is required for proper wound healing in vivo.</a> Developmental Dynamics. 249 (4), 509-522 (2020).</li></ol>

Den bilaterale excisional sår model er en meget tilpasselig procedure, som kan bruges til at studere mange forskellige aspekter af sårheling. Før du begynder en sårheling projekt, bør efterforskere udføre en magt analyse for at bestemme antallet af sår er nødvendige for at opdage en defekt af en bestemt effekt størrelse. Der er uoverensstemmelser i litteraturen om, hvorvidt enkelte mus eller sår skal anvendes som biologiske replikater, men en nylig undersøgelse viste, at der ikke er nogen signifikant sammenhæ...

Kutan sårheling er en kompleks biologisk proces med sekventielt overlappende faser. Det kræver koordinering af cellulære og molekylære processer, der er tidsmæssigt og rumligt reguleret for at genoprette barrierefunktionen af det beskadigede epitel. I den første fase, betændelse, neutrofiler og makrofager migrere ind i såret, mobilisere lokale og systemiske forsvar1. Efter og overlappende den inflammatoriske fase er spredning fase. Fibroblaster begynder hurtigt prolifererende og migrerer ind i granulationsvævet. Keratinocytter væk fra forkant retningsbestemt formere sig mod såret som differentierede keratinocytter i den forreste kant migrere til re-epithelialize såret2. Endelig begynder remodeling og modningsfasen, hvor fibroblaster i granulationsvævet begynder at syntetisere og deponere kollagen. Ombygningen og tilrettelæggelsen af den nye matrix kan vare op til 1 år efter skade3. På grund af kompleksiteten af overlappende begivenheder, der involverer krydstale mellem flere celletyper, og på trods af mange års forskning, er mange af de cellulære og molekylære mekanismer, der ligger til grund for sårheling, stadig dårligt forstået.
Musemodellen er den fremherskende pattedyrmodel til undersøgelse af mekanismer til sårheling på grund af deres brugervenlighed, relativt lave omkostninger og genetisk manipulbilitet1,4,5. Selv om forskellige typer af sår er blevet beskrevet i murine model, den mest almindelige er en excisional sår (enten bilaterale punch eller direkte punch biopsi), efterfulgt af incisional sår modeller4. Den excisional sår model har en klar fordel i forhold til den incisionelle model, da det i sagens natur genererer kontrolvæv, der ikke har gennemgået helingsprocessen. Punch biopsi væv, der er fjernet som en del af den kirurgiske protokol kan behandles på samme måde som de sårede væv og bruges til at etablere de hjemlige betingelser for et ønsket kriterium. Punkterede kontrolvæv kan også være nyttigt , hvis man vurderer virkningerne af en hudforbehandling eller bekræfter en vellykket genændring påskadestidstids gang 4.
Helbredende parametre kan vurderes ved mange forskellige teknikker, herunder planimetri eller histologi. Men planimetri kan kun vurdere synlige egenskaber af såret, og på grund af tilstedeværelsen af en skurv, ofte ikke korrelerer med målinger af healing, der visualiseres ved histologi, hvilket gør histologi den "guld standard" af analyse4. På trods af histologisk analyse er guldstandarden, er det oftest udføres på en vilkårlig delmængde af såret6,7. For eksempel, skære såret i "halv" før indlejring og sektionsskæring såret er i øjeblikket almindelig praksis for at reducere den tid og ressourcer brugt på at dele materialer og dataanalyse. Den metode til morfometrisk analyse, der er beskrevet i denne protokol, er udviklet til at omfatte hele sårvævet, for præcist at afspejle sårets morfologiske egenskaber og for at øge sandsynligheden for at opdage sårhelingsdefekter med en lille effektstørrelse. I denne protokol beskriver vi en kirurgisk metode til at generere det mest almindeligt undersøgte murine sår, det bilaterale excisionalsår med fuld tykkelse samt en detaljeret og stringent metode til histologisk analyse, som sjældent anvendes i marken.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>100% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol Prep</td>
			<td>NOVAPLUS</td>
			<td>V9100</td>
			<td>70% Isopropyl alcohol, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium hydroxide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy pads</td>
			<td>Cellpath</td>
			<td>22-222-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black plastic sheet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Something firm yet manipulatable about the size of a sheet of paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brightfield microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>With digital acquisition capabilities and a 4X objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 60 #1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental wax sheets</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Include a ruler for scale, if applicable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection teasing needle (straight)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding molds</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 22 x 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding rings</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acetic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Conair</td>
			<td></td>
			<td>Moist dry Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blades</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint brushes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Type 6</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer solution (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>82-255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Processing cassette</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M490-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>ASR</td>
			<td></td>
			<td>.009 Regular Duty</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #10</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin biopsy punches</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Size as determined by researcher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide boxes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide warmers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrosted microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 037 246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature control water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue embedding station</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a paraffin dispenser and a cold plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue processor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a oven with a vacuum pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple antibiotic opthalmic ointment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, tapered tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WypAll X60</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>34865</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis

Den murine excisional sår model er blevet brugt i udstrakt grad til at studere hver af de sekventielt overlappende faser af sårheling: betændelse, spredning og remodeling. Murine sår har en histologisk veldefineret og let genkendelig sårseng, over hvilken disse forskellige faser af helingsprocessen er målbare. Inden for feltet er det almindeligt at bruge en vilkårligt defineret "midten" af såret til histologiske analyser. Men sår er en tredimensionel enhed og ofte ikke histologisk symmetrisk, der understøtter behovet for en veldefineret og robust metode til kvantificering til at opdage morfometriske defekter med en lille effekt størrelse. I denne protokol beskriver vi proceduren for oprettelse af bilaterale, fuld-tykkelse excisional sår i mus samt en detaljeret instruktion om, hvordan man måler morfometriske parametre ved hjælp af et billedbehandlingsprogram på udvalgte serielle sektioner. De todimensionale målinger af sårlængde, epidermal længde, epidermalt område og sårområde anvendes i kombination med den kendte afstand mellem sektioner for at ekstrapolere det tredimensionale epidermale område, der dækker såret, det samlede sårområde, epidermal volumen og sårvolumen. Selv om denne detaljerede histologiske analyse er mere tid og ressourcekrævende end konventionelle analyser, dens stringens øger sandsynligheden for at opdage nye fænotyper i en i sagens natur kompleks sårheling proces.

Figur 5 viser det interval i målte og beregnede værdier, der opnås ved at udføre morfometrisk analyse af vilde sår, der genereres i forskellige musestammer af flere kirurger og analyseret af forskellige individer. Vilde mus fra forskellige stammer kan vise statistiske forskelle som beskrevet både i vores undersøgelser og i litteraturen9,10. Baseret på disse repræsentative resultater anbefaler vi, at der i en undersøgelse ku...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis at JoVE.com

Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis

Denne protokol beskriver, hvordan man genererer bilaterale, fuld tykkelse excisional sår i mus, og hvordan man efterfølgende overvåge, høste, og forberede sår til morfometrisk analyse. Inkluderet er en dybdegående beskrivelse af, hvordan man bruger seriel histologiske sektioner til at definere, præcist kvantificere og detektere morfometriske defekter.

Murine Excisional Sårheling Model og histologisk morfometrisk såranalyse

The murine excisional wound model has been used extensively to study each of the sequentially overlapping phases of wound healing: inflammation, ...

Denne protokol bruger histologisk analyse til at opnå robuste morfometriske målinger af mus excisional sår. Ved hjælp af denne teknik kan vi analysere hele såret ved hjælp af en delmængde af serielle sektioner, så vi mere præcist kan opdage fejl, der ellers ville blive overset. Demonstration af proceduren vil være Lindsey Rhea, en forskningsmedarbejder fra mit laboratorium.Efter at have bekræftet en manglende reaktion på pedal refleks i en bedøvet voksen mus, anvende salve til dyrets øjne og bruge en elektrisk barbermaskine clipper i en caudal-rostral bevægelse for at fjerne pelsen på bagsiden af musen på skulderniveau. Brug et barberblad holdt i en 20 graders vinkel fra bagsiden i en rostral-caudal bevægelse for at fjerne eventuelle resterende hår fra den eksponerede hud, derefter rense huden med en povidone jod og en 70% isopropyl alkohol prep pad tørre. For sår induktion, drapere en ren papirbaseret håndklæde på en flad overflade dækket med dental voks og placere musen på håndklædet i den udsatte position.Klem huden på musen mellem skulderbladene langs den dorsale midterlinje og træk den klemt hudfold væk fra kroppen. Skift musen til en sideliggende position, placere en biopsi punch af den ønskede sårstørrelse så tæt på kroppen som muligt og lad huden til at slappe af. Tryk ned på punch ved hjælp af en vuggende bevægelse for at punktere alle lag af huden og fjerne punch biopsier fra såret ved hjælp af sterile saks og pincet til at frigøre punch fra den omgivende hud efter behov.Lad derefter musen komme sig med overvågning og analgesi. For morfometrisk analyse af sårsengen skal du åbne et digitalt plettet sårbillede. Hvis du vil angive skalerings- og måleindstillingerne, skal du vælge Angiv skalering under Analysér og angive afstanden i pixel, den kendte afstand og længdeenheden.Vælg Global og OK for at holde skalaen den samme for hvert åbent billede og vælge Analyser og Angiv målinger for at bekræfte, at områdefeltet er markeret. For at måle sårlængde, skal du vælge frihånd, og bruge værktøjet til at spore langs dermal-epidermal krydset, startende fra den sidste hårsækken af den uskadte væv på den ene side af såret til den første hårsækken i det uskadte væv på den anden side. Hvis epidermis ikke dækker hele såret, følg dermal-epidermal krydset på den ene side af såret, hvor den migrerende tungen ender og fortsætte efter den overlegne aspekt af granulation væv eller krydset mellem granulation væv og skorpen, indtil den migrerende tungen og den første hårsækken af det uskadte væv på den anden side af såret er nået.Klik derefter på Analysér og målér. Længden af målingen vises i de samme enheder som angivet i skalaen. Hvis epidermis ikke dækker hele såret, måle afstanden mellem hver epidermal forkant efter den overlegne aspekt af granulation væv eller krydset mellem granulation væv og skurv til den første hårsækken.For at måle sårområdet, skal du bruge frihåndsværktøjet til at spore langs det overlegne aspekt af epidermis eller det overlegne aspekt af granulationsvævet fra den sidste hårsækken i det uskadte væv på den ene side af såret til den første hårsækken i det uskadte væv på den anden side. Fortsæt med at spore lodret langs hårsækken i granulationsvævet. Når den modsatte hårsækken og fedtvæv eller muskel er nået, følg ringere grænsen af granulering væv til den modsatte side af såret og slutte sig til udgangspunktet langs hårsækken for at lukke området.Hvis såret ikke er fuldt epiteliseret, spores langs den overlegne aspekt af epidermis indtil forkant og vende tilbage til udgangspunktet efter dermal-epidermal krydset. Som illustreret, når du tager 2D målinger i hele såret, vi var i stand til at beregne parametre ikke muligt med 2D-analyse på midten af såret alene, som er en almindeligt anvendt metode i feltet. I dette eksperiment blev der anvendt 2D-målinger af sårareal og i gennemsnit over hele såret eller en mellemdel af såret og viste ingen signifikant forskel mellem forsøgsgrupper eller analysemetoder.Det beregnede sårvolumen var imidlertid væsentligt forskelligt mellem forsøgsgrupperne, hvilket viste betydningen af en dybdegående histologisk analyse af sårhelingsparametre. Generering konsekvent størrelse sår til histologisk analyse og udfører strenge seriel sektionsopde dele er afgørende for en nøjagtig morfometrisk analyse. Uindgroede sektioner kan bruges til immunfluorescens eller Masson's trichrome farvning til at måle andre aspekter af sårheling, mens flash frosne sår kan bruges sammen med morfometry til kvantitativ protein analyse.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Zebrafish Keratocyte Explants to Study Collective Cell Migration and Reepithelialization in Cutaneous Wound Healing

Zebrafisk Keratocyte Eksplantater at studere Kollektiv Cell Migration og reepitelisering i kutant Sårheling

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell ...

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Automatiseret Kvantificering af hæmatopoietisk celle - stromacelle Interaktioner i Histologiske Billeder af afkalkede Bone

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Etablering af en klinisk relevant<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mock Cataract Surgery Model for Undersøgelse Epithelial Wound Reparation i en Native mikromiljø

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Optimering af såret Scratch-analysen til at påvise ændringer i murine Mesenchymale stromacelle Migration efter skade ved Opløselig Cigaret røgekstrakt

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Adenoviral Genterapi for Diabetic keratopati: Virkninger på sårheling og Stem Cell Marker Expression i Human Organ-dyrkede hornhinder og limbal epitelceller

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Culture of Murine Embryonic Metatarsals: A Physiological Model of Endochondral Ossification

Kultur af murine embryonale Mellemfodsben: en fysiologisk model af endochondral ossifikation

The fundamental process of endochondral ossification is under tight regulation in the healthy individual so as to prevent disturbed development and/or ...

Rapid Isolation of BMPR-IB+ Adipose-Derived Stromal Cells for Use in a Calvarial Defect Healing Model

Hurtig Isolering af BMPR-IB + Adipose-afledte stromaceller til brug i en calvariale Defekt Healing Model

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own ...

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

En indretning til udførelse Cell Migration / Wound Healing i en plade med 96 brønde

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish

Histologiske analyser af akut alkoholisk leverskader i sebrafisk

Alcoholic Liver Disease (ALD) refers to damage to the liver due to acute or chronic alcohol abuse. It is among the leading causes of alcohol-related ...

Analysis of Protein-protein Interactions and Co-localization Between Components of Gap, Tight, and Adherens Junctions in Murine Mammary Glands

Analyse af protein-proteininteraktioner og co-lokalisering mellem komponenter af gap-, stram- og adherensforbindelser i murine mammakirtler

Cell-cell interactions play a pivotal role in preserving tissue integrity and the barrier between the different compartments of the mammary gland. These ...