Name: murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis
Uploaded: 2020-08-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis at JoVE.com

Nous sommes reconnaissants à tous les membres du Laboratoire Dunnwald qui ont contribué à l’optimisation de ce protocole au fil des ans, et à Gina Schatteman dont la persistance dans la promotion de l’utilisation de la section sérielle pour l’analyse des plaies a rendu possible sa création. Ces travaux ont été soutenus par le financement des NIH/NIAMS à Martine Dunnwald (AR067739).

Toutes les expériences ont été réalisées conformément à la réglementation fédérale et la politique et les procédures de l’Université de l’Iowa ont été approuvées par l’IACUC de l’Université de l’Iowa.
1. Animaux et élevage
<ol><li>Utilisez des souris adultes de la lignée de souris désirée à l’âge de 8-10 semaines lorsque le stade du follicule pileux est en télogène.</li>
	<li>Le jour de la chirurgie, séparez les souris dans des cages propres et individuel...

<ol>
	<li>Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration:+mechanisms,+signaling,+and+translation.">Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation.</a> Science Translational Medicine. 6 (265), (2014).</li><li>Park, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-scale+coordination+of+cellular+behaviour+promotes+epidermal+wound+repair+in+live+mice.">Tissue-scale coordination of cellular behaviour promotes epidermal wound repair in live mice.</a> Nature Cell Biology. 19 (2), 155-163 (2017).</li><li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration.">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453 (7193), 314-321 (2008).</li><li>Ansell, D. M., Campbell, L., Thomason, H. A., Brass, A., Hardman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statistical+analysis+of+murine+incisional+and+excisional+acute+wound+models.">A statistical analysis of murine incisional and excisional acute wound models.</a> Wound Repair Regeneration. 22 (2), 281-287 (2014).</li><li>Elliot, S., Wikramanayake, T. C., Jozic, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modeling+Conundrum:+Murine+Models+for+Cutaneous+Wound+Healing.">A Modeling Conundrum: Murine Models for Cutaneous Wound Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 736-740 (2018).</li><li>Crowe, M. J., Doetschman, T., Greenhalgh, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+wound+healing+in+immunodeficient+TGF-beta+1+knockout+mice.">Delayed wound healing in immunodeficient TGF-beta 1 knockout mice.</a> Journal of Investigative Dermatology. 115 (1), 3-11 (2000).</li><li>Pietramaggiori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+cutaneous+healing+in+diabetic+mice+exposed+to+healthy+peripheral+circulation.">Improved cutaneous healing in diabetic mice exposed to healthy peripheral circulation.</a> Journal of Investigative Dermatology. 129 (9), 2265-2274 (2009).</li><li>Cold Spring Harbor. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraformaldehyde+in+PBS.">Paraformaldehyde in PBS.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 1 (1), (2006).</li><li>Gerharz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+analysis+of+murine+skin+wound+healing:+standardization+of+experimental+procedures+and+impact+of+an+advanced+multitissue+array+technique.">Morphometric analysis of murine skin wound healing: standardization of experimental procedures and impact of an advanced multitissue array technique.</a> Wound Repair Regeneration. 15 (1), 105-112 (2007).</li><li>Colwell, A. S., Krummel, T. M., Kong, W., Longaker, M. T., Lorenz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+wounds+in+the+MRL/MPJ+mouse+heal+with+scar.">Skin wounds in the MRL/MPJ mouse heal with scar.</a> Wound Repair Regeneration. 14 (1), 81-90 (2006).</li><li>Le, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor+beta+3+is+required+for+proper+excisional+wound+repair+in+vivo.">Transforming growth factor beta 3 is required for proper excisional wound repair in vivo.</a> PLoS One. 7 (10), 48040 (2012).</li><li>Sato, T., Yamamoto, M., Shimosato, T., Klinman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+wound+healing+mediated+by+activation+of+Toll-like+receptor+9.">Accelerated wound healing mediated by activation of Toll-like receptor 9.</a> Wound Repair Regeneration. 18 (6), 586-593 (2010).</li><li>Martin, P., Leibovich, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+cells+during+wound+repair:+the+good,+the+bad+and+the+ugly.">Inflammatory cells during wound repair: the good, the bad and the ugly.</a> Trends in Cell Biology. 15 (11), 599-607 (2005).</li><li>Shaw, T. J., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair:+a+showcase+for+cell+plasticity+and+migration.">Wound repair: a showcase for cell plasticity and migration.</a> Current Opinion in Cell Biology. 42, 29-37 (2016).</li><li>Hoffman, M., Monroe, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+intensity+laser+therapy+speeds+wound+healing+in+hemophilia+by+enhancing+platelet+procoagulant+activity.">Low intensity laser therapy speeds wound healing in hemophilia by enhancing platelet procoagulant activity.</a> Wound Repair Regeneration. 20 (5), 770-777 (2012).</li><li>Tomasek, J. J., Gabbiani, G., Hinz, B., Chaponnier, C., Brown, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblasts+and+mechano-regulation+of+connective+tissue+remodelling.">Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 3 (5), 349-363 (2002).</li><li>Uchiyama, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SOX2+Epidermal+Overexpression+Promotes+Cutaneous+Wound+Healing+via+Activation+of+EGFR/MEK/ERK+Signaling+Mediated+by+EGFR+Ligands.">SOX2 Epidermal Overexpression Promotes Cutaneous Wound Healing via Activation of EGFR/MEK/ERK Signaling Mediated by EGFR Ligands.</a> Journal of Investigative Dermatology. 139 (8), 1809-1820 (2019).</li><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).</li><li>Rhea, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+regulatory+factor+6+is+required+for+proper+wound+healing+in+vivo.">Interferon regulatory factor 6 is required for proper wound healing in vivo.</a> Developmental Dynamics. 249 (4), 509-522 (2020).</li></ol>

Le modèle bilatéral de blessure excisional est une procédure hautement personnalisable qui peut être employée pour étudier beaucoup de différents aspects de la guérison de blessure. Avant de commencer un projet de cicatrisation des plaies, les chercheurs devraient effectuer une analyse de puissance pour déterminer le nombre de blessures nécessaires pour détecter un défaut d’une taille d’effet particulière. Des incohérences existent dans la littérature sur la question de savoir si des souris ou des bles...

La cicatrisation cutanée des plaies est un processus biologique complexe dont les phases se chevauchent séquentiellement. Il nécessite la coordination des processus cellulaires et moléculaires qui sont régulés temporellement et spatialement afin de restaurer la fonction barrière de l’épithélium endommagé. Dans la première phase, l’inflammation, les neutrophiles et les macrophages migrent dans la plaie, mobilisant les défenses locales etsystémiques 1. Suivre et chevaucher la phase inflammatoire est le stade de prolifération. Les fibroblastes commencent à proliférer rapidement et à migrer dans le tissu de granulation. Les kératinocytes éloignés du bord d’attaque prolifèrent vers la plaie à mesure que les kératinocytes différenciés du bord d’attaque migrent pour rééthélialiserla plaie 2. Enfin, la phase de remodelage et de maturation commence, au cours de laquelle les fibroblastes dans le tissu de granulation commencent à synthétiser et à déposer le collagène. Le remodelage et l’organisation de la nouvelle matrice peuvent durer jusqu’à 1 an après la blessure3. En raison de la complexité des événements qui se chevauchent impliquant des discussions croisées entre plusieurs types de cellules, et malgré des années de recherche, bon nombre des mécanismes cellulaires et moléculaires sous-jacents à la cicatrisation des plaies demeurent mal compris.
Le modèle de souris est le modèle mammifère prédominant pour étudier les mécanismes de cicatrisation des plaies en raison de leur facilité d’utilisation, de leur coût relativement faible et de leur manipulabilitégénétique 1,4,5. Bien que différents types de blessures aient été décrits dans le modèle murin, le plus commun est une blessure excisionnelle (coup de poing bilatéral ou biopsie directe de poinçon), suivie des modèles incisionnelsde blessure 4. Le modèle excisionnel de blessure a un avantage distinct au-dessus du modèle incisionnel car il génère intrinsèquement le tissu de contrôle qui n’a pas subi le processus curatif. Le tissu de biopsie de poinçon qui est excisé dans le cadre du protocole chirurgical peut être traité de la même manière que le tissu blessé et employé pour établir les conditions homéostatiques pour un critère désiré. Le tissu de contrôle excisé peut également être utile si l’évaluation des effets d’un prétraitement de peau ou la confirmation de l’altération réussie de gène au moment de lablessure 4.
Les paramètres de guérison peuvent être évalués par de nombreuses techniques différentes, y compris la planimétrie ou l’histologie. Cependant, la planimétrie ne peut évaluer que les caractéristiques visibles de la plaie, et en raison de la présence d’une croûte, souvent n’est pas corrélée aux mesures de guérison qui sont visualisées par l’histologie, faisant ainsi de l’histologie l’étalon-or del’analyse 4. Bien que l’analyse histologique soit l’étalon-or, elle est le plus souvent effectuée sur un sous-ensemble arbitraire dela plaie 6,7. Par exemple, couper la plaie en « moitié » avant d’intégrer et de sectionner la plaie est actuellement une pratique courante pour réduire le temps et les ressources consacrés à la section des matériaux et à l’analyse des données. La méthode d’analyse morphométrique décrite dans ce protocole a été développée pour englober le tissu entier de blessure, pour refléter exactement les caractéristiques morphologiques de la blessure, et pour augmenter la probabilité de détecter des défauts curatifs de blessure avec une petite taille d’effet. Dans ce protocole, nous détaillons une méthode chirurgicale pour générer la blessure murine la plus couramment étudiée, la blessure excisionnelle bilatérale pleine épaisseur, aussi bien qu’une méthode détaillée et rigoureuse pour l’analyse histologique telle est rarement employée dans le domaine.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>100% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol Prep</td>
			<td>NOVAPLUS</td>
			<td>V9100</td>
			<td>70% Isopropyl alcohol, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium hydroxide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy pads</td>
			<td>Cellpath</td>
			<td>22-222-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black plastic sheet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Something firm yet manipulatable about the size of a sheet of paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brightfield microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>With digital acquisition capabilities and a 4X objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 60 #1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental wax sheets</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Include a ruler for scale, if applicable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection teasing needle (straight)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding molds</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 22 x 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding rings</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acetic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Conair</td>
			<td></td>
			<td>Moist dry Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blades</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint brushes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Type 6</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer solution (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>82-255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Processing cassette</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M490-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>ASR</td>
			<td></td>
			<td>.009 Regular Duty</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #10</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin biopsy punches</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Size as determined by researcher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide boxes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide warmers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrosted microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 037 246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature control water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue embedding station</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a paraffin dispenser and a cold plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue processor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a oven with a vacuum pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple antibiotic opthalmic ointment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, tapered tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WypAll X60</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>34865</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis

Le modèle de blessure excisional murine a été employé intensivement pour étudier chacune des phases séquentiellement superposées de la guérison de blessure : inflammation, prolifération et remodelage. Les plaies murines ont un lit de plaie histologiquement bien défini et facilement reconnaissable sur lequel ces différentes phases du processus de guérison sont mesurables. Sur le terrain, il est courant d’utiliser un « milieu » arbitrairement défini de la plaie pour des analyses histologiques. Cependant, les blessures sont une entité tridimensionnelle et souvent pas histologically symétrique, soutenant la nécessité d’une méthode bien définie et robuste de quantification pour détecter des défauts morphométriques avec une petite taille d’effet. Dans ce protocole, nous décrivons la procédure pour créer des plaies excisionnelles bilatérales de pleine épaisseur chez la souris ainsi qu’une instruction détaillée sur la façon de mesurer les paramètres morphométriques à l’aide d’un programme de traitement d’image sur certaines sections de série. Les mesures en deux dimensions de la longueur de la plaie, de la longueur épidermique, de la zone épidermique et de la zone de la plaie sont utilisées en combinaison avec la distance connue entre les sections pour extrapoler la zone épidermique à trois dimensions couvrant la plaie, la zone globale de la plaie, le volume épidermique et le volume des plaies. Bien que cette analyse histologique détaillée soit plus longue et plus gourmande en ressources que les analyses conventionnelles, sa rigueur augmente la probabilité de détecter de nouveaux phénotypes dans un processus intrinsèquement complexe de cicatrisation des plaies.

La figure 5 représente la fourchette des valeurs mesurées et calculées obtenues en effectuant une analyse morphométrique sur des plaies de type sauvage générées par plusieurs chirurgiens et analysées par différents individus dans différentes souches de souris. Les souris de type sauvage de différentes souches peuvent afficher des différences statistiques telles que décrites dans nos études et dans lalittérature 9,10. S...

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Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis

Ce protocole décrit comment générer des blessures excisionnelles bilatérales et pleine épaisseur chez la souris et comment surveiller, récolter et préparer les plaies pour l’analyse morphométrique. On y trouve une description détaillée de la façon d’utiliser les sections histologiques périodiques pour définir, quantifier et détecter avec précision les défauts morphométriques.

Modèle de cicatrisation des plaies excisional murine et analyse histologique des plaies morphométriques

The murine excisional wound model has been used extensively to study each of the sequentially overlapping phases of wound healing: inflammation, ...

Ce protocole utilise l’analyse histologique pour obtenir des mesures morphométriques robustes des blessures excisionales de souris. En utilisant cette technique, nous pouvons analyser l’ensemble de la plaie à l’aide d’un sous-ensemble de sections en série, ce qui nous permet de détecter plus précisément les défauts qui pourraient autrement être manqués. Lindsey Rhea, associée de recherche de mon laboratoire, démontrera la procédure.Après avoir confirmé un manque de réponse au réflexe de pédale chez une souris adulte anesthésiée, appliquez de la pommade sur les yeux de l’animal et utilisez une tondeuse à rasoir électrique dans un mouvement caudal-rostral pour enlever la fourrure sur le dos de la souris au niveau des épaules. Utilisez une lame de rasoir tenue à un angle de 20 degrés de l’arrière dans un mouvement rostral-caudal pour enlever tous les cheveux restants de la peau exposée, puis nettoyez la peau avec un iode povidone et un 70% isopropyl alcool préparation pad essuyer. Pour l’induction des plaies, drapez une serviette propre à base de papier sur une surface plane recouverte de cire dentaire et placez la souris sur la serviette en position couchée.Pincez la peau de la souris entre les omoplates le long de la ligne médiane dorsale et tirez le pli de la peau en sandwich loin du corps. En changeant la souris en position couchée latéralement, placez un poinçon de biopsie de la taille désirée de la plaie aussi près que possible du corps et laissez la peau se détendre. Appuyez sur le poinçon à l’aide d’un mouvement de bascule pour percer toutes les couches de la peau et enlever les biopsies de poinçon de la plaie à l’aide de ciseaux stériles et pinces à épiler pour libérer le punch de la peau environnante si nécessaire.Ensuite, laissez la souris récupérer avec la surveillance et l’analgésie. Pour l’analyse morphométrique du lit de plaie, ouvrez une image numérique tachée de blessure. Pour définir l’échelle et les préférences de mesure, sous Analyser, sélectionnez l’échelle définie et entrez la distance en pixels, la distance connue et l’unité de longueur.Sélectionnez Global et OK pour garder l’échelle la même pour chaque image ouverte et sélectionnez Analyser et définir les mesures pour confirmer que la zone est cochée. Pour mesurer la longueur de la plaie, sélectionnez à main levée, et utilisez l’outil pour tracer le long de la jonction cutanée-épidermique, à partir du dernier follicule pileux du tissu non blessé d’un côté de la plaie au premier follicule pileux du tissu non blessé de l’autre côté. Si l’épiderme ne couvre pas toute la plaie, suivez la jonction cutanée-épidermique d’un côté de la plaie où la langue migrante se termine et continuez à suivre l’aspect supérieur du tissu granulation ou la jonction entre le tissu granulé et la tavelure jusqu’à ce que la langue migrante et le premier follicule pileux du tissu non blessé de l’autre côté de la plaie soient atteints.Cliquez ensuite Analyser et mesurer. La longueur de la mesure apparaîtra dans les mêmes unités que dans l’échelle. Si l’épiderme ne couvre pas toute la plaie, mesurer la distance entre chaque bord d’attaque épidermique suivant l’aspect supérieur du tissu granulation ou la jonction entre le tissu granulation et la tavelure au premier follicule pileux.Pour mesurer la zone de la plaie, utilisez l’outil à main levée pour tracer le long de l’aspect supérieur de l’épiderme ou l’aspect supérieur du tissu granulation à partir du dernier follicule pileux du tissu non blessé d’un côté de la plaie au premier follicule pileux du tissu non blessé de l’autre côté. Continuer à tracer verticalement le long du follicule pileux dans le tissu de granulation. Une fois que le follicule pileux opposé et le tissu ou le muscle adipeux sont atteints, suivez la bordure inférieure du tissu de granulation de l’autre côté de la plaie et rejoignez le point de départ le long du follicule pileux pour fermer la zone.Si la plaie n’est pas entièrement épithélialisée, tracez l’aspect supérieur de l’épiderme jusqu’au bord d’attaque et retournez au point de départ suivant la jonction cutanée-épidermique. Comme illustré, lors de la prise de mesures 2D dans toute la plaie, nous avons été en mesure de calculer les paramètres non possibles avec l’analyse 2D sur le milieu de la plaie seulement, qui est une méthode couramment utilisée dans le domaine. Dans cette expérience, des mesures 2D de la zone de blessure ont été employées et moyennes au-dessus de la blessure entière ou d’un sous-ensemble moyen de la blessure et n’ont indiqué aucune différence significative entre les groupes expérimentaux ou les méthodes d’analyse.Le volume calculé de blessure, cependant, était sensiblement différent entre les groupes expérimentaux, démontrant l’importance d’une analyse histologique en profondeur des paramètres de guérison de blessure. Il est essentiel de générer des plaies de taille constante pour l’analyse histologique et d’effectuer des sections périodiques rigoureuses pour une analyse morphométrique précise. Les sections non tachées peuvent être utilisées pour l’immunofluorescence ou la coloration trichrome de Masson pour mesurer d’autres aspects de la cicatrisation des plaies, tandis que les plaies congelées flash peuvent être utilisées parallèlement à la morphométrie pour l’analyse quantitative des protéines.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Zebrafish Keratocyte Explants to Study Collective Cell Migration and Reepithelialization in Cutaneous Wound Healing

Poisson zèbre kératocyte explants d&#39;étudier la migration cellulaire collective et réépithélialisation dans la cicatrisation cutanée plaies

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell ...

Recherche

Biologie du développement

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Automated quantification des cellules hématopoïétiques - Interactions cellulaires stromales dans les images histologiques de décalcifiées os

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Création d&#39;une importance clinique<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mock Chirurgie de la cataracte modèle pour étudier épithéliale Wound Repair dans un microenvironnement maternelle

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Optimisation du dosage Blessure Scratch pour détecter les changements dans murin mésenchymateuses stromales migration cellulaire Après Dommages par Soluble Extrait Cigarette Smoke

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

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Adénovirus thérapie génique diabétique Kératopathie: Effets sur la cicatrisation des plaies et des cellules souches Marker Expression dans Human cornées Organ-culture et de cellules épithéliales limbiques

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Isolement rapide de BMPR-IB + Adipose-Derived cellules stromales pour utilisation dans un calvarial Defect Modèle de guérison

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A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

Un dispositif pour effectuer la migration cellulaire / Wound Healing dans une plaque à 96 puits

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish

Analyses histologiques de lésions hépatiques alcooliques aiguës dans le poisson zébré

Alcoholic Liver Disease (ALD) refers to damage to the liver due to acute or chronic alcohol abuse. It is among the leading causes of alcohol-related ...

Analysis of Protein-protein Interactions and Co-localization Between Components of Gap, Tight, and Adherens Junctions in Murine Mammary Glands

Analyse des interactions protéine-protéine et co-localisation entre les composants de Gap, Tight et Adherens Junctions dans les glandes mammaires murines

Cell-cell interactions play a pivotal role in preserving tissue integrity and the barrier between the different compartments of the mammary gland. These ...