Name: murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis
Uploaded: 2020-08-21T15:00:00
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私たちは、長年にわたってこのプロトコルの最適化に貢献してきたダンヴァルト研究所のすべてのメンバーと、創傷分析のための連続断面の使用を促進する粘り強さが、その作成を可能にしたジーナ・シャッテマンに感謝しています。この研究は、NIH/NIAMSからマーティン・ダンヴァルト(AR067739)への資金提供によって支えられた。

すべての実験は連邦規制に従って完了し、アイオワ大学の方針と手順はアイオワ大学IACUCによって承認されています。
1. 動物と畜産
<ol><li>毛包ステージが四葉語にある8〜10週齢で所望のマウスラインの成体マウスを使用する。</li>
	<li>手術当日は、マウスを清潔なケージに分離し、創傷の破壊を最小限に抑えるために個別に収容します。</li>
</ol>2. 手術</...

<ol>
	<li>Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration:+mechanisms,+signaling,+and+translation.">Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation.</a> Science Translational Medicine. 6 (265), (2014).</li><li>Park, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-scale+coordination+of+cellular+behaviour+promotes+epidermal+wound+repair+in+live+mice.">Tissue-scale coordination of cellular behaviour promotes epidermal wound repair in live mice.</a> Nature Cell Biology. 19 (2), 155-163 (2017).</li><li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration.">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453 (7193), 314-321 (2008).</li><li>Ansell, D. M., Campbell, L., Thomason, H. A., Brass, A., Hardman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statistical+analysis+of+murine+incisional+and+excisional+acute+wound+models.">A statistical analysis of murine incisional and excisional acute wound models.</a> Wound Repair Regeneration. 22 (2), 281-287 (2014).</li><li>Elliot, S., Wikramanayake, T. C., Jozic, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modeling+Conundrum:+Murine+Models+for+Cutaneous+Wound+Healing.">A Modeling Conundrum: Murine Models for Cutaneous Wound Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 736-740 (2018).</li><li>Crowe, M. J., Doetschman, T., Greenhalgh, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+wound+healing+in+immunodeficient+TGF-beta+1+knockout+mice.">Delayed wound healing in immunodeficient TGF-beta 1 knockout mice.</a> Journal of Investigative Dermatology. 115 (1), 3-11 (2000).</li><li>Pietramaggiori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+cutaneous+healing+in+diabetic+mice+exposed+to+healthy+peripheral+circulation.">Improved cutaneous healing in diabetic mice exposed to healthy peripheral circulation.</a> Journal of Investigative Dermatology. 129 (9), 2265-2274 (2009).</li><li>Cold Spring Harbor. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraformaldehyde+in+PBS.">Paraformaldehyde in PBS.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 1 (1), (2006).</li><li>Gerharz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+analysis+of+murine+skin+wound+healing:+standardization+of+experimental+procedures+and+impact+of+an+advanced+multitissue+array+technique.">Morphometric analysis of murine skin wound healing: standardization of experimental procedures and impact of an advanced multitissue array technique.</a> Wound Repair Regeneration. 15 (1), 105-112 (2007).</li><li>Colwell, A. S., Krummel, T. M., Kong, W., Longaker, M. T., Lorenz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+wounds+in+the+MRL/MPJ+mouse+heal+with+scar.">Skin wounds in the MRL/MPJ mouse heal with scar.</a> Wound Repair Regeneration. 14 (1), 81-90 (2006).</li><li>Le, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor+beta+3+is+required+for+proper+excisional+wound+repair+in+vivo.">Transforming growth factor beta 3 is required for proper excisional wound repair in vivo.</a> PLoS One. 7 (10), 48040 (2012).</li><li>Sato, T., Yamamoto, M., Shimosato, T., Klinman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+wound+healing+mediated+by+activation+of+Toll-like+receptor+9.">Accelerated wound healing mediated by activation of Toll-like receptor 9.</a> Wound Repair Regeneration. 18 (6), 586-593 (2010).</li><li>Martin, P., Leibovich, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+cells+during+wound+repair:+the+good,+the+bad+and+the+ugly.">Inflammatory cells during wound repair: the good, the bad and the ugly.</a> Trends in Cell Biology. 15 (11), 599-607 (2005).</li><li>Shaw, T. J., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair:+a+showcase+for+cell+plasticity+and+migration.">Wound repair: a showcase for cell plasticity and migration.</a> Current Opinion in Cell Biology. 42, 29-37 (2016).</li><li>Hoffman, M., Monroe, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+intensity+laser+therapy+speeds+wound+healing+in+hemophilia+by+enhancing+platelet+procoagulant+activity.">Low intensity laser therapy speeds wound healing in hemophilia by enhancing platelet procoagulant activity.</a> Wound Repair Regeneration. 20 (5), 770-777 (2012).</li><li>Tomasek, J. J., Gabbiani, G., Hinz, B., Chaponnier, C., Brown, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblasts+and+mechano-regulation+of+connective+tissue+remodelling.">Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 3 (5), 349-363 (2002).</li><li>Uchiyama, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SOX2+Epidermal+Overexpression+Promotes+Cutaneous+Wound+Healing+via+Activation+of+EGFR/MEK/ERK+Signaling+Mediated+by+EGFR+Ligands.">SOX2 Epidermal Overexpression Promotes Cutaneous Wound Healing via Activation of EGFR/MEK/ERK Signaling Mediated by EGFR Ligands.</a> Journal of Investigative Dermatology. 139 (8), 1809-1820 (2019).</li><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).</li><li>Rhea, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+regulatory+factor+6+is+required+for+proper+wound+healing+in+vivo.">Interferon regulatory factor 6 is required for proper wound healing in vivo.</a> Developmental Dynamics. 249 (4), 509-522 (2020).</li></ol>

両側切除創傷モデルは、創傷治癒の多くの異なる側面を研究するために使用することができる高度にカスタマイズ可能な手順である。創傷治癒プロジェクトを開始する前に、研究者は、特定の効果サイズの欠陥を検出するために必要な創傷の数を決定するために、パワー分析を実行する必要があります。個々のマウスまたは創傷を生物学的複製として使用すべきかどうかについての文献内に?...

皮創傷治癒は、連続的に重なる相を有する複雑な生物学的プロセスである。損傷した上皮のバリア機能を回復させるためには、時間的および空間的に調節される細胞および分子プロセスの調整が必要です。第1段階では、炎症、好中球およびマクロファージが創傷に移行し、局所防御および全身防御を動員する。炎症期に続いて重なり合うのが増殖段階である。線維芽細胞は急速に増殖し、造粒組織に移行し始める。先導端から離れた角化細胞は、前縁の分化された角化細胞が創傷2を再上皮化するために移行するとして、創傷に向かって方向に増殖する。最後に、造粒組織の線維芽細胞がコラーゲンを合成して沈着し始める間に、再造形および成熟相が始まる。新しいマトリックスの改造と組織は、怪我の後に1年まで続くことができます 3.複数の細胞タイプ間のクロストークを伴う重複する事象の複雑さにより、長年の研究にもかかわらず、創傷治癒の根底にある細胞および分子メカニズムの多くは十分に理解されていない。
マウスモデルは、使用の容易さ、比較的低コスト、遺伝的操作性1、4、5による創傷治癒のメカニズムを調査するための主要な哺乳類モデルである。マウスモデルには異なるタイプの創傷が記載されているが、最も一般的なのは切除創傷(両側性パンチまたは直接パンチ生検のいずれか)であり、続いて切開創傷モデル4が続く。切除創傷モデルは、癒しのプロセスを経ていない制御組織を本質的に生成するため、切開モデルに対して明確な利点があります。外科プロトコルの一部として切除されるパンチ生検組織は、傷ついた組織と同様に処理し、所望の基準のための恒食状態を確立するために使用することができる。切除された対照組織は、皮膚前処理の効果を評価する場合や、傷害時に遺伝子改変が成功したことを確認する場合にも有用である。
治癒パラメータは、平面測定やヒストロジーを含む多くの異なる技術によって評価することができる。しかし、プラニメトリーは創傷の目に見える特性しか評価できないし、また、かさぶたの存在のために、しばしば、占いが可視化される治癒の測定値と相関しない、それによって、構造学を分析4の「ゴールドスタンダード」にする。組織学的分析はゴールドスタンダードであるにもかかわらず、最も頻繁に創傷の任意のサブセット6,7で行われる。例えば、創傷を埋め込み、切断する前に「半分」に創傷を切断することは、材料の切断およびデータ分析に費やされる時間とリソースを削減するために現在一般的な習慣である。このプロトコルに記載された形態測定解析の方法は、創傷組織全体を包含し、創傷の形態学的特徴を正確に反映し、小さな効果サイズで創傷治癒欠陥を検出する可能性を高めるために開発された。このプロトコルでは、最も一般的に研究されているマウス創傷、両側の完全な厚さの切除傷を生成するための外科的方法、ならびにそのような組織学的分析のための詳細かつ厳格な方法が現場ではほとんど使用されない。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>100% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol Prep</td>
			<td>NOVAPLUS</td>
			<td>V9100</td>
			<td>70% Isopropyl alcohol, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium hydroxide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy pads</td>
			<td>Cellpath</td>
			<td>22-222-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black plastic sheet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Something firm yet manipulatable about the size of a sheet of paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brightfield microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>With digital acquisition capabilities and a 4X objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 60 #1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental wax sheets</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Include a ruler for scale, if applicable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection teasing needle (straight)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding molds</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 22 x 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding rings</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acetic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Conair</td>
			<td></td>
			<td>Moist dry Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blades</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint brushes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Type 6</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer solution (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>82-255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Processing cassette</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M490-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>ASR</td>
			<td></td>
			<td>.009 Regular Duty</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #10</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin biopsy punches</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Size as determined by researcher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide boxes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide warmers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrosted microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 037 246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature control water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue embedding station</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a paraffin dispenser and a cold plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue processor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a oven with a vacuum pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple antibiotic opthalmic ointment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, tapered tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WypAll X60</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>34865</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis

マウスの外皮創傷モデルは、創傷治癒の順次重なり合う相(炎症、増殖および改造)のそれぞれを研究するために広く使用されてきた。マウスの創傷は、治癒プロセスのこれらの異なる段階が測定可能である組織学的に明確かつ容易に認識可能な創傷床を有する。フィールド内では、組織学的分析のために任意に定義された創傷の「中間」を使用することが一般的です。しかし、創傷は三次元の実体であり、しばしば組織学的に対称的ではなく、小さな効果サイズで形態異常を検出するための明確かつ堅牢な定量方法の必要性を支持する。本プロトコルでは、マウスにおける二国間の全厚切除創傷を作成するための手順と、選択したシリアルセクションの画像処理プログラムを用いて形態測定パラメータを測定する方法についての詳細な指示を説明する。創傷長さ、表皮長さ、表皮領域、および創傷領域の2次元測定は、創傷、全体的な創傷領域、表皮容積および創傷容積を覆う3次元表皮領域を外挿するために、断面間の既知の距離と組み合わせて使用される。この詳細な組織学的分析は、従来の分析よりも時間とリソースの消費が多いが、その厳格さは、本質的に複雑な創傷治癒プロセスで新しい型を検出する可能性を高める。

図5は、複数の外科医によって異なるマウス株で発生した野生型創傷に対して形態測定解析を行い、異なる個体によって分析した結果、得られた測定値と計算値の範囲を示している。異なる株由来の野生型マウスは、我々の研究と文献9,10の両方に記載されているように統計的な違いを示すことができる。これらの代表的な結果...

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Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis

このプロトコルは、マウスで両側の完全な厚さの切除傷を生成する方法と、その後、形態測定分析のために創傷を監視、収穫、および準備する方法を記述する。これには、シリアル組織学的セクションを使用して形態異常を定義、正確に定量化、検出する方法の詳細な説明が含まれています。

マウス切除創傷治癒モデルと組織形態学的創傷解析

The murine excisional wound model has been used extensively to study each of the sequentially overlapping phases of wound healing: inflammation, ...

このプロトコルは、組織学的解析を使用して、マウスの切除創傷の堅牢な形態測定を得る。この手法を使用して、連続セクションのサブセットを使用して創傷全体を分析することができ、そうでなければ見逃される可能性のある欠陥をより正確に検出することができます。この手順を実証することは、私の研究室の研究員であるリンジー・リアです。麻酔をかけた大人のマウスでペダル反射に対する応答の欠如を確認した後、動物の目に軟膏を適用し、肩のレベルでマウスの背面の毛皮を取り除くために尾頭-rostral運動で電気カミソリのクリッパーを使用します。露出した皮膚から残りの毛を取り除くために、背中から20度の角度で保持されたカミソリの刃を使用して、露出した皮膚から残りの毛を取り除き、1つのポビドンヨウ素と1つの70%イソプロピルアルコール準備パッドワイプで皮膚をきれいにします。創傷誘導の場合は、清潔なペーパーベースのタオルを歯科ワックスで覆われた平らな表面にドレープし、マウスを起こしやすい位置のタオルの上に置きます。背部の正中線に沿って肩甲骨の間にマウスの皮膚をつまみ、サンドイッチした皮膚を体から引き離します。マウスを横に置く位置に切り替え、必要な創傷サイズの生検パンチをできるだけ体の近くに置き、皮膚をリラックスさせます。ロッキングモーションを使用してパンチを押し下げて皮膚のすべての層を穿刺し、必要に応じて周囲の皮膚からパンチを解放するために、滅菌ハサミとピンセットを使用して傷口からパンチ生検を取り除きます。その後、マウスがモニタリングと鎮痛で回復することを許可します。創傷床の形態測定解析のために、デジタル染色された創傷画像を開く。スケールと計測の設定を設定するには、[分析]で[スケールを設定]を選択し、距離をピクセル単位で指定し、距離を既知の距離と長さの単位で入力します。[グローバル]および[OK]を選択して、開いている画像ごとに尺度を同じに保ち、[解析]と[測定を設定]を選択して、領域ボックスがオンになっていることを確認します。創傷の長さを測定するには、フリーハンドを選択し、傷の片側の傷のない組織の最後の毛包から反対側の傷害されていない組織の最初の毛包まで、真皮表皮接合部に沿ってトレースするツールを使用します。表皮が創傷全体を覆わない場合は、移動する舌が終わる創傷の片側の真皮表皮接合部に従い、顆粒組織の優れた態様または顆粒組織とかさぶたの間の接合に従い続け、舌が移動し、傷の反対側の最初の毛包が達するまで続ける。次に、[分析と測定] をクリックします。計測の長さは、スケールで設定した単位と同じ単位で表示されます。表皮が創傷全体を覆わない場合は、造粒組織の優れた側面または肉芽組織と最初の毛包との間の接合部に従って、各表皮のリーディングエッジ間の距離を測定する。創傷領域を測定するには、フリーハンドツールを使用して、表皮の優れた側面または創傷の片側の傷害されていない組織の最後の毛包から他方の側の傷害されていない組織の最初の毛包まで始まる顆粒組織の優れた側面に沿ってトレースする。毛包に沿って顆粒組織に垂直にトレースを続けます。反対側の毛包と脂肪組織または筋肉に達したら、顆粒組織の下の境界に従って創傷の反対側に、毛包に沿って開始点を結合して領域を閉じる。創傷が完全に上皮化されていない場合は、表皮の優れた側面に沿って、リーディングエッジまでトレースし、真皮表皮接合部に続く出発点に戻ります。図示したように、創傷全体を通して2D測定を行う場合、現場で一般的に使用される方法である創傷の真ん中でのみ2D解析では不可能なパラメータを計算することができました。この実験では、創傷領域の2D測定を使用し、創傷全体または創傷の中間サブセットにわたって平均化し、実験群または分析方法との間に有意な差を明らかにされなかった。しかし、計算された創傷容積は実験群間で有意に異なっていたため、創傷治癒パラメータの詳細な組織学的分析の重要性が示された。組織学的解析のために一貫してサイズの大きさの創傷を生成し、厳密な連続断面化を行うことは、正確な形態測定解析にとって重要です。染色されていない切片は、免疫蛍光またはマッソンのトリクローム染色に使用して創傷治癒の他の側面を測定し、フラッシュ凍結創傷は定量的タンパク質分析のためにモルファメトリーと一緒に使用することができます。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Zebrafish Keratocyte Explants to Study Collective Cell Migration and Reepithelialization in Cutaneous Wound Healing

ゼブラフィッシュ角膜実質外植片は皮膚創傷治癒における集団細胞の移動および再上皮化を研究するために

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell ...

発生生物学

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

造血細胞の自動定量化 - 脱灰骨の組織学的画像における間質細胞の相互作用

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

臨床的に関連の確立<em&gt;エクスビボ</emネイティブ微小環境における上皮創傷修復を調査するための&gt;モック白内障手術モデル

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

可溶性タバコの煙抽出物によって損傷した後のマウス間葉系幹細胞の移動の変化を検出するために創傷スクラッチアッセイの最適化

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

糖尿病性角膜症のためのアデノウイルス遺伝子治療：ヒト臓器培養角膜と​​輪部上皮細胞における創傷治癒に及ぼす影響と細胞マーカーの発現を幹

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Culture of Murine Embryonic Metatarsals: A Physiological Model of Endochondral Ossification

マウス胚中足骨の文化：軟骨内骨化の生理学的モデル

The fundamental process of endochondral ossification is under tight regulation in the healthy individual so as to prevent disturbed development and/or ...

Rapid Isolation of BMPR-IB+ Adipose-Derived Stromal Cells for Use in a Calvarial Defect Healing Model

頭蓋冠欠損治癒モデルで使用するためのBMPR-IB +脂肪由来間質細胞の迅速な単離

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own ...

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

96ウェルプレートに細胞遊走/創傷治癒を行う装置

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish

ゼブラフィッシュにおける急性アルコール性肝障害の組織学的解析

Alcoholic Liver Disease (ALD) refers to damage to the liver due to acute or chronic alcohol abuse. It is among the leading causes of alcohol-related ...

Analysis of Protein-protein Interactions and Co-localization Between Components of Gap, Tight, and Adherens Junctions in Murine Mammary Glands

マウス乳腺のギャップ、タイトおよびアデュランス接合部の成分間のタンパク質 - タンパク質相互作用および共局在の分析

Cell-cell interactions play a pivotal role in preserving tissue integrity and the barrier between the different compartments of the mammary gland. These ...