Name: murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis
Uploaded: 2020-08-21T15:00:00
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Somos gratos a todos os membros do Laboratório Dunnwald que contribuíram para a otimização deste protocolo ao longo dos anos, e a Gina Schatteman cuja persistência em promover o uso de seção serial para análise de feridas tornou sua criação possível. Este trabalho foi apoiado por financiamento do NIH/NIAMS para Martine Dunnwald (AR067739).

Todos os experimentos foram concluídos de acordo e o cumprimento das regulamentações federais e as políticas e procedimentos da Universidade de Iowa foram aprovados pela Universidade de Iowa IACUC.
1. Animais e criação
<ol><li>Use camundongos adultos da linha de camundongos desejada com 8-10 semanas de idade quando o estágio do folículo piloso estiver em telogen.</li>
	<li>No dia da cirurgia, separe os ratos em gaiolas limpas e abriga individualmente para minimizar a interrupção da...

<ol>
	<li>Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration:+mechanisms,+signaling,+and+translation.">Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation.</a> Science Translational Medicine. 6 (265), (2014).</li><li>Park, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-scale+coordination+of+cellular+behaviour+promotes+epidermal+wound+repair+in+live+mice.">Tissue-scale coordination of cellular behaviour promotes epidermal wound repair in live mice.</a> Nature Cell Biology. 19 (2), 155-163 (2017).</li><li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration.">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453 (7193), 314-321 (2008).</li><li>Ansell, D. M., Campbell, L., Thomason, H. A., Brass, A., Hardman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statistical+analysis+of+murine+incisional+and+excisional+acute+wound+models.">A statistical analysis of murine incisional and excisional acute wound models.</a> Wound Repair Regeneration. 22 (2), 281-287 (2014).</li><li>Elliot, S., Wikramanayake, T. C., Jozic, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modeling+Conundrum:+Murine+Models+for+Cutaneous+Wound+Healing.">A Modeling Conundrum: Murine Models for Cutaneous Wound Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 736-740 (2018).</li><li>Crowe, M. J., Doetschman, T., Greenhalgh, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+wound+healing+in+immunodeficient+TGF-beta+1+knockout+mice.">Delayed wound healing in immunodeficient TGF-beta 1 knockout mice.</a> Journal of Investigative Dermatology. 115 (1), 3-11 (2000).</li><li>Pietramaggiori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+cutaneous+healing+in+diabetic+mice+exposed+to+healthy+peripheral+circulation.">Improved cutaneous healing in diabetic mice exposed to healthy peripheral circulation.</a> Journal of Investigative Dermatology. 129 (9), 2265-2274 (2009).</li><li>Cold Spring Harbor. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraformaldehyde+in+PBS.">Paraformaldehyde in PBS.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 1 (1), (2006).</li><li>Gerharz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+analysis+of+murine+skin+wound+healing:+standardization+of+experimental+procedures+and+impact+of+an+advanced+multitissue+array+technique.">Morphometric analysis of murine skin wound healing: standardization of experimental procedures and impact of an advanced multitissue array technique.</a> Wound Repair Regeneration. 15 (1), 105-112 (2007).</li><li>Colwell, A. S., Krummel, T. M., Kong, W., Longaker, M. T., Lorenz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+wounds+in+the+MRL/MPJ+mouse+heal+with+scar.">Skin wounds in the MRL/MPJ mouse heal with scar.</a> Wound Repair Regeneration. 14 (1), 81-90 (2006).</li><li>Le, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor+beta+3+is+required+for+proper+excisional+wound+repair+in+vivo.">Transforming growth factor beta 3 is required for proper excisional wound repair in vivo.</a> PLoS One. 7 (10), 48040 (2012).</li><li>Sato, T., Yamamoto, M., Shimosato, T., Klinman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+wound+healing+mediated+by+activation+of+Toll-like+receptor+9.">Accelerated wound healing mediated by activation of Toll-like receptor 9.</a> Wound Repair Regeneration. 18 (6), 586-593 (2010).</li><li>Martin, P., Leibovich, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+cells+during+wound+repair:+the+good,+the+bad+and+the+ugly.">Inflammatory cells during wound repair: the good, the bad and the ugly.</a> Trends in Cell Biology. 15 (11), 599-607 (2005).</li><li>Shaw, T. J., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair:+a+showcase+for+cell+plasticity+and+migration.">Wound repair: a showcase for cell plasticity and migration.</a> Current Opinion in Cell Biology. 42, 29-37 (2016).</li><li>Hoffman, M., Monroe, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+intensity+laser+therapy+speeds+wound+healing+in+hemophilia+by+enhancing+platelet+procoagulant+activity.">Low intensity laser therapy speeds wound healing in hemophilia by enhancing platelet procoagulant activity.</a> Wound Repair Regeneration. 20 (5), 770-777 (2012).</li><li>Tomasek, J. J., Gabbiani, G., Hinz, B., Chaponnier, C., Brown, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblasts+and+mechano-regulation+of+connective+tissue+remodelling.">Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 3 (5), 349-363 (2002).</li><li>Uchiyama, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SOX2+Epidermal+Overexpression+Promotes+Cutaneous+Wound+Healing+via+Activation+of+EGFR/MEK/ERK+Signaling+Mediated+by+EGFR+Ligands.">SOX2 Epidermal Overexpression Promotes Cutaneous Wound Healing via Activation of EGFR/MEK/ERK Signaling Mediated by EGFR Ligands.</a> Journal of Investigative Dermatology. 139 (8), 1809-1820 (2019).</li><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).</li><li>Rhea, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+regulatory+factor+6+is+required+for+proper+wound+healing+in+vivo.">Interferon regulatory factor 6 is required for proper wound healing in vivo.</a> Developmental Dynamics. 249 (4), 509-522 (2020).</li></ol>

O modelo bilateral de ferida excisional é um procedimento altamente personalizável que pode ser usado para estudar muitos aspectos diferentes da cicatrização de feridas. Antes de iniciar um projeto de cicatrização de feridas, os investigadores devem realizar uma análise de energia para determinar o número de feridas necessárias para detectar um defeito de um determinado tamanho de efeito. Existem inconsistências na literatura sobre se camundongos individuais ou feridas devem ser usados como réplicas biológica...

A cicatrização de feridas cutâneas é um processo biológico complexo com fases sequencialmente sobrepostas. Requer a coordenação de processos celulares e moleculares que são regulados temporal e espacialmente para restaurar a função de barreira do epitélio danificado. Na primeira fase, inflamações, neutrófilos e macrófagos migram para a ferida, mobilizando defesas locais e sistêmicas1. Seguir e sobrepor a fase inflamatória é o estágio de proliferação. Os fibroblastos começam a proliferar rapidamente e migrar para o tecido de granulação. Os queratinócitos para longe da borda principal proliferam direcionalmente em direção à ferida à medida que queratinócitos diferenciados na borda principal migram para re-epitelializar a ferida2. Finalmente, começa a fase de remodelação e maturação, durante a qual os fibroblastos no tecido de granulação começam a sintetizar e depositar colágeno. A remodelagem e organização da nova matriz pode durar até 1 ano após a lesão3. Devido à complexidade dos eventos sobrepostos envolvendo conversas cruzadas entre múltiplos tipos celulares, e apesar de anos de pesquisa, muitos dos mecanismos celulares e moleculares subjacentes à cicatrização das feridas permanecem mal compreendidos.
O modelo de camundongos é o modelo predominante de mamíferos para investigar mecanismos de cicatrização de feridas devido à sua facilidade de uso, custo relativamente baixo e manipulabilidade genética1,4,5. Embora diferentes tipos de feridas tenham sido descritas no modelo murino, o mais comum é uma ferida excisional (seja um soco bilateral ou biópsia direta do soco), seguida pelos modelos de ferida incisional4. O modelo de ferida excisional tem uma vantagem distinta sobre o modelo incisional, pois inerentemente gera tecido de controle que não passou pelo processo de cicatrização. O tecido de biópsia de soco excisado como parte do protocolo cirúrgico pode ser processado da mesma forma que o tecido ferido e usado para estabelecer as condições homeostáticas para um critério desejado. O tecido de controle excisado também pode ser útil se avaliar os efeitos de um pré-tratamento da pele ou confirmar alteração genética bem sucedida no momento da lesão4.
Os parâmetros de cura podem ser avaliados por muitas técnicas diferentes, incluindo planimetria ou histologia. No entanto, a planimetria só pode avaliar características visíveis da ferida, e devido à presença de uma cicatriz, muitas vezes não se correlaciona com medidas de cura que são visualizadas pela histologia, tornando a histologia o "padrão-ouro" da análise4. Apesar da análise histológica ser o padrão-ouro, é mais frequentemente realizada em um subconjunto arbitrário da ferida6,7. Por exemplo, cortar a ferida em "metade" antes de incorporar e seccionar a ferida é a prática comum para reduzir o tempo e os recursos gastos na seção de materiais e análise de dados. O método de análise morfométrica descrito neste protocolo foi desenvolvido para abranger todo o tecido da ferida, para refletir com precisão as características morfológicas da ferida, e para aumentar a probabilidade de detectar defeitos de cicatrização de feridas com um pequeno tamanho de efeito. Neste protocolo, detalhamos um método cirúrgico para a geração da ferida murina mais estudada, a ferida excisional de espessura total bilateral, bem como um método detalhado e rigoroso para análise histológica, como raramente é utilizado no campo.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>100% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol Prep</td>
			<td>NOVAPLUS</td>
			<td>V9100</td>
			<td>70% Isopropyl alcohol, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium hydroxide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy pads</td>
			<td>Cellpath</td>
			<td>22-222-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black plastic sheet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Something firm yet manipulatable about the size of a sheet of paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brightfield microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>With digital acquisition capabilities and a 4X objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 60 #1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental wax sheets</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Include a ruler for scale, if applicable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection teasing needle (straight)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding molds</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 22 x 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding rings</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acetic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Conair</td>
			<td></td>
			<td>Moist dry Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blades</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint brushes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Type 6</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer solution (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>82-255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Processing cassette</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M490-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>ASR</td>
			<td></td>
			<td>.009 Regular Duty</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #10</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin biopsy punches</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Size as determined by researcher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide boxes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide warmers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrosted microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 037 246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature control water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue embedding station</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a paraffin dispenser and a cold plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue processor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a oven with a vacuum pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple antibiotic opthalmic ointment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, tapered tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WypAll X60</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>34865</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis

O modelo de ferida excisional de murina tem sido usado extensivamente para estudar cada uma das fases sequencialmente sobrepostas da cicatrização da ferida: inflamação, proliferação e remodelação. As feridas de Murina têm um leito de ferida histologicamente bem definido e facilmente reconhecível sobre o qual essas diferentes fases do processo de cura são mensuráveis. Dentro do campo, é comum o uso de um "meio" arbitrariamente definido da ferida para análises histológicas. No entanto, as feridas são uma entidade tridimensional e muitas vezes não histologicamente simétrica, apoiando a necessidade de um método bem definido e robusto de quantificação para detectar defeitos morfométricos com um pequeno tamanho de efeito. Neste protocolo, descrevemos o procedimento para a criação de feridas excisionais bilaterais e de espessura total em camundongos, bem como uma instrução detalhada sobre como medir parâmetros morfométricos usando um programa de processamento de imagem em seções seriais selecionadas. As medidas de duas dimensões do comprimento da ferida, comprimento epidérmico, área epidérmica e área da ferida são usadas em combinação com a distância conhecida entre as seções para extrapolar a área epidérmica de três dimensões que cobre a ferida, área geral da ferida, volume epidérmico e volume da ferida. Embora esta análise histológica detalhada seja mais demora e recursos do que as análises convencionais, seu rigor aumenta a probabilidade de detectar novos fenótipos em um processo de cicatrização de feridas inerentemente complexo.

A Figura 5 retrata a faixa em valores medidos e calculados obtidos pela realização de análise morfométrica em feridas do tipo selvagem geradas em diferentes cepas de camundongos por vários cirurgiões e analisadas por diferentes indivíduos. Camundongos do tipo selvagem de diferentes cepas podem apresentar diferenças estatísticas como descrito tanto em nossos estudos quanto na literatura9,10. Com base nesses resultados represe...

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Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis

Este protocolo descreve como gerar feridas excisionais bilaterais e de espessura total em camundongos e como monitorar, colher e preparar as feridas para análise morfométrica. Incluído é uma descrição aprofundada de como usar seções histológicas seriais para definir, quantificar e detectar defeitos morfométricos.

Modelo de cura da ferida excisional de Murine e Análise de Ferida Morfômica Histológica

The murine excisional wound model has been used extensively to study each of the sequentially overlapping phases of wound healing: inflammation, ...

Este protocolo usa análise histológica para obter medidas morfométricas robustas de feridas excisionais de camundongos. Usando esta técnica, podemos analisar toda a ferida usando um subconjunto de seções seriais, permitindo-nos detectar com mais precisão defeitos que poderiam ser perdidos de outra forma. Demonstrando o procedimento será Lindsey Rhea, uma pesquisadora associada do meu laboratório.Depois de confirmar a falta de resposta ao reflexo do pedal em um rato adulto anestesiado, aplique pomada aos olhos do animal e use um cortador de navalha elétrico em um movimento caudal-rostral para remover a pele na parte de trás do mouse no nível do ombro. Use uma lâmina de barbear presa em um ângulo de 20 graus da parte de trás em um movimento rostral-caudal para remover qualquer cabelo restante da pele exposta, em seguida, limpe a pele com um iodo povidone e um limpador de almofada de preparação de álcool isopropílico de 70%. Para a indução da ferida, coloque uma toalha limpa à base de papel em uma superfície plana coberta com cera dentária e posicione o rato sobre a toalha na posição propensa.Aperte a pele do rato entre as omoplatas ao longo da linha dorsal e puxe a dobra da pele sanduíche para longe do corpo. Mudando o mouse para uma posição lateral, coloque um soco de biópsia do tamanho da ferida desejada o mais próximo possível do corpo e deixe a pele relaxar. Pressione o soco usando um movimento de balanço para perfurar todas as camadas da pele e remova as biópsias de socos da ferida usando tesouras e pinças estéreis para libertar o soco da pele circundante, conforme necessário.Em seguida, deixe o mouse se recuperar com monitoramento e analgesia. Para análise morfométrica do leito da ferida, abra uma imagem digital manchada. Para definir as preferências de escala e medição, em Analisar, selecione Definir escala e digite a distância em pixels, a distância conhecida e a unidade de comprimento.Selecione Global e OK para manter a escala a mesma para cada imagem aberta e selecione Analisar e Definir Medidas para confirmar se a caixa de área está verificada. Para medir o comprimento da ferida, selecione à mão livre e use a ferramenta para rastrear ao longo da junção dérmico-epidérmico, desde o último folículo piloso do tecido não ferido de um lado da ferida até o primeiro folículo piloso do tecido não ferido do outro lado. Se a epiderme não cobrir toda a ferida, siga a junção dérmico-epidérmico de um lado da ferida onde a língua migratória termina e continue seguindo o aspecto superior do tecido de granulação ou a junção entre o tecido de granulação e a cicatriz até que a língua migratória e o primeiro folículo piloso do tecido ileso do outro lado da ferida sejam atingidos.Em seguida, clique em Analisar e Medir. O comprimento da medição aparecerá nas mesmas unidades definidas na escala. Se a epiderme não cobrir toda a ferida, meça a distância entre cada borda epidérmica seguindo o aspecto superior do tecido de granulação ou a junção entre o tecido de granulação e a cicatriz até o primeiro folículo piloso.Para medir a área da ferida, use a ferramenta à mão livre para traçar ao longo do aspecto superior da epiderme ou o aspecto superior do tecido de granulação a partir do último folículo piloso do tecido ileso de um lado da ferida até o primeiro folículo piloso do tecido não ferido do outro lado. Continue a traçar verticalmente ao longo do folículo piloso no tecido de granulação. Uma vez alcançado o folículo piloso oposto e o tecido adiposo ou o músculo, siga a borda inferior do tecido de granulação até o lado oposto da ferida e junte-se ao ponto de partida ao longo do folículo piloso para fechar a área.Se a ferida não for totalmente epitelializada, rastreie ao longo do aspecto superior da epiderme até a borda principal e retorne ao ponto de partida após a junção dérmico-epidérmico. Como ilustrado, ao tomar medições 2D em toda a ferida, pudemos calcular parâmetros não possíveis com análise 2D apenas no meio da ferida, que é um método comumente utilizado no campo. Neste experimento, foram utilizadas medidas 2D da área da ferida e mediadas sobre toda a ferida ou um subconjunto médio da ferida e não revelaram diferença significativa entre grupos experimentais ou os métodos de análise.O volume calculado da ferida, no entanto, foi significativamente diferente entre os grupos experimentais, demonstrando a importância de uma análise histológica aprofundada dos parâmetros de cicatrização das feridas. Gerar feridas consistentemente dimensionadas para análise histológica e realizar seção serial rigorosa são fundamentais para uma análise morfométrica precisa. Seções não manchadas podem ser usadas para imunofluorescência ou coloração tricromática de Masson para medir outros aspectos da cicatrização de feridas, enquanto feridas congeladas podem ser usadas ao lado da morfometria para análise quantitativa de proteínas.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Zebrafish Keratocyte Explants to Study Collective Cell Migration and Reepithelialization in Cutaneous Wound Healing

Zebrafish queratinócitos explantes para estudar migração celular Collective e reepitelização na cicatrização de feridas cutâneas

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell ...

Biologia do Desenvolvimento

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Automated Quantificação de células hematopoiéticas - Interações de células estromais em imagens histológicas de osso não descalcificadas

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Estabelecimento de um clinicamente relevantes<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mock Cataract Surgery Modelo para investigar Epithelial Wound Repair em um microambiente Native

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Otimização do Ensaio Wound zero para detectar mudanças na Murino estromais mesenquimais migração celular após a lesão por Extract fumo do cigarro Solúvel

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Adenoviral terapia genética para Diabetic Ceratopatia: Efeitos sobre a cicatrização de feridas e Stem Cell marcador expressão em humanos Corneas Organ-cultivadas e células epiteliais Limbal

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Culture of Murine Embryonic Metatarsals: A Physiological Model of Endochondral Ossification

Cultura de murino embrionárias Metatarsos: Um modelo fisiológico de Endocondral ossificação

The fundamental process of endochondral ossification is under tight regulation in the healthy individual so as to prevent disturbed development and/or ...

Rapid Isolation of BMPR-IB+ Adipose-Derived Stromal Cells for Use in a Calvarial Defect Healing Model

Isolamento rápido de BMPR-IB + adiposo-derivados de células estromais para uso em um Defeito Modelo Cura calota craniana

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own ...

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

Um dispositivo para executar a migração celular / cicatrização de feridas em uma placa de 96 poços

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish

Análises histológicas de lesão hepática alcoólica aguda em peixe-zebra

Alcoholic Liver Disease (ALD) refers to damage to the liver due to acute or chronic alcohol abuse. It is among the leading causes of alcohol-related ...

Analysis of Protein-protein Interactions and Co-localization Between Components of Gap, Tight, and Adherens Junctions in Murine Mammary Glands

Análise das Interações Proteína-Proteína e Co-localização entre Componentes das Juntas Abertas, Apertadas e Aderentes nas Glândulas Mamárias Murinas

Cell-cell interactions play a pivotal role in preserving tissue integrity and the barrier between the different compartments of the mammary gland. These ...