Name: murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis
Uploaded: 2020-08-21T15:00:00
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Agradecemos a todos los miembros del Laboratorio Dunnwald que han contribuido a la optimización de este protocolo a lo largo de los años, y a Gina Schatteman cuya persistencia en la promoción del uso de la sección en serie para el análisis de heridas hizo posible su creación. Este trabajo fue apoyado por la financiación de NIH/NIAMS a Martine Dunnwald (AR067739).

Todos los experimentos se completaron de acuerdo con las regulaciones federales y la política y los procedimientos de la Universidad de Iowa han sido aprobados por la Universidad de Iowa IACUC.
1. Animales y cría
<ol><li>Utilice ratones adultos de la línea de ratón deseada a las 8-10 semanas de edad cuando la etapa del folículo piloso esté en telógeno.</li>
	<li>El día de la cirugía, separe los ratones en jaulas limpias y haga una casa individual para minimizar la interrupción de l...

<ol>
	<li>Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration:+mechanisms,+signaling,+and+translation.">Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation.</a> Science Translational Medicine. 6 (265), (2014).</li><li>Park, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-scale+coordination+of+cellular+behaviour+promotes+epidermal+wound+repair+in+live+mice.">Tissue-scale coordination of cellular behaviour promotes epidermal wound repair in live mice.</a> Nature Cell Biology. 19 (2), 155-163 (2017).</li><li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration.">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453 (7193), 314-321 (2008).</li><li>Ansell, D. M., Campbell, L., Thomason, H. A., Brass, A., Hardman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statistical+analysis+of+murine+incisional+and+excisional+acute+wound+models.">A statistical analysis of murine incisional and excisional acute wound models.</a> Wound Repair Regeneration. 22 (2), 281-287 (2014).</li><li>Elliot, S., Wikramanayake, T. C., Jozic, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modeling+Conundrum:+Murine+Models+for+Cutaneous+Wound+Healing.">A Modeling Conundrum: Murine Models for Cutaneous Wound Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 736-740 (2018).</li><li>Crowe, M. J., Doetschman, T., Greenhalgh, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+wound+healing+in+immunodeficient+TGF-beta+1+knockout+mice.">Delayed wound healing in immunodeficient TGF-beta 1 knockout mice.</a> Journal of Investigative Dermatology. 115 (1), 3-11 (2000).</li><li>Pietramaggiori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+cutaneous+healing+in+diabetic+mice+exposed+to+healthy+peripheral+circulation.">Improved cutaneous healing in diabetic mice exposed to healthy peripheral circulation.</a> Journal of Investigative Dermatology. 129 (9), 2265-2274 (2009).</li><li>Cold Spring Harbor. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraformaldehyde+in+PBS.">Paraformaldehyde in PBS.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 1 (1), (2006).</li><li>Gerharz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+analysis+of+murine+skin+wound+healing:+standardization+of+experimental+procedures+and+impact+of+an+advanced+multitissue+array+technique.">Morphometric analysis of murine skin wound healing: standardization of experimental procedures and impact of an advanced multitissue array technique.</a> Wound Repair Regeneration. 15 (1), 105-112 (2007).</li><li>Colwell, A. S., Krummel, T. M., Kong, W., Longaker, M. T., Lorenz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+wounds+in+the+MRL/MPJ+mouse+heal+with+scar.">Skin wounds in the MRL/MPJ mouse heal with scar.</a> Wound Repair Regeneration. 14 (1), 81-90 (2006).</li><li>Le, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor+beta+3+is+required+for+proper+excisional+wound+repair+in+vivo.">Transforming growth factor beta 3 is required for proper excisional wound repair in vivo.</a> PLoS One. 7 (10), 48040 (2012).</li><li>Sato, T., Yamamoto, M., Shimosato, T., Klinman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+wound+healing+mediated+by+activation+of+Toll-like+receptor+9.">Accelerated wound healing mediated by activation of Toll-like receptor 9.</a> Wound Repair Regeneration. 18 (6), 586-593 (2010).</li><li>Martin, P., Leibovich, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+cells+during+wound+repair:+the+good,+the+bad+and+the+ugly.">Inflammatory cells during wound repair: the good, the bad and the ugly.</a> Trends in Cell Biology. 15 (11), 599-607 (2005).</li><li>Shaw, T. J., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair:+a+showcase+for+cell+plasticity+and+migration.">Wound repair: a showcase for cell plasticity and migration.</a> Current Opinion in Cell Biology. 42, 29-37 (2016).</li><li>Hoffman, M., Monroe, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+intensity+laser+therapy+speeds+wound+healing+in+hemophilia+by+enhancing+platelet+procoagulant+activity.">Low intensity laser therapy speeds wound healing in hemophilia by enhancing platelet procoagulant activity.</a> Wound Repair Regeneration. 20 (5), 770-777 (2012).</li><li>Tomasek, J. J., Gabbiani, G., Hinz, B., Chaponnier, C., Brown, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblasts+and+mechano-regulation+of+connective+tissue+remodelling.">Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 3 (5), 349-363 (2002).</li><li>Uchiyama, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SOX2+Epidermal+Overexpression+Promotes+Cutaneous+Wound+Healing+via+Activation+of+EGFR/MEK/ERK+Signaling+Mediated+by+EGFR+Ligands.">SOX2 Epidermal Overexpression Promotes Cutaneous Wound Healing via Activation of EGFR/MEK/ERK Signaling Mediated by EGFR Ligands.</a> Journal of Investigative Dermatology. 139 (8), 1809-1820 (2019).</li><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).</li><li>Rhea, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+regulatory+factor+6+is+required+for+proper+wound+healing+in+vivo.">Interferon regulatory factor 6 is required for proper wound healing in vivo.</a> Developmental Dynamics. 249 (4), 509-522 (2020).</li></ol>

El modelo bilateral de heridas por escisión es un procedimiento altamente personalizable que se puede utilizar para estudiar muchos aspectos diferentes de la cicatrización de heridas. Antes de comenzar un proyecto de cicatrización de heridas, los investigadores deben realizar un análisis de potencia para determinar el número de heridas necesarias para detectar un defecto de un tamaño de efecto particular. Existen incoherencias en la literatura sobre si los ratones individuales o las heridas deben utilizarse como r?...

La cicatrización de heridas cutáneas es un proceso biológico complejo con fases que se superponen secuencialmente. Requiere la coordinación de procesos celulares y moleculares que están regulados temporal y espacialmente para restaurar la función de barrera del epitelio dañado. En la primera fase, la inflamación, los neutrófilos y los macrófagos migran a la herida, movilizando las defensas locales y sistémicas1. Seguir y superponer la fase inflamatoria es la etapa de proliferación. Los fibroblastos comienzan a proliferar y migrar rápidamente al tejido de granulación. Los queratinocitos alejados del borde delantero proliferan direccionalmente hacia la herida a medida que los queratinocitos diferenciados en el borde delantero migran para volver a epitelizar la herida2. Finalmente, comienza la fase de remodelación y maduración, durante la cual los fibroblastos en el tejido de granulación comienzan a sintetizar y depositar colágeno. La remodelación y organización de la nueva matriz puede durar hasta 1 año después de la lesión3. Debido a la complejidad de los eventos superpuestos que implican conversaciones cruzadas entre múltiples tipos de células, y a pesar de años de investigación, muchos de los mecanismos celulares y moleculares subyacentes a la cicatrización de heridas siguen siendo poco entendidos.
El modelo de ratón es el modelo predominante de mamíferos para investigar los mecanismos de cicatrización de heridas debido a su facilidad de uso, relativamente bajo costo y manipulabilidad genética1,4,5. Aunque se han descrito diferentes tipos de heridas en el modelo murino, la más común es una herida escisional (ya sea perforación bilateral o biopsia por punción directa), seguida de los modelos de heridas incisionales4. El modelo de herida escisión tiene una clara ventaja sobre el modelo de incisión, ya que genera intrínsecamente tejido de control que no ha sido sometido al proceso de curación. El tejido de biopsia por punción que se extirpa como parte del protocolo quirúrgico se puede procesar de la misma manera que el tejido herido y se utiliza para establecer las condiciones homeostáticas para un criterio deseado. El tejido de control extirpado también puede ser útil si se evalúan los efectos de un pretratamiento cutáneo o se confirma una alteración genética exitosa en el momento de la lesión4.
Los parámetros de curación se pueden evaluar mediante muchas técnicas diferentes, como la planimetría o la histología. Sin embargo, la planimetría sólo puede evaluar las características visibles de la herida, y debido a la presencia de una costra, a menudo no se correlaciona con las mediciones de curación que se visualizan por histología, haciendo de la histología el "estándar de oro" del análisis4. A pesar de que el análisis histológico es el estándar de oro, se realiza con mayor frecuencia en un subconjunto arbitrario de la herida6,7. Por ejemplo, cortar la herida en "la mitad" antes de incrustar y secciones de la herida es actualmente una práctica común para reducir el tiempo y los recursos invertidos en la sección de materiales y análisis de datos. El método de análisis morfométrico descrito en este protocolo fue desarrollado para abarcar todo el tejido de la herida, para reflejar con precisión las características morfológicas de la herida, y para aumentar la probabilidad de detectar defectos de cicatrización de heridas con un tamaño de efecto pequeño. En este protocolo, detallamos un método quirúrgico para generar la herida murina más comúnmente estudiada, la herida excisional bilateral de espesor completo, así como un método detallado y riguroso para el análisis histológico tal se utiliza raramente en el campo.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>100% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol Prep</td>
			<td>NOVAPLUS</td>
			<td>V9100</td>
			<td>70% Isopropyl alcohol, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium hydroxide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy pads</td>
			<td>Cellpath</td>
			<td>22-222-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black plastic sheet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Something firm yet manipulatable about the size of a sheet of paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brightfield microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>With digital acquisition capabilities and a 4X objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 60 #1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental wax sheets</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Include a ruler for scale, if applicable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection teasing needle (straight)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding molds</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 22 x 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding rings</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acetic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Conair</td>
			<td></td>
			<td>Moist dry Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blades</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint brushes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Type 6</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer solution (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>82-255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Processing cassette</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M490-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>ASR</td>
			<td></td>
			<td>.009 Regular Duty</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #10</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin biopsy punches</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Size as determined by researcher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide boxes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide warmers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrosted microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 037 246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature control water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue embedding station</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a paraffin dispenser and a cold plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue processor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a oven with a vacuum pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple antibiotic opthalmic ointment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, tapered tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WypAll X60</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>34865</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis

El modelo de heridas escisionales murinas se ha utilizado ampliamente para estudiar cada una de las fases secuencialmente superpuestas de la cicatrización de heridas: inflamación, proliferación y remodelación. Las heridas murinas tienen un lecho de heridas histológicamente bien definido y fácilmente reconocible sobre el cual estas diferentes fases del proceso de curación son medibles. Dentro del campo, es común utilizar un "medio" definido arbitrariamente de la herida para análisis histológicos. Sin embargo, las heridas son una entidad tridimensional y a menudo no es histológicamente simétricas, lo que apoya la necesidad de un método de cuantificación bien definido y robusto para detectar defectos morfométricos con un tamaño de efecto pequeño. En este protocolo, describimos el procedimiento para crear heridas de escisión bilaterales de espesor completo en ratones, así como una instrucción detallada sobre cómo medir parámetros morfométricos utilizando un programa de procesamiento de imágenes en secciones seriales selectas. Las mediciones de dos dimensiones de la longitud de la herida, la longitud epidérmica, el área epidérmica y el área de la herida se utilizan en combinación con la distancia conocida entre las secciones para extrapolar el área epidérmica de tres dimensiones que cubre la herida, el área general de la herida, el volumen epidérmico y el volumen de la herida. Aunque este análisis histológico detallado consume más tiempo y recursos que los análisis convencionales, su rigor aumenta la probabilidad de detectar nuevos fenotipos en un proceso de cicatrización de heridas inherentemente complejo.

La Figura 5 representa el rango en valores medidos y calculados obtenidos mediante la realización de análisis morfométricos en heridas de tipo salvaje generadas en diferentes cepas de ratón por múltiples cirujanos y analizadas por diferentes individuos. Los ratones de tipo salvaje de diferentes cepas pueden mostrar diferencias estadísticas como se describe tanto en nuestros estudios como en la literatura9,10. Sobre la base de e...

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Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis

Este protocolo describe cómo generar heridas de escisión bilaterales de espesor completo en ratones y cómo monitorear, cosechar y preparar las heridas para el análisis morfométrico. Se incluye una descripción detallada de cómo utilizar secciones histológicas seriales para definir, cuantificar y detectar defectos morfométricos con precisión.

Modelo de cicatrización de heridas excisionales de Murine y análisis de heridas morfométricas histológicas

The murine excisional wound model has been used extensively to study each of the sequentially overlapping phases of wound healing: inflammation, ...

Este protocolo utiliza análisis histológicos para obtener mediciones morfométricas robustas de heridas por escisión de ratón. Usando esta técnica, podemos analizar toda la herida usando un subconjunto de secciones seriales, permitiéndonos detectar con mayor precisión defectos que de otro modo podrían perderse. Demostrando el procedimiento estará Lindsey Rhea, una investigadora asociada de mi laboratorio.Después de confirmar la falta de respuesta al reflejo del pedal en un ratón adulto anestesiado, aplique un ung ón en los ojos del animal y utilice un cortaca afeitar eléctrico en un movimiento caudal-rostral para eliminar el pelaje en la parte posterior del ratón a nivel del hombro. Usa una cuchilla de afeitar sostenida en un ángulo de 20 grados desde la espalda en un movimiento rostral-caudal para eliminar cualquier cabello restante de la piel expuesta, luego limpia la piel con un yodo povidona y una toallita de preparación de alcohol isopropílico al 70%. Para la inducción de la herida, cubra una toalla limpia a base de papel sobre una superficie plana cubierta con cera dental y coloque el ratón sobre la toalla en la posición propensa.Pincha la piel del ratón entre los omóplatos a lo largo de la línea media dorsal y tira del pliegue de la piel empareda lejos del cuerpo. Cambiando el ratón a una posición lateral, coloque un puñetazo de biopsia del tamaño de la herida deseado lo más cerca posible del cuerpo y permita que la piel se relaje. Presione hacia abajo en el punzón usando un movimiento de balanceo para perforar todas las capas de la piel y retire las biopsias de punzón de la herida usando tijeras estériles y pinzas para liberar el puñetazo de la piel circundante según sea necesario.A continuación, permita que el ratón se recupere con monitoreo y analgesia. Para el análisis morfométrico del lecho de la herida, abra una imagen digital de la herida teñida. Para establecer las preferencias de escala y medición, en Analizar, seleccione Establecer escala e introduzca la distancia en píxeles, la distancia conocida y la unidad de longitud.Seleccione Global y Aceptar para mantener la misma escala para cada imagen abierta y seleccione Analizar y establecer medidas para confirmar que el cuadro de área está activado. Para medir la longitud de la herida, seleccione a mano alzada y utilice la herramienta para trazar a lo largo de la unión dérmica-epidérmica, comenzando desde el último folículo piloso del tejido no lesionado en un lado de la herida hasta el primer folículo piloso del tejido no lesionado en el otro lado. Si la epidermis no cubre toda la herida, siga la unión dérmica-epidérmica en un lado de la herida donde termina la lengua migratoria y continúe siguiendo el aspecto superior del tejido de granulación o la unión entre el tejido de granulación y la costra hasta que se alcance la lengua migratoria y el primer folículo piloso del tejido no lesionado en el otro lado de la herida.A continuación, haga clic en Analizar y medir. La longitud de la medida aparecerá en las mismas unidades establecidas en la escala. Si la epidermis no cubre toda la herida, mida la distancia entre cada borde delantero epidérmico siguiendo el aspecto superior del tejido de granulación o la unión entre el tejido de granulación y la costra hasta el primer folículo piloso.Para medir el área de la herida, utilice la herramienta a mano alzada para trazar a lo largo del aspecto superior de la epidermis o el aspecto superior del tejido de granulación a partir del último folículo piloso del tejido no lesionado en un lado de la herida hasta el primer folículo piloso del tejido no lesionado en el otro lado. Continúe trazando verticalmente a lo largo del folículo piloso en el tejido de granulación. Una vez alcanzado el folículo piloso opuesto y el tejido adiposo o el músculo, siga el borde inferior del tejido de granulación hacia el lado opuesto de la herida y únase al punto de partida a lo largo del folículo piloso para cerrar el área.Si la herida no está completamente epitelializada, trace a lo largo del aspecto superior de la epidermis hasta el borde de ataque y regrese al punto de partida después de la unión dérmica-epidérmica. Como se ilustra, al tomar mediciones 2D a lo largo de toda la herida, pudimos calcular parámetros no posibles con el análisis 2D en el medio de la herida solamente, que es un método comúnmente utilizado en el campo. En este experimento, se utilizaron mediciones 2D del área de la herida y promediaron toda la herida o un subconjunto medio de la herida y no revelaron ninguna diferencia significativa entre los grupos experimentales o los métodos de análisis.El volumen calculado de la herida, sin embargo, fue significativamente diferente entre los grupos experimentales, demostrando la importancia de un análisis histológico en profundidad de los parámetros de cicatrización de heridas. La generación de heridas de tamaño constante para el análisis histológico y la realización de un riguroso corte en serie son fundamentales para un análisis morfométrico preciso. Las secciones no manchadas se pueden utilizar para la inmunofluorescencia o la tinción tricroma de Masson para medir otros aspectos de la cicatrización de heridas, mientras que las heridas congeladas flash se pueden utilizar junto con la morfometría para el análisis cuantitativo de proteínas.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Zebrafish Keratocyte Explants to Study Collective Cell Migration and Reepithelialization in Cutaneous Wound Healing

Pez cebra queratocitos explantes para estudiar la migración celular colectiva y reepitelización en Curación de Heridas cutáneas

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell ...

Investigación

Biología del Desarrollo

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Automatizado Cuantificación de células hematopoyéticas - Interacciones de células del estroma en histológicas Imágenes de descalcificados Hueso

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establecimiento de un punto de vista clínico relevante<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Catarata Mock Modelo de Cirugía en Investigando epitelial reparación de heridas en un microambiente Nativo

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Optimización del ensayo arañazos herida para detectar cambios en Murino mesenquimales estromales migración de células después de daño por Soluble Extracto humo del cigarrillo

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Terapia génica adenoviral para Diabetic Queratopatía: Efectos en la curación de heridas y Stem Cell expresión del marcador en córneas de órganos cultivados humanos y células epiteliales Limbal

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Culture of Murine Embryonic Metatarsals: A Physiological Model of Endochondral Ossification

Cultura de murinos embrionarias Metatarsianos: Un modelo fisiológico de osificación endocondral

The fundamental process of endochondral ossification is under tight regulation in the healthy individual so as to prevent disturbed development and/or ...

Rapid Isolation of BMPR-IB+ Adipose-Derived Stromal Cells for Use in a Calvarial Defect Healing Model

El aislamiento rápido de BMPR-IB + derivadas de tejido adiposo células estromales de uso en un Defecto La curación Modelo de calota

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own ...

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

Un dispositivo para realizar la migración de células / Curación de Heridas en una placa de 96 pocillos

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish

Análisis histológicos de lesiones hepáticas alcohólicas agudas en peces cebra

Alcoholic Liver Disease (ALD) refers to damage to the liver due to acute or chronic alcohol abuse. It is among the leading causes of alcohol-related ...

Analysis of Protein-protein Interactions and Co-localization Between Components of Gap, Tight, and Adherens Junctions in Murine Mammary Glands

Análisis de las interacciones proteína-proteína y co-localización entre los componentes de la separación, estrecha, y adhiere a las uniones en las glándulas mamarias murinas

Cell-cell interactions play a pivotal role in preserving tissue integrity and the barrier between the different compartments of the mammary gland. These ...