Name: murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis
Uploaded: 2020-08-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis at JoVE.com

Vi är tacksamma mot alla medlemmar i Dunnwald Lab som har bidragit till optimering av detta protokoll genom åren, och till Gina Schatteman vars uthållighet i att främja användningen av seriell snittning för såranalys gjorde dess skapelse möjlig. Detta arbete stöddes av finansiering från NIH/NIAMS till Martine Dunnwald (AR067739).

Alla experiment slutfördes i enlighet och överensstämmelse med federala bestämmelser och University of Iowa politik och förfaranden har godkänts av University of Iowa IACUC.
1. Djur och djurhållning
<ol><li>Använd vuxna möss av önskad muslinje vid 8-10 veckors ålder när hårsäcksstadiet är i telogen.</li>
	<li>På operationsdagen, separera möss i rena burar och individuellt hus för att minimera sårstörningar.</li>
</ol>2. Kirurgi
<p class="jove_con...

<ol>
	<li>Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration:+mechanisms,+signaling,+and+translation.">Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation.</a> Science Translational Medicine. 6 (265), (2014).</li><li>Park, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-scale+coordination+of+cellular+behaviour+promotes+epidermal+wound+repair+in+live+mice.">Tissue-scale coordination of cellular behaviour promotes epidermal wound repair in live mice.</a> Nature Cell Biology. 19 (2), 155-163 (2017).</li><li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration.">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453 (7193), 314-321 (2008).</li><li>Ansell, D. M., Campbell, L., Thomason, H. A., Brass, A., Hardman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statistical+analysis+of+murine+incisional+and+excisional+acute+wound+models.">A statistical analysis of murine incisional and excisional acute wound models.</a> Wound Repair Regeneration. 22 (2), 281-287 (2014).</li><li>Elliot, S., Wikramanayake, T. C., Jozic, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modeling+Conundrum:+Murine+Models+for+Cutaneous+Wound+Healing.">A Modeling Conundrum: Murine Models for Cutaneous Wound Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 736-740 (2018).</li><li>Crowe, M. J., Doetschman, T., Greenhalgh, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+wound+healing+in+immunodeficient+TGF-beta+1+knockout+mice.">Delayed wound healing in immunodeficient TGF-beta 1 knockout mice.</a> Journal of Investigative Dermatology. 115 (1), 3-11 (2000).</li><li>Pietramaggiori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+cutaneous+healing+in+diabetic+mice+exposed+to+healthy+peripheral+circulation.">Improved cutaneous healing in diabetic mice exposed to healthy peripheral circulation.</a> Journal of Investigative Dermatology. 129 (9), 2265-2274 (2009).</li><li>Cold Spring Harbor. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraformaldehyde+in+PBS.">Paraformaldehyde in PBS.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 1 (1), (2006).</li><li>Gerharz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+analysis+of+murine+skin+wound+healing:+standardization+of+experimental+procedures+and+impact+of+an+advanced+multitissue+array+technique.">Morphometric analysis of murine skin wound healing: standardization of experimental procedures and impact of an advanced multitissue array technique.</a> Wound Repair Regeneration. 15 (1), 105-112 (2007).</li><li>Colwell, A. S., Krummel, T. M., Kong, W., Longaker, M. T., Lorenz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+wounds+in+the+MRL/MPJ+mouse+heal+with+scar.">Skin wounds in the MRL/MPJ mouse heal with scar.</a> Wound Repair Regeneration. 14 (1), 81-90 (2006).</li><li>Le, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor+beta+3+is+required+for+proper+excisional+wound+repair+in+vivo.">Transforming growth factor beta 3 is required for proper excisional wound repair in vivo.</a> PLoS One. 7 (10), 48040 (2012).</li><li>Sato, T., Yamamoto, M., Shimosato, T., Klinman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+wound+healing+mediated+by+activation+of+Toll-like+receptor+9.">Accelerated wound healing mediated by activation of Toll-like receptor 9.</a> Wound Repair Regeneration. 18 (6), 586-593 (2010).</li><li>Martin, P., Leibovich, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+cells+during+wound+repair:+the+good,+the+bad+and+the+ugly.">Inflammatory cells during wound repair: the good, the bad and the ugly.</a> Trends in Cell Biology. 15 (11), 599-607 (2005).</li><li>Shaw, T. J., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair:+a+showcase+for+cell+plasticity+and+migration.">Wound repair: a showcase for cell plasticity and migration.</a> Current Opinion in Cell Biology. 42, 29-37 (2016).</li><li>Hoffman, M., Monroe, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+intensity+laser+therapy+speeds+wound+healing+in+hemophilia+by+enhancing+platelet+procoagulant+activity.">Low intensity laser therapy speeds wound healing in hemophilia by enhancing platelet procoagulant activity.</a> Wound Repair Regeneration. 20 (5), 770-777 (2012).</li><li>Tomasek, J. J., Gabbiani, G., Hinz, B., Chaponnier, C., Brown, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblasts+and+mechano-regulation+of+connective+tissue+remodelling.">Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 3 (5), 349-363 (2002).</li><li>Uchiyama, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SOX2+Epidermal+Overexpression+Promotes+Cutaneous+Wound+Healing+via+Activation+of+EGFR/MEK/ERK+Signaling+Mediated+by+EGFR+Ligands.">SOX2 Epidermal Overexpression Promotes Cutaneous Wound Healing via Activation of EGFR/MEK/ERK Signaling Mediated by EGFR Ligands.</a> Journal of Investigative Dermatology. 139 (8), 1809-1820 (2019).</li><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).</li><li>Rhea, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+regulatory+factor+6+is+required+for+proper+wound+healing+in+vivo.">Interferon regulatory factor 6 is required for proper wound healing in vivo.</a> Developmental Dynamics. 249 (4), 509-522 (2020).</li></ol>

Den bilaterala excisional sår modellen är en mycket anpassningsbar förfarande som kan användas för att studera många olika aspekter av sårläkning. Innan du påbörjar ett sårläkningsprojekt bör utredarna utföra en effektanalys för att fastställa antalet sår som behövs för att upptäcka en defekt av en viss effektstorlek. Inkonsekvenser finns inom litteraturen om huruvida enskilda möss eller sår bör användas som biologiska replikat, men en färsk studie visade att det inte finns någon signifikant kor...

Testning sårläkning är en komplex biologisk process med sekventiellt överlappande faser. Det kräver samordning av cellulära och molekylära processer som är tidsmässigt och rumsligt reglerade för att återställa barriärfunktionen hos det skadade epitelet. I den första fasen, inflammation, neutrofiler och makrofager migrera in i såret, mobilisera lokala och systemiska försvar1. Efter och överlappande den inflammatoriska fasen är spridningsstadiet. Fibroblaster börjar snabbt proliferera och migrera in i granulationsvävnaden. Keratinocyter bort från framkanten riktad föröka sig mot såret som differentierade keratinocyter i framkanten migrera till åter epithelialisera såret2. Slutligen börjar ombyggnads- och mognadsfasen, under vilken fibroblaster i granulationsvävnaden börjar syntetisera och deponera kollagen. Ombyggnad och organisation av den nya matrisen kan pågå upp till 1 år efter skada3. På grund av komplexiteten i överlappande händelser som involverar cross-talk mellan flera celltyper, och trots år av forskning, många av de cellulära och molekylära mekanismer bakom sårläkning förbli dåligt förstådd.
Musmodellen är den dominerande däggdjursmodellen för att undersöka mekanismer för sårläkning på grund av deras användarvänlighet, relativt låg kostnad och genetisk manipulabilitet1,4,5. Även om olika typer av sår har beskrivits i murine modellen, den vanligaste är en excisional sår (antingen bilaterala punch eller direkt punch biopsi), följt av incisional sår modeller4. Excisional sår modellen har en klar fördel jämfört med den incisional modellen som det i sig genererar kontroll vävnad som inte har genomgått läkningsprocessen. Den hålslagsbiopsivävnad som strukits som en del av det kirurgiska protokollet kan bearbetas på samma sätt som den sårade vävnaden och användas för att fastställa de homeostatiska villkoren för ett önskat kriterium. Struken kontrollvävnad kan också vara användbar om man bedömer effekterna av en hudförbehandling eller bekräftar en lyckad genförändelse vid tidpunkten för skadan4.
Läkningsparametrar kan bedömas av många olika tekniker, inklusive planimetry eller histologi. Dock kan planimetry endast utvärdera synliga egenskaper av såret, och på grund av närvaron av en sårskorpa, ofta inte korrelerar till mätningar av läkning som visualiseras av histologi, därigenom gör histologi "guldmyntfoten" av analys4. Trots histologisk analys är den gyllene standarden, är det oftast utförs på en godtycklig delmängd av såret6,7. Till exempel, skära såret i "halv" före inbäddning och avsnittning såret är för närvarande vanligt att minska den tid och resurser som spenderas på sektionering material och dataanalys. Metoden för morfometer analys som beskrivs i detta protokoll utvecklades för att omfatta hela sårvävnaden, att korrekt återspegla morfologiska egenskaper såret, och att öka sannolikheten för att upptäcka sårläkning defekter med en liten effekt storlek. I detta protokoll, vi detalj en kirurgisk metod för att generera de vanligaste studerade murine såret, den bilaterala full-tjocklek excisional sår, samt en detaljerad och rigorös metod för histologiska analys sådan används sällan i fältet.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>100% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol Prep</td>
			<td>NOVAPLUS</td>
			<td>V9100</td>
			<td>70% Isopropyl alcohol, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium hydroxide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy pads</td>
			<td>Cellpath</td>
			<td>22-222-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black plastic sheet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Something firm yet manipulatable about the size of a sheet of paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brightfield microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>With digital acquisition capabilities and a 4X objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 60 #1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental wax sheets</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Include a ruler for scale, if applicable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection teasing needle (straight)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding molds</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22 x 22 x 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding rings</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acetic acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Conair</td>
			<td></td>
			<td>Moist dry Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blades</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint brushes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Type 6</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer solution (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>82-255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Processing cassette</td>
			<td>Simport Scientific Inc.</td>
			<td>M490-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>ASR</td>
			<td></td>
			<td>.009 Regular Duty</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades #10</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin biopsy punches</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Size as determined by researcher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide boxes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide warmers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrosted microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 037 246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature control water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue embedding station</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a paraffin dispenser and a cold plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue processor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Minimum of a oven with a vacuum pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple antibiotic opthalmic ointment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tweezers, tapered tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterile for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WypAll X60</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>34865</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine excisional wound healing model and histological morphometric wound analysis

Den murine excisional sårmodellen har använts i stor utsträckning för att studera var och en av de sekventiellt överlappande faserna av sårläkning: inflammation, proliferation och ombyggnad. Murine sår har en histologiskt väldefinierad och lätt igenkännlig sårbädd över vilka dessa olika faser av läkningsprocessen är mätbara. Inom området är det vanligt att använda ett godtyckligt definierat "mitten" av såret för histologiska analyser. Sår är dock en tredimensionell enhet och ofta inte histologiskt symmetriska, stödja behovet av en väldefinierad och robust metod för kvantifiering att upptäcka morphometric defekter med en liten effekt storlek. I detta protokoll beskriver vi proceduren för att skapa bilaterala, full-tjocklek excisional sår i möss samt en detaljerad instruktion om hur man mäter morfometer parametrar med hjälp av ett bildbehandlingsprogram på välj seriella avsnitt. De tvådimensionsmått av sårlängd, epidermal längd, epidermalt område och sårområde används i kombination med det kända avståndet mellan sektioner för att extrapolera det epidermala området med tre dimensioner som täcker såret, den totala sårytan, den epidermala volymen och sårvolymen. Även om denna detaljerade histologiska analys är mer tid och resurs konsumerar än konventionella analyser, ökar dess rigor sannolikheten för att upptäcka nya fenotyper i en inneboende komplexa sårläkningsprocessen.

Figur 5 skildrar intervallet i uppmätta och beräknade värden som erhålls genom att utföra morfometrisk analys på vildtypssår som genereras i olika musstammar av flera kirurger och analyseras av olika individer. Möss av vildtyp från olika stammar kan visa statistiska skillnader som beskrivs både i våra studier och ilitteraturen 9,10. Baserat på dessa representativa resultat rekommenderar vi att möss från endast en stam, ...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis at JoVE.com

Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis

Detta protokoll beskriver hur du genererar bilaterala excisionella sår med full tjocklek hos möss och hur man därefter övervakar, skördar och förbereder såren för morfometrisk analys. Inkluderat är en ingående beskrivning av hur man använder seriella histologiska avsnitt för att definiera, exakt kvantifiera och upptäcka morfometriska defekter.

Murine Excisional sårläkning Modell och histologiska morfinmetriska såranalys

The murine excisional wound model has been used extensively to study each of the sequentially overlapping phases of wound healing: inflammation, ...

Detta protokoll använder histologiska analys för att få robust morphometric mätningar av mus excisional sår. Med hjälp av denna teknik kan vi analysera hela såret med hjälp av en delmängd av seriella sektioner, så att vi mer exakt kan upptäcka defekter som annars kan missas. Demonstrerar proceduren blir Lindsey Rhea, en forskarassistent från mitt laboratorium.Efter att ha bekräftat en brist på svar på pedal reflex i en sövd vuxen mus, applicera salva på djurets ögon och använda en elektrisk rakkniv clipper i en caudal-rostral rörelse för att ta bort pälsen på baksidan av musen på axeln nivå. Använd ett rakblad som hålls i en 20 graders vinkel från baksidan i en rostral-caudal rörelse för att ta bort eventuella kvarvarande hår från den exponerade huden, rengör sedan huden med en povidon jod och en 70%isopropyl alkohol prep pad pad torka. För sårinduktion, drapera en ren pappersbaserad handduk på en plan yta täckt med dentalvax och placera musen på handduken i utsatt position.Nyp ihop musens hud mellan skulderbladen längs ryggsmide och dra den inklämda huden vika bort från kroppen. Växla musen till en sidoliggande position, placera en biopsi punch av önskad sårstorlek så nära kroppen som möjligt och låta huden slappna av. Tryck ner på punsch med hjälp av en gungande rörelse för att punktera alla lager av huden och ta bort punsch tarmbiopsier från såret med hjälp av steril sax och pincett för att frigöra punsch från den omgivande huden vid behov.Låt sedan musen återhämta sig med övervakning och analgesi. För morfometrisk analys av sårbädden, öppna en digital fläckad sårbild. Om du vill ställa in skalnings- och måttpreferenserna markerar du Ange skala under Analysera och anger avståndet i pixlar, det kända avståndet och på längdenhet.Välj Global och OK om du vill behålla skalan densamma för varje öppen bild och välj Analysera och Ange mått för att bekräfta att områdesrutan är markerad. För att mäta sårlängden väljer du frihand, och använder verktyget för att spåra längs den dermal-epidermala korsningen, med början från den sista hårsäcken i den oskadade vävnaden på ena sidan av såret till den första hårsäcken i den oskadade vävnaden på andra sidan. Om epidermis inte täcker hela såret, följ den dermal-epidermala korsningen på ena sidan av såret där migrerande tungan slutar och fortsätta följa den överlägsna aspekten av granulationsvävnaden eller korsningen mellan granulationsvävnaden och sårskorpan tills migrerande tungan och den första hårsäcken i den oskadade vävnaden på andra sidan av såret nås.Klicka sedan på Analysera och mäta. Längden på mätningen kommer att visas i samma enheter som anges i skalan. Om epidermis inte täcker hela såret, mät avståndet mellan varje epidermal framkant efter den överlägsna aspekten av granuleringsvävnaden eller korsningen mellan granuleringsvävnaden och sårskorpan till den första hårsäcken.För att mäta sårområdet, använd frihandsverktyget för att spåra längs den överlägsna aspekten av epidermis eller den överlägsna aspekten av granuleringsvävnaden med början från den sista hårsäcken i den oskadade vävnaden på ena sidan av såret till den första hårsäcken i den oskadade vävnaden på den andra sidan. Fortsätt att spåra vertikalt längs hårsäcken i granulationsvävnaden. När den motsatta hårsäcken och fettvävnad eller muskel nås, följ sämre gränsen av granulationsvävnaden till motsatt sida av såret och gå med utgångspunkten längs hårsäcken för att stänga området.Om såret inte är helt epithelialized, spåra längs den överlägsna aspekten av epidermis tills framkanten och återgå till utgångspunkten efter den dermal-epidermala korsningen. Som illustreras, när man tar 2D-mätningar i hela såret, kunde vi beräkna parametrar inte möjligt med 2D-analys på mitten av såret bara, vilket är en vanligt förekommande metod i fältet. I detta experiment användes 2D-mätningar av sårområde och i genomsnitt över hela såret eller en mitt undergrupp av såret och visade ingen signifikant skillnad mellan experimentella grupper eller analysmetoderna.Den beräknade sårvolymen var dock väsentligt annorlunda mellan de experimentella grupperna, vilket visar vikten av en ingående histologisk analys av sårläkningsparametrar. Generera konsekvent storlek sår för histologiska analys och utför rigorösa seriell sectioning är avgörande för en exakt morphometric analys. Obefläckade sektioner kan användas för immunofluorescens eller Massons trichromefärgning för att mäta andra aspekter av sårläkning medan blixtfrysta sår kan användas vid sidan av morfinometri för kvantitativ proteinanalys.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Zebrafish Keratocyte Explants to Study Collective Cell Migration and Reepithelialization in Cutaneous Wound Healing

Zebrafisk Keratocyte Explants att studera Kollektiv Cell Migration och reepithelialization i Kutan sårläkning

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell ...

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Automatiserad Kvantifiering av hematopoetisk cell - stromacells- Interaktioner i Histologiska bilder från Undecalcified Bone

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Inrättande av en kliniskt relevant<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mock kataraktoperation Modell för utredning Epithelial sårläkning i en Native mikromiljö

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Optimering av sår Scratch analys för att upptäcka förändringar i Murine Mesenkymala Stromal Cell Migration Efter Skador av lösliga cigarett rökextrakt

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Adenoviral genterapi för Diabetic keratopati: Effekter på sårläkning och Stamcells Marker Expression in Human Organ-odlade hornhinnor och limbus epitelceller

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Culture of Murine Embryonic Metatarsals: A Physiological Model of Endochondral Ossification

Odling av Murina embryonala fotbenen: En fysiologisk modell av endokondral benbildning

The fundamental process of endochondral ossification is under tight regulation in the healthy individual so as to prevent disturbed development and/or ...

Rapid Isolation of BMPR-IB+ Adipose-Derived Stromal Cells for Use in a Calvarial Defect Healing Model

Snabb Isolering av BMPR-IB + Fett-stromala celler för användning i en calvarial defekt Healing Modell

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own ...

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

En anordning för utförande Cell Migration / Sårläkning i en platta med 96 brunnar

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish

Histologiska analyser av akut alkoholhaltig leverskada i sebrafisk

Alcoholic Liver Disease (ALD) refers to damage to the liver due to acute or chronic alcohol abuse. It is among the leading causes of alcohol-related ...

Analysis of Protein-protein Interactions and Co-localization Between Components of Gap, Tight, and Adherens Junctions in Murine Mammary Glands

Analys av protein-proteininteraktioner och samlokalisering mellan komponenter av gap-, täta och adherens-föreningar i murina mammalkörtlar

Cell-cell interactions play a pivotal role in preserving tissue integrity and the barrier between the different compartments of the mammary gland. These ...