Name: in vitro culture strategy for oocytes from early antral follicle in cattle
Uploaded: 2020-07-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle at JoVE.com

وقد دعم هذا العمل من قبل Regione Lombardia PSR INNOVA n.201801061529 و UNIMI n.PSR 2019_DIP_027_ALUCI_01

تم جمع المبيضين من 4 إلى 8 سنوات من العمر هولشتاين الأبقار الحلوب تعافى في المسلخ المحلية (INALCA S.p.A. ، أوسبيداليتو لودجيانو ، LO ، IT 2270M CE ، إيطاليا).
1- إعداد وسائط الإعلام
ملاحظة: يجب أن تكون كافة الوسائط تحضير أربع ساعات على الأقل قبل الاستخدام. يتم احتضان الوسائط ا...

<ol>
	<li>Lonergan, P., Fair, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+Oocytes+in+Vitro.">Maturation of Oocytes in Vitro.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 4, 255-268 (2016).</li><li>Luciano, A. M., Franciosi, F., Modina, S. C., Lodde, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction-mediated+communications+regulate+chromatin+remodeling+during+bovine+oocyte+growth+and+differentiation+through+cAMP-dependent+mechanism(s).">Gap junction-mediated communications regulate chromatin remodeling during bovine oocyte growth and differentiation through cAMP-dependent mechanism(s).</a> Biology of Reproduction. 85 (6), 1252-1259 (2011).</li><li>McLaughlin, M., Telfer, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+development+in+bovine+primordial+follicles+is+promoted+by+activin+and+FSH+within+a+two-step+serum-free+culture+system.">Oocyte development in bovine primordial follicles is promoted by activin and FSH within a two-step serum-free culture system.</a> Reproduction. 139 (6), 971-978 (2010).</li><li>Galli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Achievements+and+unmet+promises+of+assisted+reproduction+technologies+in+large+animals:+a+per-sonal+perspective.">Achievements and unmet promises of assisted reproduction technologies in large animals: a per-sonal perspective.</a> Animal Reproduction. 14 (3), 614-621 (2017).</li><li>Luciano, A. M., Sirard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+in+vitro+maturation+of+oocytes:+a+matter+of+follicular+differentiation.">Successful in vitro maturation of oocytes: a matter of follicular differentiation.</a> Biology of Reproduction. 98 (2), 162-169 (2018).</li><li>Lonergan, P., Fair, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-produced+bovine+embryos:+dealing+with+the+warts.">In vitro-produced bovine embryos: dealing with the warts.</a> Theriogenology. 69 (1), 17-22 (2008).</li><li>Clement, M. D. F., Dalbies-Tran, R., Estienne, A., Fabre, S., Mansanet, C., Monget, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ovarian+reserve+of+primordial+follicles+and+the+dynamic+reserve+of+antral+growing+follicles:+what+is+the+link.">The ovarian reserve of primordial follicles and the dynamic reserve of antral growing follicles: what is the link.</a> Biology of Reproduction. 90 (4), 85 (2014).</li><li>Lussier, J. G., Matton, P., Dufour, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+rates+of+follicles+in+the+ovary+of+the+cow.">Growth rates of follicles in the ovary of the cow.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 81 (2), 301-307 (1987).</li><li>Fair, T., Hulshof, S. C., Hyttel, P., Greve, T., Boland, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+ultrastructure+in+bovine+primordial+to+early+tertiary+follicles.">Oocyte ultrastructure in bovine primordial to early tertiary follicles.</a> Anatomy and Embryology (Berlin). 195 (4), 327-336 (1997).</li><li>Pavlok, A., Lucas-Hahn, A., Niemann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertilization+and+developmental+competence+of+bovine+oocytes+derived+from+different+categories+of+antral+follicles.">Fertilization and developmental competence of bovine oocytes derived from different categories of antral follicles.</a> Molecular Reproduction and Development. 31 (1), 63-67 (1992).</li><li>Blondin, P., Sirard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+and+follicular+morphology+as+determining+characteristics+for+developmental+competence+in+bovine+oocytes.">Oocyte and follicular morphology as determining characteristics for developmental competence in bovine oocytes.</a> Molecular Reproduction and Development. 41 (1), 54-62 (1995).</li><li>Harada, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+oocytes+from+early+antral+follicles+grow+to+meiotic+competence+in+vitro:+effect+of+FSH+and+hypoxanthine.">Bovine oocytes from early antral follicles grow to meiotic competence in vitro: effect of FSH and hypoxanthine.</a> Theriogenology. 48 (5), 743-755 (1997).</li><li>Hirao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+growth+and+development+of+bovine+oocyte-granulosa+cell+complexes+on+the+flat+substratum:+effects+of+high+polyvinylpyrrolidone+concentration+in+culture+medium.">In vitro growth and development of bovine oocyte-granulosa cell complexes on the flat substratum: effects of high polyvinylpyrrolidone concentration in culture medium.</a> Biology of Reproduction. 70 (1), 83-91 (2004).</li><li>Alm, H., Katska-Ksiazkiewicz, L., Rynska, B., Tuchscherer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+meiotic+competence+of+bovine+oocytes+originating+from+early+antral+ovarian+follicles.">Survival and meiotic competence of bovine oocytes originating from early antral ovarian follicles.</a> Theriogenology. 65 (7), 1422-1434 (2006).</li><li>Taketsuru, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+oocytes+in+secondary+follicles+grow+in+medium+containing+bovine+plasma+after+vitrification.">Bovine oocytes in secondary follicles grow in medium containing bovine plasma after vitrification.</a> Journal of Reproduction and Development. 57 (1), 99-106 (2011).</li><li>Endo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol+supports+in+vitro+development+of+bovine+early+antral+follicles.">Estradiol supports in vitro development of bovine early antral follicles.</a> Reproduction. 145 (1), 85-96 (2013).</li><li>Makita, M., Miyano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+promote+bovine+oocyte+growth+and+connection+with+granulosa+cells.">Steroid hormones promote bovine oocyte growth and connection with granulosa cells.</a> Theriogenology. 82 (4), 605-612 (2014).</li><li>Yamamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+to+live+young+from+bovine+small+oocytes+after+growth,+maturation+and+fertilization+in+vitro.">Development to live young from bovine small oocytes after growth, maturation and fertilization in vitro.</a> Theriogenology. 52 (1), 81-89 (1999).</li><li>Alam, M. H., Lee, J., Miyano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+PDE3A+sustains+meiotic+arrest+and+gap+junction+of+bovine+growing+oocytes+in+in+vitro+growth+culture.">Inhibition of PDE3A sustains meiotic arrest and gap junction of bovine growing oocytes in in vitro growth culture.</a> Theriogenology. 118, 110-118 (2018).</li><li>Lodde, V., Modina, S., Galbusera, C., Franciosi, F., Luciano, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+chromatin+remodeling+in+germinal+vesicle+bovine+oocytes:+interplay+with+gap+junction+functionality+and+developmental+competence.">Large-scale chromatin remodeling in germinal vesicle bovine oocytes: interplay with gap junction functionality and developmental competence.</a> Molecular Reproduction and Development. 74 (6), 740-749 (2007).</li><li>Lodde, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+morphology+and+transcriptional+silencing+in+relation+to+chromatin+remodeling+during+the+final+phases+of+bovine+oocyte+growth.">Oocyte morphology and transcriptional silencing in relation to chromatin remodeling during the final phases of bovine oocyte growth.</a> Molecular Reproduction and Development. 75 (5), 915-924 (2008).</li><li>Dieci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+cumulus+cell+gene+expression+indicate+the+benefit+of+a+pre-maturation+step+to+improve+in-vitro+bovine+embryo+production.">Differences in cumulus cell gene expression indicate the benefit of a pre-maturation step to improve in-vitro bovine embryo production.</a> Molecular Human Reproduction. 22 (12), 882-897 (2016).</li><li>Soares, A. C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+interact+with+natriuretic+peptide+C+to+delay+nuclear+maturation,+to+maintain+oocyte-cumulus+communication+and+to+improve+the+quality+of+in+vitro-produced+embryos+in+cattle.">Steroid hormones interact with natriuretic peptide C to delay nuclear maturation, to maintain oocyte-cumulus communication and to improve the quality of in vitro-produced embryos in cattle.</a> Reproduction, Fertililty and Development. 29 (11), 2217-2224 (2017).</li><li>Soares, A. C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+control+of+oocyte+large-scale+chromatin+configuration+in+different+cattle+breeds.">Characterization and control of oocyte large-scale chromatin configuration in different cattle breeds.</a> Theriogenology. 141, 146-152 (2020).</li><li>Franciosi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natriuretic+peptide+precursor+C+delays+meiotic+resumption+and+sustains+gap+junction-mediated+communication+in+bovine+cumulus-enclosed+oocytes.">Natriuretic peptide precursor C delays meiotic resumption and sustains gap junction-mediated communication in bovine cumulus-enclosed oocytes.</a> Biology of Reproduction. 91 (3), 61 (2014).</li><li>Luciano, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+different+levels+of+intracellular+cAMP+on+the+in+vitro+maturation+of+cattle+oocytes+and+their+subsequent+development+following+in+vitro+fertilization.">Effect of different levels of intracellular cAMP on the in vitro maturation of cattle oocytes and their subsequent development following in vitro fertilization.</a> Molecular Reproduction and Development. 54 (1), 86-91 (1999).</li><li>Bilodeau-Goeseels, S., Panich, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+oocyte+quality+on+development+and+transcriptional+activity+in+early+bovine+embryos.">Effects of oocyte quality on development and transcriptional activity in early bovine embryos.</a> Animal Reproduction Science. 71 (3-4), 143-155 (2002).</li><li>Dieci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cilostamide+on+gap+junction+communication+dynamics,+chromatin+remodeling,+and+competence+acquisition+in+pig+oocytes+following+parthenogenetic+activation+and+nuclear+transfer.">The effect of cilostamide on gap junction communication dynamics, chromatin remodeling, and competence acquisition in pig oocytes following parthenogenetic activation and nuclear transfer.</a> Biology of Reproduction. 89 (3), 68 (2013).</li><li>Shu, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cilostamide+and+forskolin+on+the+meiotic+resumption+and+embryonic+development+of+immature+human+oocytes.">Effects of cilostamide and forskolin on the meiotic resumption and embryonic development of immature human oocytes.</a> Human Reproduction. 23 (3), 504-513 (2008).</li><li>Lodde, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+supports+transcription+and+improves+meiotic+competence+of+growing+bovine+oocytes.">Zinc supports transcription and improves meiotic competence of growing bovine oocytes.</a> Reproduction. 159 (6), 679-691 (2020).</li><li>Henderson, K. M., McNeilly, A. S., Swanston, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotrophin+and+steroid+concentrations+in+bovine+follicular+fluid+and+their+relationship+to+follicle+size.">Gonadotrophin and steroid concentrations in bovine follicular fluid and their relationship to follicle size.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 65 (2), 467-473 (1982).</li><li>Kruip, T. A., Dieleman, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormone+concentrations+in+the+fluid+of+bovine+follicles+relative+to+size,+quality+and+stage+of+the+oestrus+cycle.">Steroid hormone concentrations in the fluid of bovine follicles relative to size, quality and stage of the oestrus cycle.</a> Theriogenology. 24 (4), 395-408 (1985).</li><li>Sakaguchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationships+between+the+antral+follicle+count,+steroidogenesis,+and+secretion+of+follicle-stimulating+hormone+and+anti-Mullerian+hormone+during+follicular+growth+in+cattle.">Relationships between the antral follicle count, steroidogenesis, and secretion of follicle-stimulating hormone and anti-Mullerian hormone during follicular growth in cattle.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 17 (1), 88 (2019).</li><li>Makita, M., Miyano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgens+promote+the+acquisition+of+maturation+competence+in+bovine+oocytes.">Androgens promote the acquisition of maturation competence in bovine oocytes.</a> Journal of Reproduction and Development. 61 (3), 211-217 (2015).</li><li>Walters, K. A., Allan, C. M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+actions+and+the+ovary.">Androgen actions and the ovary.</a> Biology of Reproduction. 78 (3), 380-389 (2008).</li><li>Luciano, A. M., Pappalardo, A., Ray, C., Peluso, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+inhibits+large+granulosa+cell+apoptosis+by+stimulating+progesterone+synthesis+and+regulating+the+distribution+of+intracellular+free+calcium.">Epidermal growth factor inhibits large granulosa cell apoptosis by stimulating progesterone synthesis and regulating the distribution of intracellular free calcium.</a> Biology of Reproduction. 51 (4), 646-654 (1994).</li><li>Gordon, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory Production of Cattle Embryos, 2nd edn. , (2003).</li><li>Telfer, E. E., McLaughlin, M., Ding, C., Thong, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+two-step+serum-free+culture+system+supports+development+of+human+oocytes+from+primordial+follicles+in+the+presence+of+activin.">A two-step serum-free culture system supports development of human oocytes from primordial follicles in the presence of activin.</a> Human Reproduction. 23 (5), 1151-1158 (2008).</li><li>McLaughlin, M., Albertini, D. F., Wallace, W. H. B., Anderson, R. A., Telfer, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metaphase+II+oocytes+from+human+unilaminar+follicles+grown+in+a+multi-step+culture+system.">Metaphase II oocytes from human unilaminar follicles grown in a multi-step culture system.</a> Molecular Human Reproduction. 24 (3), 135-142 (2018).</li><li>Fair, T., Hyttel, P., Greve, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+oocyte+diameter+in+relation+to+maturational+competence+and+transcriptional+activity.">Bovine oocyte diameter in relation to maturational competence and transcriptional activity.</a> Molecular Reproduction and Development. 42 (4), 437-442 (1995).</li></ol>

هنا نحن وصف نظام ثقافة لزبد البويضات المتنامية التي تعزز التنمية بويضات لمدة 5 أيام من خلال دعم قدرتها على البقاء ومنع استئناف meiotic. هذا الجانب الأخير هو من أهم أهمية للسماح للنمو المستمر والتمايز اللازمة لمنح البويضة مع الكفاءة التنموية meiotic والجنينية2,20, ا?...

خلال فترة الحياة الإنجابية، يتم إطلاق جزء ضئيل فقط من البويضات الموجودة في المبيض الناضج، في قناة فالوب عند الإباضة، وتتوفر للتخصبات والتطور إلى جنين قابل للحياة1. من ناحية أخرى، فإن معظم البويضات داخل المبيض تخضع للضجر ولا يتم الإباضة أبداً. في المختبر إنتاج الجنين (IVP) التكنولوجيات قد حاولت زيادة استغلال احتياطي المبيض2,3. وقد سمحت هذه التكنولوجيات حتى الآن بالتدخل في مجال المحافظة على الخصوبة، وبرامج الاختيار في الثروة الحيوانية، وحفظ الأنواع المهددة بالانقراض. ومع ذلك، فإن معظم البروتوكولات تستخدم البويضات التي أكملت أساسا مرحلة النمو داخل بصيلات المبيض الأنتال، وبالتالي يشار إليها على أنها البويضات المزروعة بالكامل. في الماشية، حيث تستخدم تقنيات IVP على نطاق واسع، البويضات المزروعة بالكامل تصل إلى قطرها النهائي من حوالي 120 ميكرومتر ويتم جمعها من بصيلات التي تمتد من 2 إلى 8 ملم في القطر (بصيلات النمل المتوسط)1. عند العزل من بصيلات، والبويضات مثل في المختبر نضجت وتخصيب. ثم يتم استزراع الزيجوت حتى مرحلة الكيسة الأرومية ونقلها إما إلى مستلم أو إلى المبرد. في الماشية، وكذلك في العديد من الأنواع الأخرى، على الرغم من الإمكانات التي تقدمها IVP، لم يتحسن عدد الجنين في المختبر لكل بقرة بشكل كبير على مدى السنوات ال 40 الماضية. ويرجع ذلك جزئيا إلى العدد المحدود من البويضات المزروعة بالكامل التي تملأ المبيض في وقت معين والتي يمكن استردادها وإخضاعها لتقنيات IVP القياسية4،5،6.
البويضات المغلقة داخل بصيلات النملية المبكرة، أي تلك الجريبات التي تقل عن 2 مم في القطر، تمثل مصدراً محتملاً لاستخدامها في برامج الحفاظ على الخصوبة7 ، كما يحتوي المبيض تقريباً على 10 مرات أكثر من بصيلات الأنترال المبكرة من متوسطة8. ومع ذلك، هذه البويضات لا تزال في مرحلة النمو ولم تصل بعد المرحلة نمت بالكامل9. على هذا النحو، فإنها لا تزال نشطة النسخي، وإنتاج mRNAs التي سيتم تخزينها للخطوات التنموية في وقت لاحق، ولم تخضع بعد كل عملية التمايز المطلوبة لمنح البويضات مع القدرة على استئناف تلقائيا واستكمال meiosis أنا معزولة مرة واحدة من المقصورة الجريبي10،11. ولذلك، لا يمكن تقديمها مباشرة إلى بروتوكولات النضج في المختبر القياسي (IVM)، ولكنها تتطلب فترة إضافية من الثقافة تسمح لهم بإكمال مرحلة النمو والتمييز بشكل صحيح.
الانتقال من مرحلة النمو إلى مرحلة كاملة النمو، والتي تحدث في الماشية عندما يتطور الجريبات من أوائل النمل إلى المرحلة الأنرال المتوسطة، هي واحدة من الخطوات الحاسمة خلال التنمية البويضية. في الماشية، حاولت عدة دراسات لتكبيل هذه الأحداث في المختبر2،12،13،14،15،16،17،18،19. بيد أنه لم يتم حتى الآن وضع بروتوكولات موثوقة ولم يُبلّغ عن سوى نجاح محدود. وفقا للدراسات السابقة20, هذه البويضات المتنامية تشكل سكان متجانس. بالإضافة إلى كونها نشطة بشكل نسخي ، يتم تفريق chromatin في vesicle الجرثومي (GV) ، في تكوين يسمى GV02،21. وعلى العكس من ذلك، فإن عدد البويضات المزروعة بالكامل التي تم الحصول عليها من بصيلات النمل المتوسطة أكثر تجانساً، وهي حالة تعكسها درجات مختلفة من ضغط الكروماتين (GV1 وGV2 وGV3) التي يمكن ملاحظتها20. من بين هذه البيانات السابقة أظهرت أن GV2 وGV3 بويضات تتميز عموما من نوعية أفضل وأعلى كفاءة النمو الجنينية20,21,22,23,24.
بدءا من الملاحظات المذكورة أعلاه، هنا نحن وصف نظام ثقافة طويلة 5 أيام من البويضات (L-IVCO) التي تسمح للتمايز من البويضات معزولة كمجمعات الزلق cumulus-oocyte (COCs) من بصيلات الانطلية المبكرة. وقد تطورت هذه الاستراتيجية ثقافة من 10 سنوات دراسات طويلة أجريت في مختبرنا وجذور أرضها على تطوير سابقا 24-48 ساعة في ثقافة البويضات في المختبر (IVCO)2, نظم الخداج23,,25 والزنك خلال ثقافة البويض. مزيج من هرمون تحفيز بصيلات (FSH) و phosphodiesterase-3 (PDE3) المانع, قادرة على تعزيز cumulus-بويضة الاتصال2, منع استئناف meiotic في وقت غير مناسب2, ودعم نمو البويضات2 تم استخدامها.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:635px;" width="633">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:215px;">4-well dishes</td>
			<td style="width:127px;">Nunclon</td>
			<td style="width:123px;">179830</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:215px;">96-well dish</td>
			<td style="width:127px;">Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td style="width:123px;">356649</td>
			<td>BioCoat&#8482; Collagen I</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:215px;">Bovine Serum Albumin (Fatty acid free)</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">A8806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Bovine Serum Albumin (Fraction V)</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">A3311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cell culture water</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">W3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cilostamide</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>C7971</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cysteamine</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M9768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Digital camera</td>
			<td style="width:127px;">Nikon Corp</td>
			<td>Camera DS-5M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Disodium phosphate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Estradiol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E2758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Glutamax Supplement</td>
			<td style="width:127px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Gonal F</td>
			<td style="width:127px;">Merck Serono</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Heparin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Hepes</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">H3784</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Vacuum pump</td>
			<td>Cook-IVF</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Incubator</td>
			<td style="width:127px;">Sanyo</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Kanamycin sulfate from Streptomyces kanamyceticus</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">K1377</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:45px;width:215px;">Medium 199</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M3769</td>
			<td style="width:171px;">Powder for hepes-buffered TCM199</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:26px;width:215px;">Medium 199</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M2520</td>
			<td>Powder for M199-D</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microscope</td>
			<td>Nikon Corp</td>
			<td>Nikon Diaphot</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microscope</td>
			<td style="width:127px;">Nikon Corp</td>
			<td style="width:123px;">Eclipse E 600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Monopotassium phosphate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Penicilin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Phenol Red</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Polyvinyl alcohol</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P8137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Polyvinylpyrrolidone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>P5288</td>
			<td>360k molecular weight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Potassium chloride</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Progesterone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P8783</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium choride</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium pyruvate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>P4562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Streptomycin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Testosterone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">86500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Triton X</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">T9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vectashield with DAPI</td>
			<td style="width:127px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">H1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:123px;">W3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Zinc sulfate heptahydrate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">Z0251</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro culture strategy for oocytes from early antral follicle in cattle

يمثل الاحتياطي المحدود من البويضات الناضجة القابلة للتخصيب عائقاً رئيسياً أمام نجاح التكاثر المساعد في الثدييات. وبالنظر إلى أنه خلال فترة الحياة الإنجابية فقط حوالي 1٪ من البويضات في المبيض الناضجة والاباضة، وقد تم تطوير العديد من التقنيات لزيادة استغلال احتياطي المبيض لأعداد متزايدة من بصيلات غير مبيضة. وقد سمحت هذه التكنولوجيات بالتدخل في مجال المحافظة على الخصوبة، وبرامج الاختيار في الثروة الحيوانية، وحفظ الأنواع المهددة بالانقراض. ومع ذلك، فإن الإمكانات الهائلة لاحتياطي المبيض لا تزال غير مستغلة إلى حد كبير. ففي الأبقار، على سبيل المثال، بذلت بعض المحاولات لدعم الثقافة المختبرية للبويضات في مراحل نمو محددة، ولكن لم يتم بعد وضع بروتوكولات فعالة وموثوقة. هنا نحن وصف نظام الثقافة التي تستنسخ الظروف الفسيولوجية للمرحلة المسامية المقابلة، التي تعرف لتطوير في المختبر تزايد البويضات التي تم جمعها من بصيلات الأنطلية الأبقار في وقت مبكر إلى مرحلة نمت بالكامل، المقابلة لبصيلات النمل المتوسطة في الجسم الحي. تم استخدام مزيج من الهرمونات ومثبط phosphodiesterase 3 لمنع استئناف meiotic في وقت غير مناسب وتوجيه التمايز البويض.

في نهاية L-IVCO، تغير التشكل الإجمالي لCOCS وتم تحديد 4 فئات بناءً على مظهر خلايا الركام، كما هو موضح في الشكل 2. استنادا إلى المعايير المورفولوجية التي اعتمدت عادة لاختيار COCs صحية11,26,,27, الفئة 1, 2 و 3 واعتبرت صحية, في حين أن الفئة 4...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle at JoVE.com

In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle

نحن نصف إجراءات عزل البويضات المتنامية من بصيلات المبيض في المراحل المبكرة من التطور ، وكذلك إعداد نظام ثقافة في المختبر يمكن أن يدعم النمو والتمايز حتى المرحلة الكاملة النمو.

في استراتيجية ثقافة فيترو لبويضات من أوائل الجريب الأنترال في الماشية

The limited reserve of mature, fertilizable oocytes represents a major barrier for the success of assisted reproduction in mammals. Considering that ...

في هذا البروتوكول الفيديو، ونحن نبين بالتفصيل، نظام ثقافة لزراعة البويضات البقرية. يدعم النظام قابلية البويضات للحياة في الثقافة لمدة تصل إلى خمسة أيام ويسمح بتمايزها. باستخدام هذا النظام culture، يمكن زراعة البويضات التي يتم جمعها من بصيلات النمل الصغيرة، والتي لا تستخدم عادة في البروتوكولات القياسية في المختبر في الإنتاج، لزيادة توافر شعيا القابلة للتخصيب.ويمكن أن يوفر هذا الاستغلال للاحتياطي الأوسع نطاقا خيارات جديدة من أجل الإنقاذ الجيني للأنواع المهددة بالانقراض، أو للأسرة البقرية، أو السلالات المحلية المعرضة لخطر التآكل الجيني. للبدء، إعداد 15 ملليلتر من الثقافة الأساسية المتوسطة وتكملة ذلك وفقا لاتجاهات المخطوطات. المقبل، وإعداد ثلاثة ملليلتر من عقد المتوسطة عن طريق إضافة خمسة cilostamide micromolar إلى الوسط الثقافة الأساسية وصبه في طبق بيتري 35 ملليمتر.إعداد متوسط IVCO طويل من خلال استكمال الثقافة الأساسية المتوسطة وفقا لاتجاهات المخطوطات. أضف 200 ميكرولترات من متوسطة IVCO طويلة لكل بئر من 96 لوحة مغلفة بشكل جيد. ثم املأ الحواف الأربعة بالماء المعقم للتعويض عن التبخر والحفاظ على الرطوبة المناسبة أثناء الاستزراع.احتضان لوحة 96-well والمتوسطة عقد في 38.5 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون مع أقصى نسبة الرطوبة. اغسل المبيضين أربع مرات في ملح ملحي معقمة، والحفاظ على درجة حرارة 26 درجة مئوية. ثم تُطرّح جميع بصيلات القطر التي يزيد قطرها عن ملليمترين، مع إبرة قياس 18 متصلة بمضخة التطلع.الدانتيل المبيضين المستنشق في منقار مع المالحة العقيمة الحفاظ على 26 درجة مئوية. ضع مبيض واحد في كل مرة على لوحة تقطيع PTFE معقمة ، واستخدم شفرة جراحية رقم 22 لقطع شرائح من قشرة المبيض التي سمكها من 1.5 إلى 2 ملليمتر ، ومتوازية مع المحور الرئيسي للجهاز. الدانتيل شرائح من قشرة المبيض في طبق بيتري الزجاج المعقم، مع تشريح المتوسطة على لوحة دافئة، في 38.5 درجة مئوية.الدانتيل شريحة قشرة المبيض واحد في طبق بيتري الزجاج 60 ملليمتر، مع اثنين إلى ثلاثة ملليلتر من M199D تحت مجهر تشريح، حدد الجريبات التي هي بين 5 واثنين ملليمتر. تحديد بصيلات غير الارتلي صحية تحت المجهر ستيريو، من خلال مراقبة المعلمات المورفولوجية، مثل مظهر شفاف ساطع بشكل موحد، الأوعية الدموية واسعة النطاق، وطبقة حبيبات العادية. بينما بصيلات الاترفيك لها مظهر رمادي معتم، والأوعية الدموية سيئة، مع COC الظلام داخل.تجاهل بصيلات الاترتيك ومعالجة جميع الآخرين. استخدم الشفرة الجراحية لإزالة أنسجة المبيض المحيطة بالجريبات على جانب واحد، حتى يتم كشفها. ثم استخدم إبرة قياس 26 لعمل شق في جدار المسام المكشوفة بعناية ، والتي ستفرج عن المحتوى الجريبي الذي يتكون من COC ، والسوائل الجريبية ، وكتل الخلايا.تحديد COC وفحصه لتكامل الكامولو، ونهاية pellucida سلامة والتجانس من السيتوبلازم. إذا تم استيفاء هذه المعايير، استلهمي COC مع ماصة P20. الدانتيل COC المعزولة في M199D cilostamide، ومواصلة إجراء العزل لمدة 30 دقيقة.بعد اختيار COCs، كما هو موضح سابقا، وإعداد 16 قطرات مع 20 ميكرولترات من سيلوستاميد M199D في طبق بيتري 60 ملليمتر، ووضع واحد COC صحية في كل قطرة. استخدم مجهرًا مقلوبًا متصلًا بكاميرا لقياس قطر البويضة، باستثناء زونا بيلوسيدا. مع تصور واضح للبويضة، وجعل اثنين من القياسات عمودي، وضمان أن متوسط من القياسات اثنين ضمن نطاق 100 إلى 110 ميكرومتر.يمكن أن يكون من الصعب قياس قطر البويضات بدقة ، وذلك بسبب خلايا cumulus المرافقة. COCs التي لها بويضات مع قطر أصغر أو أكبر, أو التي ليس لديها بويضة مدورة, أو تلك مع البويضات التي لا يمكن قياسها, ينبغي أن يتم تجاهلها. نقل COCs المختارة في طبق 35 ملليمتر يحتوي على متوسط M199H، والاحتفاظ بها في الحاضنة في 38.5 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون مع أقصى نسبة الرطوبة، تأكد من أن الوقت العام للعمل لا يتجاوز ساعتين.بمجرد الانتهاء من إجراءات الاختيار والجمع ، قم بنقل COC واحد إلى مركز كل بئر من اللوحة التي تم إعدادها مسبقًا. احتضان لوحة لمدة خمسة أيام في 38.5 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون مع الحد الأقصى للرطوبة، وتحديث المتوسطة كل يومين. لتجديد المتوسطة، استبدال 100 ميكرولترات من المتوسط القديم مع 100 ميكرولترات من الطازجة طويلة IVCO المتوسطة، القيام بذلك تحت المجهر ستيريو لتجنب تحريك COCs.في نهاية IVCO طويلة، وتحليل مورفولوجيا COCs. إذا كان لديهم استثمار خلية cumulus المدمجة مع عدم وجود علامة على التوسع cumulus، أو انحطاط الخلية، تصنيفها على أنها فئة واحدة. إذا كان COCs لديها استثمار خلية cumulus المدمجة مع عدم وجود علامة على التوسع cumulus أو انحطاط الخلية، ومع تشكيلات تشبه أو أكثر من antrum، تصنيفها على أنها من الفئة الثانية.الفئة الثالثة COCs، وتظهر عدة طبقات من الخلايا الركامية مع عدم وجود علامة على التوسع cumulus، وبعض الخلايا المصنفة في الطبقة الخارجية من الخلايا الكامولو ولا تشكيل يشبه النوبة. تصنيف COCs على أنها الفئة الرابعة إذا كانت تظهر فقدان وفير من الخلايا الركام تمتد لأكثر من 50٪ من سطح البويضة، فضلا عن علامات انحطاط الخلية ومخلفات الخلية. في النهاية من طويلة IVCO ال فظّة مورفولوجيا من ال COC غيّرت.وتم تحديد أربع فئات بناء على مظهر الخلايا الرامبلية. وبشكل عام، تم تحليل 74 بويضة في خمس بويضات بيولوجية، منها 9.45٪ تم التخلص منها من التقييم الإضافي. تم الحكم على الطبقات الأولى واثنين وثلاثة بصحة جيدة، في حين أظهرت الفئة الرابعة علامات واضحة على الانحطاط، مثل عدم وجود طبقات كاملة من خلايا الكامولو المحيطة بالبويضات.تعتبر هذه COCs غير مناسب للخضوع لإجراءات المتلقين في إعداد IVP المحتملة. وأظهر تقييم المرحلة الوَنية في نهاية الـ IVCO الطويلة أن نسبة أعلى بكثير من البويضات ظلت موقوفة في مرحلة غير ناضجة، مع وجود الكروماتين لا يزال مُحاطاً داخل الأصوات العالمية. عندما تم التحقيق في التكثيف الكروماتين داخل الأصوات العالمية كعلامة على اكتساب الكفاءة، لوحظ انتقال تكوين الكروماتين إلى مراحل أكثر تكثيفا، وهي GV اثنين و GV ثلاثة، في 59٪ من البويضات. استأنفت نسبة صغيرة meiosis الوصول إلى metaphase مرحلة واحدة، أو انحطاط.هذه النتائج تثبت أن ثقافة L-IVCO تدعم صلاحية البويضة، مع منع استئناف meiotic لمدة خمسة أيام. في نهاية IVCO طويلة، يمكن استخدام COCs في إجراءات المصب لإنتاج الجنين في المختبر، أي في مرحلة النضج، والتسميد، وثقافة الجنين. هذه الخطوات ضرورية لتقديم دليل على مفهوم أن البويضة اكتسبت كفاءة تنموية أعلى.إلى جانب عقد إمكانات زيادة كمية البويضات القابلة للتخصيب ، فإن نظام ثقافة IVCO الطويل هو أداة للعلماء المهتمين بتشريح العمليات الخلوية والجزيئية التي تنظم تشكيل gamete المختصة.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

فهم توالد المبكر باستخدام المبسطة<em&gt; في الموقع</em&gt; بروتوكول التهجين في<em&gt; القيطم</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

مقاربة Optogenetic لتقييم تشكيل الوصلات العصبية في نظام المشارك الثقافة

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

الخلايا الجذعية مثل<em&gt; القيطم</em&gt; الجنينية إإكسبلنتس إلى الدراسة في وقت مبكر العصبية التنموية الميزات<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em

Understanding the genetic programs underlying neural development is an important goal of developmental and stem cell biology. In the amphibian blastula, ...

Isolation and Characterization of Mouse Antral Oocytes Based on Nucleolar Chromatin Organization

عزل وتوصيف ماوس الغارية البويضات واستنادا إلى منظمة ونين نويي

This protocol describes a simple and quick method to isolate and characterize mouse antral GV (Germinal Vesicle) oocytes as able (SN, Surrounded ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

وجه التفريق بين فروعه المكونة للدم البدائي والنهائي من الخلايا الجذعية Pluripotent البشرية

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Visualization of Cellular Electrical Activity in Zebrafish Early Embryos and Tumors

التصور للنشاط الكهربائي الخلوية في الزرد الأجنة في وقت مبكر، والأورام

Bioelectricity, endogenous electrical signaling mediated by ion channels and pumps located on the cell membrane, plays important roles in signaling ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

جيل بانكريتويدس التعبير عن الأنسولين خالية من السقالة، ثلاثي الأبعاد من الماوس المتكفل البنكرياس في المختبر

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

تصور بالعقدة ولوحة نوتوتشوردال في جاسترولاتينج الأجنة الماوس باستخدام الميكروسكوب الإلكتروني المسح وكله جبل الفلورة

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

في المختبر توليد المشتقات سميط من البشرية التي يسببها الخلايا الجذعية Pluripotent

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

In Vitro Culture of Epithelial Cells from Different Anatomical Regions of the Human Amniotic Membrane

في المختبر الثقافة من الخلايا الظهاريه من المناطق التشريحية المختلفة من الغشاء السلوى الإنسان

Several protocols have been reported in the literature for the isolation and culture of human amniotic epithelial cells (HAEC). However, these assume that ...