Name: in vitro culture strategy for oocytes from early antral follicle in cattle
Uploaded: 2020-07-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי Regione Lombardia PSR INNOVA n.201801061529 ו- UNIMI n.PSR 2019_DIP_027_ALUCI_01

השחלות נאספו בין 4 ל 8 שנים חולב הולשטיין פרות התאושש בבית המטבחיים המקומי (INALCA S.p.A., Ospedaletto Lodigiano, LO, IT 2270M לסה"נ, איטליה).
1. הכנה לתקשורת
הערה: יש להכין את כל אמצעי המדיה לפחות ארבע שעות לפני השימוש. מדיה המאגרת נתרן ביקרבונט מדגירה ב 38.5 ° C ו 5% CO2 באוויר, לחות מק?...

<ol>
	<li>Lonergan, P., Fair, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+Oocytes+in+Vitro.">Maturation of Oocytes in Vitro.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 4, 255-268 (2016).</li><li>Luciano, A. M., Franciosi, F., Modina, S. C., Lodde, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction-mediated+communications+regulate+chromatin+remodeling+during+bovine+oocyte+growth+and+differentiation+through+cAMP-dependent+mechanism(s).">Gap junction-mediated communications regulate chromatin remodeling during bovine oocyte growth and differentiation through cAMP-dependent mechanism(s).</a> Biology of Reproduction. 85 (6), 1252-1259 (2011).</li><li>McLaughlin, M., Telfer, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+development+in+bovine+primordial+follicles+is+promoted+by+activin+and+FSH+within+a+two-step+serum-free+culture+system.">Oocyte development in bovine primordial follicles is promoted by activin and FSH within a two-step serum-free culture system.</a> Reproduction. 139 (6), 971-978 (2010).</li><li>Galli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Achievements+and+unmet+promises+of+assisted+reproduction+technologies+in+large+animals:+a+per-sonal+perspective.">Achievements and unmet promises of assisted reproduction technologies in large animals: a per-sonal perspective.</a> Animal Reproduction. 14 (3), 614-621 (2017).</li><li>Luciano, A. M., Sirard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+in+vitro+maturation+of+oocytes:+a+matter+of+follicular+differentiation.">Successful in vitro maturation of oocytes: a matter of follicular differentiation.</a> Biology of Reproduction. 98 (2), 162-169 (2018).</li><li>Lonergan, P., Fair, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-produced+bovine+embryos:+dealing+with+the+warts.">In vitro-produced bovine embryos: dealing with the warts.</a> Theriogenology. 69 (1), 17-22 (2008).</li><li>Clement, M. D. F., Dalbies-Tran, R., Estienne, A., Fabre, S., Mansanet, C., Monget, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ovarian+reserve+of+primordial+follicles+and+the+dynamic+reserve+of+antral+growing+follicles:+what+is+the+link.">The ovarian reserve of primordial follicles and the dynamic reserve of antral growing follicles: what is the link.</a> Biology of Reproduction. 90 (4), 85 (2014).</li><li>Lussier, J. G., Matton, P., Dufour, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+rates+of+follicles+in+the+ovary+of+the+cow.">Growth rates of follicles in the ovary of the cow.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 81 (2), 301-307 (1987).</li><li>Fair, T., Hulshof, S. C., Hyttel, P., Greve, T., Boland, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+ultrastructure+in+bovine+primordial+to+early+tertiary+follicles.">Oocyte ultrastructure in bovine primordial to early tertiary follicles.</a> Anatomy and Embryology (Berlin). 195 (4), 327-336 (1997).</li><li>Pavlok, A., Lucas-Hahn, A., Niemann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertilization+and+developmental+competence+of+bovine+oocytes+derived+from+different+categories+of+antral+follicles.">Fertilization and developmental competence of bovine oocytes derived from different categories of antral follicles.</a> Molecular Reproduction and Development. 31 (1), 63-67 (1992).</li><li>Blondin, P., Sirard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+and+follicular+morphology+as+determining+characteristics+for+developmental+competence+in+bovine+oocytes.">Oocyte and follicular morphology as determining characteristics for developmental competence in bovine oocytes.</a> Molecular Reproduction and Development. 41 (1), 54-62 (1995).</li><li>Harada, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+oocytes+from+early+antral+follicles+grow+to+meiotic+competence+in+vitro:+effect+of+FSH+and+hypoxanthine.">Bovine oocytes from early antral follicles grow to meiotic competence in vitro: effect of FSH and hypoxanthine.</a> Theriogenology. 48 (5), 743-755 (1997).</li><li>Hirao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+growth+and+development+of+bovine+oocyte-granulosa+cell+complexes+on+the+flat+substratum:+effects+of+high+polyvinylpyrrolidone+concentration+in+culture+medium.">In vitro growth and development of bovine oocyte-granulosa cell complexes on the flat substratum: effects of high polyvinylpyrrolidone concentration in culture medium.</a> Biology of Reproduction. 70 (1), 83-91 (2004).</li><li>Alm, H., Katska-Ksiazkiewicz, L., Rynska, B., Tuchscherer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+meiotic+competence+of+bovine+oocytes+originating+from+early+antral+ovarian+follicles.">Survival and meiotic competence of bovine oocytes originating from early antral ovarian follicles.</a> Theriogenology. 65 (7), 1422-1434 (2006).</li><li>Taketsuru, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+oocytes+in+secondary+follicles+grow+in+medium+containing+bovine+plasma+after+vitrification.">Bovine oocytes in secondary follicles grow in medium containing bovine plasma after vitrification.</a> Journal of Reproduction and Development. 57 (1), 99-106 (2011).</li><li>Endo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol+supports+in+vitro+development+of+bovine+early+antral+follicles.">Estradiol supports in vitro development of bovine early antral follicles.</a> Reproduction. 145 (1), 85-96 (2013).</li><li>Makita, M., Miyano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+promote+bovine+oocyte+growth+and+connection+with+granulosa+cells.">Steroid hormones promote bovine oocyte growth and connection with granulosa cells.</a> Theriogenology. 82 (4), 605-612 (2014).</li><li>Yamamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+to+live+young+from+bovine+small+oocytes+after+growth,+maturation+and+fertilization+in+vitro.">Development to live young from bovine small oocytes after growth, maturation and fertilization in vitro.</a> Theriogenology. 52 (1), 81-89 (1999).</li><li>Alam, M. H., Lee, J., Miyano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+PDE3A+sustains+meiotic+arrest+and+gap+junction+of+bovine+growing+oocytes+in+in+vitro+growth+culture.">Inhibition of PDE3A sustains meiotic arrest and gap junction of bovine growing oocytes in in vitro growth culture.</a> Theriogenology. 118, 110-118 (2018).</li><li>Lodde, V., Modina, S., Galbusera, C., Franciosi, F., Luciano, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+chromatin+remodeling+in+germinal+vesicle+bovine+oocytes:+interplay+with+gap+junction+functionality+and+developmental+competence.">Large-scale chromatin remodeling in germinal vesicle bovine oocytes: interplay with gap junction functionality and developmental competence.</a> Molecular Reproduction and Development. 74 (6), 740-749 (2007).</li><li>Lodde, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+morphology+and+transcriptional+silencing+in+relation+to+chromatin+remodeling+during+the+final+phases+of+bovine+oocyte+growth.">Oocyte morphology and transcriptional silencing in relation to chromatin remodeling during the final phases of bovine oocyte growth.</a> Molecular Reproduction and Development. 75 (5), 915-924 (2008).</li><li>Dieci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+cumulus+cell+gene+expression+indicate+the+benefit+of+a+pre-maturation+step+to+improve+in-vitro+bovine+embryo+production.">Differences in cumulus cell gene expression indicate the benefit of a pre-maturation step to improve in-vitro bovine embryo production.</a> Molecular Human Reproduction. 22 (12), 882-897 (2016).</li><li>Soares, A. C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+interact+with+natriuretic+peptide+C+to+delay+nuclear+maturation,+to+maintain+oocyte-cumulus+communication+and+to+improve+the+quality+of+in+vitro-produced+embryos+in+cattle.">Steroid hormones interact with natriuretic peptide C to delay nuclear maturation, to maintain oocyte-cumulus communication and to improve the quality of in vitro-produced embryos in cattle.</a> Reproduction, Fertililty and Development. 29 (11), 2217-2224 (2017).</li><li>Soares, A. C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+control+of+oocyte+large-scale+chromatin+configuration+in+different+cattle+breeds.">Characterization and control of oocyte large-scale chromatin configuration in different cattle breeds.</a> Theriogenology. 141, 146-152 (2020).</li><li>Franciosi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natriuretic+peptide+precursor+C+delays+meiotic+resumption+and+sustains+gap+junction-mediated+communication+in+bovine+cumulus-enclosed+oocytes.">Natriuretic peptide precursor C delays meiotic resumption and sustains gap junction-mediated communication in bovine cumulus-enclosed oocytes.</a> Biology of Reproduction. 91 (3), 61 (2014).</li><li>Luciano, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+different+levels+of+intracellular+cAMP+on+the+in+vitro+maturation+of+cattle+oocytes+and+their+subsequent+development+following+in+vitro+fertilization.">Effect of different levels of intracellular cAMP on the in vitro maturation of cattle oocytes and their subsequent development following in vitro fertilization.</a> Molecular Reproduction and Development. 54 (1), 86-91 (1999).</li><li>Bilodeau-Goeseels, S., Panich, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+oocyte+quality+on+development+and+transcriptional+activity+in+early+bovine+embryos.">Effects of oocyte quality on development and transcriptional activity in early bovine embryos.</a> Animal Reproduction Science. 71 (3-4), 143-155 (2002).</li><li>Dieci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cilostamide+on+gap+junction+communication+dynamics,+chromatin+remodeling,+and+competence+acquisition+in+pig+oocytes+following+parthenogenetic+activation+and+nuclear+transfer.">The effect of cilostamide on gap junction communication dynamics, chromatin remodeling, and competence acquisition in pig oocytes following parthenogenetic activation and nuclear transfer.</a> Biology of Reproduction. 89 (3), 68 (2013).</li><li>Shu, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cilostamide+and+forskolin+on+the+meiotic+resumption+and+embryonic+development+of+immature+human+oocytes.">Effects of cilostamide and forskolin on the meiotic resumption and embryonic development of immature human oocytes.</a> Human Reproduction. 23 (3), 504-513 (2008).</li><li>Lodde, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+supports+transcription+and+improves+meiotic+competence+of+growing+bovine+oocytes.">Zinc supports transcription and improves meiotic competence of growing bovine oocytes.</a> Reproduction. 159 (6), 679-691 (2020).</li><li>Henderson, K. M., McNeilly, A. S., Swanston, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotrophin+and+steroid+concentrations+in+bovine+follicular+fluid+and+their+relationship+to+follicle+size.">Gonadotrophin and steroid concentrations in bovine follicular fluid and their relationship to follicle size.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 65 (2), 467-473 (1982).</li><li>Kruip, T. A., Dieleman, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormone+concentrations+in+the+fluid+of+bovine+follicles+relative+to+size,+quality+and+stage+of+the+oestrus+cycle.">Steroid hormone concentrations in the fluid of bovine follicles relative to size, quality and stage of the oestrus cycle.</a> Theriogenology. 24 (4), 395-408 (1985).</li><li>Sakaguchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationships+between+the+antral+follicle+count,+steroidogenesis,+and+secretion+of+follicle-stimulating+hormone+and+anti-Mullerian+hormone+during+follicular+growth+in+cattle.">Relationships between the antral follicle count, steroidogenesis, and secretion of follicle-stimulating hormone and anti-Mullerian hormone during follicular growth in cattle.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 17 (1), 88 (2019).</li><li>Makita, M., Miyano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgens+promote+the+acquisition+of+maturation+competence+in+bovine+oocytes.">Androgens promote the acquisition of maturation competence in bovine oocytes.</a> Journal of Reproduction and Development. 61 (3), 211-217 (2015).</li><li>Walters, K. A., Allan, C. M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+actions+and+the+ovary.">Androgen actions and the ovary.</a> Biology of Reproduction. 78 (3), 380-389 (2008).</li><li>Luciano, A. M., Pappalardo, A., Ray, C., Peluso, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+inhibits+large+granulosa+cell+apoptosis+by+stimulating+progesterone+synthesis+and+regulating+the+distribution+of+intracellular+free+calcium.">Epidermal growth factor inhibits large granulosa cell apoptosis by stimulating progesterone synthesis and regulating the distribution of intracellular free calcium.</a> Biology of Reproduction. 51 (4), 646-654 (1994).</li><li>Gordon, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory Production of Cattle Embryos, 2nd edn. , (2003).</li><li>Telfer, E. E., McLaughlin, M., Ding, C., Thong, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+two-step+serum-free+culture+system+supports+development+of+human+oocytes+from+primordial+follicles+in+the+presence+of+activin.">A two-step serum-free culture system supports development of human oocytes from primordial follicles in the presence of activin.</a> Human Reproduction. 23 (5), 1151-1158 (2008).</li><li>McLaughlin, M., Albertini, D. F., Wallace, W. H. B., Anderson, R. A., Telfer, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metaphase+II+oocytes+from+human+unilaminar+follicles+grown+in+a+multi-step+culture+system.">Metaphase II oocytes from human unilaminar follicles grown in a multi-step culture system.</a> Molecular Human Reproduction. 24 (3), 135-142 (2018).</li><li>Fair, T., Hyttel, P., Greve, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+oocyte+diameter+in+relation+to+maturational+competence+and+transcriptional+activity.">Bovine oocyte diameter in relation to maturational competence and transcriptional activity.</a> Molecular Reproduction and Development. 42 (4), 437-442 (1995).</li></ol>

כאן אנו מתארים מערכת תרבות לגידול oocytes המקדמת פיתוח oocyte במשך 5 ימים על ידי תמיכה בכדאיות שלהם ומניעת חידוש מיוטי. היבט זה הוא בעל חשיבות עליונה כדי לאפשר את המשך הצמיחה והבידול הדרושים כדי לחולץ את האוציט עם יכולת התפתחותית מיוטיתועוברית 2,,20, שאחרת היה נחסם ע...

במהלך תוחלת החיים של הרבייה, רק חלק קטן של oocytes הנוכחיים בשחלה בוגרת, משתחררים בחצוצרות בעת הביוץ, והם זמינים להיות מופרית ולפתחלעובר קיימא 1. מצד שני, רוב האוציטים בתוך השחלה עוברים אטרזיה ולעולם לא מביצים. במבחנה עובר ייצור (IVP) טכנולוגיות ניסו להגדיל את הניצול של שמורת השחלות2,,3. עד כה, טכנולוגיות כאלה אפשרו התערבויות של שימור פוריות, תוכניות בחירה במשק החי ושימור מינים בסכנת הכחדה. אף על פי כן, רוב הפרוטוקולים להשתמש oocytes כי בעצם השלימו את שלב הצמיחה בתוך זקיק השחלות antral, ולכן מכונים oocytes גדל במלואו. בבקר, שבו טכנולוגיות IVP נמצאות בשימוש נרחב, oocytes גדל באופן מלא להגיע קוטר סופי של כ 120 μm נאספים זקיקים המשתרעים מ 2 עד 8 מ"מ קוטר (זקיקי אנטרל בינוני)1. עם הבידוד מהזקיקים, אוציטים כאלה הם במבחנה התבגרו ומופריים. הזיגוטים מתהתרבות לאחר מכן עד לשלב blastocyst או מועברים לנמען או cryopreserved. בבקר, כמו גם מינים רבים אחרים, למרות הפוטנציאל המוצע על ידי IVP, מספר העובר המיוצר במבחנה לכל פרה לא השתפר במידה רבה ב-40 השנים האחרונות. זאת בין היתר בשל המספר המוגבל של oocytes גדל באופן מלא המאכלסים שחלה בזמן נתון אשר ניתן לאחזר ולהיות נתון טכניקות IVPסטנדרטיות 4,5,6.
oocytes המוקפים בתוך זקיקי antral מוקדם, כלומר, זקיקים אלה כי הם פחות מ 2 מ"מ קוטר, מייצגים מקור פוטנציאלי לשמש בתוכניות שימור פוריות7 , כמו שחלה בערך מכיל 10 פעמים זקיקים אנטראליים מוקדמים יותר מאשר נמלהבינונית 8. עם זאת, oocytes אלה עדיין בשלב הצמיחה ועדיין לא הגיעו לשלב 9 גדלבמלואו. בתור שכזה, הם עדיין פעילים תעתיק, הפקת mRNAs כי יאוחסן עבור צעדים התפתחותיים מאוחרים יותר, ועדיין לא עברו את כל תהליך הבידול הנדרש כדי לתן את oocytes עם היכולת של באופן ספונטני התחדשות והשלמת meiosis אני פעם בודדתי מת תאזקיקים 10,,11. לכן, הם לא יכולים להיות מוגשים ישירות לפרוטוקולי התבגרות חוץ-חוץ (IVM) סטנדרטיים, אבל הם דורשים תקופה נוספת של תרבות שתאפשר להם להשלים את שלב הצמיחה ולהבדיל כראוי.
המעבר מההגדלה לשלב הבוגר במלואו, אשר בבקר מתרחש כאשר הזקיק מתפתח מהעקבר המוקדם לשלב הנמלי הבינוני, הוא אחד הצעדים הקריטיים במהלך פיתוח oocyte. בבקר ניסו מספר מחקרים לסיכום אירועים אלהבמבחנה 2,,12,13,,14,,15,,16,,17,,18,,19., עם זאת, עד כה לא פותחו פרוטוקולים אמינים ורק דווח על הצלחה מוגבלת. על פי מחקריםקודמים 20, oocytes גדל אלה מהווים אוכלוסייה הומוגנית. מלבד היותם פעילים בתמלול, הכרומטין שלהם מפוזר בפסית הנבט (GV), בתצורה הנקראת GV02,21. לעומת זאת, האוכלוסייה של oocytes גדל באופן מלא המתקבל זקיקי אנטרל בינוני הוא הטרוגני יותר, מצב כי הוא שיקוף על ידי דרגות שונות של דחיסת כרומטין (GV1, GV2 ו GV3) שניתןלצפות 20. בין אלה, נתונים קודמים הראו כי oocytes GV2 ו GV3 מאופיינים באופן כללי באיכות טובה יותר ויכולת התפתחותית עוברית גבוההיותר 20,21,22,23,24.
החל מהתצפיות לעיל, כאן אנו מתארים מערכת תרבות ארוכה של 5 ימים של oocytes (L-IVCO) המאפשרת בידול של oocytes מבודד כמו קומפלקסים cumulus-oocyte (COCs) מזקיקי אנטרל מוקדם. אסטרטגיית תרבות זו התפתחה מ 10 שנים מחקרים ארוכים שנערכו במעבדה שלנו שורשים הקרקע שלה על שפותחו בעבר 24-48 שעות בתרבות oocyte מבחנה (IVCO)2,מערכות טרום בגרות 23,,25 ותוספי אבץ במהלך תרבות oocyte. שילוב של הורמון מגרה זקיק (FSH) ו פוספודאסטראז-3 (PDE3) מעכב, מסוגל לשפר את התקשורת cumulus-oocyte2,למנוע חידוש מיוטיבטרם עת 2, ותמיכהצמיחה oocyte2 שימש.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:635px;" width="633">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:215px;">4-well dishes</td>
			<td style="width:127px;">Nunclon</td>
			<td style="width:123px;">179830</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:215px;">96-well dish</td>
			<td style="width:127px;">Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td style="width:123px;">356649</td>
			<td>BioCoat&#8482; Collagen I</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:215px;">Bovine Serum Albumin (Fatty acid free)</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">A8806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Bovine Serum Albumin (Fraction V)</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">A3311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cell culture water</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">W3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cilostamide</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>C7971</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cysteamine</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M9768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Digital camera</td>
			<td style="width:127px;">Nikon Corp</td>
			<td>Camera DS-5M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Disodium phosphate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Estradiol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E2758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Glutamax Supplement</td>
			<td style="width:127px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Gonal F</td>
			<td style="width:127px;">Merck Serono</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Heparin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Hepes</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">H3784</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Vacuum pump</td>
			<td>Cook-IVF</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Incubator</td>
			<td style="width:127px;">Sanyo</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Kanamycin sulfate from Streptomyces kanamyceticus</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">K1377</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:45px;width:215px;">Medium 199</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M3769</td>
			<td style="width:171px;">Powder for hepes-buffered TCM199</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:26px;width:215px;">Medium 199</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M2520</td>
			<td>Powder for M199-D</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microscope</td>
			<td>Nikon Corp</td>
			<td>Nikon Diaphot</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microscope</td>
			<td style="width:127px;">Nikon Corp</td>
			<td style="width:123px;">Eclipse E 600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Monopotassium phosphate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Penicilin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Phenol Red</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Polyvinyl alcohol</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P8137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Polyvinylpyrrolidone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>P5288</td>
			<td>360k molecular weight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Potassium chloride</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Progesterone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P8783</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium choride</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium pyruvate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>P4562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Streptomycin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Testosterone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">86500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Triton X</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">T9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vectashield with DAPI</td>
			<td style="width:127px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">H1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:123px;">W3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Zinc sulfate heptahydrate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">Z0251</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro culture strategy for oocytes from early antral follicle in cattle

העתודה המוגבלת של אוציטים בוגרים ותו לא מהווים מחסום מרכזי להצלחת הרבייה בסיוע ליונקים. בהתחשב בכך שבמהלך תוחלת החיים של הרבייה רק כ 1% של oocytes בשחלה בוגרת ומבייצת, מספר טכניקות פותחו כדי להגדיל את הניצול של שמורת השחלות לאוכלוסייה הגדלה של זקיקים שאינם מבייצים. טכנולוגיות כאלה אפשרו התערבויות של שימור פוריות, תוכניות בחירה במשק החי ושימור מינים בסכנת הכחדה. עם זאת, הפוטנציאל העצום של שמורת השחלות עדיין לא נופק ברובו. בפרות, למשל, נעשו כמה ניסיונות לתמוך בתרבות המבחנה של אוציטים בשלבים התפתחותיים ספציפיים, אך פרוטוקולים יעילים ואמינים עדיין לא פותחו. כאן אנו מתארים מערכת תרבות השוחזרת את התנאים הפיזיולוגיים של שלב הזקיקים המתאים, המוגדרת להתפתח במבחנה הגדלה oocytes שנאספו מזקיקי אנטרל מוקדם של צב ים לשלב הבוגר במלואו, המקביל זקיק אנתלי בינוני ב vivo. שילוב של הורמונים ופוספודיסטרז 3 מעכב שימש כדי למנוע חידוש מיוטי בטרם עת כדי להנחות את ההבידול של oocyte.

בסוף ה-L-IVCO, המורפולוגיה הגולמית של COCs השתנתה ו-4 מחלקות זוהו בהתבסס על המראה של תאי קומולוס, כפי שמופף באות 2. בהתבסס על הקריטריונים המורפולוגיים שאומצו בדרך כלל כדי לבחור COCsבריאים 11,26,27, כיתה 1, 2 ו 3 נשפטו בריאים, בעוד בכיתה 4, ...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle at JoVE.com

In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle

אנו מתארים את ההליכים לבידוד של גידול oocytes מזקיקי השחלות בשלבים מוקדמים של פיתוח, כמו גם את ההתקנה של מערכת תרבות מבחנה אשר יכול לתמוך בצמיחה ובידול עד לשלב הבוגר במלואו.

במבחנה תרבות אסטרטגיה עבור Oocytes מ זקיק אנטרל מוקדם בבקר

The limited reserve of mature, fertilizable oocytes represents a major barrier for the success of assisted reproduction in mammals. Considering that ...

בפרוטוקול וידאו זה, אנו מדגימים בפירוט, מערכת תרבות לגידול oocytes בוקר. המערכת תומכת בכדאיות ה-oocytes בתרבות עד חמישה ימים ומאפשרת את ההתברמות שלהם. באמצעות מערכת תרבות זו, ביציות שנאספו זקיקי antral קטנים, אשר בדרך כלל לא משמשים פרוטוקולים סטנדרטיים עבור במבחנה בייצור, ניתן לגדל כדי להגדיל את הזמינות של גיימרים הפריה.ניצול זה של השמורה הרחבה יותר, יכול לספק אפשרויות חדשות להצלה גנטית של מינים בסכנת הכחדה, של משפחת בקר, או של גזעים מקומיים בסיכון לשחיקה גנטית. כדי להתחיל, להכין 15 מיליליטר של תרבות בסיסית בינונית ולהשלים אותו על פי הוראות כתב היד. לאחר מכן, להכין שלושה מיליליטר של החזקת בינוני על ידי הוספת חמישה cilostamide micromolar למדיום התרבות הבסיסית ויוצקים אותו בצלחת פטרי 35 מילימטר.הכן מדיום IVCO ארוך על ידי השלמת מדיום תרבות בסיסית על פי הוראות כתב היד. הוסיפו 200 מיקרוליטרים של מדיום IVCO ארוך לכל באר של צלחת מצופה 96 היטב. לאחר מכן מלאו את ארבעת הקצוות במים סטריליים כדי לפצות על האידוי ולשמור על לחות מתאימה במהלך התרבות.הדגירה את צלחת 96 באר ואת המדיום החזק ב 38.5 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני עם לחות מקסימלית. לשטוף את השחלות ארבע פעמים מלוחים סטריליים, מתוחזק ב 26 מעלות צלזיוס. לאחר מכן שאפו את כל הזקיקים בקוטר של יותר משני מילימטרים, עם מחט 18 מד המחוברת למשאבת שאיפה.תחרה השחלות שאפו בסקילר עם מלוחים סטריליים מתוחזק ב 26 מעלות צלזיוס. מניחים שחלה אחת בכל פעם על קרש חיתוך PTFE סטרילי, ולהשתמש מספר כירורגי 22 להב לחתוך פרוסות של קליפת המוח השחלות כי הם 1.5 עד שני מילימטרים עבה, במקביל לציר העיקרי של האיבר. תחרה את פרוסות קליפת השחלות בצלחת פטרי זכוכית סטרילית, עם מדיום ניתוח על צלחת חמה, ב 38.5 מעלות צלזיוס.תחרה אחת פרוסת קליפת המוח השחלות בצלחת פטרי זכוכית 60 מילימטר, עם שניים עד שלושה מיליליטר של M199D תחת מיקרוסקופ ניתוח, לבחור את הזקיקים כי הם בין 5 לשני מילימטרים. זהה את הזקיקים הבריאים שאינם אטיים מתחת למיקרוסקופ הסטריאו, על ידי התבוננות בפרמטרים מורפולוגיים, כגון מראה שקוף בהיר באופן אחיד, כלי דם נרחבים ושכבת גרנולוזה רגילה. בעוד זקיקי atretic יש מראה אטום אפור, והם vascularized גרוע, עם COC כהה בפנים.להשליך את זקיקי atretic ולעבד את כל האחרים. השתמש בלהב כירורגי כדי להסיר את רקמת השחלות המקיפה את הזקיק בצד אחד, עד שהוא נחשף. לאחר מכן השתמש מחט מד 26 בזהירות לעשות חריץ בקיר זקיק חשוף, אשר ישחרר את התוכן הזקיקי הכולל את COC, נוזל זקיקי, גושים של תאים.זהה את ה- COC ובדוק אותו לשלמות קומולוס, שלמות שונה פלוצ'ידה והומוגניות של הציטופלסמה. אם קריטריונים אלה מומשו, שאף את ה- COC עם פיפטה P20. תחרה COC מבודד ב M199D cilostamide, ולהמשיך את הליך הבידוד במשך 30 דקות.לאחר בחירת COCs, כפי שתואר קודם לכן, להכין 16 טיפות עם 20 microliters של M199D cilostamide בצלחת פטרי 60 מילימטר, ולמקם COC בריא אחד לתוך כל טיפה. השתמש במיקרוסקופ הפוך המחובר למצלמה כדי למדוד את קוטר הoocyte, למעט zona pellucida. עם הדמיה ברורה של oocyte, לבצע שתי מדידות ניצבות, להבטיח כי הממוצע של שתי המידות הוא בטווח של 100 עד 110 מיקרומטר.זה יכול להיות קשה למדוד במדויק את קוטר oocytes, בשל תאי קומולוס המלווה. יש להשליך קוטפי COC בעלי קוציטים בקוטר קטן או גדול יותר, או שאין להם oocyte מעוגל, או כאלה עם בוציטים שאינם ניתנים למדידה. מעבירים את ה-COCs שנבחרו לצלחת של 35 מילימטר המכילה מדיום M199H, ומעבירים אותם באינקובטור בטמפרטורה של 38.5 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני עם לחות מרבית, ודאו שזמן העבודה הכולל אינו עולה על שעתיים.לאחר השלמת הליכי הבחירה והאיסוף, העבר COC אחד למרכז כל באר של צלחת 96 באר שהוכן בעבר. הדגירה את הצלחת במשך חמישה ימים ב 38.5 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני עם לחות מקסימלית, לרענן את המדיום כל יומיים. כדי לחדש את המדיום, החלף 100 מיקרוליטרים של מדיום ישן ב- 100 מיקרוליטרים של מדיום IVCO ארוך ורענן, עשה זאת תחת מיקרוסקופ הסטריאו כדי להימנע מהזזת ה- COCs.בסוף IVCO ארוך, לנתח את מורפולוגיה COCs. אם יש להם השקעה קומפקטית בתא קומולוס ללא סימן של הרחבת קומולוס, או ניוון תאים, לסווג אותם כמו מחלקה אחת. אם ל- COCs יש השקעה קומפקטית בתא קומולוס ללא סימן להרחבת קומולוס או ניוון תאים, ועם תצורה אחת או יותר דמוית antrum, סווג אותם ככיתה 2.דרגה 3 COCs, להראות מספר שכבות של תאים cumulus ללא סימן של התפשטות קומולוס, כמה תאים מפוררים בשכבה החיצונית של תאי קומולוס וללא היווצרות דמויי antrum. סווג את ה- COCs כמדרגה 4 אם הם מראים אובדן שופע של תאי קומולוס המשתרעים על פני יותר מ- 50% משטח ה- oocyte, כמו גם סימנים של ניוון תאים ופסולת תאים. בסוף IVCO ארוך המורפולוגיה ברוטו של COC משתנה.וארבע כיתות זוהו בהתבסס על המראה של תאי קומולוס. בסך הכל נותחו 74 בוציטים בחמישה שכפולים ביולוגיים, מהם 9.45% נמחקו מהערכה נוספת. כיתות א', ב' ו-ג' נשפטו בריאות, ואילו כיתות ד' הראו סימנים ברורים של ניוון, כגון היעדר שכבות שלמות של תאי קומולוס המקיפים את הוציטים.COCs אלה נחשבו לא מתאימים לעבור הליכים במורד הזרם בסביבה IVP פוטנציאלי. הערכה של השלב המיאוטי בסוף IVCO הארוך הראה כי אחוז גבוה משמעותית של oocytes נשאר נעצר בשלב לא בוגר, עם כרומטין עדיין סגור בתוך GV. כאשר עיבוי כרומטין בתוך GV נחקר כסמן של רווח של יכולת, המעבר של תצורת הכרומטין לשלבים מרוכזים יותר, כלומר GV 2 ו GV שלוש, נצפתה 59% של oocytes. אחוז קטן חזר meiosis להגיע metaphase שלב אחד, או ניוון.תוצאות אלו מראות שתרבות L-IVCO תומכת בכדאיות ה-oocyte, תוך מניעת חידוש מיוטי למשך חמישה ימים. בסוף IVCO ארוך, COCs ניתן להשתמש בהליכים במורד הזרם של ייצור עובר במבחנה, כלומר, הבשלה במבחנה, הפריה, ותרבות העובר. צעדים אלה נחוצים כדי לספק הוכחת מושג כי oocyte רכשו יכולת התפתחותית גבוהה יותר.מלבד החזקת הפוטנציאל של הגדלת כמות ביציות הפריה, מערכת התרבות IVCO הארוכה היא כלי עבור מדענים המעוניינים לנתח את התהליכים התאיים והמולקולריים המווסתים את היווצרותו של גמטה מוכשר.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

הבנת organogenesis המוקדם שימוש פשוטה<em&gt; באתר</em&gt; הכלאת פרוטוקול ב<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

גישת optogenetic להערכת יצירת קשרים עצביים במערכת Co-תרבות

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

כמו תא גזע<em&gt; Xenopus</em&gt; Explants העובריים לחקר תכונות המוקדמות עצבי התפתחותית<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; In vivo</em

Understanding the genetic programs underlying neural development is an important goal of developmental and stem cell biology. In the amphibian blastula, ...

Isolation and Characterization of Mouse Antral Oocytes Based on Nucleolar Chromatin Organization

בידוד ואפיון של עכבר Antral ביציות בהתבסס על ארגון הכרומטין nucleolar

This protocol describes a simple and quick method to isolate and characterize mouse antral GV (Germinal Vesicle) oocytes as able (SN, Surrounded ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

ביים הבידול של אבות Hematopoietic פרימיטיבי, מהווים הסופית מתאי גזע Pluripotent אנושי

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Visualization of Cellular Electrical Activity in Zebrafish Early Embryos and Tumors

ויזואליזציה של הפעילות החשמלית הסלולר עוברי מוקדם דג זברה, גידולים

Bioelectricity, endogenous electrical signaling mediated by ion channels and pumps located on the cell membrane, plays important roles in signaling ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

דור של אינסולין נטולת לגרדום, תלת מימדי לבטא Pancreatoids העכבר אבות הלבלב במבחנה

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

להמחיש את צומת ואת צלחת Notochordal Gastrulating עוברי העכבר באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סריקה כל הר Immunofluorescence

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

בדור חוץ גופית של Somite נגזרים מן האדם המושרה בתאי גזע Pluripotent

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

In Vitro Culture of Epithelial Cells from Different Anatomical Regions of the Human Amniotic Membrane

בתרבות מבחנה של תאים אפיתל מאזורים אנטומיים שונים של קרום הפיר האנושי

Several protocols have been reported in the literature for the isolation and culture of human amniotic epithelial cells (HAEC). However, these assume that ...