Name: in vitro culture strategy for oocytes from early antral follicle in cattle
Uploaded: 2020-07-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle at JoVE.com

इस काम को रीजनल लोम्बार्डिया पीएसआर इनोवा एन 201801061529 और यूएनआईएमआई एन पीएसआर 2019_DIP_027_ALUCI_01

अंडाशय 4 से 8 साल पुराने होल्स्टीन डेयरी गायों से एकत्र किए गए थे जो स्थानीय बूचड़खाने (INALCA S.P.A., Ospedaletto Lodigiano, LO, IT 2270M CE, इटली) में बरामद किए गए थे।
1. मीडिया की तैयारी
नोट: सभी मीडिया का उपयोग करने ?...

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	<li>Lonergan, P., Fair, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+Oocytes+in+Vitro.">Maturation of Oocytes in Vitro.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 4, 255-268 (2016).</li><li>Luciano, A. M., Franciosi, F., Modina, S. C., Lodde, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction-mediated+communications+regulate+chromatin+remodeling+during+bovine+oocyte+growth+and+differentiation+through+cAMP-dependent+mechanism(s).">Gap junction-mediated communications regulate chromatin remodeling during bovine oocyte growth and differentiation through cAMP-dependent mechanism(s).</a> Biology of Reproduction. 85 (6), 1252-1259 (2011).</li><li>McLaughlin, M., Telfer, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+development+in+bovine+primordial+follicles+is+promoted+by+activin+and+FSH+within+a+two-step+serum-free+culture+system.">Oocyte development in bovine primordial follicles is promoted by activin and FSH within a two-step serum-free culture system.</a> Reproduction. 139 (6), 971-978 (2010).</li><li>Galli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Achievements+and+unmet+promises+of+assisted+reproduction+technologies+in+large+animals:+a+per-sonal+perspective.">Achievements and unmet promises of assisted reproduction technologies in large animals: a per-sonal perspective.</a> Animal Reproduction. 14 (3), 614-621 (2017).</li><li>Luciano, A. M., Sirard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+in+vitro+maturation+of+oocytes:+a+matter+of+follicular+differentiation.">Successful in vitro maturation of oocytes: a matter of follicular differentiation.</a> Biology of Reproduction. 98 (2), 162-169 (2018).</li><li>Lonergan, P., Fair, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-produced+bovine+embryos:+dealing+with+the+warts.">In vitro-produced bovine embryos: dealing with the warts.</a> Theriogenology. 69 (1), 17-22 (2008).</li><li>Clement, M. D. F., Dalbies-Tran, R., Estienne, A., Fabre, S., Mansanet, C., Monget, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ovarian+reserve+of+primordial+follicles+and+the+dynamic+reserve+of+antral+growing+follicles:+what+is+the+link.">The ovarian reserve of primordial follicles and the dynamic reserve of antral growing follicles: what is the link.</a> Biology of Reproduction. 90 (4), 85 (2014).</li><li>Lussier, J. G., Matton, P., Dufour, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+rates+of+follicles+in+the+ovary+of+the+cow.">Growth rates of follicles in the ovary of the cow.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 81 (2), 301-307 (1987).</li><li>Fair, T., Hulshof, S. C., Hyttel, P., Greve, T., Boland, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+ultrastructure+in+bovine+primordial+to+early+tertiary+follicles.">Oocyte ultrastructure in bovine primordial to early tertiary follicles.</a> Anatomy and Embryology (Berlin). 195 (4), 327-336 (1997).</li><li>Pavlok, A., Lucas-Hahn, A., Niemann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertilization+and+developmental+competence+of+bovine+oocytes+derived+from+different+categories+of+antral+follicles.">Fertilization and developmental competence of bovine oocytes derived from different categories of antral follicles.</a> Molecular Reproduction and Development. 31 (1), 63-67 (1992).</li><li>Blondin, P., Sirard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+and+follicular+morphology+as+determining+characteristics+for+developmental+competence+in+bovine+oocytes.">Oocyte and follicular morphology as determining characteristics for developmental competence in bovine oocytes.</a> Molecular Reproduction and Development. 41 (1), 54-62 (1995).</li><li>Harada, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+oocytes+from+early+antral+follicles+grow+to+meiotic+competence+in+vitro:+effect+of+FSH+and+hypoxanthine.">Bovine oocytes from early antral follicles grow to meiotic competence in vitro: effect of FSH and hypoxanthine.</a> Theriogenology. 48 (5), 743-755 (1997).</li><li>Hirao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+growth+and+development+of+bovine+oocyte-granulosa+cell+complexes+on+the+flat+substratum:+effects+of+high+polyvinylpyrrolidone+concentration+in+culture+medium.">In vitro growth and development of bovine oocyte-granulosa cell complexes on the flat substratum: effects of high polyvinylpyrrolidone concentration in culture medium.</a> Biology of Reproduction. 70 (1), 83-91 (2004).</li><li>Alm, H., Katska-Ksiazkiewicz, L., Rynska, B., Tuchscherer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+meiotic+competence+of+bovine+oocytes+originating+from+early+antral+ovarian+follicles.">Survival and meiotic competence of bovine oocytes originating from early antral ovarian follicles.</a> Theriogenology. 65 (7), 1422-1434 (2006).</li><li>Taketsuru, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+oocytes+in+secondary+follicles+grow+in+medium+containing+bovine+plasma+after+vitrification.">Bovine oocytes in secondary follicles grow in medium containing bovine plasma after vitrification.</a> Journal of Reproduction and Development. 57 (1), 99-106 (2011).</li><li>Endo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol+supports+in+vitro+development+of+bovine+early+antral+follicles.">Estradiol supports in vitro development of bovine early antral follicles.</a> Reproduction. 145 (1), 85-96 (2013).</li><li>Makita, M., Miyano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+promote+bovine+oocyte+growth+and+connection+with+granulosa+cells.">Steroid hormones promote bovine oocyte growth and connection with granulosa cells.</a> Theriogenology. 82 (4), 605-612 (2014).</li><li>Yamamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+to+live+young+from+bovine+small+oocytes+after+growth,+maturation+and+fertilization+in+vitro.">Development to live young from bovine small oocytes after growth, maturation and fertilization in vitro.</a> Theriogenology. 52 (1), 81-89 (1999).</li><li>Alam, M. H., Lee, J., Miyano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+PDE3A+sustains+meiotic+arrest+and+gap+junction+of+bovine+growing+oocytes+in+in+vitro+growth+culture.">Inhibition of PDE3A sustains meiotic arrest and gap junction of bovine growing oocytes in in vitro growth culture.</a> Theriogenology. 118, 110-118 (2018).</li><li>Lodde, V., Modina, S., Galbusera, C., Franciosi, F., Luciano, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+chromatin+remodeling+in+germinal+vesicle+bovine+oocytes:+interplay+with+gap+junction+functionality+and+developmental+competence.">Large-scale chromatin remodeling in germinal vesicle bovine oocytes: interplay with gap junction functionality and developmental competence.</a> Molecular Reproduction and Development. 74 (6), 740-749 (2007).</li><li>Lodde, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+morphology+and+transcriptional+silencing+in+relation+to+chromatin+remodeling+during+the+final+phases+of+bovine+oocyte+growth.">Oocyte morphology and transcriptional silencing in relation to chromatin remodeling during the final phases of bovine oocyte growth.</a> Molecular Reproduction and Development. 75 (5), 915-924 (2008).</li><li>Dieci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+cumulus+cell+gene+expression+indicate+the+benefit+of+a+pre-maturation+step+to+improve+in-vitro+bovine+embryo+production.">Differences in cumulus cell gene expression indicate the benefit of a pre-maturation step to improve in-vitro bovine embryo production.</a> Molecular Human Reproduction. 22 (12), 882-897 (2016).</li><li>Soares, A. C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+interact+with+natriuretic+peptide+C+to+delay+nuclear+maturation,+to+maintain+oocyte-cumulus+communication+and+to+improve+the+quality+of+in+vitro-produced+embryos+in+cattle.">Steroid hormones interact with natriuretic peptide C to delay nuclear maturation, to maintain oocyte-cumulus communication and to improve the quality of in vitro-produced embryos in cattle.</a> Reproduction, Fertililty and Development. 29 (11), 2217-2224 (2017).</li><li>Soares, A. C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+control+of+oocyte+large-scale+chromatin+configuration+in+different+cattle+breeds.">Characterization and control of oocyte large-scale chromatin configuration in different cattle breeds.</a> Theriogenology. 141, 146-152 (2020).</li><li>Franciosi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natriuretic+peptide+precursor+C+delays+meiotic+resumption+and+sustains+gap+junction-mediated+communication+in+bovine+cumulus-enclosed+oocytes.">Natriuretic peptide precursor C delays meiotic resumption and sustains gap junction-mediated communication in bovine cumulus-enclosed oocytes.</a> Biology of Reproduction. 91 (3), 61 (2014).</li><li>Luciano, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+different+levels+of+intracellular+cAMP+on+the+in+vitro+maturation+of+cattle+oocytes+and+their+subsequent+development+following+in+vitro+fertilization.">Effect of different levels of intracellular cAMP on the in vitro maturation of cattle oocytes and their subsequent development following in vitro fertilization.</a> Molecular Reproduction and Development. 54 (1), 86-91 (1999).</li><li>Bilodeau-Goeseels, S., Panich, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+oocyte+quality+on+development+and+transcriptional+activity+in+early+bovine+embryos.">Effects of oocyte quality on development and transcriptional activity in early bovine embryos.</a> Animal Reproduction Science. 71 (3-4), 143-155 (2002).</li><li>Dieci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cilostamide+on+gap+junction+communication+dynamics,+chromatin+remodeling,+and+competence+acquisition+in+pig+oocytes+following+parthenogenetic+activation+and+nuclear+transfer.">The effect of cilostamide on gap junction communication dynamics, chromatin remodeling, and competence acquisition in pig oocytes following parthenogenetic activation and nuclear transfer.</a> Biology of Reproduction. 89 (3), 68 (2013).</li><li>Shu, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cilostamide+and+forskolin+on+the+meiotic+resumption+and+embryonic+development+of+immature+human+oocytes.">Effects of cilostamide and forskolin on the meiotic resumption and embryonic development of immature human oocytes.</a> Human Reproduction. 23 (3), 504-513 (2008).</li><li>Lodde, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+supports+transcription+and+improves+meiotic+competence+of+growing+bovine+oocytes.">Zinc supports transcription and improves meiotic competence of growing bovine oocytes.</a> Reproduction. 159 (6), 679-691 (2020).</li><li>Henderson, K. M., McNeilly, A. S., Swanston, I. 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A., Allan, C. M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+actions+and+the+ovary.">Androgen actions and the ovary.</a> Biology of Reproduction. 78 (3), 380-389 (2008).</li><li>Luciano, A. M., Pappalardo, A., Ray, C., Peluso, J. 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E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metaphase+II+oocytes+from+human+unilaminar+follicles+grown+in+a+multi-step+culture+system.">Metaphase II oocytes from human unilaminar follicles grown in a multi-step culture system.</a> Molecular Human Reproduction. 24 (3), 135-142 (2018).</li><li>Fair, T., Hyttel, P., Greve, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+oocyte+diameter+in+relation+to+maturational+competence+and+transcriptional+activity.">Bovine oocyte diameter in relation to maturational competence and transcriptional activity.</a> Molecular Reproduction and Development. 42 (4), 437-442 (1995).</li></ol>

यहां हम बढ़ते ओसाइट्स के लिए एक संस्कृति प्रणाली का वर्णन करते हैं जो उनकी व्यवहार्यता का समर्थन करके और मेइटिक बहाली को रोककर 5 दिनों के लिए ओसाइट विकास को बढ़ावा देता है। यह उत्तरार्द्ध पहलू सबसे अधि?...

प्रजनन जीवन काल के दौरान, अंडाशय परिपक्व में मौजूद ओसाइट्स का केवल एक न्यूनतम अंश, अंडाशय पर फैलोपियन ट्यूबों में जारी किया जाता है, और निषेचित होने और एक व्यवहार्य भ्रूण1में विकसित होने के लिए उपलब्ध हैं। दूसरी ओर, एक अंडाशय के भीतर अधिकांश ओसाइट्स अट्रेसिया से गुजरते हैं और कभी भी अंडाशय नहीं होते हैं। इन विट्रो भ्रूण उत्पादन (आईवीपी) प्रौद्योगिकियों ने ओवेरियन रिजर्व2,3के शोषण को बढ़ाने का प्रयास किया है। इस प्रकार अब तक, ऐसी प्रौद्योगिकियों ने प्रजनन संरक्षण, पशुधन में चयन कार्यक्रमों और लुप्तप्राय प्रजातियों के संरक्षण के हस्तक्षेप की अनुमति दी है । फिर भी, अधिकांश प्रोटोकॉल ओसाइट्स का उपयोग करते हैं जिन्होंने मूल रूप से एंट्रल ओवेरियन कूप के भीतर विकास चरण पूरा कर लिया है, और इसलिए इसे पूरी तरह से विकसित ओसाइट्स के रूप में जाना जाता है। मवेशियों में, जहां आईवीपी प्रौद्योगिकियों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, पूरी तरह से विकसित ओसाइट्स लगभग 120 माइक्रोन के अंतिम व्यास तक पहुंचते हैं और रोम से एकत्र किए जाते हैं जो व्यास (मध्यम अंत्येय रोम) 1 में 2 से 8 मिमी तक फैलेहोतेहैं। रोम से अलगाव पर, इस तरह के ओसाइट्स विट्रो परिपक्व और निषेचित में हैं। ज़िगोट्स को तब ब्लास्टोसिस्ट चरण तक सुसंस्कृत किया जाता है और या तो प्राप्तकर्ता या क्रायोप्रीड्योर में स्थानांतरित कर दिया जाता है। मवेशियों के साथ-साथ कई अन्य प्रजातियों में, IVP द्वारा पेश की गई क्षमता के बावजूद, प्रति गाय इन विट्रो उत्पादित भ्रूण की संख्या में पिछले ४० वर्षों से काफी हद तक सुधार नहीं हुआ । यह सीमित संख्या में पूरी तरह से विकसित ओसाइट्स के कारण होता है जो एक ऐसे समय में अंडाशय को आबाद करता है जिसे वापस लाया जा सकता है और मानक आईवीपीतकनीकों केअधीन किया जा सकता है 4,5,6.
शुरुआती एंट्रल रोम के भीतर संलग्न ओसाइट्स, यानी, उन रोम जो व्यास में 2 मिमी से कम हैं, प्रजनन संरक्षण कार्यक्रमों में उपयोग किए जाने वाले संभावित स्रोत का प्रतिनिधित्व करते हैं7, क्योंकि एक अंडाशय में मोटे तौर पर मध्यम एंट्रल8की तुलना में 10 गुना अधिक प्रारंभिक एंट्रल रोम होते हैं। हालांकि, ये ओसाइट्स अभी भी ग्रोथ फेज में हैं और अभी पूरी तरह से विकसित स्टेज9तक नहीं पहुंचे हैं । जैसे, वे अभी भी ट्रांसक्रिप्शन रूप से सक्रिय हैं, जो बाद में विकासात्मक कदमों के लिए संग्रहीत किए जाएंगे, और अभी तक सभी भेदभाव प्रक्रिया से नहीं गुजरे हैं, जो अनायास शुरू करने और मीनोसिस को पूरा करने की क्षमता के साथ oocytes प्रदान करने के लिए आवश्यक है, मैं एक बार कूप डिब्बे10, 11,11से अलग हो गया था। इसलिए, उन्हें सीधे मानक इन विट्रो परिपक्वता (आईवीएम) प्रोटोकॉल में प्रस्तुत नहीं किया जा सकता है, लेकिन उन्हें संस्कृति की एक अतिरिक्त अवधि की आवश्यकता होती है जो उन्हें विकास चरण को पूरा करने और उचित अंतर करने की अनुमति देगी।
बढ़ती से पूरी तरह से विकसित चरण में संक्रमण, जो मवेशियों में तब होता है जब कूप प्रारंभिक अंत से मध्यम अंत्येय चरण तक विकसित होता है, ओसाइट विकास के दौरान महत्वपूर्ण चरणों में से एक है। पशुओं में, कई अध्ययनों ने इन घटनाओं को विट्रो 2,,12, 13,14,15,16, 17,,18,14,,,19में पुनः प्राप्त करने का प्रयास किया ।1719 हालांकि, आज तक कोई विश्वसनीय प्रोटोकॉल विकसित नहीं किया गया है और केवल सीमित सफलता की सूचना दी गई है । पिछले अध्ययनों के अनुसार20,ये बढ़ते ओसाइट्स एक सजातीय आबादी का गठन करते हैं। ट्रांसक्रिप्शनल रूप से सक्रिय होने के अलावा, उनका क्रोमेटिन जर्मिनल वेसिकल (जीवी) में फैलाया जाता है, एक विन्यास में जिसे जीवी0 2, 21,नाम दियागयाहै। इसके विपरीत, मध्यम एंट्रल रोम से प्राप्त पूरी तरह से विकसित ओसाइट्स की आबादी अधिक विषम है, एक ऐसी स्थिति जो क्रोमेटिन कॉम्पैक्टेशन (जीवी 1, जीवी 2 और जीवी 3) की विभिन्न डिग्री से प्रतिबिंबित होती है जिसे20देखा जा सकता है। इनमें से, पिछले आंकड़ों से पता चला है कि जीवी 2 और जीवी 3 ओसाइट्स को समग्र रूप से बेहतर गुणवत्ता और उच्च भ्रूणीय विकास क्षमता20,21, 22,,,23,,23,24की विशेषता है।
उपरोक्त टिप्पणियों से शुरू, यहां हम ओसाइट्स (एल-आईवीसीओ) की 5 दिनों की लंबी संस्कृति प्रणाली का वर्णन करते हैं जो शुरुआती अंत्येष्कों से क्यूमुलस-ओसाइट परिसरों (सीओसी) के रूप में अलग-थलग पड़े ओसाइट्स के भेदभाव की अनुमति देता है। यह संस्कृति रणनीति हमारी प्रयोगशाला में किए गए 10 वर्षों के लंबे अध्ययनों से विकसित हुई है और ओसाइट संस्कृति के दौरान विट्रो ओसाइट संस्कृति (आईवीसीओ) 2, प्रीमैचुरेशन सिस्टम23, 25,और जिंक सप्लीमेंट में पहले से विकसित24-48 घंटे पर इसकी जमीन को जड़ों ।2 कूप उत्तेजक हार्मोन (एफएसएच) और एक फॉस्फोडिस्टेरेस-3 (पीडीई 3) अवरोधक का एक संयोजन, क्यूमुलस-ओसाइट संचार2को बढ़ाने में सक्षम, असामयिक मेयोटिक बहाली2को रोकने, और समर्थन ओसाइट विकास2 का उपयोग किया गया था।

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		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:215px;">4-well dishes</td>
			<td style="width:127px;">Nunclon</td>
			<td style="width:123px;">179830</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:215px;">96-well dish</td>
			<td style="width:127px;">Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td style="width:123px;">356649</td>
			<td>BioCoat&#8482; Collagen I</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:215px;">Bovine Serum Albumin (Fatty acid free)</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">A8806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Bovine Serum Albumin (Fraction V)</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">A3311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cell culture water</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">W3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cilostamide</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>C7971</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cysteamine</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M9768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Digital camera</td>
			<td style="width:127px;">Nikon Corp</td>
			<td>Camera DS-5M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Disodium phosphate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Estradiol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E2758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Glutamax Supplement</td>
			<td style="width:127px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Gonal F</td>
			<td style="width:127px;">Merck Serono</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Heparin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Hepes</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">H3784</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Vacuum pump</td>
			<td>Cook-IVF</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Incubator</td>
			<td style="width:127px;">Sanyo</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Kanamycin sulfate from Streptomyces kanamyceticus</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">K1377</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:45px;width:215px;">Medium 199</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M3769</td>
			<td style="width:171px;">Powder for hepes-buffered TCM199</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:26px;width:215px;">Medium 199</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M2520</td>
			<td>Powder for M199-D</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microscope</td>
			<td>Nikon Corp</td>
			<td>Nikon Diaphot</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microscope</td>
			<td style="width:127px;">Nikon Corp</td>
			<td style="width:123px;">Eclipse E 600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Monopotassium phosphate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Penicilin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Phenol Red</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Polyvinyl alcohol</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P8137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Polyvinylpyrrolidone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>P5288</td>
			<td>360k molecular weight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Potassium chloride</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Progesterone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P8783</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium choride</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium pyruvate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>P4562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Streptomycin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Testosterone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">86500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Triton X</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">T9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vectashield with DAPI</td>
			<td style="width:127px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">H1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:123px;">W3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Zinc sulfate heptahydrate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">Z0251</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro culture strategy for oocytes from early antral follicle in cattle

परिपक्व, उर्वरक ओसाइट्स का सीमित भंडार स्तनधारियों में सहायता प्राप्त प्रजनन की सफलता के लिए एक प्रमुख बाधा का प्रतिनिधित्व करता है। यह देखते हुए कि प्रजनन जीवन काल के दौरान अंडाशय परिपक्व और अंडाशय में केवल 1% ओसाइट्स के बारे में, अंडाशय के भंडार के शोषण को गैर-अंडाशय रोम की बढ़ती आबादी तक बढ़ाने के लिए कई तकनीकों का विकास किया गया है। ऐसी प्रौद्योगिकियों ने प्रजनन संरक्षण, पशुधन में चयन कार्यक्रमों और लुप्तप्राय प्रजातियों के संरक्षण के हस्तक्षेप की अनुमति दी है । हालांकि, अंडाशय रिजर्व की विशाल क्षमता अभी भी काफी हद तक अनशोषित है । उदाहरण के लिए, गायों में, विशिष्ट विकासात्मक चरणों में ओसाइट्स की विट्रो संस्कृति में समर्थन करने के लिए कुछ प्रयास किए गए हैं, लेकिन कुशल और विश्वसनीय प्रोटोकॉल अभी तक विकसित नहीं किए गए हैं । यहां हम एक संस्कृति प्रणाली का वर्णन करते हैं जो इसी कूप चरण की शारीरिक स्थितियों को पुन: उत्पन्न करता है, जिसे गोजातीय प्रारंभिक एंट्रल रोम से पूरी तरह से विकसित चरण तक एकत्र किए गए विट्रो बढ़ते ओसाइट्स को विकसित करने के लिए परिभाषित किया गया है, जो वीवो में मध्यम एंट्रल कूप के अनुरूप है। हार्मोन और फॉस्फोडिस्टेरेस 3 अवरोधक का एक संयोजन असामयिक मेइटिक बहाली को रोकने और ओसाइट के भेदभाव का मार्गदर्शन करने के लिए इस्तेमाल किया गया था।

एल-आईवीसीओ के अंत में, सीओसी की सकल आकृति विज्ञान बदल गई और 4 वर्गों की पहचान क्यूमुलस कोशिकाओं की उपस्थिति के आधार पर की गई, जैसा कि चित्र 2में दिखाया गया है। आमतौर पर स्वस्थ,COCs11,<sup c...

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In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle

हम विकास के प्रारंभिक चरणों में अंडाशय के रोम से बढ़ते ओसाइट्स के अलगाव के लिए प्रक्रियाओं का वर्णन करते हैं, साथ ही एक इन विट्रो संस्कृति प्रणाली की स्थापना जो पूरी तरह से विकसित चरण तक विकास और भेदभाव का समर्थन कर सकती है।

पशुओं में अर्ली एंट्रल कूप से Oocytes के लिए विट्रो संस्कृति रणनीति

The limited reserve of mature, fertilizable oocytes represents a major barrier for the success of assisted reproduction in mammals. Considering that ...

इस वीडियो प्रोटोकॉल में, हम विस्तार से प्रदर्शित करते हैं, गोजातीय oocytes बढ़ने के लिए एक संस्कृति प्रणाली। प्रणाली पांच दिनों तक संस्कृति में oocytes व्यवहार्यता का समर्थन करता है और उनके भेदभाव के लिए अनुमति देता है । इस संस्कृति प्रणाली का उपयोग करके, छोटे एंट्रल रोम से एकत्र किए गए ओसाइट्स, जो आम तौर पर उत्पादन में इन विट्रो के लिए मानक प्रोटोकॉल में उपयोग नहीं किए जाते हैं, को उर्वरक गेम की उपलब्धता बढ़ाने के लिए उगाया जा सकता है।व्यापक रिजर्व का यह शोषण, संकटग्रस्त प्रजातियों के आनुवंशिक उबार के लिए नए विकल्प प्रदान कर सकते हैं, गोजातीय परिवार की, या आनुवंशिक कटाव के खतरे में स्थानीय नस्लों की । शुरू करने के लिए, बुनियादी संस्कृति माध्यम के 15 मिलीलीटर तैयार करते हैं और पांडुलिपि निर्देशों के अनुसार इसे पूरक करते हैं। इसके बाद, बुनियादी संस्कृति माध्यम में पांच माइक्रोमोलर सिलोस्टामाइड जोड़कर होल्डिंग माध्यम के तीन मिलीलीटर तैयार करें और इसे 35 मिलीमीटर पेट्री डिश में डालें।पांडुलिपि निर्देशों के अनुसार बुनियादी संस्कृति माध्यम को पूरक बनाकर लंबे आईवीसीओ माध्यम तैयार करें। 96-अच्छी तरह से लेपित प्लेट के प्रत्येक कुएं में लंबे आईवीसीओ माध्यम के 200 माइक्रोलीटर जोड़ें। फिर वाष्पीकरण की भरपाई करने और संस्कृति के दौरान उचित आर्द्रता बनाए रखने के लिए बाँझ पानी के साथ चार किनारों को भरें।अधिकतम आर्द्रता के साथ 96-वेल प्लेट और होल्डिंग मीडियम 38.5 डिग्री सेल्सियस और 5% कार्बन डाइऑक्साइड पर इनक्यूबेट करें। अंडाशय को बाँझ खारा में चार बार धोएं, जो 26 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा गया है। फिर एक आकांक्षा पंप से जुड़े 18 गेज सुई के साथ, व्यास में दो मिलीमीटर से अधिक हैं कि सभी रोम आकांक्षी।फीता एक बीकर में एस्पिरेटेड अंडाशय बाँझ खारा के साथ 26 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा । एक बाँझ PTFE काटने बोर्ड पर एक समय में एक अंडाशय रखें, और एक शल्य संख्या 22 ब्लेड का उपयोग करने के लिए अंडाशय प्रांतस्था के स्लाइस है कि १.५ से दो मिलीमीटर मोटी हैं, और अंग की प्रमुख धुरी के समानांतर काट । एक बाँझ ग्लास पेट्री डिश में अंडाशय प्रांतस्था के स्लाइस फीता, एक गर्म थाली पर विच्छेदन माध्यम के साथ, ३८.५ डिग्री सेल्सियस पर ।60 मिलीमीटर ग्लास पेट्री डिश में लेस वन ओवेरियन कॉर्टेक्स स्लाइस, एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत M199D के दो से तीन मिलीलीटर के साथ, 5 और दो मिलीमीटर के बीच के रोम का चयन करें। रूपात्मक मापदंडों को देखकर, जैसे समान रूप से उज्ज्वल पारदर्शी उपस्थिति, व्यापक संवहनी, और एक नियमित ग्रेनुलोसा परत के तहत स्वस्थ गैर-अटारी रोम की पहचान करें। जबकि अटारी रोम एक ग्रे अपारदर्शी उपस्थिति है, और खराब संवहनी हैं, अंदर एक अंधेरे COC के साथ ।अतीक रोम को त्यागें और अन्य सभी को संसाधित करें। सर्जिकल ब्लेड का उपयोग करने के लिए एक तरफ कूप आसपास के अंडाशय ऊतक को दूर करने के लिए, जब तक यह उजागर हो रहा है । फिर उजागर कूप दीवार में सावधानी से एक भट्ठा बनाने के लिए 26 गेज सुई का उपयोग करें, जो कूप सामग्री को जारी करेगा जिसमें सीओसी, कूप तरल पदार्थ और कोशिकाओं के झुरमुट शामिल हैं।सीओसी की पहचान करें और साइटोप्लाज्म की क्यूमुलस अखंडता, जोना पेलुसिडा अखंडता और एकरूपता के लिए इसकी जांच करें। यदि इन मानदंडों को पूरा कर रहे हैं, एक P20 पिपेट के साथ COC आकांक्षी । M199D cilostamide में अलग COC फीता, और 30 मिनट के लिए अलगाव की प्रक्रिया जारी है ।COCs का चयन करने के बाद, जैसा कि पहले वर्णित है, 60 मिलीमीटर पेट्री डिश में M199D सिलोस्टामाइड के 20 माइक्रोलीटर के साथ 16 बूंदें तैयार करें, और प्रत्येक बूंद में एक स्वस्थ COC रखें। जोना पेलुसिडा को छोड़कर, ओसाइट व्यास को मापने के लिए कैमरे से जुड़े एक उल्टे माइक्रोस्कोप का उपयोग करें। ओसाइट के स्पष्ट दृश्य के साथ, दो लंबवत माप बनाएं, आश्वस्त करें कि दो मापों का मतलब 100 से 110 माइक्रोमीटर की सीमा के भीतर है।साथी क्यूमुलस कोशिकाओं के कारण ओसाइट्स व्यास को ठीक से मापना मुश्किल हो सकता है। COCs जिनमें छोटे या बड़े व्यास के साथ ओसाइट्स होते हैं, या जिनके पास गोल ओसाइट नहीं होता है, या ओसाइट्स वाले जो औसत दर्जे के नहीं हैं, उन्हें छोड़ दिया जाना चाहिए। चयनित COCs को M199H माध्यम युक्त 35 मिलीमीटर डिश में स्थानांतरित करें, और उन्हें अधिकतम आर्द्रता के साथ 38.5 डिग्री सेल्सियस और 5% कार्बन डाइऑक्साइड पर इनक्यूबेटर में रखें, सुनिश्चित करें कि समग्र कार्य समय दो घंटे से अधिक नहीं है।एक बार चयन और संग्रह प्रक्रियाओं को पूरा कर रहे हैं, पहले से तैयार ९६-अच्छी तरह से थाली के प्रत्येक अच्छी तरह के केंद्र में एक COC हस्तांतरण । पांच दिनों के लिए थाली को ३८.५ डिग्री सेल्सियस और अधिकतम आर्द्रता के साथ 5% कार्बन डाइऑक्साइड, हर दूसरे दिन मध्यम ताज़ा पर इनक्यूबेट । माध्यम को नवीनीकृत करने के लिए, पुराने माध्यम के 100 माइक्रोलीटर को ताजा लंबे आईवीसीओ माध्यम के 100 माइक्रोलीटर के साथ बदलें, सीओसी को आगे बढ़ने से बचने के लिए स्टीरियो माइक्रोस्कोप के तहत ऐसा करें।लंबे आईवीसीओ के अंत में, सीओसी आकृति विज्ञान का विश्लेषण करें। यदि उनके पास एक कॉम्पैक्ट क्यूमुलस सेल निवेश है जिसमें क्यूमुलस विस्तार, या सेल अध: पतन का कोई संकेत नहीं है, तो उन्हें कक्षा एक के रूप में वर्गीकृत करें। यदि सीओसी के पास एक कॉम्पैक्ट क्यूमुलस सेल निवेश है जिसमें क्यूमुलस विस्तार या सेल अध: पतन का कोई संकेत नहीं है, और एक या अधिक एंट्रम जैसी संरचनाओं के साथ, उन्हें कक्षा दो के रूप में वर्गीकृत करें।कक्षा तीन COCs, क्यूमुलस विस्तार का कोई संकेत नहीं के साथ cumulus कोशिकाओं की कई परतों को दिखाने के लिए, Cumulus कोशिकाओं की बाहरी परत में कुछ अलग कोशिकाओं और कोई antrum की तरह गठन । सीओसी को कक्षा चार के रूप में वर्गीकृत करें यदि वे ओसाइट सतह के 50% से अधिक के लिए विस्तारित क्यूमुलस कोशिकाओं के प्रचुर मात्रा में नुकसान दिखाते हैं, साथ ही सेल अध: पतन और सेल मलबे के संकेत भी देते हैं। लंबे आईवीसीओ के अंत में सीओसी की सकल आकृति विज्ञान बदल जाती है।और क्यूमुलस कोशिकाओं की उपस्थिति के आधार पर चार वर्गों की पहचान की गई थी। कुल मिलाकर, पांच जैविक प्रतिकृति में 74 ओसाइट्स का विश्लेषण किया गया, जिनमें से 9.45% को आगे के मूल्यांकन से छोड़ दिया गया। कक्षा एक, दो, और तीन को स्वस्थ आंका गया, जबकि कक्षा चार ने पतन के स्पष्ट संकेत दिखाए, जैसे कि ओसाइट्स के आसपास के क्यूमुलस कोशिकाओं की पूरी परतों का अभाव ।इन सीओसी को संभावित आईवीपी सेटिंग में डाउनस्ट्रीम प्रक्रियाओं से गुजरने के लिए अनुपयुक्त माना जाता था। लंबे आईवीसीओ के अंत में मेइओटिक चरण के आकलन से पता चला है कि ओसाइट्स का काफी अधिक प्रतिशत अपरिपक्व चरण में गिरफ्तार किया गया, जिसमें क्रोमेटिन अभी भी जीवी के भीतर संलग्न है। जब जीवी के भीतर क्रोमेटिन संघनन की क्षमता के लाभ के मार्कर के रूप में जांच की गई थी, तो क्रोमेटिन विन्यास का संक्रमण अधिक संघनित चरणों, अर्थात् जीवी दो और जीवी तीन में 59% ओसाइट्स में देखा गया था। एक छोटा सा प्रतिशत मेटाफेज एक चरण, या पतन तक पहुंचने वाले मेयोसिस को फिर से शुरू किया।इन परिणामों से पता चलता है कि एल-IVCO संस्कृति oocyte व्यवहार्यता का समर्थन करता है, जबकि पांच दिनों के लिए meiotic बहाली को रोकने । लंबे आईवीसीओ के अंत में, सीओसी का उपयोग इन विट्रो भ्रूण उत्पादन की डाउनस्ट्रीम प्रक्रियाओं में किया जा सकता है, अर्थात्, इन विट्रो परिपक्वता, निषेचन और भ्रूण संस्कृति। इन कदमों की अवधारणा का सबूत है कि oocyte एक उच्च विकास क्षमता हासिल की है प्रदान करने के लिए आवश्यक हैं ।उर्वरक oocytes की मात्रा बढ़ाने की क्षमता रखने के अलावा, लंबी आईवीसीओ संस्कृति प्रणाली वैज्ञानिकों के लिए एक उपकरण है जो एक सक्षम गेमे के गठन को विनियमित करने वाली सेलुलर और आणविक प्रक्रियाओं को विच्छेदन करने में रुचि रखते हैं।

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

समझना एक सरलीकृत का प्रयोग अर्ली जीवोत्पत्ति<em&gt; बगल में</emमें&gt; संकरण प्रोटोकॉल<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

एक सह-संस्कृति प्रणाली में neuronal कनेक्शन के गठन का आकलन करने के लिए एक optogenetic दृष्टिकोण

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

स्टेम सेल की तरह<em&gt; Xenopus</em&gt; भ्रूण Explants अर्ली तंत्रिका विकास संबंधी सुविधाओं का अध्ययन करने के लिए<em&gt; इन विट्रो</em&gt; और<em&gt; Vivo</em

Understanding the genetic programs underlying neural development is an important goal of developmental and stem cell biology. In the amphibian blastula, ...

Isolation and Characterization of Mouse Antral Oocytes Based on Nucleolar Chromatin Organization

Nucleolar Chromatin संगठन के आधार पर माउस कोटरीय oocytes के अलगाव और विशेषता

This protocol describes a simple and quick method to isolate and characterize mouse antral GV (Germinal Vesicle) oocytes as able (SN, Surrounded ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

मानव Pluripotent स्टेम सेल से आदिम और निश्चित टेम Progenitors के विभेद का निर्देशन

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Visualization of Cellular Electrical Activity in Zebrafish Early Embryos and Tumors

Zebrafish जल्दी भ्रूण और ट्यूमर में सेलुलर विद्युत गतिविधि के दृश्य

Bioelectricity, endogenous electrical signaling mediated by ion channels and pumps located on the cell membrane, plays important roles in signaling ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

पाड़-मुक्त, तीन आयामी इंसुलिन व्यक्त Pancreatoids से माउस अग्नाशय Progenitors इन विट्रो में की पीढ़ी

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Gastrulating माउस में नोड और Notochordal प्लेट visualizing इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी और पूरे माउंट इम्यूनोफ्लोरेसेंस का उपयोग कर भ्रूण

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

मानव प्रेरित Pluripotent स्टेम सेल से Somite डेरिवेटिव के विट्रो पीढ़ी में

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

In Vitro Culture of Epithelial Cells from Different Anatomical Regions of the Human Amniotic Membrane

मानव एमनियोटिक झिल्ली के विभिन्न शारीरिक क्षेत्रों से एपिथेलियल कोशिकाओं की विट्रो संस्कृति में

Several protocols have been reported in the literature for the isolation and culture of human amniotic epithelial cells (HAEC). However, these assume that ...