Name: in vitro culture strategy for oocytes from early antral follicle in cattle
Uploaded: 2020-07-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle at JoVE.com

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卵巣は、地元のアバトワール(INALCA S.p.A.、オスペダレット・ロディジアーノ、LO、IT 2270M CE、イタリア)で回収された4〜8歳のホルスタイン乳牛から採取された。
1. メディアの準備
注: すべてのメディアは、使用の少なくとも4時間前に準備する必要があります。炭酸水素ナトリウム緩衝培地は、空気中で38.5°C及び5%CO2、 最大湿度でインキュベー?...

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	<li>Lonergan, P., Fair, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+Oocytes+in+Vitro.">Maturation of Oocytes in Vitro.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 4, 255-268 (2016).</li><li>Luciano, A. M., Franciosi, F., Modina, S. C., Lodde, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction-mediated+communications+regulate+chromatin+remodeling+during+bovine+oocyte+growth+and+differentiation+through+cAMP-dependent+mechanism(s).">Gap junction-mediated communications regulate chromatin remodeling during bovine oocyte growth and differentiation through cAMP-dependent mechanism(s).</a> Biology of Reproduction. 85 (6), 1252-1259 (2011).</li><li>McLaughlin, M., Telfer, E. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cilostamide+and+forskolin+on+the+meiotic+resumption+and+embryonic+development+of+immature+human+oocytes.">Effects of cilostamide and forskolin on the meiotic resumption and embryonic development of immature human oocytes.</a> Human Reproduction. 23 (3), 504-513 (2008).</li><li>Lodde, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+supports+transcription+and+improves+meiotic+competence+of+growing+bovine+oocytes.">Zinc supports transcription and improves meiotic competence of growing bovine oocytes.</a> Reproduction. 159 (6), 679-691 (2020).</li><li>Henderson, K. M., McNeilly, A. S., Swanston, I. 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ここでは、卵母細胞の生存率をサポートし、そして、meiotic再開を防止することによって、5日間の卵母細胞の発達を促進する培養システムについて説明する。この後者の側面は、大腸分裂の早期再開によって妨げられる、大腸および胚発生能力22、2020と卵母細胞を与えるために必要な継続的な成長と分化を可能にするために最も重要である。
<p c...

生殖寿命期間中、卵巣成熟に存在する卵母細胞のほんの一部は、排卵時に卵管内で放出され、受精して生存可能な胚1に発展するために利用可能である。一方、卵巣内の卵母細胞のほとんどは閉鎖を受け、排卵することはありません。インビトロ胚生産(IVP)技術は、卵巣予備軍22、33の搾取を増加させようとしている。これまでのところ、このような技術は、不妊治療の保存、家畜の選択プログラム、および絶滅危惧種の保全の介入を可能にしてきました。それにもかかわらず、ほとんどのプロトコルは、基本的にアンタル卵巣卵胞内の成長段階を完了した卵母細胞を使用し、したがって完全に成長した卵母細胞と呼ばれる。IVP技術が広く使用されている牛では、完全に成長した卵母細胞は約120μmの最終直径に達し、直径2〜8mm(中角毛)1に及ぶ卵胞から採取される。卵胞から分離すると、そのような卵母細胞は体外成熟し、受精する。その後、ジゴテは胚盤胞期まで培養され、レシピエントまたは凍結保存に移される。牛は、他の多くの種だけでなく、IVPによって提供される可能性にもかかわらず、牛1頭当たりのインビトロ産生胚の数は、過去40年間ほとんど改善されなかった。これは、一定の時間に卵巣を取り出し、標準的なIVP,技術4、5、6に供することができる、完全に成長した卵母細胞の数が4限られているためです。56
初期の角包の中に含まれる卵母細胞、すなわち、直径2mm未満の卵胞は、不妊治療保存プログラム7で使用される潜在的な供給源を表し、卵巣は中型角質8よりも約10倍多い初期のアンタル卵胞を含む。しかし、これらの卵母細胞はまだ成長段階にあり、まだ完全に成長した段階9に達していない。したがって、それらはまだ転写活性であり、後の発達段階のために保存されるmRNAを産生し、そして私がかつて濾胞室10、11,11から隔離された明視を自発的に再開して完了させる能力を母細胞に与えるために必要なすべての分化プロセスをまだ受けていない。したがって、標準の in vitro 成熟 (IVM) プロトコルに直接提出することはできませんが、成長フェーズを完了し、適切に区別できる追加の培養期間が必要です。
成長から完全に成長した段階への移行は、牛で卵胞が初期の角質から中型の角質段階に発達したときに起こる、卵母細胞の発達中の重要なステップの一つである。牛では、いくつかの研究は、vitro,,2、12、13、14、15、16、17、18、1912,13,14,15,16でこれらの出来事18を19再現しようとしました。217しかし、現在までに信頼性の高いプロトコルは開発されておらず、限られた成功しか報告されていません。これまでの研究20によると、これらの成長する卵母細胞は均質な集団を構成する。転写活性であることに加えて、それらのクロマチンは、GV0,2,21という名前の構成で、胚性小胞(GV)に分散される。21逆に、中型の卵胞から得られる完全に成長した卵母細胞の集団は、より不均一であり、クロマチン圧縮の様々な程度(GV1、GV2およびGV3)によってミラーリングされる状態である20を観察することができる。これらの中で、以前のデータは、GV2およびGV3卵母細胞がより良い品質およびより高い胚発生能力20、21、22、23、24によって全体的に特徴付けられることを示している。20,21,22,23,24
上記の観察から始めて、初期の角胞から積雲卵母細胞複合体(COC)として分離された卵母細胞の分化を可能にする卵母細胞(L-IVCO)の5日間の長い培養システムについて説明する。この文化戦略は、私たちの研究室で行われた10年の長い研究から進化し、以前に開発された24-48時間の体外卵母細胞培養(IVCO)2、卵母細胞培養中の準備システム23、25および25卵子培養中の亜鉛補充に基づいて根付いています。卵胞刺激ホルモン(FSH)とホスホジエステラーゼ-3(PDE3)阻害剤の組み合わせにより、積雲-卵母細胞通信2を増強することができ、不時の起血再開2を防止し、かつ支持卵母細胞成長2を使用した。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:635px;" width="633">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:215px;">4-well dishes</td>
			<td style="width:127px;">Nunclon</td>
			<td style="width:123px;">179830</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:215px;">96-well dish</td>
			<td style="width:127px;">Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td style="width:123px;">356649</td>
			<td>BioCoat&#8482; Collagen I</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:215px;">Bovine Serum Albumin (Fatty acid free)</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">A8806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Bovine Serum Albumin (Fraction V)</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">A3311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cell culture water</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">W3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cilostamide</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>C7971</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cysteamine</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M9768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Digital camera</td>
			<td style="width:127px;">Nikon Corp</td>
			<td>Camera DS-5M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Disodium phosphate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Estradiol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E2758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Glutamax Supplement</td>
			<td style="width:127px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Gonal F</td>
			<td style="width:127px;">Merck Serono</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Heparin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Hepes</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">H3784</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Vacuum pump</td>
			<td>Cook-IVF</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Incubator</td>
			<td style="width:127px;">Sanyo</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Kanamycin sulfate from Streptomyces kanamyceticus</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">K1377</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:45px;width:215px;">Medium 199</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M3769</td>
			<td style="width:171px;">Powder for hepes-buffered TCM199</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:26px;width:215px;">Medium 199</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M2520</td>
			<td>Powder for M199-D</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microscope</td>
			<td>Nikon Corp</td>
			<td>Nikon Diaphot</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microscope</td>
			<td style="width:127px;">Nikon Corp</td>
			<td style="width:123px;">Eclipse E 600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Monopotassium phosphate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Penicilin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Phenol Red</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Polyvinyl alcohol</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P8137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Polyvinylpyrrolidone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>P5288</td>
			<td>360k molecular weight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Potassium chloride</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Progesterone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P8783</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium choride</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium pyruvate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>P4562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Streptomycin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Testosterone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">86500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Triton X</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">T9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vectashield with DAPI</td>
			<td style="width:127px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">H1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:123px;">W3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Zinc sulfate heptahydrate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">Z0251</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro culture strategy for oocytes from early antral follicle in cattle

成熟した肥沃な卵母細胞の限られた予備は、哺乳類における補助生殖の成功のための主要な障壁を表す。生殖寿命期間中、卵巣成熟および排卵体の卵母細胞の約1%しか存在しない場合、卵巣予備の利用を非排卵卵胞の増加集団に増加させるいくつかの技術が開発されてきた。このような技術は、不妊治療の保存、家畜の選択プログラム、および絶滅危惧種の保全の介入を可能にしました。しかし、卵巣予備軍の広大な可能性はまだほとんど利用されていない。例えば、牛では、特定の発達段階で卵母細胞の体外培養をサポートするいくつかの試みがなされているが、効率的で信頼性の高いプロトコルはまだ開発されていない。ここでは、インビボ中腹葉に対応して、牛初期のアンタル卵胞から完全に成長したステージに集められた生体外成長卵母細胞を開発するために定義された、対応する濾胞期の生理学的条件を再現する培養系について説明する。ホルモンとホスホジエステラーゼ3阻害剤の組み合わせは、タイムリーなmeiotic再開を防ぎ、卵母細胞の分化を導くために使用されました。

L-IVCOの終わりに、図2に示すように、COCの総形態が変化し、4つのクラスが積雲細胞の外観に基づいて同定された。健康なCOCs11、26、27を選択するために11,26,27一般的に採用された形態学的基準に基づいて、クラス1、2、3は健康であると判断され、卵母細胞を取り巻く積雲細胞の完全な層が存在しないな?...

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In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle

開発初期段階で卵巣卵胞から卵母細胞を分離する手順と、完全に成長した段階までの成長と分化をサポートできるインビトロ培養システムのセットアップについて説明する。

牛の初期のアンタル卵胞からの卵母細胞のための体外培養戦略

The limited reserve of mature, fertilizable oocytes represents a major barrier for the success of assisted reproduction in mammals. Considering that ...

このビデオプロトコルでは、ウシの卵母細胞を成長するための培養システムを詳細に示します。このシステムは、培養における卵母細胞の生存率を最大5日間サポートし、その分化を可能にする。この培養系を用いて、生産中のin vitro用の標準プロトコルでは通常使用されない小さな骨包から採取された卵母細胞を、受精可能なアテクトの利用可能性を高めるために成長させることができる。より広い保護区のこの搾取は、絶滅危惧種、牛科、または遺伝的侵食の危険にさらされている地元の品種の遺伝的救済のための新しいオプションを提供することができます。開始するには, 基本的な培養培地の15ミリリットルを準備し、原稿の指示に従ってそれを補完.次に、塩基性培養培地に5マイクロモルクロスターミドを加えて保持媒体を3ミリリットル調製し、35ミリメートルペトリ皿に注ぎます。原稿の指示に従って基本的な培養培地を補って長いIVCO培地を準備する。96ウェルコーティングされたプレートの各ウェルに長いIVCO培地の200マイクロリットルを追加します。その後、4つの縁を滅菌水で満たし、蒸発を補い、培養中に適切な湿度を維持します。96ウェルプレートと保持媒体を摂氏38.5度、最大湿度で5%の二酸化炭素でインキュベートします。卵巣を無菌生理食糸で4回洗浄し、摂氏26度に維持する。その後、直径2ミリメートル以上のすべての卵胞を吸引し、18ゲージの針を吸引ポンプに接続します。滅菌生理食糸を摂氏26度に維持したビーカーで吸引された卵巣をレースする。無菌PTFEまな板の上に一度に1つの卵巣を置き、外科番号22ブレードを使用して、厚さ1.5〜2ミリメートルの卵巣皮質のスライスを切断し、臓器の長軸に平行に切断する。無菌ガラスペトリ皿に卵巣皮質のスライスをレースし、暖かいプレートにミディアムを38.5度で解剖します。60ミリメートルガラスペトリ皿に1つの卵巣皮質スライスをレースし、解剖顕微鏡の下でM199Dの2〜3ミリリットルで、5〜2ミリメートルの間にある卵胞を選択します。ステレオ顕微鏡下で健康な非不全卵胞を同定し、均一に明るい半透明な外観、広範な血管形成、および通常の顆粒膜層などの形態学的パラメータを観察することによって。食症卵胞は灰色の不透明な外観を有し、血管化が不十分であり、内部に暗いCOCがある。食痛卵胞を捨て、他のすべてを処理します。外科用ブレードを使用して、片側の卵胞を取り囲む卵巣組織を、露出するまで除去します。その後、26ゲージの針を使用して、露出した卵胞壁にスリットを慎重に作り、COC、濾胞液、および細胞の塊を含む濾胞含有量を放出します。COCを特定し、細胞質の凝積完全性、透明帯完全性および均質性について調べてください。これらの基準が満たされている場合は、P20ピペットでCOCを吸引します。分離したCOCをM199Dクロスアミドでレースし、30分間分離手順を継続します。コマクを選択した後、前述のように、60ミリメートルペトリ皿にM199Dクロスアミドの20マイクロリットルで16滴を調製し、各ドロップに1つの健康なCOCを入れます。透明帯を除く卵母細胞径を測定するには、カメラに取り付けられた反転顕微鏡を使用します。卵母細胞の明確な視覚化を使用して、2つの垂直な測定を行い、2つの測定値の平均が100〜110マイクロメートルの範囲内であることを保証します。コンパニオン積雲細胞のために、卵母細胞の直径を正確に測定することは困難です。小さい直径または大きな直径の卵母細胞を持つCOCs、または丸みを帯びた卵母細胞を持たないCOCs、または測定できない卵母細胞を持つものは廃棄する必要があります。選択したCOCをM199H培地を含む35ミリメートル皿に移し、最大湿度で摂氏38.5度と5%の二酸化炭素をインキュベーターに入れておき、全体的な作業時間が2時間を超えないようにしてください。選択および収集のプロシージャが完了したら、前に準備された96ウェルプレートの各ウェルの中心に1つのCOCを移す。プレートを摂氏38.5度で5日間、最大湿度で5%の二酸化炭素をインキュベートし、1日おきに培地をリフレッシュします。培地を更新するには、100マイクロリットルの古い培地を100マイクロリットルの新鮮な長いIVCO培地に置き換え、これをステレオ顕微鏡下で行い、COCsを移動しないようにします。長いIVCOの終わりに、COCの形態を分析する。積雲膨張や細胞変性の兆候のないコンパクトな積雲セル投資がある場合は、クラス1として分類します。COCが積雲膨張や細胞変性の兆候のないコンパクトな積雲細胞投資を有し、1つ以上のアントラム様形成を有する場合は、それらをクラス2として分類する。クラス3個のCOCsは、積雲膨張の兆候のない積雲細胞のいくつかの層を示し、積雲細胞の外層に一部の分解細胞およびアントラム様形成を示さない。卵母細胞表面の50%以上に及ぶ積雲細胞の豊富な損失、ならびに細胞変性および細胞デブリの兆候を示す場合は、COCをクラス4として分類する。長いIVCOの終わりにCOCの総形態が変わる。そして、積雲細胞の外観に基づいて4つのクラスを同定した。全体として、5つの生物学的複製物中の74個の卵母細胞が分析され、そのうち9.45%がさらなる評価から廃棄された。クラス1、2、3は健康と判断され、クラス4は卵母細胞を取り巻く積雲細胞の完全な層がないなど、変性の明確な徴候を示した。これらのCOCは、将来のIVP設定で下流の手順を受けるには不適当であると考えられていました。長いIVCOの終わりにmeiotic段階の評価は、卵母細胞の有意に高い割合が未熟な段階で逮捕されたままであり、クロマチンは依然としてGV内に封入されていることを示した。GV内のクロマチン縮合を能力のゲインのマーカーとして調べたところ、クロマチン構成をより凝縮された段階、すなわちGV2およびGV3への移行は、卵母細胞の59%で観察された。わずかな割合で、転移1段階、または変性に達する微小症が再開された。これらの結果は、L-IVCO培養が卵母細胞の生存率を支持し、5日間のmeiotic再開を防ぐことを示した。長いIVCOの終わりに、COCは、体外胚生産、すなわち、体外成熟、受精、および胚培養の下流の手順で使用することができる。これらのステップは、卵母細胞がより高い発達能力を獲得したという概念実証を提供するために必要である。肥沃な卵母細胞の量を増やす可能性を秘めていることに加えて、長いIVCO培養システムは、有能なスタイ分の形成を調節する細胞および分子プロセスを解剖することに興味を持っている科学者のためのツールです。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

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簡体字を使用した初期の器官形成の理解<em&gt;その場で</em&gt;ハイブリダイゼーションプロトコルで<em&gt;アフリカツメガエル</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

共培養系における神経結合の形成を評価するための光遺伝学的アプローチ

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

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幹細胞様<em&gt;アフリカツメガエル</em&gt;胚外植片を早期神経発達の特徴を研究するために<em&gt;インビトロ</em&gt;と<em&gt;インビボ</em

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In Vitro Culture of Epithelial Cells from Different Anatomical Regions of the Human Amniotic Membrane

ヒト羊膜の異なる解剖学的領域からの上皮細胞のインビトロ培養

Several protocols have been reported in the literature for the isolation and culture of human amniotic epithelial cells (HAEC). However, these assume that ...