Name: in vitro culture strategy for oocytes from early antral follicle in cattle
Uploaded: 2020-07-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle at JoVE.com

Bu çalışma Regione Lombardia PSR INNOVA n.201801061529 ve UNIMI n.PSR 2019_DIP_027_ALUCI_01

Yumurtalıklar yerel mezbahada (INALCA S.p.A., Ospedaletto Lodigiano, LO, IT 2270M CE, İtalya) bulunan 4 ila 8 yaşındaki Holstein süt ineklerinden toplanmıştır.
1. Medya hazırlığı
NOT: Tüm ortamlar kullanımdan en az dört saat önce hazırlanmalıdır. Sodyum bikarbonat tamponlu ortam 38,5 °C ve %5 CO2 hava, maksimum nem de kuluçkaya yatırılır. HEPES-tamponlu ortam termostatik fırında 38.5 °C'de muhafaza edilir.
<ol><li>Yumurtaları...

<ol>
	<li>Lonergan, P., Fair, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+Oocytes+in+Vitro.">Maturation of Oocytes in Vitro.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 4, 255-268 (2016).</li><li>Luciano, A. M., Franciosi, F., Modina, S. C., Lodde, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction-mediated+communications+regulate+chromatin+remodeling+during+bovine+oocyte+growth+and+differentiation+through+cAMP-dependent+mechanism(s).">Gap junction-mediated communications regulate chromatin remodeling during bovine oocyte growth and differentiation through cAMP-dependent mechanism(s).</a> Biology of Reproduction. 85 (6), 1252-1259 (2011).</li><li>McLaughlin, M., Telfer, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+development+in+bovine+primordial+follicles+is+promoted+by+activin+and+FSH+within+a+two-step+serum-free+culture+system.">Oocyte development in bovine primordial follicles is promoted by activin and FSH within a two-step serum-free culture system.</a> Reproduction. 139 (6), 971-978 (2010).</li><li>Galli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Achievements+and+unmet+promises+of+assisted+reproduction+technologies+in+large+animals:+a+per-sonal+perspective.">Achievements and unmet promises of assisted reproduction technologies in large animals: a per-sonal perspective.</a> Animal Reproduction. 14 (3), 614-621 (2017).</li><li>Luciano, A. M., Sirard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+in+vitro+maturation+of+oocytes:+a+matter+of+follicular+differentiation.">Successful in vitro maturation of oocytes: a matter of follicular differentiation.</a> Biology of Reproduction. 98 (2), 162-169 (2018).</li><li>Lonergan, P., Fair, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-produced+bovine+embryos:+dealing+with+the+warts.">In vitro-produced bovine embryos: dealing with the warts.</a> Theriogenology. 69 (1), 17-22 (2008).</li><li>Clement, M. D. F., Dalbies-Tran, R., Estienne, A., Fabre, S., Mansanet, C., Monget, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ovarian+reserve+of+primordial+follicles+and+the+dynamic+reserve+of+antral+growing+follicles:+what+is+the+link.">The ovarian reserve of primordial follicles and the dynamic reserve of antral growing follicles: what is the link.</a> Biology of Reproduction. 90 (4), 85 (2014).</li><li>Lussier, J. G., Matton, P., Dufour, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+rates+of+follicles+in+the+ovary+of+the+cow.">Growth rates of follicles in the ovary of the cow.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 81 (2), 301-307 (1987).</li><li>Fair, T., Hulshof, S. C., Hyttel, P., Greve, T., Boland, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+ultrastructure+in+bovine+primordial+to+early+tertiary+follicles.">Oocyte ultrastructure in bovine primordial to early tertiary follicles.</a> Anatomy and Embryology (Berlin). 195 (4), 327-336 (1997).</li><li>Pavlok, A., Lucas-Hahn, A., Niemann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertilization+and+developmental+competence+of+bovine+oocytes+derived+from+different+categories+of+antral+follicles.">Fertilization and developmental competence of bovine oocytes derived from different categories of antral follicles.</a> Molecular Reproduction and Development. 31 (1), 63-67 (1992).</li><li>Blondin, P., Sirard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+and+follicular+morphology+as+determining+characteristics+for+developmental+competence+in+bovine+oocytes.">Oocyte and follicular morphology as determining characteristics for developmental competence in bovine oocytes.</a> Molecular Reproduction and Development. 41 (1), 54-62 (1995).</li><li>Harada, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+oocytes+from+early+antral+follicles+grow+to+meiotic+competence+in+vitro:+effect+of+FSH+and+hypoxanthine.">Bovine oocytes from early antral follicles grow to meiotic competence in vitro: effect of FSH and hypoxanthine.</a> Theriogenology. 48 (5), 743-755 (1997).</li><li>Hirao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+growth+and+development+of+bovine+oocyte-granulosa+cell+complexes+on+the+flat+substratum:+effects+of+high+polyvinylpyrrolidone+concentration+in+culture+medium.">In vitro growth and development of bovine oocyte-granulosa cell complexes on the flat substratum: effects of high polyvinylpyrrolidone concentration in culture medium.</a> Biology of Reproduction. 70 (1), 83-91 (2004).</li><li>Alm, H., Katska-Ksiazkiewicz, L., Rynska, B., Tuchscherer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+meiotic+competence+of+bovine+oocytes+originating+from+early+antral+ovarian+follicles.">Survival and meiotic competence of bovine oocytes originating from early antral ovarian follicles.</a> Theriogenology. 65 (7), 1422-1434 (2006).</li><li>Taketsuru, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+oocytes+in+secondary+follicles+grow+in+medium+containing+bovine+plasma+after+vitrification.">Bovine oocytes in secondary follicles grow in medium containing bovine plasma after vitrification.</a> Journal of Reproduction and Development. 57 (1), 99-106 (2011).</li><li>Endo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol+supports+in+vitro+development+of+bovine+early+antral+follicles.">Estradiol supports in vitro development of bovine early antral follicles.</a> Reproduction. 145 (1), 85-96 (2013).</li><li>Makita, M., Miyano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+promote+bovine+oocyte+growth+and+connection+with+granulosa+cells.">Steroid hormones promote bovine oocyte growth and connection with granulosa cells.</a> Theriogenology. 82 (4), 605-612 (2014).</li><li>Yamamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+to+live+young+from+bovine+small+oocytes+after+growth,+maturation+and+fertilization+in+vitro.">Development to live young from bovine small oocytes after growth, maturation and fertilization in vitro.</a> Theriogenology. 52 (1), 81-89 (1999).</li><li>Alam, M. H., Lee, J., Miyano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+PDE3A+sustains+meiotic+arrest+and+gap+junction+of+bovine+growing+oocytes+in+in+vitro+growth+culture.">Inhibition of PDE3A sustains meiotic arrest and gap junction of bovine growing oocytes in in vitro growth culture.</a> Theriogenology. 118, 110-118 (2018).</li><li>Lodde, V., Modina, S., Galbusera, C., Franciosi, F., Luciano, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+chromatin+remodeling+in+germinal+vesicle+bovine+oocytes:+interplay+with+gap+junction+functionality+and+developmental+competence.">Large-scale chromatin remodeling in germinal vesicle bovine oocytes: interplay with gap junction functionality and developmental competence.</a> Molecular Reproduction and Development. 74 (6), 740-749 (2007).</li><li>Lodde, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+morphology+and+transcriptional+silencing+in+relation+to+chromatin+remodeling+during+the+final+phases+of+bovine+oocyte+growth.">Oocyte morphology and transcriptional silencing in relation to chromatin remodeling during the final phases of bovine oocyte growth.</a> Molecular Reproduction and Development. 75 (5), 915-924 (2008).</li><li>Dieci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+cumulus+cell+gene+expression+indicate+the+benefit+of+a+pre-maturation+step+to+improve+in-vitro+bovine+embryo+production.">Differences in cumulus cell gene expression indicate the benefit of a pre-maturation step to improve in-vitro bovine embryo production.</a> Molecular Human Reproduction. 22 (12), 882-897 (2016).</li><li>Soares, A. C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+interact+with+natriuretic+peptide+C+to+delay+nuclear+maturation,+to+maintain+oocyte-cumulus+communication+and+to+improve+the+quality+of+in+vitro-produced+embryos+in+cattle.">Steroid hormones interact with natriuretic peptide C to delay nuclear maturation, to maintain oocyte-cumulus communication and to improve the quality of in vitro-produced embryos in cattle.</a> Reproduction, Fertililty and Development. 29 (11), 2217-2224 (2017).</li><li>Soares, A. C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+control+of+oocyte+large-scale+chromatin+configuration+in+different+cattle+breeds.">Characterization and control of oocyte large-scale chromatin configuration in different cattle breeds.</a> Theriogenology. 141, 146-152 (2020).</li><li>Franciosi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natriuretic+peptide+precursor+C+delays+meiotic+resumption+and+sustains+gap+junction-mediated+communication+in+bovine+cumulus-enclosed+oocytes.">Natriuretic peptide precursor C delays meiotic resumption and sustains gap junction-mediated communication in bovine cumulus-enclosed oocytes.</a> Biology of Reproduction. 91 (3), 61 (2014).</li><li>Luciano, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+different+levels+of+intracellular+cAMP+on+the+in+vitro+maturation+of+cattle+oocytes+and+their+subsequent+development+following+in+vitro+fertilization.">Effect of different levels of intracellular cAMP on the in vitro maturation of cattle oocytes and their subsequent development following in vitro fertilization.</a> Molecular Reproduction and Development. 54 (1), 86-91 (1999).</li><li>Bilodeau-Goeseels, S., Panich, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+oocyte+quality+on+development+and+transcriptional+activity+in+early+bovine+embryos.">Effects of oocyte quality on development and transcriptional activity in early bovine embryos.</a> Animal Reproduction Science. 71 (3-4), 143-155 (2002).</li><li>Dieci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cilostamide+on+gap+junction+communication+dynamics,+chromatin+remodeling,+and+competence+acquisition+in+pig+oocytes+following+parthenogenetic+activation+and+nuclear+transfer.">The effect of cilostamide on gap junction communication dynamics, chromatin remodeling, and competence acquisition in pig oocytes following parthenogenetic activation and nuclear transfer.</a> Biology of Reproduction. 89 (3), 68 (2013).</li><li>Shu, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cilostamide+and+forskolin+on+the+meiotic+resumption+and+embryonic+development+of+immature+human+oocytes.">Effects of cilostamide and forskolin on the meiotic resumption and embryonic development of immature human oocytes.</a> Human Reproduction. 23 (3), 504-513 (2008).</li><li>Lodde, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+supports+transcription+and+improves+meiotic+competence+of+growing+bovine+oocytes.">Zinc supports transcription and improves meiotic competence of growing bovine oocytes.</a> Reproduction. 159 (6), 679-691 (2020).</li><li>Henderson, K. M., McNeilly, A. S., Swanston, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotrophin+and+steroid+concentrations+in+bovine+follicular+fluid+and+their+relationship+to+follicle+size.">Gonadotrophin and steroid concentrations in bovine follicular fluid and their relationship to follicle size.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 65 (2), 467-473 (1982).</li><li>Kruip, T. A., Dieleman, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormone+concentrations+in+the+fluid+of+bovine+follicles+relative+to+size,+quality+and+stage+of+the+oestrus+cycle.">Steroid hormone concentrations in the fluid of bovine follicles relative to size, quality and stage of the oestrus cycle.</a> Theriogenology. 24 (4), 395-408 (1985).</li><li>Sakaguchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationships+between+the+antral+follicle+count,+steroidogenesis,+and+secretion+of+follicle-stimulating+hormone+and+anti-Mullerian+hormone+during+follicular+growth+in+cattle.">Relationships between the antral follicle count, steroidogenesis, and secretion of follicle-stimulating hormone and anti-Mullerian hormone during follicular growth in cattle.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 17 (1), 88 (2019).</li><li>Makita, M., Miyano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgens+promote+the+acquisition+of+maturation+competence+in+bovine+oocytes.">Androgens promote the acquisition of maturation competence in bovine oocytes.</a> Journal of Reproduction and Development. 61 (3), 211-217 (2015).</li><li>Walters, K. A., Allan, C. M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+actions+and+the+ovary.">Androgen actions and the ovary.</a> Biology of Reproduction. 78 (3), 380-389 (2008).</li><li>Luciano, A. M., Pappalardo, A., Ray, C., Peluso, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+inhibits+large+granulosa+cell+apoptosis+by+stimulating+progesterone+synthesis+and+regulating+the+distribution+of+intracellular+free+calcium.">Epidermal growth factor inhibits large granulosa cell apoptosis by stimulating progesterone synthesis and regulating the distribution of intracellular free calcium.</a> Biology of Reproduction. 51 (4), 646-654 (1994).</li><li>Gordon, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory Production of Cattle Embryos, 2nd edn. , (2003).</li><li>Telfer, E. E., McLaughlin, M., Ding, C., Thong, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+two-step+serum-free+culture+system+supports+development+of+human+oocytes+from+primordial+follicles+in+the+presence+of+activin.">A two-step serum-free culture system supports development of human oocytes from primordial follicles in the presence of activin.</a> Human Reproduction. 23 (5), 1151-1158 (2008).</li><li>McLaughlin, M., Albertini, D. F., Wallace, W. H. B., Anderson, R. A., Telfer, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metaphase+II+oocytes+from+human+unilaminar+follicles+grown+in+a+multi-step+culture+system.">Metaphase II oocytes from human unilaminar follicles grown in a multi-step culture system.</a> Molecular Human Reproduction. 24 (3), 135-142 (2018).</li><li>Fair, T., Hyttel, P., Greve, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+oocyte+diameter+in+relation+to+maturational+competence+and+transcriptional+activity.">Bovine oocyte diameter in relation to maturational competence and transcriptional activity.</a> Molecular Reproduction and Development. 42 (4), 437-442 (1995).</li></ol>

Burada, yumurtaların canlılığını destekleyerek ve meyozis inmesini engelleyerek 5 gün boyunca yumurta gelişimini destekleyen yumurtaların büyümesini sağlayan bir kültür sistemini tanımlıyoruz. Bu ikinci yönü sürekli büyüme ve farklılaşma meiyotik ve embriyonikgelişimselyetkinlik2,20ile oosit vermek için gerekli izin vermek için en önemli öneme sahiptir , aksi takdirde meiyotik bölünme erken bir devamı tarafından bloke olacaktır.</...

Üreme ömrü boyunca, bir yumurtalık olgun mevcut yumurtaların sadece minimal bir kısmını, yumurtlama üzerine fallop tüpleri serbest bırakılır, ve döllenmiş olmak ve uygun bir embriyo haline geliştirmek için kullanılabilir1. Öte yandan, bir yumurtalık içinde oositlerin çoğu atrezi geçmesi ve yumurtalık asla. In vitro embriyo üretimi (IVP) teknolojileri yumurtalıkrezervi2,3sömürü artırmak için çalıştılar. Şimdiye kadar, bu tür teknolojiler doğurganlık koruma müdahaleleri, hayvancılık seçim programları ve nesli tükenmekte olan türlerin korunması izin verdi. Yine de, çoğu protokol temelde antral yumurtalık folikül içinde büyüme aşaması tamamlamış yumurta kullanın, ve dolayısıyla tam büyümüş yumurta olarak adlandırılır. IVP teknolojilerinin yaygın olarak kullanıldığı sığırlarda, tam olarak yetiştirilen yumurtalar yaklaşık 120 μm'lik bir çapa ulaşır ve çapı 2 ila 8 mm arasında değişen foliküllerden toplanır (orta antral foliküller)1. Foliküllerden izolasyon üzerine, bu tür yumurtalar in vitro olgunlaşmış ve döllenmiş. Zigotlar daha sonra blastosist evresine kadar kültürlenir ve ya alıcıya aktarılır ya da kriyokorunmuş olur. Sığır, yanı sıra diğer birçok tür, IVP tarafından sunulan potansiyele rağmen, başına üretilen in vitro embriyo sayısı büyük ölçüde son 40 yıldır artmadı. Bu kısmen alınabilir ve standart IVP teknikleri 4 tabi belirli bir zamanda bir yumurtalık doldurmak tam olarak yetiştirilen yumurta sınırlı sayıda nedeniyle4,5,6.
Erken antral foliküller içinde kapalı oositler, yani, çapı 2 mm'den az olan bu foliküller, doğurganlık koruma programlarında kullanılmak üzere potansiyel bir kaynak temsil7 , bir yumurtalık kabaca orta antral daha 10 kat daha erken antral foliküller içerir8. Ancak, bu oositler hala büyüme aşamasında ve henüz tam olarak yetiştirilen aşama9ulaşmadı . Bu nedenle, hala transkripsiyon elverişsal aktif, daha sonraki gelişimsel adımlar için saklanacak mRNA'lar üreten, ve henüz kendiliğinden devam etme ve mayoz tamamlama yeteneği ile oositler vermek için gerekli tüm farklılaşma sürecinden geçmedi bir kez foliküler bölmesi izole10,11. Bu nedenle, doğrudan standart in vitro olgunlaşma (IVM) protokollerine sunulamaz, ancak büyüme aşamasını tamamlamak ve düzgün bir şekilde ayırt etmek için izin verecek ek bir kültür dönemi gerektirir.
Folikül erken antral evresinden orta antral evreye geliştiğinde sığırlarda meydana gelen büyüme den tam olarak yetiştirilen evreye geçiş, yumurta gelişimi sırasında kritik adımlardan biridir. Sığır, çeşitli çalışmalarda bu olayları in vitro2,12,13,,14,15,16,17,18,19olarak özetlemeye çalıştı. Ancak, bugüne kadar hiçbir güvenilir protokoller geliştirilmiştir ve sadece sınırlı başarı bildirilmiştir. Önceki çalışmalara göre20, Bu büyüyen yumurta homojen bir popülasyon oluşturmaktadır. Transkripsiyonel aktif olmasının yanı sıra, onların kromatin germinal vezikül dağılır (GV), GV02,adlı bir yapılandırma,21. Tersine, orta antral foliküllerden elde edilen tam büyümüş oositlerin popülasyonu daha heterojendir, kromatin sıkıştırmanın çeşitli dereceleri (GV1, GV2 ve GV3) ile yansıtılan birdurumdur 20. Bunlar arasında, önceki veriler GV2 ve GV3 oositler genel olarak daha kaliteli ve daha yüksek embriyonik gelişimsel yeterlilik20,21,,22,23,24ile karakterize olduğunu göstermiştir.
Yukarıdaki gözlemlerden yola çıkarak, burada, erken antral foliküllerden kümülüs-oosit kompleksleri (COC) olarak izole edilmiş yumurtaların farklılaşmasını sağlayan 5 günlük bir kültür yumurtası sistemini (L-IVCO) açıklıyoruz. Bu kültür stratejisi laboratuarımızda yürütülen 10 yıllık uzun çalışmalardan gelişti ve daha önce geliştirilen 24-48 saat in vitro oosit kültürü (IVCO)2,prematürasyon sistemleri23,25 ve oosit kültürü sırasında çinko takviyesi üzerine zemin kökleri . Folikül uyarıcı hormon (FSH) ve fosfodiesteraz-3 (PDE3) inhibitörü kombinasyonu, kümülüs-oositiletişiminigeliştirebilen 2 , zamansız meiyotik devamı önlemek2, ve destek oosit büyüme2 kullanıldı.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:635px;" width="633">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:215px;">4-well dishes</td>
			<td style="width:127px;">Nunclon</td>
			<td style="width:123px;">179830</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:215px;">96-well dish</td>
			<td style="width:127px;">Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td style="width:123px;">356649</td>
			<td>BioCoat&#8482; Collagen I</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:42px;width:215px;">Bovine Serum Albumin (Fatty acid free)</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">A8806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Bovine Serum Albumin (Fraction V)</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">A3311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cell culture water</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">W3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cilostamide</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>C7971</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cysteamine</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M9768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Digital camera</td>
			<td style="width:127px;">Nikon Corp</td>
			<td>Camera DS-5M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Disodium phosphate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Estradiol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E2758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Glutamax Supplement</td>
			<td style="width:127px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Gonal F</td>
			<td style="width:127px;">Merck Serono</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Heparin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Hepes</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">H3784</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Vacuum pump</td>
			<td>Cook-IVF</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Incubator</td>
			<td style="width:127px;">Sanyo</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Kanamycin sulfate from Streptomyces kanamyceticus</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">K1377</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:45px;width:215px;">Medium 199</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M3769</td>
			<td style="width:171px;">Powder for hepes-buffered TCM199</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:26px;width:215px;">Medium 199</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">M2520</td>
			<td>Powder for M199-D</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microscope</td>
			<td>Nikon Corp</td>
			<td>Nikon Diaphot</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Microscope</td>
			<td style="width:127px;">Nikon Corp</td>
			<td style="width:123px;">Eclipse E 600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Monopotassium phosphate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Penicilin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Phenol Red</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Polyvinyl alcohol</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P8137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Polyvinylpyrrolidone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>P5288</td>
			<td>360k molecular weight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Potassium chloride</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Progesterone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P8783</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium choride</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">P5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium pyruvate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>P4562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Streptomycin</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Testosterone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">86500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Triton X</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">T9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Vectashield with DAPI</td>
			<td style="width:127px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">H1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:123px;">W3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Zinc sulfate heptahydrate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">Z0251</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro culture strategy for oocytes from early antral follicle in cattle

Olgun, döllenebilir yumurtaların sınırlı rezervi, memelilerde yardımcı üremenin başarısı için önemli bir engel teşkil eder. Üreme ömrü boyunca yumurtalıkolgun ve yumurtlayan yumurtaların sadece %1'inin yumurtalıkların sadece %1'inde yumurtalık rezervinin yumurtalık dışı foliküllerin artan popülasyonuna olan sömürüsünü artırmak için çeşitli teknikler geliştirilmiştir. Bu tür teknolojiler doğurganlık koruma müdahaleleri, hayvancılık ta seçim programları ve nesli tükenmekte olan türlerin korunması izin vemiştir. Ancak, yumurtalık rezervinin büyük potansiyeli hala büyük ölçüde sömürülmemaktadır. Örneğin, belirli gelişimsel evrelerde yumurtaların in vitro kültürünü desteklemek için bazı girişimlerde bulunulmuş, ancak verimli ve güvenilir protokoller henüz geliştirilmemiştir. Burada, sığır erken antral foliküllerinden tam olarak yetiştirilen evreye kadar toplanan in vitro büyüyen oositlerin geliştirilmesi için tanımlanan, ilgili foliküler evrenin fizyolojik koşullarını yeniden üreten bir kültür sistemini tanımlıyoruz. Hormonlar ve fosfodiesteraz 3 inhibitörü bir arada zamansız meiyotik devamı önlemek ve oosit farklılaşması rehberlik etmek için kullanılmıştır.

L-IVCO sonunda, COCs brüt morfolojisi değişti ve 4 sınıf kümülüs hücrelerinin görünümüne göre tespit edildi, Şekil 2'degösterildiği gibi . SağlıklıCOC'ların 11,,26,,27, sınıf 1, 2 ve 3'ü seçmek için yaygın olarak kabul edilen morfolojik kriterlere göre sağlıklı değerlendirilirken, oositleri çevreleyen kümülüs hücrelerinin tam tabakalarının yokluğu gibi açık ...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle at JoVE.com

In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle

Gelişimin erken aşamalarında yumurtalık foliküllerinden büyüyen yumurtaların izolasyonuna yönelik prosedürlerin yanı sıra büyümeyi ve farklılaşmayı tam olarak büyümüş aşamaya kadar desteklendirebilecek bir in vitro kültür sisteminin kurulumunu anlatıyoruz.

Sığırlarda Erken Antral Folikülden Oositler Için Tüp Bebek Kültür Stratejisi

The limited reserve of mature, fertilizable oocytes represents a major barrier for the success of assisted reproduction in mammals. Considering that ...

Bu video protokolünde, sığır yumurtası yetiştirmek için bir kültür sistemini ayrıntılı olarak gösteriyoruz. Sistem beş güne kadar kültürde oositcanlılık destekler ve onların farklılaşması için izin verir. Bu kültür sistemi kullanılarak, normalde üretimde in vitro için standart protokollerde kullanılmayan küçük antral foliküllerden toplanan yumurtalar, döllenebilir gametlerin kullanılabilirliğini artırmak için yetiştirilebilir.Daha geniş rezerv bu sömürü, tehdit türlerin genetik kurtarma için yeni seçenekler sağlayabilir, sığır ailesinin, ya da genetik erozyon riski yerel ırkların. Başlamak için, temel kültür orta 15 mililitre hazırlamak ve el yazması talimatlara göre tamamlamak. Daha sonra, temel kültür ortamına beş mikromolar silostamid ekleyerek üç mililitre tutma ortamı hazırlayın ve 35 milimetrelik petri kabına dökün.El yazması talimatlara göre temel kültür ortamını tamamlayarak uzun IVCO ortamı hazırlayın. 96 iyi kaplı plakanın her kuyuya 200 mikrolitre uzunluğunda IVCO orta ekleyin. Daha sonra buharlaşmayı telafi etmek ve kültür sırasında uygun nemi korumak için dört kenarı steril suyla doldurun.96 kuyulu plakayı ve tutma ortamını 38,5 santigrat derece ve maksimum nem oranıyla %5 karbondioksitle kuluçkaya yatırın. Yumurtalıkları steril tuzlu da dört kez yıkayın, 26 santigrat derecede muhafaza. Daha sonra çapı iki milimetreden fazla olan tüm folikülleri, bir aspirasyon pompasına bağlı 18 gauge iğneile aspire edin.Dantel steril salin ile bir beher aspire yumurtalıklar 26 santigrat derece korunur. Steril ptfe kesme tahtası üzerinde bir seferde bir yumurtalık yerleştirin ve 1,5 ila iki milimetre kalınlığında ve organın ana eksenine paralel yumurtalık korteks dilimleri kesmek için cerrahi bir sayı 22 bıçak kullanın. Dantel steril bir cam Petri çanak yumurtalık korteks dilimleri, sıcak bir plaka üzerinde kesme orta ile, 38.5 santigrat derece.Bir diseksiyon mikroskobu altında M199D 2-3 mililitre ile 60 milimetrecam Petri çanak dantel bir yumurtalık korteks dilim, 5 ve iki milimetre arasında folikülleri seçin. Stereo mikroskop altında sağlıklı atreetik olmayan folikülleri, tek düze parlak yarı saydam görünüm, geniş vaskülarizasyon ve düzenli granülasyon tabakası gibi morfolojik parametreleri gözlemleyerek tanımlayın. Atreetik foliküller gri opak bir görünüme sahip iken, ve kötü vaskülarize, içinde koyu bir COC ile.Atreetik folikülleri atın ve tüm diğerleri işlemek. Bir tarafta folikül çevreleyen yumurtalık dokusukaldırmak için cerrahi bıçak kullanın, maruz kalana kadar. Sonra dikkatle maruz folikül duvarında bir yarık yapmak için bir 26 gauge iğne kullanın, HANGI COC oluşan foliküler içerik serbest bırakacak, foliküler sıvı, ve hücrelerin kümeleri.COC'yi tanımlayın ve kümülüs bütünlüğü, zona pellucida bütünlüğü ve sitoplazmanın homojenliği için inceleyin. Bu kriterler yerine getirilirse, COC'yi P20 pipetli aspire edin. M199D simide izole COC dantel, ve izolasyon prosedürü devam 30 dakika.COC'ları seçtikten sonra, daha önce açıklandığı gibi, 60 milimetrelik Petri kabında 20 mikrolitre M199D silostamid ile 16 damla hazırlayın ve her damlaya sağlıklı bir COC yerleştirin. Zona pellucida hariç, yumurta çapını ölçmek için bir kameraya bağlı ters bir mikroskop kullanın. Yumurtanın net bir görselleştirme ile, iki dik ölçümler yapmak, iki ölçüm ortalama 100 ila 110 mikrometre aralığında olduğundan emin olun.Eşlik eden kümülüs hücreleri nedeniyle yumurta çapını tam olarak ölçmek zor olabilir. Daha küçük veya daha büyük çapta oositleri olan veya yuvarlak yumurtası olmayan veya ölçülebilir olmayan oositleri olan COC'lar atılmalıdır. Seçilen COC'leri M199H ortamı içeren 35 milimetrelik bir tabağa aktarın ve maksimum nem oranı yla 38,5 santigrat derece ve %5 karbondioksit le kuvözde tutun, toplam çalışma süresinin iki saati geçmediğinden emin olun.Seçim ve toplama işlemleri tamamlandıktan sonra, önceden hazırlanmış 96 kuyulu plakanın her kuyunun ortasına bir COC aktarın. Plakayı 5 gün boyunca 38,5 santigrat derece ve maksimum nem oranıyla %5 karbondioksitle inkübe edin, ortamı her gün yenileyin. Ortamı yenilemek için, 100 mikrolitre eski orta yı 100 mikrolitre taze uzun IVCO ortamı ile değiştirin, COC'ların hareket etmesini önlemek için bunu stereo mikroskop altında yapın.Uzun IVCO sonunda, COCs morfolojisi analiz. Kümülüs genişlemesi veya hücre dejenerasyonu belirtisi olmayan kompakt bir kümülüs hücre yatırımı varsa, onları birinci sınıf olarak sınıflandırın. COCs kümülüs genişleme veya hücre dejenerasyonu hiçbir belirti ile kompakt bir kümülüs hücre yatırımı varsa, ve bir veya daha fazla antrum benzeri oluşumları ile, sınıf iki olarak sınıflandırın.Sınıf üç COCs, kümülüs genişleme belirtisi ile kümülüs hücrelerinin birkaç tabaka göstermek, kümülüs hücrelerinin dış tabakasında bazı disaggregated hücreleri ve hiçbir antrum benzeri oluşumu. Oosit yüzeyinin %50'sinden fazlasını genişleten kümülüs hücrelerinin bol miktarda kaybının yanı sıra hücre dejenerasyonu ve hücre enkazı belirtileri gösteriyorsa, COC'leri sınıf dört olarak sınıflandırın. Uzun IVCO sonunda COC brüt morfolojisi değiştirilir.Kümülüs hücrelerinin görünümüne göre dört sınıf tespit edildi. Toplamda, beş biyolojik kopyada 74 oosit analiz edildi ve bunların %9,45'i ileri değerlendirmeden çıkarıldı. Birinci, ikinci ve üç sınıflar sağlıklı değerlendirilirken, dördüncü sınıf yumurtaları çevreleyen kümülüs hücrelerinin tam tabakalarının yokluğu gibi açık dejenerasyon belirtileri gösterdi.Bu COC'lar prospektif bir IVP ortamında aşağı işlemden geçmek için uygun görülmedi. Uzun IVCO sonunda meiyotik aşamada değerlendirilmesi yumurtaların önemli ölçüde daha yüksek bir yüzdesi olgunlaşmamış aşamada tutuklandı kaldı gösterdi, kromatin hala GV içinde kapalı. GV içindeki kromatin yoğuşması yeterlilik kazanımının bir göstergesi olarak incelendiğinde, yumurtaların %59'unda kromatin konfigürasyonunun daha yoğun evrelere , yani GV iki ve GV üçe geçişi gözlendi. Küçük bir yüzdesi metafaz bir aşamaya ulaşan meyozis devam, ya da dejenerasyon.Bu sonuçlar, L-IVCO kültürünün yumurta canlılığını desteklediğini ve beş gün boyunca meyotik devamı engellediğini göstermektedir. Uzun IVCO sonunda, COCs in vitro embriyo üretiminin downstream prosedürleri kullanılabilir, yani, in vitro maturasyon, döllenme, ve embriyo kültürü. Bu adımlar, yumurtanın daha yüksek bir gelişimsel yeterlilik elde ettiği kavramının kanıtını sağlamak için gereklidir.Döllenebilir yumurta miktarını artırma potansiyelini elinde tutmanın yanı sıra, uzun IVCO kültür sistemi, yetkin bir gamet oluşumunu düzenleyen hücresel ve moleküler süreçleri incelemek isteyen bilim adamları için bir araçtır.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Anlamak Basitleştirilmiş kullanma Erken Organogenez<em&gt; In Situ</emIçinde&gt; Hibridizasyon Protokolü<em&gt; Ksenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

Bir Co-kültür Sistemde nöronal bağlantıları Oluşumunda değerlendirilmesi için bir optogenetic Yaklaşım

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Kök hücre benzeri<em&gt; Xenopus</em&gt; Embriyonik Eksplantlarındaki Erken Nöral Gelişim Özellikleri Okuyacak<em&gt; İn Vitro</em&gt; Ve<em&gt; İn Vivo</em

Understanding the genetic programs underlying neural development is an important goal of developmental and stem cell biology. In the amphibian blastula, ...

Isolation and Characterization of Mouse Antral Oocytes Based on Nucleolar Chromatin Organization

Nucleolar Kromatin Teşkilatı dayanarak Fare Antral OOSİT İzolasyonu ve Karakterizasyonu

This protocol describes a simple and quick method to isolate and characterize mouse antral GV (Germinal Vesicle) oocytes as able (SN, Surrounded ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

İlkel ve kesin hematopoetik ataları insan Pluripotent kök hücrelerden farklılaşma yönetmen

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Visualization of Cellular Electrical Activity in Zebrafish Early Embryos and Tumors

Zebra balığı erken embriyo ve tümör hücresel elektrik aktivitesinin görselleştirme

Bioelectricity, endogenous electrical signaling mediated by ion channels and pumps located on the cell membrane, plays important roles in signaling ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

İskele-free, üç boyutlu insülin ifade Pancreatoids fare pankreas ataları Vitro gelen nesil

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Düğüm ve Notochordal plaka Gastrulating fare embriyo Tarama elektron mikroskobu ve bütün Dağı ayirt kullanarak görselleştirme

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Somite türevleri indüklenen insan nesil Vitro Pluripotent kök hücreler

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

In Vitro Culture of Epithelial Cells from Different Anatomical Regions of the Human Amniotic Membrane

İnsan Amniyotik Membranının Farklı Anatomik Bölgelerinden Epitel Hücrelerin In Vitro Kültürü

Several protocols have been reported in the literature for the isolation and culture of human amniotic epithelial cells (HAEC). However, these assume that ...