Name: derivation, expansion, cryopreservation and characterization of brain microvascular endothelial cells from human induced pluripotent stem cells
Uploaded: 2020-11-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation, Expansion, Cryopreservation and Characterization of Brain Microvascular Endothelial Cells from Human Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av en National Institute of Mental Health Biobehavioral Research Awards for Innovative New Scientists (BRAINS) Award R01MH113858 (til R.K.), en National Institutes of Health Award KL2 TR002542 (PL). en National Institute of Mental Health Clinical Scientist Development Award K08MH086846 (til R.K.), en Sydney R Baer Jr Foundation Grant (til P.L.) Doris Duke Charitable Foundation Clinical Scientist Development Award (til R.K.), Ryan Licht Sang Bipolar Foundation (til R.K.), Phyllis & Jerome Lyle Rappaport Foundation (til R.K.), Harvard Stem Cell Institute (til R.K.) og av Steve Willis og Elissa Freud (til R.K.). Vi takker dr. Annie Kathuria for hennes kritiske lesing og tilbakemeldinger på manuskriptet.

Menneskelige iPSCer ble omprogrammert fra fibroblastene til friske givere ved hjelp av en protokoll godkjent av Institutional Review Boards of Massachusetts General Hospital og McLean Hospital, og karakterisert som beskrevet i tidligerestudier 44,45,46.
MERK: Kort tid ble fibroblaster omprogrammert til iPSC via mRNA-basert genetisk omprogrammering47. IPSCene ble opprettholdt i ...

Endringer og feilsøking
I denne protokollen gjorde vi noen endringer i bruk av en vanlig brukt ekstracellulær matrise og cellekulturmedier under iPSC-dyrking for avledning av BMB(figur 1). Disse endringene påvirket ikke muligheten til å utlede BMECS fra menneskelige iPSCer som beskrevet i Lippmann-protokollen1. En iPSC-linje fra en annen sunn donor ble brukt til å vise at denne modifiserte protokollen viser resultater ...

Blod-hjerne barriere funksjon Blod-hjernebarrieren (BBB) danner en grense som begrenser bevegelsen av stoffer fra blodet til hjernen. BBB består av mikrovaskulære hjerneceller (BMECer) som danner en monolayer som fôrer vaskulaturen. BMECs, sammen med astrocytter, nevroner, pericytter, microglia og ekstracellulær matrise, danner den nevrovaskulære enheten. BMECs har en tett regulert paracellulær struktur som gjør at BBB kan opprettholde høy trans-endotel elektrisk motstand (TEER), som begrenser passiv diffusjon og fungerer som en indikator på barriereintegritet1,2. BMECs har også proteiner som hjelper med transcellulær bevegelse som endocytose, transcytose og transmigrasjon, samt ekstravasasjon av leukocytter under en immunrespons3. BMECs stole på tilstrømning og efflux transportører for næring og fjerning av avfallsprodukter, for å opprettholde en homeostatisk balanse i hjernen3. For eksempel, solute carrier family 2 medlem 1 (SLC2A1) er en tilstrømning transportør ansvarlig for bevegelse av glukose over BBB4,mens efflux transportører som ATP bindende kassett underfamilie B medlem 1 (ABCB1) og ATP bindende kassett underfamilie C medlem 1 (ABCC1) er ansvarlig for å returnere substrater tilbake i blodet3,5,6,7. ABCB1-substrater inkluderer morfin, verapamil4og antipsykotika som olanzapin og risperidon8,mens ABCC1-transportøren har en rekke substrater, inkludert sulfatkonjugater, vincristine og glukuronidkonjugater4.
Anvendelse av BBB-modeller i psykiatriske lidelser BBB dysfunksjon har vært innblandet i en rekke nevrologiske og psykiatriske lidelser, inkludert schizofreni og bipolarlidelse 9,10. Nylig blir iPSC-avledede ex vivo cellulære modeller brukt til å avhøre cellulære og molekylære underlag av psykiatriske lidelser, men disse modellene tar for tiden ikke hensyn til den potensielle rollen som nevrovaskulaturen11,12,13. Det er hypotetisk at perifere inflammatoriske cytokiner som sirkulerer i blodet kan påvirke BBB14,15 ,16,17, men det er også bevis for paracellulære18,19,20,21,22, transcellulær23,24,25,26,27,28,29og ekstracellulær matrise20,29,30,31,32 abnormiteter som bidrar til BBB dysfunksjon. Forstyrrelse av BBB kan resultere i at innholdet i blodet kommer inn i hjernen parenchyma og aktiverer astrocytter og / eller microglia for å frigjøre proinflammatoriske cytokiner, som igjen initierer en inflammatoriskrespons 33 som kan ha skadelige effekter på hjernen34. BMECs er den primære komponenten i BBB og undersøke strukturen og funksjonen til disse cellene kan forbedre forståelsen av BBB dysfunksjon i nevrologiske og psykiatriske lidelser.
Alternative BMEC-modeller Før utviklingen av effektive protokoller for utleding av BMECer fra iPSCs1,6,35,36, hadde forskere ansatt udødeliggjortE BMECs37 for å studere BBB-funksjon. Men mange av disse modellene klarte ikke å oppnå ønskeligE BBB fenotyper, et slikt fysiologisk utvalg av TEER-verdier38,39. Bruk av iPSCer har fordelen av å beholde den genetiske bakgrunnen til individet som cellene er avledet fra. Forskere arbeider aktivt med å etablere iPSC-avledede ex vivo mikromiljømodeller som rekafulerer strukturen og funksjonen til den menneskelige hjernen. Forskere har utviklet metoder for å utlede BMV-er som er strukturelt og fysiologisk lik BMECs funnet in vivo. Metoder for å skaffe rensede populasjoner av iPSC-avledede BMECer krever en rekke forskjellige trinn med protokoller som optimaliseres de siste årene1,6,35,36. Generelt er iPSC-avledede BMECer dyrket i Essential 6 (E6) medium i 4 dager, etterfulgt av 2 dager i humant endotelterumfritt medium (hESFM) supplert med grunnleggende fibroblastvekstfaktor (bFGF), retinsyre (RA) og B27-tillegg. Cellene blir deretter dyrket på en kollagen IV (COL4) og fibronectin (FN) matrise for å oppnå > 90% homogene BMECs1.
Identiteten til BMB er bekreftet ved immunofluorescence som viser kouttrykket av BMEC proteiner inkludert blodplate-endotelcelleadhesjon molekyl-1 (PECAM1), SLC2A1, og tette koblingsproteiner som tett kobling protein 1 (TJP1), okkludin (OCLN), og claudin-5 (CLDN5)6. Spirende analyser har blitt brukt til å bekrefte det angiogene potensialet til iPSC-avledede BMECer. 6 BBB-integriteten til BMV-er evalueres av tilstedeværelsen av fysiologiske in vitro TEER-verdier (~2000Ω x cm2)37 og målbar aktivitet for efflukstransportører som ABCB1 og ABCC11,6,36. Nylige metodiske fremskritt fra Lippmann-gruppen har ført til iPSC-avledede BMEC-protokoller med redusert eksperimentell variasjon og forbedret reproduserbarhet1. Det er imidlertid ikke kjent om de kan utvides og passeres utover sub-culturing scenen. Vår modifiserte protokoll tar sikte på å løse dette problemet ved å passere iPSC-avledede BMV-er utover dag 8 og vurdere om de kan utvides ytterligere for å beholde BBB-egenskaper etter kryopreservation. Selv om ingen studier har beskrevet passaging av iPSC-avledede BMECer, finnes det en protokoll for BMEC kryopreservation som beholder fysiologiske BBB egenskaper etter å ha gjennomgått en fryse-tinesyklus 40. Det er imidlertid ikke kjent etter-cryopreservation BMV kan passeres og beholde BBB egenskaper.
BMECs avledet fra iPSCer ved hjelp av Lippmann-protokollen har blitt brukt til å modellere BBB-forstyrrelser i nevrologiske lidelser som Huntington sykdom7. Slike iPSC-avledede BMECer har også blitt brukt til å undersøke effekten av bakteriell infeksjon som Neisseria meningitidis eller gruppe B Streptococcus på forstyrrelse av henholdsvis blod-CSF barriere og BBBhenholdsvis 41,42. Også ved hjelp av iPSC-avledede BMECer fra 22q sletting syndrom pasienter med schizofreni, forskere observert en økning i intercellulære vedheft molekyl-1 (ICAM-1), et stort vedheft molekyl i BMECs som bistår med rekruttering og ekstravasasjon av leukocytter inn i hjernen43. Samlet viser disse studiene nytten av iPSC-avledede BMECer for å studere BBB-forstyrrelser i komplekse nevropsykiatriske lidelser.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2&#8242;,7&#8242;-dichlorodihydrofluorescein diacetate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D6883-50MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A6964-100mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Donkey anti-Mouse IgG</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-21202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555 Donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-31572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 (PECAM-1) (89C2) Mouse mAb</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>3528S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CLDN5 (Claudin-5)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35-2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen IV from human placenta</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C5533-5mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 2 mL Internal Threaded Polypropylene Cryogenic Vial&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>&#160;8670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Costar Flat Bottom Cell Culture Plates (6-wells)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Falcon Flat Bottom Cell Culture Plates (24-wells)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Transwell Multiple Well Plate with Permeable Polyester Membrane Inserts (12-wells)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess slides</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12 (without phenol red)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;A1413202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2438-50mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9663-10ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS (+/+)</td>
			<td>Gibco/Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14040-117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epithelial Volt/Ohm (TEER) Meter (EVOM2) STX2</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Essential 6 Medium (Thermo Fisher)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1516401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2006-2mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geltrex LDEV-Free Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1413202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balance Salt Solution with calcium and magnesium&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>24020-117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342, Trihydrochloride, Trihydrate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>H3570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human endothelial serum-free medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11111044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InCell Analyzer 6000</td>
			<td>General Electric</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen&#160;Countess Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MK-571</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7571-5MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NutriStem</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>01-0005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Occludin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>33-1500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 16%</td>
			<td>Electron Microscopy Services</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perkin Elmer Envision 2103 multi-plate Reader</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human VEGF 165</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human FGF-basic (154 a.a.)</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retinoic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R2625-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhodamine 123</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>83702-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SLC2A1 (GLUT-1)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>PA1-21041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX17</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>81778S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TJP-1 (ZO-1)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>PA5-28869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8787-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain (0.4%) for use with the Countess Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>T10282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Valspodar (Sigma) (cyclosporin A)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>SML0572-5MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Versene solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15040066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632 dihydrochloride (ROCK inhibitor)</td>
			<td>Tocris/Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1254</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

derivation, expansion, cryopreservation and characterization of brain microvascular endothelial cells from human induced pluripotent stem cells

Mikrovaskulære hjerneceller (BMECer) kan differensieres fra humane induserte pluripotente stamceller (iPSCer) for å utvikle ex vivo cellulære modeller for å studere blod-hjernebarriere (BBB) funksjon. Denne modifiserte protokollen gir detaljerte trinn for å utlede, utvide og kryoreserve BMV-er fra menneskelige iPSCer ved hjelp av en annen donor og reagenser enn de som er rapportert i tidligere protokoller. iPSCer behandles med essensielle 6 medium i 4 dager, etterfulgt av 2 dager med humant endoteltumfritt kulturmedium supplert med grunnleggende fibroblastvekstfaktor, retinsyre og B27-supplement. På dag 6 blir celler subkulturert på en kollagen / fibronectin matrise i 2 dager. Immunocytochemistry utføres på dag 8 for BMEC markøranalyse ved hjelp av CLDN5, OCLN, TJP1, PECAM1 og SLC2A1. Vestlig blotting utføres for å bekrefte BMEC-markøruttrykk, og fravær av SOX17, en endodermal markør. Angiogent potensial er demonstrert med en spirende analyse. Trans-endotel elektrisk motstand (TEER) måles ved hjelp av spisepinneelektroder og voltohmmeter fra dag 7. Efflux transporter aktivitet for ATP bindende kassett subfamily B medlem 1 og ATP bindekassett subfamily C medlem 1 måles ved hjelp av en multi-plate leser på dag 8. Vellykket avledning av BMV-er bekreftes av tilstedeværelsen av relevante cellemarkører, lave nivåer av SOX17, angiogent potensial, transportøraktivitet og TEER-verdier ~ 2000 Ω x cm2. BMV-er utvides til dag 10 før de går over på nybelagte kollagen/fibronectinplater eller kryopreservert. Denne protokollen viser at iPSC-avledede BMV-er kan utvides og passeres minst én gang. Lavere TEER-verdier og dårligere lokalisering av BMEC-markører ble imidlertid observert etter kryopreservasjon. BMECs kan benyttes i co-kultur eksperimenter med andre celletyper (nevroner, glia, pericytes), i tredimensjonale hjernemodeller (organ-chip og hydrogel), for vaskularisering av hjerneorganoider, og for å studere BBB dysfunksjon i nevropsykiatriske lidelser.

BMEC differensiering Noen kritiske trinn i denne protokollen bør følges nøyaktig (figur 1). E6 middels bruk på dag 1 er viktig, siden det ofte brukes til å utlede nevroekodær avstamning fra iPSCer innen relativt kort tid gir reproduserbare resultater på tvers av flere cellelinjer36. Et annet viktig skritt er på dag 4 av differensiering, hvor E6 medium bør byttes til hESFM med fortynnet (1:200) B27, 20 ng / ml bFGF og 10 μM RA for å utvid...

Watch this Scientific Journal Video about Derivation, Expansion, Cryopreservation and Characterization of Brain Microvascular Endothelial Cells from Human Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Derivation, Expansion, Cryopreservation and Characterization of Brain Microvascular Endothelial Cells from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Denne protokollen beskriver en tilpasset metode for å utlede, utvide og kryopreserve hjernen mikrovaskulære endotelceller oppnådd ved differensiere menneskelige induserte pluripotente stamceller, og å studere blod hjernebarriere egenskaper i en ex vivo modell.

Avledning, utvidelse, kryopreservasjon og karakterisering av mikrovaskulære endotelceller fra humane induserte pluripotente stamceller

Brain microvascular endothelial cells (BMECs) can be differentiated from human induced pluripotent stem cells (iPSCs) to develop ex vivo cellular models ...

BMECs generated from iPSC provide new experimental models for studying blood brain barrier function and dysfunction. We have used this protocol to examine whether BMECs retain their barrier properties after expansion and cryopreservation. This technique enables the generation of disease-specific BMECs from patients with disorders in which blood-brain barrier disruption plays a role in the pathophysiology of disease.To induce BMEC differentiation from human iPSCs, wash the confluent iPSC culture with DPBS one time before incubating the cells with the appropriate volume of enzymatic EDTA for approximately five minutes at 37 degrees Celsius. When a single cell suspension has been obtained collect the cells by centrifugation and resuspend the pellet in an appropriate volume of stem cell medium supplemented with 10 micromolar ROCK inhibitor for counting. Dilute the cells to 1.56 times 10 to the fourth cells per cubic centimeter concentration and seed two milliliters of cells into individual wells of a six-well flat bottom.After 24 hours in the cell culture incubator replace the supernatant in each well with E6 medium and return the plate to the incubator for four more days. To purify the iPSC-derived BMECs, coat the subculturing plates with the appropriate volume of a freshly prepared collagen IV and fibronectin solution per well and incubate the plates for a minimum of two hours at 37 degrees Celsius. On day six of differentiation collect the cells by centrifugation and resuspend the pellets in the appropriate volume of fresh human endothelial serum-free medium supplemented with B27, basic fibroblasts growth factor, and retinoic acid.For TEER analysis, plate the differentiated cells into each well of a collagen and fibronectin coated 12-transwell filtered plate. For efflux transporter activity analysis, plate the cells into each well of a collagen and fibronectin coated 24-well flat bottom plate. After 24 hours of subculture, replace the supernatant in each well with fresh human endothelial serum-free medium supplemented only with B27 supplement.To measure the blood brain barrier properties of the BMECs using TEER, charge the TEER instrument overnight and lightly wipe the instrument and chopstick electrodes with 70%ethanol before placing them into the safety hood. Switch on the power and calibrate the ohm meter according to the manufacturer's specifications. Plug in the electrodes and rinse them one time with 70%ethanol and one time with DPBS.Place the shorter end of the electrode into the atypical chamber of the insert and the longer end into the basolateral chamber of a blank well. After measuring the negative control response, quickly rinse the electrodes as demonstrated and measure the first experimental well. After all of the measurements have been recorded rinse chopstick electrodes again, gently wipe the electrodes and let them air dry in the safety hood.To assess the efflux transporter activity of the cells, on day eight of culturing treat the appropriate number of wells with a 10 micromolar efflux transporter inhibitor solution and place in an incubator for one hour at 37 degrees Celsius. At the end of the incubation, treat the cells with a 10 micromolar efflux transporter substrate solution for one hour in the incubator. At the end of the incubation, wash each well twice with 500 microliters of DPBS per well before lysing the cells with 500 microliters DPBS supplemented with 5%Triton-X per well.After five minutes, use a microplate reader to measure the fluorescence of the lysed cells at a 485 nanometer excitation and a 530 nanometer emission. For wells not used in the transporter assay, wash the cells twice with DPBS before fixing with 4%paraformaldehyde per cell nuclei quantification. After one day of culture in E6 medium, the cell morphology is similar to that of iPSCs.By day four, the cells are visibly distinct from iPSCs and cover most of the well. Two days of culture in human endothelial serum-free medium induces an elongated and cobblestone appearance in the cells. At day eight, individual cells form a mostly large cobblestone pattern.A sprouting assay can be performed to demonstrate the angiogenic potential of iPSC-derived BMECs. This leads to the development of tube-like structures after three days of growth factor treatment. The iPSC-derived BMECs generated using this protocol co-expressed tight junction proteins expressed in endothelial cells in the brain, lung, liver, and kidney, as well as vascular endothelial markers expressed at the blood brain barrier.As observed, 48 hours after subculture and medium change iPSC-derived BMECs demonstrate TEER values within the range described for iPSC-derived BMECs that were co-cultured with rat primary astrocytes. Efflux transporter activity was also observed at this stage. After cryopreservation, TEER measurements are lower compared to freshly derived BMECs.Western blot analysis reveals reduced levels of tight junction markers, such as occludin, while immunocytochemistry shows freckled and or frayed patterns of tight junction proteins. A too high or too low iPSC density will affect the differentiation efficiency and impact the development of appropriate blood brain barrier properties. This method enables the investigation of barrier properties cellular signaling and transporter activity using individualized BMECs to model the physiology and pathophysiology of the blood-brain barrier function.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Effektiv Utledning av Human nevrale stamceller og nevroner fra pluripotent humane embryonale stamceller med lite molekyl Induksjon

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

The Specification of Telencephalic Glutamatergic Neurons from Human Pluripotent Stem Cells

Spesifikasjonen av Telencephalic glutamatergic Neurons fra menneskelige pluripotente stamceller

Here, a stepwise procedure for efficiently generating telencephalic glutamatergic neurons from human pluripotent stem cells (PSCs) has been described. The ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

Isolasjon og kultur av endotelceller fra Embryonale brain

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

A cGMP-applicable Expansion Method for Aggregates of Human Neural Stem and Progenitor Cells Derived From Pluripotent Stem Cells or Fetal Brain Tissue

En cGMP-relevant Expansion Metode for Aggregater of Human Neural Stem og stamceller avledet fra pluripotent stamceller eller Fetal hjernevev

A cell expansion technique to amass large numbers of cells from a single specimen for research experiments and clinical trials would greatly benefit the ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Feeder-free Utledning av Neural Crest stamceller fra menneskelige pluripotent stamceller

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Directed Dopaminergic Neuron Differentiation from Human Pluripotent Stem Cells

Regissert dopaminerge Neuron Differensiering fra Menneskelig Pluripotent stamceller

Dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars compacta  (also known as A9 DA neurons) are the specific cell type that is lost in ...

Isolation of Primary Murine Brain Microvascular Endothelial Cells

Isolering av Primary murine Brain mikrovaskulære Cells

The blood-brain-barrier is ultrastructurally assembled by a monolayer of brain microvascular endothelial cells (BMEC) interconnected by a junctional ...

Isolation of Primary Murine Skeletal Muscle Microvascular Endothelial Cells

Isolering av primære Murine Skjelettmuskel mikrovaskulær endotelceller

The endothelial cells of skeletal muscle capillaries (muscle microvascular endothelial cells, MMEC) build up the barrier between blood stream and skeletal ...

Migration, Chemo-Attraction, and Co-Culture Assays for Human Stem Cell-Derived Endothelial Cells and GABAergic Neurons

Migrasjon, kjemo-attraksjon og co-kultur analyser for menneskelige stamcelle-avledet endotelceller og GABAergic Nevroner

Role of brain vasculature in nervous system development and etiology of brain disorders is increasingly gaining attention. Our recent studies have ...

Generation of Human Neurons and Oligodendrocytes from Pluripotent Stem Cells for Modeling Neuron-Oligodendrocyte Interactions

Generering av humane nevroner og oligodendrocytter fra pluripotente stamceller for modellering av neuron-oligodendrococyttinteraksjoner

In Alzheimer&#8217;s disease (AD) and other neurodegenerative disorders, oligodendroglial failure is a common early pathological feature, but how it ...