Name: derivation, expansion, cryopreservation and characterization of brain microvascular endothelial cells from human induced pluripotent stem cells
Uploaded: 2020-11-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation, Expansion, Cryopreservation and Characterization of Brain Microvascular Endothelial Cells from Human Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri Ödülü KL2 TR002542 (PL) olan Yenilikçi Yeni Bilim İnsanları için Ulusal Ruh Sağlığı Enstitüsü Biyobehavioral Araştırma Ödülleri R01MH113858 (R.K.'ye) tarafından desteklendi. Ulusal Ruh Sağlığı Enstitüsü Klinik Bilimci Geliştirme Ödülü K08MH086846 (R.K.'ye), Sydney R Baer Jr Vakfı Hibesi (P.L.'ye) Doris Duke Hayır Kurumu Klinik Bilimci Geliştirme Ödülü (R.K.'ye), Ryan Licht Sang Bipolar Vakfı (R.K.'ye), Phyllis & Jerome Lyle Rappaport Vakfı (R.K.'ye), Harvard Kök Hücre Enstitüsü (R.K.'ye) ve Steve Willis ve Elissa Freud (R.K.'ye). Dr. Annie Kathuria'ya makale hakkındaki eleştirel okumaları ve geri bildirimleri için teşekkür ederiz.

İnsan iPSC'leri, Massachusetts Genel Hastanesi ve McLean Hastanesi Kurumsal İnceleme Kurulları tarafından onaylanan bir protokol kullanılarak sağlıklı donörlerin fibroblastlarından yeniden programlandı ve önceki çalışmalarda açıklandığı gibi karakterize edildi44,45,46.
NOT: Kısaca, fibroblastlar mRNA tabanlı genetik yeniden programlama ile iPSC'ye yeniden programlandı<sup class=...

Değişiklikler ve Sorun Giderme
Bu protokolde, BMEC'lerin türetimi için iPSC kültürü sırasında yaygın olarak kullanılan hücre dışı matris ve hücre kültürü medyasının kullanılmasında bazı değişiklikler yaptık (Şekil 1). Bu değişiklikler, Lippmann protokolünde açıklandığı gibi bmecs'i insan iPSC'lerinden türetme yeteneğini etkilemedi1. Bu değiştirilmiş protokolün diğer satırlarla ön...

Kan-Beyin Bariyer fonksiyonu Kan-beyin bariyeri (BBB), maddelerin kandan beyne hareketini sınırlayan bir sınır oluşturur. BBB, vaskülat astarlı bir monolayer oluşturan beyin mikrovasküler endotel hücrelerinden (VPC' ler) oluşur. BMEC'ler, astrositler, nöronlar, perisitler, mikroglia ve hücre dışı matris ile birlikte nörovasküler üniteyi oluşturur. BMEC'ler, BBB'nin pasif difüzyonu sınırlayan ve bariyer bütünlüğünün bir göstergesi olarak hizmet eden yüksek trans-endotel elektrik direncini (TEER) korumasını sağlayan sıkı bir şekilde düzenlenmiş parasellüler yapıya sahiptir1,2. BMEC'ler ayrıca endositoz, transsitoz ve transmigrasyon gibi hücrelerarası hareketin yanı sıra immün yanıt sırasında lökositlerin ekstravazasyonuna yardımcı olan proteinlere sahiptir3. BMEC'ler, beyinde homeostatik bir dengeyi korumak için atık ürünlerin beslenmesi ve uzaklaştırılması için akın ve efflux taşıyıcılarınagüvenir 3. Örneğin, solute taşıyıcı ailesi 2 üye 1 (SLC2A1), Glikozun BBB4boyunca hareketinden sorumlu bir akın taşıyıcısıdır, ATP bağlama kaseti alt ailesi gibi efflux taşıyıcıları ise B üye 1 (ABCB1) ve ATP bağlama kaseti alt familyası C üye 1 (ABCC1), substratları kan akışına geri döndürmekten sorumludur3,5,6,7. ABCB1 substratları morfin, verapamil4ve olanzapine ve risperidone8gibi antipsikotikleri içerirken, ABCC1 taşıyıcısı sülfat konjugeleri, vincristine ve glucuronide konjugeleri4dahil olmak üzere çeşitli substratlara sahiptir.
Psikiyatrik Bozukluklarda BBB Modellerinin Uygulanması BBB disfonksiyonu, şizofreni ve bipolar bozukluk9,10dahil olmak üzere bir dizi nörolojik ve psikiyatrik rahatsızlığa karışmıştır. Son zamanlarda, psikiyatrik bozuklukların hücresel ve moleküler temellerini sorgulamak için iPSC türevli ex vivo hücresel modeller kullanılmaktadır, ancak bu modeller şu anda nörovasküler11 , 12,13tarafından oynanan potansiyel rolü dikkate almamaktadır. Kanda dolaşan periferik inflamatuar sitokinlerin BBB14 , 15,16,17'yi olumsuz yönde etkileyebileceği varsayılmaktadır, ancak paraselüler18 , 19,20,21,21için de kanıtlarvardır.22, hücreler arası23,24,25,26,27,28,29ve hücre dışı matris20,29,30,31,BBB disfonksiyona katkıda bulunan32 anormallik. BBB'nin bozulması, kanın içeriğinin beyin parenkimine girmesine ve proinflamatuar sitokinleri serbest bırakmak için astrositleri ve / veya mikrogliayı aktive etmesine neden olabilir, bu da beyin üzerinde zararlı etkileri olabilecek enflamatuar bir yanıt33 başlatır34. BMEC'ler BBB'nin birincil bileşenidir ve bu hücrelerin yapısının ve işlevinin incelenmesi nörolojik ve psikiyatrik bozukluklarda BBB disfonksiyonunun anlaşılmasını artırabilir.
Alternatif BMEC Modelleri IPSC 1 , 6 , 35,36'danBMEC'leri türetmek için etkili protokollerin geliştirilmesindenönce,araştırmacılar BBB işlevini incelemek için ölümsüzleştirilmiş BMEC37'yi çalıştırmışlardı. Bununla birlikte, bu modellerin çoğu istenen BBB fenotiplerine ulaşamadı, böyle bir fizyolojik TEER değerleri aralığı38,39. IPSC'lerin kullanılması, hücrelerin türetildiği bireyin genetik arka planını koruma avantajına sahiptir. Bilim adamları, insan beyninin yapısını ve işlevini yeniden sağlayan iPSC türevi ex vivo mikroçevronment modelleri oluşturmak için aktif olarak çalışıyorlar. Araştırmacılar, yapısal ve fizyolojik olarak in vivo bulunan BMEC'lere benzeyen BMEC'leri türetmek için yöntemler geliştirmiştir. iPSC türevi BMEC'lerin saflaştırılmış popülasyonlarını elde etmek için yöntemler, son birkaç yılda optimize edilen protokollerle bir dizi farklı adım gerektirir1,6,35,36. Genellikle, iPSC türevi BMEC'ler Essential 6 (E6) ortamında 4 gün boyunca kültürlenir, ardından temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF), retinoik asit (RA) ve B27 takviyesi ile desteklenmiş insan endotel serumsuz ortamında (hESFM) 2 gün kültürlenir. Hücreler daha sonra bir kollajen IV (COL4) ve fibronektin (FN) matrisi üzerinde kültürlenir ve >% 90 homojen BMEC1elde edilir.
VPC'lerin kimliği, trombosit-endotel hücre yapışma molekülü-1 (PECAM1), SLC2A1 ve sıkı kavşak proteini 1 (TJP1), occludin (OCLN) ve claudin-5 (CLDN5)6gibi sıkı kavşak proteinleri de dahil olmak üzere BMEC proteinlerinin birlikte ekspresyonunu gösteren immünoresans ile doğrulanır. Filizlenen tahliller, iPSC türevli VPC'lerin anjiyojenik potansiyelini doğrulamak için kullanılmıştır. 6 BMEC'lerin BBB bütünlüğü, fizyolojik in vitro TEER değerlerinin (~2000Ω x cm2)37 varlığı ve ABCB1 ve ABCC11,6,36gibi efflux taşıyıcıları için ölçülebilir aktivite ile değerlendirilir. Lippmann grubunun son metodolojik gelişmeleri, deneysel değişkenliği azaltılmış ve tekrarlanabilirliği artırılmış iPSC türevi BMEC protokollerine yol açmıştır1. Bununla birlikte, alt kültleme aşamasının ötesine genişletilip geçilemeyecekleri bilinmemektedir. Değiştirilmiş protokolümüz, iPSC türevi BMEC'leri 8. Hiçbir çalışma iPSC türevi BMEC'lerin geçtiğini açıklamamakla birlikte, bmec kriyoprezervasyonu için donma-çözülme döngüsünden geçtikten sonra fizyolojik BBB özelliklerini koruyan bir protokolvardır 40. Bununla birlikte, kriyoprezervasyon sonrası BMEC'lerin geçebileceği ve BBB özelliklerini koruyabileceği bilinmemektedir.
Lippmann protokolünü kullanan iPSC'lerden türetilen BMEC'ler Huntington hastalığı7gibi nörolojik bozukluklarda BBB bozulmasını modellemek için kullanılmıştır. Bu tür iPSC türevli BMEC'ler, Neisseria meningitidis veya B Grubu Streptococcus gibi bakteriyel enfeksiyonun kan-CSF bariyerinin ve BBB'nin bozulması üzerindeki etkilerini araştırmak için dekullanılmıştır. Ayrıca, şizofrenili 22q delesyon sendromu hastalarından iPSC türevi BMEC'ler kullanan araştırmacılar, LÖK'lerde lökositlerin beyne alınmasına ve ekstravazasyonuna yardımcı olan önemli bir yapışma molekülü olan hücreler arası yapışma molekülü-1'de (ICAM-1) bir artış gözlemlediler43. Birlikte ele alındığında, bu çalışmalar karmaşık nöropsikiyatrik bozukluklarda BBB bozulmasını incelemek için iPSC türevi BMEC'lerin yararını göstermektedir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2&#8242;,7&#8242;-dichlorodihydrofluorescein diacetate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D6883-50MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A6964-100mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Donkey anti-Mouse IgG</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-21202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555 Donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-31572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 (PECAM-1) (89C2) Mouse mAb</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>3528S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CLDN5 (Claudin-5)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35-2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen IV from human placenta</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C5533-5mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 2 mL Internal Threaded Polypropylene Cryogenic Vial&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>&#160;8670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Costar Flat Bottom Cell Culture Plates (6-wells)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Falcon Flat Bottom Cell Culture Plates (24-wells)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Transwell Multiple Well Plate with Permeable Polyester Membrane Inserts (12-wells)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess slides</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12 (without phenol red)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;A1413202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2438-50mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9663-10ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS (+/+)</td>
			<td>Gibco/Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14040-117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epithelial Volt/Ohm (TEER) Meter (EVOM2) STX2</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Essential 6 Medium (Thermo Fisher)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1516401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2006-2mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geltrex LDEV-Free Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1413202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balance Salt Solution with calcium and magnesium&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>24020-117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342, Trihydrochloride, Trihydrate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>H3570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human endothelial serum-free medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11111044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InCell Analyzer 6000</td>
			<td>General Electric</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen&#160;Countess Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MK-571</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7571-5MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NutriStem</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>01-0005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Occludin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>33-1500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 16%</td>
			<td>Electron Microscopy Services</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perkin Elmer Envision 2103 multi-plate Reader</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human VEGF 165</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human FGF-basic (154 a.a.)</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retinoic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R2625-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhodamine 123</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>83702-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SLC2A1 (GLUT-1)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>PA1-21041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX17</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>81778S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TJP-1 (ZO-1)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>PA5-28869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8787-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain (0.4%) for use with the Countess Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>T10282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Valspodar (Sigma) (cyclosporin A)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>SML0572-5MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Versene solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15040066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632 dihydrochloride (ROCK inhibitor)</td>
			<td>Tocris/Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1254</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

derivation, expansion, cryopreservation and characterization of brain microvascular endothelial cells from human induced pluripotent stem cells

Beyin mikrovasküler endotel hücreleri (VPC'ler), kan-beyin bariyeri (BBB) fonksiyonunu incelemek için ex vivo hücresel modeller geliştirmek için insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden (iPSC' ler) ayırt edilebilir. Bu değiştirilmiş protokol, önceki protokollerde bildirilenlerden farklı bir donör ve reaktif kullanarak insan iPSC'lerinden BMEC'leri türetmek, genişletmek ve kriyoprezerk için ayrıntılı adımlar sağlar. iPSC'ler 4 gün boyunca esansiyel 6 ortam ile tedavi edilir, ardından temel fibroblast büyüme faktörü, retinoik asit ve B27 takviyesi ile desteklenmiş 2 günlük insan endotel serumsuz kültür ortamı ile tedavi edilir. 6. günde, hücreler 2 gün boyunca bir kollajen / fibronektin matrisi üzerine alt kültürlenir. İmmünostokimya, CLDN5, OCLN, TJP1, PECAM1 ve SLC2A1 kullanılarak BMEC belirteç analizi için 8. Batı blotting, BMEC işaretleyici ifadesini ve endodermal bir işaretleyici olan SOX17'nin yokluğunu onaylamak için gerçekleştirilir. Anjiyojenik potansiyel filizlenen bir test ile gösterilmiştir. Trans-endotel elektrik direnci (TEER), 7. günden itibaren çubuk elektrotlar ve voltohmmetre kullanılarak ölçülür. ATP bağlama kaseti alt familyası B üye 1 ve ATP bağlama kaseti alt familyası C üye 1 için efflux taşıyıcı etkinliği 8. günde çok plakalı okuyucu kullanılarak ölçülür. BMEC'lerin başarılı türemesi, ilgili hücre belirteçlerinin varlığı, düşük SOX17 seviyeleri, anjiyojenik potansiyel, taşıyıcı aktivitesi ve TEER değerlerinin ~2000 Ω x cm2varlığı ile doğrulanır. BMEC'ler, taze kaplanmış kollajen/ fibronektin plakalarına geçmeden veya kriyoprezserved olmadan önce 10 güne kadar genişletilir. Bu protokol, iPSC türevli BMEC'lerin en az bir kez genişletilebileceğini ve geçebileceğini göstermektedir. Bununla birlikte, kriyoprezervasyondan sonra daha düşük TEER değerleri ve BMEC işaretleyicilerinin daha zayıf lokalizasyonu gözlenmiştir. BMEC'ler diğer hücre tipleriyle (nöronlar, glialar, perisitler) ortak kültürdeneylerinde, üç boyutlu beyin modellerinde (organ çipi ve hidrojel), beyin organoidlerinin damarlanması ve nöropsikiyatrik bozukluklarda BBB disfonksiyonunun incelenmesi için kullanılabilir.

BMEC Farklılaşması Bu protokoldeki birkaç kritik adım tam olarak takip edilmelidir (Şekil 1). 1. günde E6 orta kullanımı önemlidir, çünkü genellikle birden fazla hücre hattında tekrarlanabilir sonuçlar veren nispeten kısa bir süre içinde iPSC'lerden nöroektoderm soyu türetmek için kullanılır36. Bir diğer önemli adım, E6 ortamının seyreltilmiş (1:200) B27, 20 ng/mL bFGF ve 10 μM RA ile iPSC türevi BMEC'leri genişletm...

Watch this Scientific Journal Video about Derivation, Expansion, Cryopreservation and Characterization of Brain Microvascular Endothelial Cells from Human Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Derivation, Expansion, Cryopreservation and Characterization of Brain Microvascular Endothelial Cells from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Bu protokol, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerin ayırt edilmesiyle elde edilen beyin mikrovasküler endotel hücrelerini türetmek, genişletmek ve kriyoprezerserve etmek ve bir ex vivo modelde kan beyin bariyeri özelliklerini incelemek için uyarlanmış bir yöntemi detaylandırmaktadır.

İnsan İndüklenen Pluripotent Kök Hücrelerden Beyin Mikrovasküler Endotel Hücrelerinin Derivasyonu, Genişlemesi, Kriyoprezervasyonu ve Karakterizasyonu

Brain microvascular endothelial cells (BMECs) can be differentiated from human induced pluripotent stem cells (iPSCs) to develop ex vivo cellular models ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Küçük Molekül İndüksiyon Pluripotent İnsan Embriyonik Kök Hücreleri İnsan Nöronal atalarıdır ve Nöronlar Verimli türetilmesi

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

The Specification of Telencephalic Glutamatergic Neurons from Human Pluripotent Stem Cells

İnsan Pluripotent Kök Hücreler Telencephalic glutamaterjik Nöron Şartnamesi

Here, a stepwise procedure for efficiently generating telencephalic glutamatergic neurons from human pluripotent stem cells (PSCs) has been described. The ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

Embriyonik ön beyin gelen Endotel Hücreleri İzolasyon ve Kültürü

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

A cGMP-applicable Expansion Method for Aggregates of Human Neural Stem and Progenitor Cells Derived From Pluripotent Stem Cells or Fetal Brain Tissue

İnsan Nöral Agregalarının bir cGMP uygulanabilir Açılım Yöntemi kök hücrelerin pluripotent kök hücreleri veya Fetal Beyin dokusundan türetilen

A cell expansion technique to amass large numbers of cells from a single specimen for research experiments and clinical trials would greatly benefit the ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

İnsan Pluripotent dan Sinir Crest Progenitör Hücreler besleyici ücretsiz Derivasyon Kök Hücre

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Directed Dopaminergic Neuron Differentiation from Human Pluripotent Stem Cells

İnsan Pluripotent Kök Hücreleri dopaminerjik Nöron Farklılaşma Yönetmen

Dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars compacta  (also known as A9 DA neurons) are the specific cell type that is lost in ...

Isolation of Primary Murine Brain Microvascular Endothelial Cells

İlköğretim Kemirgen Beyin mikrovasküler endotel hücreleri İzolasyonu

The blood-brain-barrier is ultrastructurally assembled by a monolayer of brain microvascular endothelial cells (BMEC) interconnected by a junctional ...

Derivation of Leptomeninges Explant Cultures from Postmortem Human Brain Donors

Otopsi İnsan beyni Donörleri gelen leptomeninkslerde Eksplantasyon Kültürlerin türetilmesi

Even though great progress has been made in the clinical characterization of Parkinson&#39;s disease, several studies report that the diagnosis of ...

Isolation of Primary Murine Skeletal Muscle Microvascular Endothelial Cells

Birincil fare iskelet kas mikrovasküler endotel hücre izolasyon

The endothelial cells of skeletal muscle capillaries (muscle microvascular endothelial cells, MMEC) build up the barrier between blood stream and skeletal ...

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

Insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerinin (iPSCs), PiggyBac vektörler kullanarak fonksiyonel spinal ve kranial motor nöronlara dönüşümü

We describe here a method to obtain functional spinal and cranial motor neurons from human induced pluripotent stem cells (iPSCs). Direct conversion into ...