Name: nanoparticle tracking analysis of gold nanoparticles in aqueous media through an inter-laboratory comparison
Uploaded: 2020-10-20T13:30:00
Duration: 7 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nanoparticle Tracking Analysis of Gold Nanoparticles in Aqueous Media through an Inter-Laboratory Comparison at JoVE.com

يعترف المؤلفون بالدعم المالي من المشروع الممول من H2020: ACEnano (اتفاقية المنحة رقم 720952). وقد تم دعم هذا العمل جزئياً أيضاً من قبل برنامج البحث والتطوير التعاوني الدولي الممول من وزارة التجارة والصناعة والطاقة في كوريا (رقم المنحة N05310009، "Horizon20 Kor-EU التعاونية R&BD على صندوق أدوات ACEnano") الذي مكّن من مشاركة الشركاء الكوريين في اتحاد مشروع أفق 2020 ACEnano.

وقد استخدمت المنهجية الموصوفة هنا في الجولة الثالثة من المقارنات بين المختبرات.
1. إعداد العينة
<ol><li>تصفية المياه من خلال مرشح حقنة 0.02 μm. تنقية المياه ضروري لإزالة أي جزيئات التلوث قبل استخدامه لتخفيف العينة.</li>
	<li>لتحليل عينة طازجة، تمييع عينة من 60 نانومتر الذهب الغروانية تشتت الحجمية بعامل 50 في المياه فائقة التبخر المصفاة. التركيز المقترح لتحليل NTA هو 1 × 107 – 1 × 109 جسيمات لكل مل.</li>
</ol>2. تنفيذ القياس
<ol><li>التبديل على النظام<ol>
<li>توصيل أداة NTA ومضخة الحقن والكمبيوتر. قم بتشغيل الأجهزة والبرامج. يضمن البرنامج المقترن (انظر جدول المواد)تشغيل جميع اتصالات الأجهزة وعرض قراءات درجة حرارة حية.</li>
		<li>إزالة وحدة الليزر من NTA واستخدام الأنسجة والهواء المضغوط تجف تماما الأسطح الزجاجية والخلايا تدفق انخفاض حجم (LVFC) القنوات الداخلية، أنابيب، والمنافذ fluidic.</li>
	</ol>
</li>
	<li>فتيلة الأنابيب<ol>
<li>شطف أنابيب مائع مدخل مع الماء فائقة الpure لإزالة أي جزيئات والحد من احتمال فقاعات الهواء التي من شأنها أن تتداخل مع القياسات. للشطف، يتم وضع نهاية أنابيب مدخل داخل غلاف الصك في حاوية النفايات.</li>
		<li>أدخل حقنة 1 مل (بدون إبرة) من الماء المصفى في ميناء لور ودفع ~ 900 ميكرولتر من السائل من خلال أنابيب مدخل بالسرعة التي يسمح بها الضغط الخلفي. اترك الحقنة تحتوي على السائل المتبقي المرفق لمنع أي ّ هدّم.</li>
	</ol>
</li>
	<li>توصيل أنابيب مضخة الحقنة<ol>
<li>تجميع LVFC على وحدة الليزر لإنشاء غرفة العينة كما رأينا في الشكل 1. إرفاق أنابيب مأخذ إلى المنفذ الجانب الأيمن من LVFC. ملاحظة: إن أنابيب المدخل والمأخذ تختلف في القطر، حيث يكون قطر المدخل أصغر من المأخذ. قد يؤدي تبديل توصيل أنابيب منفذ المدخل إلى الضغط على خلية التدفق والتسرب.</li>
		<li>افصل الحقنة عن أنابيب المدخل واتبادل حقنة جديدة تحتوي على 1 مل من المياه المصفاة، مما يضمن ملامسة السائل إلى السائل. قم بتوصيل أنابيب المدخل بالمنفذ الأيسر للـ LVFC. ببطء إدخال ~ 500 ميكرولتر من السوائل في غرفة العينة. الحرص على ضمان عدم إدخال فقاعات الهواء أثناء التحميل. يظهر تكوين الأنابيب النهائية في الشكل 2.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61741/61741fig1v2.jpg"> الشكل 1: تجميع خلية تدفق وحدة التخزين المنخفضة التي شنت على وحدة ليزر. 
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61741/61741fig02.jpg"> الشكل 2: تكوين أنابيب خلية تدفق وحدة التخزين المنخفضة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61741/61741fig02large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<ol start="4"><li>الليزر وحدة تحميل والتحقق من النظام<ol>
<li>أدخل وحدة الليزر مع LVFC مملوءة بالماء في الصك وقفل في مكانه.</li>
		<li>ضع الحقنة في مهد مضخة الحقنة وآمن. تهيئة الكاميرا عن طريق النقر على ابدأ الكاميرا في واجهة البرنامج. في علامة التبويب الأجهزة من الواجهة، انقر فوق مبعثر لنقل موضع المرجع.</li>
		<li>قم بتعيين مستوى الكاميرا إلى 16 وضبط التركيز يدويًا للتحقق من المصب لأي جسيمات. ضبط مجال الرؤية موقف من قبل اليسار النقر على نافذة العرض الرئيسية واستخدام الماوس لسحب صعودا وهبوطا للتحقق من وجود أي جسيمات. إذا كان هناك أكثر من ثلاثة جسيمات في مجال الرؤية ، وهذا يعني مشكلة في نقاء المياه أو عملية التنظيف ، وبالتالي ، فإن عملية التنظيف تحتاج إلى تكرار أو الحاجة إلى استبدال المياه أو تصفيتها.</li>
		<li>إزالة وحدة الليزر من الصك.</li>
		<li>افصل الحقنة عن أنابيب المدخل واستبدلها بحقنة مليئة بالهواء فقط. إدخال الهواء ببطء في غرفة عينة لإزالة السائل داخل. قم بإزالة LVFC من وحدة الليزر وافصل الأنابيب. تنظيف الأسطح الزجاجية للLVFC والزجاج البصري من وحدة ليزر مع الماء وجافة مع الأنسجة والهواء المضغوط. جفف الأنابيب بالهواء المضغوط. إعادة تجميع LVFC على وحدة الليزر وتوصيل الأنابيب، وعلى استعداد لتحميل العينة. ملاحظة: هذه الخطوة غير مطلوبة دوماً، ومع ذلك، في هذه الحالة تمت إضافتها كإجراء وقائي إضافي لتقليل أي تباين محتمل.</li>
	</ol>
</li>
	<li>عينة التحميل<ol>
<li>كرر الخطوة 2.2.2. قم بتوصيل حقنة تحتوي على 1 مل من تشتت الجسيمات النانوية الذهبية 60 نانومتر مصنوعة في الخطوة 1.1 إلى منفذ Luer. حقن ببطء 750 ميكرولتر من العينة في LVFC عن طريق أنابيب مدخل مع وحدة الليزر ينظر خارج الصك لضمان عدم إدخال فقاعات.</li>
		<li>قم بتحميل وحدة الليزر مرة أخرى إلى أداة NTA و تهيئة الكاميرا بالنقر على كاميرا ابدأ في واجهة البرنامج. في علامة التبويب الأجهزة من الواجهة، انقر فوق مبعثر للانتقال إلى موضع التركيز المرجعي، تحقق من أن هذا تم تعيينه بشكل صحيح لإعطاء صورة واضحة للجسيمات.</li>
		<li>تأكد من أن مجال الرؤية يتم تعيينه مركزياً فيما يتعلق بوضع شعاع الليزر. ضبط وفقا لذلك عن طريق النقر على اليسار على نافذة العرض الرئيسية في البرنامج والماوس سحب صعودا وهبوطا.</li>
		<li>تشغيل وظيفة AutoSetup لتحسين مستوى التركيز والكاميرا تلقائيًا لضمان تحقيق جودة الصورة المثلى. ملاحظة: تسمح الكاميرا التلقائية ومعلمات التركيز البؤري بمزيد من الاتساق بين المعامل المختلفة نظرًا لأن هذا مستقل عن المستخدم.</li>
	</ol>
</li>
	<li>تحليل العينة<ol>
<li>إنشاء برنامج نصي القياس في القياس القياسي، SOP التبويب ، للحصول على 5 أشرطة الفيديو تكرار 60 ق تحت بطيئة (يجب أن تكون الجسيمات تمر عبر من جانب واحد من الشاشة إلى الآخر في حوالي 10 ق) وتدفق مستمر (ملف تكميلي 1). ملاحظة: يوصى بالتدفق لضمان عرض أفضل للعينة العامة للقياس. وتتحسن دقة وقياسات تكرار التركيز تحسنا كبيرا عندما يتم نقل التدفق البطيء على العينة لضمان تدفق عدد أكبر من الجسيمات الجديدة عبر منطقة القياس وتحليلها أثناء التجربة. يعتمد طول الفيديو على توزيع ملف التعريف ومدى متغيره خلال وقت التحليل. 5 أشرطة الفيديو من 60 s تعتبر مدة قياس نموذجية.</li>
		<li>تعيين اسم ملف التجربة وموقع البيانات وبدء التشغيل. وقد تم إجراء التحليل بعد الإجراء المبين من قبل المختبرات السبعة لمشروع أفق 2020 ACEnano17.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. تحليل البيانات
ملاحظة: تم إجراء كل تحليل البيانات ضمن برنامج v 3.4 (انظر جدول المواد)، لا يتم استخدام أي تحويلات يدوية أو حسابات إضافية. وتقدم بيانات تحجيم الجسيمات في شكل خام كتوزيع مدرج التكراري ويتم حسابها من التغير المقاس في موضع الجسيم باستخدام معادلة ستوكس آينشتاين. البرنامج يحدد متوسط المسافة التي تحركها كل جسيم في الطائرات س و ص. هذه القيمة تسمح للمعامل نشر الجسيمات (D) التي يمكن أن تحدد من الذي، إذا كانت درجة حرارة العينة T واللزوجة المذيبات η معروفة، نصف قطرها الهيدروديناميكية كروية كروية مكافئة، RH، من الجسيمات يمكن حسابها. يتم تسجيل درجة حرارة العينة تلقائيا من قبل NTA. اللزوجة الافتراضية عينة المستخدمة من قبل البرنامج هو للمياه، ويتم تضمينها في السيناريو القياس هو مبين أعلاه، على الرغم من اللزوجة يمكن تعديلها من قبل المستخدم عند استخدام عينات مختلفة من تينوين، إما قبل أو بعد أخذ القياس.
<ol><li>تعيين عتبة الكشف (DT) عن طريق سحب شريط المنزلق أو النقر على أزرار + و - في البرنامج تحت عتبة الكشف، وهو معلمة تحليل لتتبع الأمثل من الجسيمات visualized ، بين 2 و 20. تأكد من أن قيمة DT المختارة تحدد وتتبع أكبر عدد ممكن من الجسيمات المرئية (يتم وضع علامة عليها تلقائيًا كصلبان حمراء على شاشة صورة البرنامج).<ol>
<li>21 - وكتوجّه لتحديد عتبة الكشف، ينبغي أن يكون عدد الجسيمات المحددة في الصورة في حدود 30-80 تقريباً حيث لا ينبغي أن يكون أكثر من 10 شطمرات حمراء مطابقة للمواقع التي لا يعتبرها المراقب جسيمات. يجب ألا يكون هناك أكثر من 5 الصلبان الزرقاء (دلالة على الضوضاء) لوحظ.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61741/61741fig03.jpg"> الشكل 3: ملاحظات تحديد العتبة. A سيئة (يسار) وجيدة (يمين) الكشف عن عتبة الملاحظة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61741/61741fig03large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<ol start="2"><li>معالجة تلقائيا الجزيئات تتبع تحليل الفيديو عن طريق الضغط على زر العملية في البرنامج. اترك كافة معلمات المعالجة المحددة تلقائيًا وتصدير البيانات كملف نتائج تنسيق .csv مع توزيع حجم الجسيمات الكامل وبيانات التعريف الإضافية التي تصف إعداد القياس. للتحقق من جودة القياس، انظر إلى علامة التبويب تحليل في البرنامج أو تحقق من ملف الإخراج .csv لأي رسالة تحذير أو تنبيهات. يظهر مثال عن تقرير نتائج PDF في الملف التكميلي 2.
</li>
	<li>اقرأ نتائج حجم الوضع والانحراف المعياري المرتبط به من تقرير PDF. ملاحظة: تم استخدام نتائج حجم الوضع لمقارنة الأحجام التي تم الحصول عليها بين المختبرات السبعة ويتم عرضها ومناقشتها في القسم 5.</li>
</ol>4. التنظيف والتجفيف
<ol><li>بعد الاستخدام، طرد النظام جيدا مع المياه النظيفة لإزالة جميع آثار العينة من الأنابيب والأسطح البصرية. ويمكن رصد فعالية التنظيف من خلال مراقبة كمية الجسيمات في مجال الرؤية.</li>
	<li>إزالة وحدة الليزر من صك NTA.</li>
	<li>تحميل حقنة من الهواء من خلال النظام لتفريغ الأنابيب وLVFC.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Thwala, M., Musee, N., Sikhwivhilu, L., Wepener, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+oxidative+toxicity+of+Ag+and+ZnO+nanoparticles+towards+the+aquatic+plant+Spirodela+punctuta+and+the+role+of+testing+media+parameters.">The oxidative toxicity of Ag and ZnO nanoparticles towards the aquatic plant Spirodela punctuta and the role of testing media parameters.</a> Environmental Science-Processes and Impacts. 15 (10), 1830-1843 (2013).</li><li>Lowry, G. V., Gregory, K. B., Apte, S. C., Lead, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformations+of+nanomaterials+in+the+environment.">Transformations of nanomaterials in the environment.</a> Environmental Science &amp; Technology. 46 (13), 6893-6899 (2012).</li><li>Auffan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+definition+of+inorganic+nanoparticles+from+an+environmental,+health+and+safety+perspective.">Towards a definition of inorganic nanoparticles from an environmental, health and safety perspective.</a> Nature Nanotechnology. 4 (10), 634-641 (2009).</li><li>Valsami-Jones, E., Lynch, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+safe+are+nanomaterials.">How safe are nanomaterials.</a> Science. 350 (6259), 388-389 (2015).</li><li>Briffa, S. M., Nasser, F., Valsami-Jones, E., Lynch, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uptake+and+impacts+of+polyvinylpyrrolidone+(PVP)+capped+metal+oxide+nanoparticles+on+Daphnia+magna:+role+of+core+composition+and+acquired+corona.">Uptake and impacts of polyvinylpyrrolidone (PVP) capped metal oxide nanoparticles on Daphnia magna: role of core composition and acquired corona.</a> Environmental Science: Nano. 5, 1745-1756 (2018).</li><li>Hassell&#246;v, M. a. R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Analysis and Characterization of Manufactured Nanoparticles in Aquatic Environments. Environmental and Human Health Impacts of Nanotechnology. , 211-266 (2009).</li><li>Hoet, P., Br&#252;ske-hohlfeld, I., Salata, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+and+known+and+unknown+health+risks.">Nanoparticles and known and unknown health risks.</a> Journal of Nanobiotechnology. 2 (1), 12 (2004).</li><li>Briffa, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+transformations+of+manufactured+nanomaterials+as+a+proposed+proxy+for+ageing.">Thermal transformations of manufactured nanomaterials as a proposed proxy for ageing.</a> Environmental Science: Nano. 5, 1618-1627 (2018).</li><li>Kestens, V., Bozatzidis, V., De Temmerman, P. J., Ramaye, Y., Roebben, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+particle+tracking+analysis+method+for+the+size+determination+of+nano-+and+microparticles.">Validation of a particle tracking analysis method for the size determination of nano- and microparticles.</a> Journal of Nanoparticle Research. 19 (8), 271 (2017).</li><li>Walker, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+nano-particle+tracking+analysis.">Improved nano-particle tracking analysis.</a> Measurement Science and Technology. 23 (6), 065605 (2012).</li><li>Using NTA to Study Aggregation Behavior of Liposome-Protein Complexes. Malvern Panalytical Available from: <a target="_blank" href="https://www.news-medical.net/whitepaper/20161125/Using-NTA-to-Study-Aggregation-Behavior-of-Liposome-Protein-Complexes.aspx">https://www.news-medical.net/whitepaper/20161125/Using-NTA-to-Study-Aggregation-Behavior-of-Liposome-Protein-Complexes.aspx</a> (2019)</li><li>Filipe, V., Hawe, A., Jiskoot, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+evaluation+of+nanoparticle+tracking+analysis+(NTA)+by+NanoSight+for+the+measurement+of+nanoparticles+and+protein+aggregates.">Critical evaluation of nanoparticle tracking analysis (NTA) by NanoSight for the measurement of nanoparticles and protein aggregates.</a> Pharmaceutical Research. 27 (5), 796-810 (2010).</li><li>Roebben, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interlaboratory+comparison+of+size+and+surface+charge+measurements+on+nanoparticles+prior+to+biological+impact+assessment.">Interlaboratory comparison of size and surface charge measurements on nanoparticles prior to biological impact assessment.</a> Journal of Nanoparticle Research. 13 (7), 2675 (2011).</li><li>Hole, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interlaboratory+comparison+of+size+measurements+on+nanoparticles+using+nanoparticle+tracking+analysis+(NTA).">Interlaboratory comparison of size measurements on nanoparticles using nanoparticle tracking analysis (NTA).</a> Journal of Nanoparticle Research: An Interdisciplinary Forum for Nanoscale Science and Technology. 15 (12), 2101 (2013).</li><li>Analytical and Characterisation Excellence in nanomaterial risk assessment: A tiered approach. ACEnano Available from: <a target="_blank" href="https://cordis.europa.ue/project/id/720952">https://cordis.europa.ue/project/id/720952</a> (2019)</li><li>Soille, P., Vincent, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Determining watersheds in digital pictures via flooding simulations. 1360, (1990).</li></ol>

المؤلف جو سوليفان، Agnieszka سيوبا، بولين كارنيل موريس وميشيل كاربوني هم موظفون في Malvern Panalytical Ltd. التي تصنع الأدوات المستخدمة في هذه المقالة.

وقد أبرزت النتائج غير المتسقة التي تم الحصول عليها من الدورة 1 للجنة القانون الدولي الحاجة إلى إجراء فحوصات صحية للأجهزة للنظم القديمة، فضلا عن وضع نظام أداء تشغيلي أكثر تفصيلا، والحاجة إلى التدريب العملي، وفهم أفضل لأوضاع القياس والتحليل لضمان تحقيق نتائج أكثر اتساقا في مختلف المختبرات. وفي الواقع، وجد Hole et al. أن عدم وجود مبادئ توجيهية مشتركة حول كيفية استخدام نظام NTA وإعداد العينات أدى إلى تقلب عبر المختبرات حتى بالنسبة للعينات أحادية المدى نسبيًا16. ولذلك، حضر جميع المشاركين في لجنة القانون الدولي حلقة عمل تدريبية شملت أفضل الممارسات المتعلقة بتشغيل النظام وظروف القياس، فضلا عن توجيهات التنظيف والصيانة الخاصة بوسيلة محددة من أدوات التدريب على النظـر الوطني. كما أجرى جميع المشاركين قياسات على نفس الجهاز في مختبراتهم الخاصة لجولات لجنة القانون الدولي اللاحقة. وقد شمل الإجراء أولاً جولة اختبرت النظام محلياً في كل مختبر من خلال تشغيل لجنة القانون الدولي على عينات قياسية من اللاتكس (دورة لجنة القانون الدولي 2)، قبل أن يستخدمها الشركاء لتكرار قياسات الذهب (دورة لجنة القانون الدولي 3). وكان الهدف من قياس عينات الذهب هذه بواسطة التقييم الوطني للمواد النووية هو إدخال الثقة والوضوح في أساليب وممارسات تقييم المخاطر النانوية اللازمة للتأثير على بروتوكولات التوجيه المتعلقة بالسلامة النانوية.
NTA هي تقنية يمكن قياس قطر مكافئ كروية هيدرودينامية من الجسيمات ويمكن استخدامها للجسيمات بواسطة الجسيمات، والتحليل البصري في الوقت الحقيقي من النظم متعددة التخصصات تتراوح بين 10 نانومتر – 50 نانومتر، إلى ما يقرب من 1000 نانومتر في الحجم (اعتمادا على خصائص العينة وتكوين الصك). مطلوب إعداد عينة الحد الأدنى. على الرغم من إعداد عينة الحد الأدنى، وهذه الخطوة أمر بالغ الأهمية للبروتوكول وينبغي توخي الحذر الشديد عند تخفيف عينة واختيار مخفف. يمكن أن يكون الشكل عاملاً مقيداً فيما يتعلق بـ NTA حيث يتم الحصول على قياسات الحجم المكافئ الكروية وسيكون للجسيمات غير الكروية قيمة حجم أقل دقة.
بالنسبة لتكنولوجيا NTA، فإن بعض الاختلافات في النتائج هي دائماً المتوقعة حيث يتم ملاحظة عينة تمثيلية فقط من العينة بأكملها. بغض النظر عن ذلك، فإن جميع النتائج تفي بمعيار ISO 19430 لتحجيم الجسيمات. التركيز الأمثل لتوفير عادة حوالي 108 جسيمات / مل في غضون 30-60 ثانية تحليل الوقت. وبالنسبة للعينات ذات التركيزات الجزيئات الأدنى، سوف تكون هناك حاجة إلى أوقات تحليل أطول لضمان النتائج القابلة للتكرار. وبالنسبة للعينات التي تحتوي على تركيزات من الجسيمات التي يزيد حجمها على10 9 جسيمات/مل، هناك احتمال أكبر من حدوث مشاكل في التتبع، وسوف تحتاج العينات إلى تخفيفها إلى نطاق مناسب لقياس الانبعاثات غير العاشرة.
عموما النتائج من 3RD الجولة لجنة القانون الدولي تظهر استنساخ جيدة من قياسات الجسيمات النانوية الذهب مع NTA مع زيادة الدقة والتكرار. تم إجراء جميع قياسات NTA باستخدام إعدادات مستوى الكاميرا والتركيز التلقائي لضبط الصورة، كما تم تحديدها بواسطة ميزة الإعداد التلقائي في البرنامج. وكان مستوى الكاميرا التي وضعتها البرمجيات متسقة جدا ، مع مستوى الكاميرا من 10 أو 11 التي يتم تعيينها في جميع الحالات تبين أنه كما هو متوقع ، والمزيد من التشغيل الآلي وتشمل عملية تحقيق المزيد من الاتساق. وكانت نتائج التحجيم مماثلة لتلك التي حصلت عليها الشركة المصنعة عن طريق TEM مما يشير إلى أن النتائج قابلة للتكرار، ولكن الفروق الدنيا هي المتوقعة من تقنيات مختلفة منذ TEM لا يحدد قطر هيدرودينامية. 10- ويظهر التحسن الكبير في اتساق النتائج أهمية وفوائد صيانة الأدوات، وPSPS مفصلة، وتحديثات أفضل الممارسات، ومعرفة المستخدم وأتمتة القياس التطبيقي لـ NTA. وفي الختام، أقرّت لجنة القانون الدولي هذا النظام العام للمواد الخطرة غير التعريفية المحددة، ومن ثم أدخلت الثقة والوضوح في هذه الطريقة المحددة لتقييم المخاطر المتعلقة بالمواد النانوية.

المواد النانوية (NMs) يمكن أن تختلف في كل من الخصائص الفيزيائية والكيميائية التي تؤثر بدورها على سلوكهم، والاستقرار، والسمية1،2،3،4،5. واحدة من الصعوبات الرئيسية، عند تطوير فهم شامل لخصائص NM، والمخاطر، والسلوكيات، هو القدرة على الحصول على معلومات قابلة للتكاثر حول الخصائص النانوية الفيزيائية والكيميائية. وتشمل الأمثلة على هذه الخصائص الفيزيائية حجم الجسيمات وتوزيع حجم6،7،8. هذه هي معلمات هامة لأنها جانب رئيسي من المفوضية الأوروبية (الجماعة الأوروبية) تعريف مصطلح 'نانو'9.
إن تحقيق قياسات دقيقة لحجم الجسيمات أمر بالغ الأهمية للعديد من التطبيقات والعمليات الصناعية والبحثية المختلفة بالإضافة إلى فهم مصير وتأثيرات السمية لـ NMs6و10. ومن المهم أن تكون هناك أساليب راسخة قادرة على قياس حجم هذه الأساليب بدقة وموثوقية وتكرار. وعلاوة على ذلك، ينبغي أن توفر المعلومات المبلغ عنها فهما عميقا للتقنية المستخدمة، مثلا، أن تبين نوع المعلمة الحجمية (مثل الحجم الفعلي أو الحجم الهيدرودينامي) وكذلك حالة العينة، مثل الوسيلة المحددة التي يوجد فيها الـ NM، والطريقة التي يمكن أن تؤديها بشكل موثوق في وسائط مختلفة. من أجل قياس الحجم ، يمكن استخدام عدد من التقنيات ، بما في ذلك المجهر الإلكتروني (EM) ، وتشتت الضوء الديناميكي (DLS) ، وقياس الطيف الكتلي الكتلي بلازما (spICP-MS) وتفاضلية الطرد المركزي (DCS) ، والمجهر الممسحة الضوئية (SPM) ، وتشتت الأشعة السينية (SAXS) بزاوية صغيرة ، وتحليل تتبع الجسيمات النانوية (NTA).
11- إن التكنولوجيات النووية غير النووية هي تكنولوجيا جديدة نسبياً وقد حققت تقدماً كبيراً في السنوات الأخيرة، وقد تبين أنها تقيس بشكل موثوق قطرها الهيدروديناميكية للأجهزة الوطنية غير النووية الكروية في وسائط مائية معقدة كتلك التي لها أهمية بيئية، مثل نظم المياه العذبة. القطر الهيدروديناميكية هو "حجم الكرة الصلبة الافتراضية التي تنتشر في نفس الطريقة التي يتم قياس الجسيمات'11; في الناحية العملية وفي وسائط مائي هذا يصف قطر أكبر من أن من الجسيم نفسه، والذي يتضمن أيضا طبقة من الجزيئات (معظمها ماء) التي عقدت على سطح الجسيم من قبل القوى الكهروستاتيكية ضعيفة. قطر الهيدروديناميكي من الجسيمات سوف تختلف في وسائل الإعلام المختلفة، والحصول على أصغر كما قوة الأيونية من وسائل الإعلام التي يتم قياسها يحصل على أعلى.
ومن السمات الهامة الإضافية لتقنية NTA أنها تسمح للمحلل بتحقيق قياسات للحجم المرجح لعدد، وهي ضرورية في سياق تعريف المواد النانوية للجماعة الأوروبية. عالية الدقة، تحليل الجسيمات من قبل الجسيمات يجعل هذه التقنية أقل عرضة للتدخل الناجم عن أجغلومرت أو أكبر الجسيمات عندما تكون موجودة في عينة اختبار غير متجانسة مع معدل عال من إنتاجية الجسيمات10،12.
يتكون إجراء القياس من إعداد تعليق مناسب للعينة ، والذي يتطلب في كثير من الأحيان تخفيف العينة ، يليه تسجيل فيديو لسلوك الحركة البراونية للجسيمات وتحليل الفيديو. من غرفة العينة، يتم تمرير شعاع ليزر، وجزيئات التعليق في مسار ضوء شعاع الليزر المبعثرة مما يؤدي إلى تصورهم باستخدام المجهر البصري مع كاميرا محمولة. تلتقط الكاميرا ملف فيديو لضوء الليزر المتناثر من الجسيمات التي تتحرك تحت حركة براونيان. يمكن تتبع العديد من الجسيمات بشكل فردي لتحديد معاملات الانتشار الخاصة بها ويمكن حساب أقطارها الهيدروديناميكية باستخدام معادلة ستوكس آينشتاين: d = kT/3πηD حيث d هو القطر الهيدروديناميكية، ك هو ثابت بولتزمان، T هو درجة الحرارة، η هو اللزوجة و D هو معامل الانتشار10. يمكن أيضا أن تستخدم NTA لتتبع سلوك تجميع الجسيمات التي هي عموما غير مستقرة بشكل غرواني (يجب أن تكون الجسيمات، ومع ذلك، مستقرة بشكل غرواني على مقياس وقت القياس)13،14. NTA هو طريقة مطلقة ولا يلزم معايرة النظام على الأداة المستخدمة في هذا العمل. إذا كان المستخدمون يريدون التحقق من أداء النظام يمكن القيام بذلك بسهولة عن طريق قياس حجم المواد القياسية في كثير من الأحيان كما يريد.
أداة NTA من السهل أن تعمل مع وقت التحليل السريع (أقل من 10 دقيقة لكل عينة). وبالنسبة للقياسات العالية الجودة التي تكون لها قابلية جيدة لتكرار البيانات وإمكانية استنساخها، ينبغي النظر في عدد من العوامل في إعداد العينات وكذلك في عملية الأجهزة. وإذا لم تؤخذ هذه العوامل في الاعتبار بعناية، فإن القياسات على نفس المادة عبر مختلف المختبرات والمشغلين يمكن أن تخضع لشكّيات غير معروفة أو غير محددة كمياً. أثناء توصيف NP، باستخدام أفضل الممارسات الداخلية المتقدمة SOPs لا تضمن دائماً الاتساق مع المختبرات الأخرى، كما هو مبين من قبل Roebben وآخرون لتقنية DLS15.
في الواقع، كشفت (الجولة الأولى) في وقت مبكر NTA ILC بين مختبرات مختلفة والمستخدمين والأدوات نتائج غير متناسقة. ومن بين المسائل الرئيسية التي كانت تتعلق باستخدام مختلف الأدوات القديمة القديمة التي لم تكن لها خدمات منتظمة أو عمليات فحص للمعايرة، فضلا عن الاختلافات في تفسير الطريقة. وجدت دراسة NTA ILC من قبل Hole et al. أنه مع عدم وجود مبادئ توجيهية مشتركة حول كيفية استخدام نظام وإعداد العينات ، يمكن أن تكون التباين عبر المختبرات كبيرة حتى بالنسبة للعينات أحادية الاعتيادية نسبيًا16. وهذا بالإضافة إلى نتائج الجولة الأولى من لجنة القانون الدولي يبرز الحاجة إلى صيانة جيدة للأدوات فضلا عن التدريب على الطرق وإجراءات التشغيل الموحدة المتطورة. ويعمل هذا الأخير كأداة قوية لوصف وتوثيق الامتثال للممارسات الجيدة. إذا كانت مفصلة بشكل جيد ، يمكن أن توفر إجراءات التشغيل القياسية (SOPs) الوضوح ، الشرح ، والفهم ، والتوحيد القياسي ، وضمان الجودة.
ولذلك فإن التوصية باعتماد دراسة للجنة القانون الدولي مثالية لكل من وضع واختبار البروتوكولات16. وقد عملت لجنة القانون الدولي على التحقق من صحة هذا النظام الوطني للمواد النووية المحددة، ومن ثم أدخلت الثقة والوضوح في هذه الطريقة المحددة لتقييم المخاطر المتعلقة بالمواد النانوية. لقد اشتملت على ثلاث جولات الجولة 1 حللت 60 نانوميكيات ذهبية نانوية على أدوات كل مشارك قبل التدريب. وشملت الجولة 2 تحليل 100 نانومتر اللاتكس باستخدام أداة جديدة مع تكوين مشترك كاختبار بسيط من أجل تحديد أن الصك تم إعداده بشكل صحيح وكان لدى المستخدمين معرفة جيدة حول كيفية استخدام الأداة. وشملت الجولة 3 تحليل جسيمات نانوية ذهبية 60 نانومترا على الأداة الجديدة ذات التكوين المشترك، بعد التدريب. جاء المشاركون في لجنة القانون الدولي من سبعة مختبرات مختلفة، وجميع أعضاء الاتحاد من أفق 2020 ACEnano المشروع17.
الهدف من هذه المقالة هو مناقشة الأسلوب والنتائج من جولة ثالثة من القياس لتكنولوجيا NTA حيث تم إعادة تحليل NPs الذهب 60 نانومتر من قبل سبعة شركاء بعد التدريب التفصيلي وتطوير SOP. كما ستجري مقارنة والرجوع إلى النتائج التي تم الحصول عليها في الجولة الأولى من لجنة القانون الدولي. وقد أجريت جميع التحليلات من الجولة 3 من لجنة القانون الدولي باستخدام نفس الصك (انظر جدول المواد)من تكوين متطابقة مزودة ليزر 405 نانومتر وكاميرا sCMOS عالية الحساسية. تقييم القياسات المعيارية لتقييم أداء التكنولوجيا على العينات، وبالتالي يؤدي إلى وضع بروتوكولات "أفضل الممارسات". وهكذا، فإن هذه المادة تشارك أيضا في طريقة "غيركال" للأداة المستخدمة في هذا المركز وتجعلها متاحة للأوساط العلمية حيث تم تنسيقها عن طريق إجراء وتقييم اللجان الإقليمية وفقا للمعايير الدولية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>60 nm gold colloid dispersion</td>
			<td>BBI Solutions OEM Ltd.</td>
			<td>Product EM. GC60, Batch number 024650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.02 &#181;m syringe filter - Whatman Anotop 25 Sterile Syringe Filters</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>WHA68092102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoSight</td>
			<td>Malvern Panalytical Ltd.</td>
			<td>NS300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoSight NTA Software v3.4</td>
			<td>Malvern Panalytical Ltd.</td>
			<td>v3.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE without needle luer slip tip, centered, capacity 1&#160;mL, graduated, 0.01&#160;mL, sterile</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z230723</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nanoparticle tracking analysis of gold nanoparticles in aqueous media through an inter-laboratory comparison

في مجال تكنولوجيا النانو، يلعب التوصيف التحليلي دوراً حيوياً في فهم سلوك المواد النانوية وسميتها. وينبغي أن يكون التوصيف شاملا وأن تكون التقنية المختارة مناسبة تماما للممتلكات التي سيتم تحديدها، والمواد التي يجري تحليلها، والوسيلة التي توجد بها. وعلاوة على ذلك، ينبغي أن يكون تشغيل الأداة ومنهجيتها متطورين ومتفهمين بوضوح من جانب المستعملين لتجنب أخطاء جمع البيانات. ويمكن أن تؤدي أي اختلافات في الطريقة أو الإجراءات المطبقة إلى اختلافات وسوء إمكانية إعادة إنتاج البيانات التي تم الحصول عليها. تهدف هذه الورقة إلى توضيح طريقة قياس القطر الهيدروديناميكية للجسيمات النانوية الذهبية عن طريق تحليل تتبع الجسيمات النانوية (NTA). وقد أجريت هذه الدراسة كمقارنة بين المختبرات (ILC) بين سبعة مختبرات مختلفة للتحقق من أداء الإجراء التشغيلي الموحد وقابلية التكاثر. وتكشف النتائج التي تم الحصول عليها من هذه الدراسة التي أجرتها لجنة القانون الدولي عن أهمية وفوائد إجراءات التشغيل الموحدة المفصلة، وتحديثات أفضل الممارسات، ومعرفة المستعملين، وأتمتة القياس.

تظهر نتائج الجولة 1 لجنة القانون الدولي باستخدام مختلف تكوينات أداة NTA في الشكل 4. باستثناء مختبر 6، التكرار بين 5 التقاط تكرارات كانت جيدة ولكن العديد من المختبرات سجلت وضع حجم أعلى مما كان متوقعا. وأظهرت نتائج مختبر 6 تكرار الفقراء وحجم وضع أعلى بكثير قياس. بعد التحقيق، وجد أن الأنظمة التي تبلغ عن أكبر اختلافات الحجم إما لم يتم الحفاظ عليها على النحو الموصى به أو أن التحليل تأثر بعدم الاتساق في إعداد العينة حيث يمكن أن تخلق خطوة التخفيف تباينًا ناتجًا عن معدات الأنابيب المختلفة، وعملية المستخدم وتقنيته، و/أو إعداد القياس بما في ذلك خلية التدفق التي لا تكون نظيفة، ومستوى الكاميرا الخاطئ الذي يتم استخدامه، وعدم تركيز الصورة بشكل صحيح، وإعداد اختبار التحليل بشكل غير صحيح.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61741/61741fig4v2.jpg"> الشكل 4: نتائج حجم وضع الجولة 1 من ILC. وضع نتائج حجم جميع شركاء قياس NTA للجولة 1 60 نانومتر الذهب تشتت نفذت على مختلف NTA الصكوك (كما يختصر في محور س).
تم تحسين دقة نتائج NTA من الجولة 3 من قبل جميع المختبرات التي تنفذ نفس SOP وإعدادات الأدوات. يمكن رؤية نتائج حجم الوضع التي تم الحصول عليها لهذه الجولة 3 في الشكل 5. وبلغ متوسط الوضع عبر جميع المختبرات 62.02 ± 1.97 نانومتر. وكانت جميع النتائج المقاسة من الجولة 3 أكثر اتساقا من نتائج المرحلة الأولى مع النتائج التي تقع بشكل جيد في حدود 10٪ من حجم متوسط 60.5 نانومتر للمجموعة كما ذكر من قبل الشركة المصنعة. وكان معامل الاختلاف لعينات الذهب التي ذكرها الصانع ≤8٪.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61741/61741fig5v2.jpg"> الشكل 5: نتائج حجم صيغة الجولة الثالثة من ILC. وضع نتائج حجم من جميع شركاء قياس NTA ل60 نانومتر الذهب ILC الجولة 3 تحليلها على نفس الصك NTA. وبلغ متوسط الوضع عبر جميع المختبرات 62.02 ± 1.97 نانومتر.
للتحقق من حجم الجسيمات، كما هو منصوص عليه من قبل الشركة المصنعة، تم تحليل عدد صغير من الجسيمات (N = 82) بواسطة المجهر الإلكتروني الإرسال (TEM). وكان ما يقرب من 10 ميكرولتر من التشتت غير مخففة قطرة يلقي على شبكة TEM Cu المغلفة الكربون وتجفيفها في الهواء قبل التصوير في TEM التحليلية في 200 كيلو فولت. تم التقاط صور مثل الشكل التكميلي 1 من مناطق ذات تداخل جزئيات أدنى وتحليلها باستخدام عملية تحليل الصور شبه التلقائية. وقد طبقت طريقة مستجمعات المياه التلقائية على الجسيمات المنفصلة والتحف اليدوية لهذه العملية واستبعدت وكذلك على جسيمات الحواف18. تم حساب متوسط القطر إما كمتوسط من المحور الرئيسي والصغرى (61 ± 7 نانومتر) أو كتحويل من المنطقة المقاسة (62 ± 6 نانومتر) على افتراض وجود جسيمات كروية. ويبدو أن الجسيمات كروية في معظمها مع متوسط نسبة العرض إلى الارتفاع 1.1. تظهر نتائج TEM قطرًا أعلى قليلاً من قيمة الشركة المصنعة (60.5 نانومتر) ولكنها ضمن مستوى التسامح. بالإضافة إلى ذلك، هناك اتفاق جيد جدا مع القيمة المشتقة من NTA قطر الهيدروديناميكية.
الشكل التكميلي 1: صورة TEM لجسيمات نانوية ذهبية 60 نانومتر. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61741/61741supfig01.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الرقم.</a>
الملف التكميلي 1: قياس البرنامج النصي. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61741/Measurement_script.docx" target="_blank">الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الملف.</a>
الملف التكميلي 2: مثال تقرير نتائج PDF. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61741/PDF_results_report.pdf" target="_blank">الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الملف.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Nanoparticle Tracking Analysis of Gold Nanoparticles in Aqueous Media through an Inter-Laboratory Comparison at JoVE.com

Nanoparticle Tracking Analysis of Gold Nanoparticles in Aqueous Media through an Inter-Laboratory Comparison

يهدف البروتوكول الموصوف هنا إلى قياس القطر الهيدروديناميكية للجسيمات النانوية الكروية ، وبشكل أكثر تحديدًا الجسيمات النانوية الذهبية ، في وسائل الإعلام المائية عن طريق تحليل تتبع الجسيمات النانوية (NTA). وينطوي هذا الأخير على تتبع حركة الجسيمات بسبب الحركة البراونية وتنفيذ معادلة ستوكس-آينشتاين للحصول على القطر الهيدروديناميكية.

تحليل تتبع الجسيمات النانوية للجسيمات النانوية الذهبية في الوسائط مائي من خلال مقارنة بين المختبرات

In the field of nanotechnology, analytical characterization plays a vital role in understanding the behavior and toxicity of nanomaterials (NMs). ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Preparation of Silica Nanoparticles Through Microwave-assisted Acid-catalysis

Microwave-assisted synthetic techniques were used to quickly and reproducibly produce silica nanoparticle sols using an acid catalyst with nanoparticle ...

A Simple Method for the Size Controlled Synthesis of Stable Oligomeric Clusters of Gold Nanoparticles under Ambient Conditions

طريقة بسيطة لحجم تجميع الشواهد من الكتل بلازميدة قليلة القسيمات مستقرة من جزيئات الذهب في ظل الظروف المحيطة

Reducing dilute aqueous HAuCl4 with sodium thiocyanate (NaSCN) under alkaline conditions produces 2 to 3 nm diameter nanoparticles. Stable grape-like ...

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

بروتوكول الأمثل لRadiolabeling كفاءة من جزيئات الذهب عن طريق استخدام<sup&gt; 125</sup&gt; أزيد المجموعة الترقيعي المسمى أنا

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient ...

Liquid-cell Transmission Electron Microscopy for Tracking Self-assembly of Nanoparticles

خلايا السائل مجهر إلكتروني لتعقب التجميع الذاتي من جسيمات نانوية

Drying a nanoparticle dispersion is a versatile way to create self-assembled structures of nanoparticles, but the mechanism of this process is not fully ...

Rapid Nanoprobe Signal Enhancement by In Situ Gold Nanoparticle Synthesis

Rapid Nanoprobe Signal Enhancement by In Situ Gold Nanoparticle Synthesis

تعزيز السريع نانوبروبي إشارة بتوليف نانوحبيبات الذهب في الموقع

The use of nanoprobes such as gold, silver, silica or iron-oxide nanoparticles as detection reagents in bioanalytical assays can enable high sensitivity ...

Heterogeneous Removal of Water-Soluble Ruthenium Olefin Metathesis Catalyst from Aqueous Media Via Host-Guest Interaction

إزالة غير متجانسة الحفاز الناتج اوليفينيه الروثينيوم للذوبان في الماء من الوسط المائي عن طريق التفاعل الضيف المضيف

A highly efficient transition metal catalyst removal method is developed. The water-soluble catalyst contains a newly-designed NHC ligand for the catalyst ...

Synthesis and Characterization of Amphiphilic Gold Nanoparticles

تركيب وتوصيف جسيمات نانوية الذهب أمفيفيليك

Gold nanoparticles covered with a mixture of 1-octanethiol (OT) and 11-mercapto-1-undecane sulfonic acid (MUS) have been extensively studied because of ...

Gold Nanoparticle Modified Carbon Fiber Microelectrodes for Enhanced Neurochemical Detection

الذهب نانوجسيم تعديل الأقطاب الدقيقة ألياف الكربون لتعزيز الكشف العصبي الكيميائي

For over 30 years, carbon-fiber microelectrodes (CFMEs) have been the standard for neurotransmitter detection. Generally, carbon fibers are aspirated into ...

Synthesis of Aptamer-PEI-g-PEG Modified Gold Nanoparticles Loaded with Doxorubicin for Targeted Drug Delivery

توليف Aptamer-PEI-g-PEG الجسيمات النانوية الذهبية المعدلة المحملة بدوكسوروبيسين لتسليم الأدوية المستهدفة

Due to drug resistance and toxicity in healthy cells, use of doxorubicin (DOX) has been limited in clinical cancer therapy. This protocol describes the ...

Preparation of Nanoparticles for ToF-SIMS and XPS Analysis

إعداد الجسيمات النانوية لتحليل TOF-SIMS و XPS

Nanoparticles have gained increasing attention in recent years due to their potential and application in different fields including medicine, cosmetics, ...