Name: isolation and functional assessment of human breast cancer stem cells from cell and tissue samples
Uploaded: 2020-10-02T14:00:00
Description: Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

हम अपनी प्रयोगशाला के सदस्यों को उनकी उपयोगी चर्चा और समर्थन के लिए धन्यवाद देते हैं। स्तन कैंसर स्टेम कोशिकाओं और ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट पर हमारा शोध कनाडाई कैंसर रिसर्च सोसाइटी रिसर्च इंस्टीट्यूट और अमेरिकी सेना रक्षा विभाग स्तन कैंसर कार्यक्रम (ग्रांट # बीसी 160912) से अनुदान द्वारा वित्त पोषित है। वी.बी. को वेस्टर्न पोस्टडॉक्टोरल फैलोशिप (वेस्टर्न यूनिवर्सिटी) द्वारा समर्थित किया जाता है, और एएलए और वीबी दोनों कनाडा के स्तन कैंसर सोसायटी द्वारा समर्थित हैं। सीएल कनाडा सरकार से वैनियर कनाडा स्नातक छात्रवृत्ति द्वारा समर्थित है।

सहमति से स्तन कैंसर के रोगियों से सीधे रोगी-व्युत्पन्न सर्जिकल या बायोप्सी नमूनों का संग्रह संस्थागत नैतिकता बोर्ड द्वारा अनुमोदित अनुमोदित मानव नैतिकता प्रोटोकॉल के तहत किया गया था। रोगी-व्युत्पन...

स्तन कैंसर मेटास्टेसिस और चिकित्सा के लिए प्रतिरोध दुनिया भर में महिलाओं में मृत्यु दर का प्रमुख कारण बन गया है। स्तन कैंसर स्टेम कोशिकाओं (बीसीएससी) की एक उप-आबादी का अस्तित्व मेटास्टेसिस 26,43,44,45...

मानव स्तन कैंसर स्टेम सेल (बीसीएससी) के सेलुलर और आणविक तंत्र को समझना स्तन कैंसर के उपचार में आने वाली चुनौतियों को संबोधित करने के लिए महत्वपूर्ण है। बीसीएससी अवधारणा का उद्भव 21वीं शताब्दी की शुरुआत में हुआ, जहां सीडी 44 + सीडी 24- / कम स्तन कैंसर कोशिकाओं की एक छोटी आबादी चूहों 1,2 में हेटरोजेनस ट्यूमर पैदा करने में सक्षम पाई गई। इसके बाद, यह देखा गया कि एल्डिहाइड डिहाइड्रोजनेज (एएलडीएच उच्च) कीउच्च एंजाइमेटिक गतिविधि के साथ मानव स्तन कैंसर कोशिकाओं ने भी इसी तरह के स्टेम सेलजैसे गुण प्रदर्शित किए। ये बीसीएससी कोशिकाओं की एक छोटी आबादी का प्रतिनिधित्व करते हैं जो आत्म-नवीकरण और भेदभाव में सक्षम हैं, जो थोक ट्यूमर 1,2,3 की विषम प्रकृति में योगदान देते हैं। साक्ष्य जमा करने से पता चलता है कि विकासवादी रूप से संरक्षित सिग्नलिंग मार्गों में परिवर्तन बीसीएससी अस्तित्व और रखरखाव को चलाते हैं 4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14 . इसके अलावा, सेल बाह्य माइक्रोएन्वायरमेंट को विभिन्न बीसीएससी कार्यों15,16,17 को निर्देशित करने में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाने के लिए दिखाया गया है। ये आणविक मार्ग और बीसीएससी फ़ंक्शन को विनियमित करने वाले बाहरी कारक स्तन कैंसर रिलैप्स, मेटास्टेसिस18 और उपचारों के प्रतिरोध के विकास में योगदान करते हैं19,20,21, जिसमें बीसीएससी का अवशिष्ट अस्तित्व उपचार के बाद स्तन कैंसर रोगियों के समग्र अस्तित्व के लिए एक बड़ी चुनौती पेश करता है। . इसलिए इन कारकों का पूर्व-नैदानिक मूल्यांकन बीसीएससी-लक्ष्यीकरण उपचारों की पहचान करने के लिए बहुत महत्वपूर्ण है जो बेहतर उपचार परिणामों को प्राप्त करने और स्तन कैंसर के रोगियों में बेहतर समग्र अस्तित्व के लिए फायदेमंद हो सकते हैं।
कई इन विट्रो मानव स्तन कैंसर सेल लाइन मॉडल और विवो मानव जेनोग्राफ्ट मॉडल का उपयोग बीसीएससी24,25,26,27,28,29 को चिह्नित करने के लिए किया गया है। प्रत्येक क्रमिक मार्ग के बाद सेल लाइनों की लगातार पुन: आबादी की क्षमता इन्हें ओमिक्स-आधारित और फार्माकोजेनोमिक अध्ययन करने के लिए एक आदर्श मॉडल प्रणाली बनाती है। हालांकि, सेल लाइनें अक्सर रोगी के नमूनों में देखी गई विषमता को पुन: परिभाषित करने में विफल रहती हैं। इसलिए, रोगी-व्युत्पन्न नमूनों के साथ सेल लाइन डेटा को पूरक करना महत्वपूर्ण है। BCSCs के विस्तृत लक्षण वर्णन को सक्षम करने के लिए BCSCs का उनके शुद्धतम रूप में अलगाव महत्वपूर्ण है। इस शुद्धता को प्राप्त करना BCSCs के लिए विशिष्ट फेनोटाइपिक मार्करों के चयन पर निर्भर करता है। वर्तमान में, ALDHउच्चCD44 + CD24- सेल फेनोटाइप का उपयोग आमतौर परअधिकतम शुद्धता के लिए फ्लोरेसेंस एक्टिवेटेड सेल सॉर्टिंग (FACS) का उपयोग करके थोक स्तन कैंसर सेल आबादी से मानव BCSCs को अलग करने और अलग करने के लिए किया जाता है। 3,26. इसके अलावा, पृथक बीसीएससी के गुणों जैसे स्व-नवीकरण, प्रसार और भेदभाव का मूल्यांकन इन विट्रो और विवो तकनीकों का उपयोग करके किया जा सकता है।
उदाहरण के लिए, इन विट्रो कॉलोनी बनाने वाले परख का उपयोग विभिन्न उपचार स्थितियों की उपस्थिति में 50 कोशिकाओं या उससे अधिक की कॉलोनी बनाने के लिए एक एकल कोशिका की क्षमता का आकलन करने के लिए किया जा सकताहै। मैमोस्फीयर परख का उपयोग एंकरेज-स्वतंत्र स्थितियों के तहत स्तन कैंसर कोशिकाओं की आत्म-नवीकरण क्षमता का आकलन करने के लिए भी किया जा सकता है। यह परख सीरम-मुक्त गैर-अनुयायी संस्कृति स्थितियों में प्रत्येक क्रमिक मार्ग पर गोले (बीसीएससी और गैर-बीसीएससी के मिश्रण) के रूप में उत्पन्न करने और बढ़ने के लिए एकल कोशिकाओं की क्षमता को मापताहै। इसके अतिरिक्त, 3-आयामी (3 डी) संस्कृति मॉडल का उपयोग बीसीएससी फ़ंक्शन का आकलन करने के लिए किया जा सकता है, जिसमें सेल-सेल और सेल-मैट्रिक्स इंटरैक्शन शामिल हैं जो विवो माइक्रोएन्वायरमेंट में बारीकी से पुन: उत्पन्न करते हैं और संभावित बीसीएससी-लक्षितउपचारों की गतिविधि की जांच की अनुमति देते हैं। इन विट्रो मॉडल के विविध अनुप्रयोगों के बावजूद, केवल इन विट्रो परखों का उपयोग करके विवो स्थितियों की जटिलता को मॉडल करना मुश्किल है। विवो में बीसीएससी व्यवहार का मूल्यांकन करने के लिए माउस जेनोग्राफ्ट मॉडल के उपयोग से इस चुनौती को दूर किया जा सकता है। विशेष रूप से, ऐसे मॉडल स्तन कैंसर मेटास्टेसिस33 का आकलन करने के लिए एक आदर्श प्रणाली के रूप में काम करते हैं, विवो इमेजिंग35 में रोग की प्रगति34 के दौरान माइक्रोएन्वायरमेंट के साथ बातचीत की जांच करते हैं, और रोगी-विशिष्ट विषाक्तता और एंटीट्यूमरएजेंटों की प्रभावकारिता की भविष्यवाणी करते हैं।
यह प्रोटोकॉल हेटरोजेनस स्तन कैंसर कोशिकाओं की थोक आबादी से अधिकतम शुद्धता पर मानव एएलडीएचउच्चसीडी 44 + सीडी 24- बीसीएससी के अलगाव के लिए एक विस्तृत विवरण प्रदान करता है। हम तीन इन विट्रो तकनीकों (कॉलोनी बनाने की परख, मैमोस्फीयर परख और 3 डी संस्कृति मॉडल) और एक इनविवो ट्यूमर जेनोग्राफ्ट परख का विस्तृत विवरण भी प्रदान करते हैं जिसका उपयोग बीसीएससी के विभिन्न कार्यों का आकलन करने के लिए किया जा सकता है। ये विधियां बीसीएससी जीव विज्ञान को समझने और / या नए बीसीएससी-लक्ष्यीकरण उपचारों की जांच के प्रयोजनों के लिए मानव स्तन कैंसर सेल लाइनों या प्राथमिक-रोगी व्युत्पन्न स्तन कैंसर कोशिकाओं और ट्यूमर ऊतक से बीसीएससी को अलग करने और चिह्नित करने में रुचि रखने वाले जांचकर्ताओं द्वारा उपयोग के लिए उपयुक्त होंगी।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>7-Aminoactinomycin D (7AAD)</td>
			<td>BD</td>
			<td>51-68981E</td>
			<td>suggested: 0.25 &#181;g/1x106 cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A18-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aldehyde dehydrogenase (ALDH) substrate</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>1700</td>
			<td>Sold commerically as part of the ALDEFLOUR Assay kit; follow manufacturer&#39;s instructions for ALDH substrate preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basement membrane extract (BME)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td>Sold under the commercial name Matrigel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture plates: 6 well</td>
			<td>Corning</td>
			<td>877218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture plates: 60mm</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture plates: 96-well ultra low attachment</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3474</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer: 40 micron</td>
			<td>BD</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>7001</td>
			<td>Prepare 1:30 dilution of 3 mg/mL collagen in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>11088807001</td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical tubes: 50 mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>05-539-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal violet</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C6158</td>
			<td>Use 0.05% crystal violet solution in water for staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>7913</td>
			<td>5U/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM:F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11330-032</td>
			<td>1x, With L-glutamine and 15 mM HEPES</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D5052</td>
			<td>0.1 mg/mL final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Avantor Seradigm Lifescience</td>
			<td>97068-085</td>
			<td>&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow tubes: 5ml</td>
			<td>BD</td>
			<td>352063</td>
			<td>Polypropylene round-bottom tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>84124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-Human CD24 antibody</td>
			<td>BD</td>
			<td>561646</td>
			<td>R-phycoerythrin and Cyanine dye conjugated Clone: ML5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-Human CD44 antibody</td>
			<td>BD</td>
			<td>555479</td>
			<td>R-phycoerythrin conjugated, Clone: G44-26</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N-diethylaminobenzaldehyde (DEAB)</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>1700</td>
			<td>Sold commerically as part of the ALDEFLOUR Assay kit; follow manufacturer&#39;s instructions DEAB preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Wisent Inc</td>
			<td>311-425-CL</td>
			<td>1x, Without calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mammosphere Media Composition</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504-44</td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bFGF</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F2006</td>
			<td>10 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>ALB003</td>
			<td>04%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM:F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11330-032</td>
			<td>1x, With L-glutamine and 15 mM HEPES</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E9644</td>
			<td>20 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>16634</td>
			<td>5 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D Organoid Media Composition</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A8301</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2939</td>
			<td>500 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504-44</td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM:F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11330-032</td>
			<td>1x, With L-glutamine and 15 mM HEPES</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E9644</td>
			<td>5 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF10</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-26</td>
			<td>20 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF7</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-19</td>
			<td>5 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMax</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>35050-061</td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15630-080</td>
			<td>10 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetylcysteine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9165</td>
			<td>1.25 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neuregulin &#946;1</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-03</td>
			<td>5 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N0636</td>
			<td>5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td>100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R-spondin3</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>3500</td>
			<td>250 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB202190</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7067</td>
			<td>500 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>1254</td>
			<td>5 &#181;M</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and functional assessment of human breast cancer stem cells from cell and tissue samples

स्तन कैंसर स्टेम सेल (बीसीएससी) विरासत में मिली या अधिग्रहित स्टेम सेल जैसी विशेषताओं के साथ कैंसर कोशिकाएं हैं। उनकी कम आवृत्ति के बावजूद, वे स्तन कैंसर की शुरुआत, रिलैप्स, मेटास्टेसिस और थेरेपी प्रतिरोध में प्रमुख योगदानकर्ता हैं। स्तन कैंसर के इलाज के लिए नए चिकित्सीय लक्ष्यों की पहचान करने के लिए स्तन कैंसर स्टेम कोशिकाओं के जीव विज्ञान को समझना अनिवार्य है। स्तन कैंसर स्टेम कोशिकाओं को सीडी 44, सीडी 24 जैसे अद्वितीय सेल सतह मार्करों और एल्डिहाइड डिहाइड्रोजनेज (एएलडीएच) की एंजाइमेटिक गतिविधि की अभिव्यक्ति के आधार पर अलग और विशेषता दी जाती है। ये एएलडीएचउच्चसीडी 44 + सीडी 24- कोशिकाएं बीसीएससी आबादी का गठन करती हैं और डाउनस्ट्रीम कार्यात्मक अध्ययन के लिए फ्लोरेसेंस-एक्टिवेटेड सेल सॉर्टिंग (एफएसीएस) द्वारा अलग की जा सकती हैं। वैज्ञानिक प्रश्न के आधार पर, बीसीएससी की कार्यात्मक विशेषताओं का आकलन करने के लिए विभिन्न इन विट्रो और विवो विधियों का उपयोग किया जा सकता है। यहां, हम स्तन कैंसर कोशिकाओं की विषम आबादी के साथ-साथ स्तन कैंसर के रोगियों से प्राप्त प्राथमिक ट्यूमर ऊतक दोनों से मानव बीसीएससी के अलगाव के लिए एक विस्तृत प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं। इसके अलावा, हम डाउनस्ट्रीम इन विट्रो और विवो कार्यात्मक परखों पर प्रकाश डालते हैं, जिसमें कॉलोनी बनाने वाले परख, मैमोस्फीयर परख, 3 डी कल्चर मॉडल और ट्यूमर जेनोग्राफ्ट परख शामिल हैं जिनका उपयोग बीसीएससी फ़ंक्शन का आकलन करने के लिए किया जा सकता है।

वर्णित प्रोटोकॉल स्तन कैंसर कोशिकाओं की एक विषम आबादी से मानव बीसीएससी के अलगाव की अनुमति देता है, या तो सेल लाइनों से या अलग ट्यूमर ऊतक से। किसी भी सेल लाइन या ऊतक के नमूने के लिए, अधिकतम शुद्धता पर BCSCs को...

यह प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल स्तन कैंसर कोशिका और ऊतक के नमूनों के साथ-साथ इन विट्रो और विवो परख से बीसीएससी के अलगाव का वर्णन करता है जिसका उपयोग बीसीएससी फेनोटाइप और फ़ंक्शन का आकलन करने के लिए किया जा सकता है।

सेल और ऊतक नमूने से मानव स्तन कैंसर स्टेम कोशिकाओं का अलगाव और कार्यात्मक मूल्यांकन

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

This technique will allow researchers to isolate breast cancer stem cells at maximum purity and viability for the performance of both in vitro and in vivo functional characterization assays. Isolated breast cancer stem cells can also be used to help elucidate the molecular events that control tumorigenicity and metastasis, and to design therapeutic strategies to target these cells. With minor modifications specific to the cell and tissue types of interest, this method can also be applied to other systems.To generate a single cell suspension from a cell culture, wash an 80%confluent breast cancer cell culture with PBS and treat the cells with an appropriate cell dissociation solution for five minutes at room temperature. Once the cells have detached, add five milliliters of culture medium to neutralize the cell dissociation solution and transfer the cells to a 50 milliliter conical tube for centrifugation. Resuspend the pellet in five milliliters of PBS for counting.After counting, centrifuge the cells again, then resuspend the cells at one times 10 to six cells per milliliter of ALDH substrate buffer. To generate a single cell suspension from a tissue sample, use surgical blades in a crisscross technique to mince the tumor tissue into approximately one millimeter size pieces. Place the pieces in a 50 milliliter conical tube containing 10 milliliters of dissociation buffer.Seal the tube with parafilm for a 40 minute incubation at 37 degrees Celsius in a shaker and sediment the digested tissue pieces by centrifugation. Resuspend the pellet in five milliliters of trypsin using a five milliliter pipette and incubate the tissue in a 37 degree water bath for five minutes. At the end of the incubation, vigorously pipette the tissue several times to release single cells and add enough DMEM/F-12 medium to bring the total volume in the tube to 25 milliliters.Collect the cells by centrifugation, resuspend the pellet in one milliliter of Displace DNAse, and incubate for five minutes in a 37 degree Celsius water bath. At the end of the incubation, bring the total volume to 10 milliliters with PBS. Mix the cells by pipetting and passage them through a 40 micron cell strainer into a 50 milliliter tube.After centrifugation, resuspend the cells in five milliliters of fresh PBS for counting. To perform a colony forming assay, after sorting, resuspend the cells in complete medium and add the appropriate number of breast cancer stem cells to each of the three tubes containing two milliliters of medium per tube, labeled one times 10 to the second, two times 10 to the second, or five times 10 to the second cells. Pipette up and down five times to thoroughly mix the cell suspension and plate the cells into individual wells of a six well plate.Gently swirl the plate to obtain uniform cell distributions and place the plate in the cell culture incubator until colonies appear. At the end of the incubation, wash the cells with one milliliter of PBS per well and stain the cells with 500 microliters of 0.05%crystal violet solution per well for 30 seconds. At the end of the incubation, wash the wells two times with two milliliters of water per well to remove the excess dye, and count and record the total number of colonies per well by light microscopy at a four or 10 times magnification.To perform a mammosphere assay, after sorting, resuspend the cells in complete mammosphere medium and plate the at a seating density of five times 10 of the second cells per square centimeter area per well in a 96 well ultra-low attachment cell culture plate. Before counting the number of mammospheres per well by light microscopy, place the plate in the cell culture incubator for five to 10 days. To set up a 3D culture model, carefully add 50 microliters of basement membrane extract to each well of a 96 well plate without bubbles and place the plate at 37 degrees Celsius for one hour to allow the solution to polymerize.Add 100 microliters of PBS after 10 minutes to avoid drying of the gel layer. At the end of the incubation, suspend the sorted cells to five to 50 times 10 to the third cells per 200 microliters of 3D culture medium concentration and replace the PBS in each well of the 96 well plate with 200 microliters of media containing cells. Then place the plate in the cell culture incubator for 10 to 14 days before assessing the cultures for organoid formation.Human breast cancer cells that exhibit enhanced ALDH enzymatic activity express high levels of CD44 and low to negative levels of expression of CD24, and can be classified as breast cancer stem cells. The proportion of breast cancer stem cells within the bulk population can vary between cell lines or patients and often depends on the disease stage, with more aggressive breast cancer typically displaying a higher proportion of breast cancer stem cells. The ability of a single breast cancer cell to self-renew and generate colonies of 50 cells can be assessed by colony forming assays.The ability of breast cancer stem cells to self-renew under anchorage-independent experimental conditions can be assessed by mammosphere assays. Culturing breast cancer cells and basement membrane extract allows breast cancer stem cells to form 3D structures that recapitulate in vivo conditions. In addition, in vivo mouse xenograft models can be used to understand the differences in growth, self-renewal, differentiation, and/or the tumor initiating ability of breast cancer stem cells compared to non-breast cancer stem cells or bulk cell populations.Following this procedure, the isolated breast cancer stem cells can be used in transcriptomic, kinomic, and metabolomic studies. This method provides researchers with an opportunity to explore the role of breast cancer stem cells in tumor initiation, metastasis, recurrence, and therapy resistance.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

Establishment of Cancer Stem Cell Cultures from Human Conventional Osteosarcoma

कैंसर की स्थापना मानव परम्परागत ऑस्टिओसारकोमाः से स्टेम सेल संस्कृतियों

The current improvements in therapy against osteosarcoma (OS) have prolonged the lives of cancer patients, but the survival rate of five years remains ...

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

उपयोग कार्यात्मक जीनोमिक्स स्क्रीनिंग कैंसर सेल उपगोल संस्कृतियों में संभावित उपन्यास ड्रग लक्ष्यों की पहचान करने के लिए

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NF&#954;B Activity and Breast Cancer Stem Cells

संश्लेषण और एक एस्पिरिन-fumarate प्रोड्रग की विशेषता है कि NFκB गतिविधि और स्तन कैंसर स्टेम कोशिकाओं को रोकता है

Inflammation is a cancer hallmark that underlies cancer incidence and promotion, and eventually progression to metastasis. Therefore, adding an ...

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

भ्रूणीय Zebrafish में मानव स्तन कैंसर की कोशिकाओं के आक्रामक व्यवहार

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mesenchymal लुगदी ऊतक और सह कैंसर कोशिकाओं के साथ संस्कृति से कोशिका अलगाव स्टेम उनके बातचीत का अध्ययन करने के लिए

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cells for the Generation of Tumor Antigen-specific T Cells

ट्यूमर एंटीजन-विशिष्ट टी कोशिकाओं की पीढ़ी के लिए मानव प्रेरित Pluripotent स्टेम सेल का उपयोग करना

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

स्त्री रोग और स्तन कैंसर ट्यूमर से कैंसर स्टेम सेल क्षेत्रों प्राप्त करना

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

3-आयामी स्फेरॉइड संस्कृतियों से स्टेम जैसी कोशिकाओं का अलगाव

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

Functional Assessment of BRCA1 variants using CRISPR-Mediated Base Editors

CRISPR-मध्यस्थता आधार संपादकों का उपयोग कर BRCA1 वेरिएंट का कार्यात्मक मूल्यांकन

Recent studies have investigated the risks associated with BRCA1 gene mutations using various functional assessment methods such as fluorescent reporter ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

एक माइक्रोफिजियोलॉजिकल सिस्टम का उपयोग कर मानव स्तन ऊतक में स्तन कैंसर मॉडलिंग

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...