Name: experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model
Uploaded: 2022-01-12T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

JG kreeg een UCL Impact Studentship en Rosetrees Trust-financiering om CB te ondersteunen. VC ontving een onderzoekssubsidie van Akari Therapeutics Inc. We willen het UCL Institute of Ophthalmology, Biological Service Unit bedanken, in het bijzonder mevrouw Alison O'Hara en haar team voor hun technische ondersteuning.

Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de UK Animals (Scientific Procedures) Act van 1986 en de richtlijnen van het Institutional Animal Welfare and Ethical Review Body (AWERB).
1. Behuizing C57BL/6J muizen
<ol><li>Huismuizen in een specifieke pathogeenvrije omgeving, op een 12 uur durende licht-donkercyclus en voedsel en water beschikbaar ad libitum.</li>
	<li>Voer alle experimenten uit op volwassen vrouwelijke C57BL/6J (vrouwen worden bij voorkeur gekozen omdat...

<ol>
	<li>Lyu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TMP778,+a+selective+inhibitor+of+RORgammat,+suppresses+experimental+autoimmune+uveitis+development,+but+affects+both+Th17+and+Th1+cell+populations.">TMP778, a selective inhibitor of RORgammat, suppresses experimental autoimmune uveitis development, but affects both Th17 and Th1 cell populations.</a> The European Journal of Immunology. 48, 1810-1816 (2018).</li><li>Klaska, I. P., Forrester, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+autoimmune+uveitis.">Mouse models of autoimmune uveitis.</a> Current Pharmaceutical Design. 21, 2453-2467 (2015).</li><li>Eskandarpour, M., Alexander, R., Adamson, P., Calder, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+Inhibition+of+Bromodomain+Proteins+Suppresses+Retinal+Inflammatory+Disease+and+Downregulates+Retinal+Th17+Cells.">Pharmacological Inhibition of Bromodomain Proteins Suppresses Retinal Inflammatory Disease and Downregulates Retinal Th17 Cells.</a> The Journal of Immunology. 198, 1093-1103 (2017).</li><li>Mochizuki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+and+clinical+study+of+FK506+in+uveitis.">Preclinical and clinical study of FK506 in uveitis.</a> Current Eye Research. 11, 87-95 (1992).</li><li>Nguyen, Q. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreal+Sirolimus+for+the+Treatment+of+Noninfectious+Uveitis:+Evolution+through+Preclinical+and+Clinical+Studies.">Intravitreal Sirolimus for the Treatment of Noninfectious Uveitis: Evolution through Preclinical and Clinical Studies.</a> Ophthalmology. 125, 1984-1993 (2018).</li><li>Leal, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-TNF+Drugs+for+Chronic+Uveitis+in+Adults-A+Systematic+Review+and+Meta-Analysis+of+Randomized+Controlled+Trials.">Anti-TNF Drugs for Chronic Uveitis in Adults-A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials.</a> Frontiers in Medicine (Lausanne). 6, 104 (2019).</li><li>Chen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+distinct+IFN-?++IL-17A++Th+cells+in+experimental+autoimmune+uveitis:+T-cell+heterogeneity,+migration,+and+steroid+response.">Functionally distinct IFN-?+ IL-17A+ Th cells in experimental autoimmune uveitis: T-cell heterogeneity, migration, and steroid response.</a> European Journal of Immunology. 50 (12), 1941-1951 (2020).</li><li>Xu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+clinical+grading+system+for+retinal+inflammation+in+the+chronic+model+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+digital+fundus+images.">A clinical grading system for retinal inflammation in the chronic model of experimental autoimmune uveoretinitis using digital fundus images.</a> Experimental Eye Research. 87, 319-326 (2008).</li><li>Copland, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+time-course+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+topical+endoscopic+fundal+imaging+with+histologic+and+cellular+infiltrate+correlation.">The clinical time-course of experimental autoimmune uveoretinitis using topical endoscopic fundal imaging with histologic and cellular infiltrate correlation.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49, 5458-5465 (2008).</li><li>Dick, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doyne+lecture+2016:+intraocular+health+and+the+many+faces+of+inflammation.">Doyne lecture 2016: intraocular health and the many faces of inflammation.</a> Eye (Lond). 31, 87-96 (2017).</li><li>Agarwal, R. K., Silver, P. B., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Rodent models of experimental autoimmune uveitis.</a> Methods in Molecular Biology. 900, 443-469 (2012).</li><li>Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+look+at+autoimmunity+and+inflammation+in+the+eye.">A look at autoimmunity and inflammation in the eye.</a> Journal of Clininical Investigation. 120, 3073-3083 (2010).</li><li>Caspi, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Mouse models of experimental autoimmune uveitis.</a> Ophthalmic Research. 40, 169-174 (2008).</li><li>Shao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+chronic+experimental+autoimmune+uveitis+(EAU)+of+the+C57BL/6+mouse+induced+by+adoptive+transfer+of+IRBP1-20-specific+T+cells.">Severe chronic experimental autoimmune uveitis (EAU) of the C57BL/6 mouse induced by adoptive transfer of IRBP1-20-specific T cells.</a> Experimental Eye Research. 82, 323-331 (2006).</li><li>Horai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota-Dependent+Activation+of+an+Autoreactive+T+Cell+Receptor+Provokes+Autoimmunity+in+an+Immunologically+Privileged+Site.">Microbiota-Dependent Activation of an Autoreactive T Cell Receptor Provokes Autoimmunity in an Immunologically Privileged Site.</a> Immunity. 43, 343-353 (2015).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+induced+vs.+spontaneous+models+of+autoimmune+uveitis+targeting+the+interphotoreceptor+retinoid+binding+protein.">Comparative analysis of induced vs. spontaneous models of autoimmune uveitis targeting the interphotoreceptor retinoid binding protein.</a> PLoS One. 8, 72161 (2013).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C. C., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8, 63904 (2013).</li><li>Harry, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+autoimmune+retinal+disease+by+lovastatin+does+not+require+Th2+cytokine+induction.">Suppression of autoimmune retinal disease by lovastatin does not require Th2 cytokine induction.</a> Journal of Immunology. 174, 2327-2335 (2005).</li></ol>

Experimentele diermodellen zijn noodzakelijke hulpmiddelen voor het bestuderen van ziektepathogenese en preklinisch testen van nieuwe therapeutische paradigma's. In het huidige protocol hebben we een methodologie besproken voor het induceren, monitoren en scoren van EAU, een experimenteel model van intraoculaire inflammatoire uveïtis. Dit EAU-model heeft meer dan 95% ziekte-incidentie wanneer alle procedures worden uitgevoerd volgens het hierin beschreven protocol en resulteert in de ontwikkeling van chronische, monofas...

Dit protocol zal aantonen hoe experimentele auto-immune uveïtis (EAU) in de C57BL/6J-muis kan worden geïnduceerd door een enkele subcutane injectie van een retinaal antigeen in een geëmulgeerd adjuvans. Methoden voor het monitoren en beoordelen van ziekteprogressie zullen worden gedetailleerd door middel van fundoscopische beeldvorming en histologisch onderzoek, met meetparameters die binnenin worden beschreven. Daarnaast zal fluoresceïneangiografie, een techniek voor het onderzoeken van de retinale bloedvatstructuur en permeabiliteit, worden besproken.
Dit EAU-model vat centrale kenmerken van niet-infectieuze posterieure uveïtis bij mensen samen met betrekking tot clinicopathologische kenmerken en de basale cellulaire en moleculaire mechanismen die ziekte veroorzaken. EAU wordt gemedieerd door Th1- en/of Th17-subgroepen van zelfreactieve CD4+T-lymfocyten, zoals aangetoond in adoptieve overdrachtsexperimenten en met IFNγ-uitgeputte muizen1. Veel van ons begrip van de mogelijke rollen voor deze cellen bij uveïtis komt van het bestuderen van EAU2, waar zowel Th1- als Th17-cellen worden gedetecteerd in de retinale weefsels3. Vaak wordt EAU gebruikt als een preklinisch model om het nut van nieuwe therapieën bij het verzachten van ziekten te beoordelen. Therapeutische benaderingen die met succes de EAU-ziekte hebben gemoduleerd, hebben enige werkzaamheid in de kliniek aangetoond en de door de FDA goedgekeurde status bereikt. Voorbeelden hiervan zijn groepen immunoregulerende geneesmiddelen zoals de T-celgerichte therapieën: ciclosporine, FK-506 en rapamycine 4,5,6. Onlangs zijn interventies gericht op nieuwe paden ook onderzocht in dit model om zowel het mechanisme als het effect op de uitkomst van de ziekte te onderzoeken. Deze omvatten gerichte transcriptionele regulatie via chromatinelezer Bromodomain Extra-Terminal (BET) eiwitten en P-TEFb-remmers3. Bovendien hebben meer conventionele benaderingen zoals een VLA-4-remmer onlangs onderdrukking in EAU aangetoond via modulatie van effector CD4 + T-cellen7. Bovendien is gebleken dat het richten op Th17-cellen met TMP778, een RORγt-inverse agonist, ook EAU8 aanzienlijk onderdrukt. Bovendien biedt dit model de mogelijkheid om chronische auto-immuunontsteking in het netvlies en de bijbehorende onderliggende mechanismen zoals lymfocytenpriming te bestuderen.
De primaire uitlezingen voor preklinische studies van EAU zijn klinische beoordeling door het uitvoeren van retinale fundoscopie beeldvorming en minder vaak, door het beoordelen van retinale integriteit door optische coherentie tomografie (OCT). Retinale histopathologische evaluatie en immunofenotypering van retinale cellen door middel van flowcytometrie worden vervolgens bij beëindiging uitgevoerd. Fundoscopie is een eenvoudig te gebruiken live beeldvormingssysteem dat een snelle en reproduceerbare klinische beoordeling van het hele netvlies mogelijk maakt. Voor immunohistochemische beoordelingen zijn de technieken gebaseerd op de voorbereiding van retinale secties waarmee we weefselarchitectuur kunnen bestuderen op de mate van ontsteking en structurele schade9. De beoordelingscriteria en conventionele scoresystemen, voor alle gebruikte technieken, zullen in dit protocol worden beschreven. De omvang van de schade die is geregistreerd met behulp van fundoscopische beeldvorming correleert vaak nauw met histologische veranderingen. Deze dubbele benadering voor het monitoren en beoordelen van de ernst van de ziekte zorgt voor een grotere gevoeligheid en betrouwbaardere meetresultaten.
EAU is een gevestigde, veelgebruikte model voor preklinische testen en onderzoek van immuungemedieerde oogziekte. Dit model is betrouwbaar en reproduceerbaar met >95% ziekte-incidentie en genereert uitgebreide gegevens die kunnen worden gebruikt om nieuwe therapieën voor de behandeling van intraoculaire ontstekingsziekten te valideren of af te wijzen die wereldwijd een belangrijke oorzaak van blindheid in de werkende leeftijd vormen10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>antisedan</td>
			<td>ZOETIS, USA</td>
			<td></td>
			<td>for waking up</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Freund&#8217;s Adjuvant; CFA</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F5881</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domitor</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flourescein</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F2456</td>
			<td>for Angiography</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRBP1-20</td>
			<td>Chamberidge peptide, UK</td>
			<td></td>
			<td>peptide;antigen&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micron III</td>
			<td>Phoenix Research, USA</td>
			<td></td>
			<td>for fundoscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Serum</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>M5905</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycobacterium terberculosis</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>344289</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis Toxin</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>P2980</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylephrine hydrochloride 2.5%&#160;</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb UK&#160;</td>
			<td>PHEN25</td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 1%</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td></td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viscotears</td>
			<td>WELDRICKS Pharmacy, UK</td>
			<td>2082642</td>
			<td>for eye lubrication</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model

Experimentele auto-immune uveïtis (EAU) wordt aangedreven door immuuncellen die reageren op zelf-antigenen. Veel kenmerken van dit niet-infectieuze, intraoculaire ontstekingsziektemodel recapituleren het klinische fenotype van posterieure uveïtis die mensen treft. EAU is betrouwbaar gebruikt om de werkzaamheid van nieuwe inflammatoire therapieën, hun werkingsmechanisme te bestuderen en om de mechanismen die ten grondslag liggen aan de progressie van de ziekte van intraoculaire aandoeningen verder te onderzoeken. Hier bieden we een gedetailleerd protocol over EAU-inductie in de C57BL / 6J-muis - het meest gebruikte modelorganisme met gevoeligheid voor deze ziekte. Klinische beoordeling van de ernst en progressie van de ziekte zal worden aangetoond met behulp van fundoscopie, histologisch onderzoek en fluoresceïneangiografie. De inductieprocedure omvat subcutane injectie van een emulsie met een peptide (IRBP1-20) uit het oculaire eiwit interfotoreceptor retinoïde bindend eiwit (ook bekend als retinolbindend eiwit 3), Complete Freund's Adjuvant (CFA) en aangevuld met gedode Mycobacterium tuberculosis. Injectie van deze viskeuze emulsie op de achterkant van de nek wordt gevolgd door een enkele intraperitoneale injectie van Bordetella pertussis toxine. Bij het begin van de symptomen (dag 12-14) en onder algemene anesthesie worden fundoscopische beelden gemaakt om de progressie van de ziekte te beoordelen door middel van klinisch onderzoek. Deze gegevens kunnen direct worden vergeleken met die op latere tijdstippen en piekziekte (dag 20-22) met geanalyseerde verschillen. Tegelijkertijd stelt dit protocol de onderzoeker in staat om potentiële verschillen in vaatdoorlaatbaarheid en schade te beoordelen met behulp van fluoresceïneangiografie. EAU kan worden geïnduceerd in andere muizenstammen - zowel wildtype als genetisch gemodificeerd - en gecombineerd met nieuwe therapieën die flexibiliteit bieden voor het bestuderen van de werkzaamheid van geneesmiddelen en / of ziektemechanismen.

In dit protocol beschrijven we een stapsgewijze methode voor het induceren van een model van experimentele auto-immune uveïtis (EAU) door muizen te immuniseren met een uveitogene retinale peptide afgeleid van IRBP. De beoordeling van ziekten waarbij gebruik wordt gemaakt van veelgebruikte en gemakkelijk toegankelijke benaderingen, wordt behandeld, hoewel deze niet exclusief zijn en kunnen worden toegevoegd aan of gedeeltelijk worden vervangen door andere beeldvormingstechnieken. De eerste tekenen van EAU bij C57BL/6J-mu...

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

In dit rapport presenteren we een protocol waarmee de onderzoeker een muismodel van intraoculaire uveïtis kan genereren. Meer algemeen aangeduid als experimentele auto-immune uveïtis (EAU), dit gevestigde model legt vele aspecten van de menselijke ziekte vast. Hierin zullen we beschrijven hoe de progressie van de ziekte kan worden geïnduceerd en gevolgd met behulp van verschillende uitlezingen.

Experimentele auto-immune uveïtis: een intraoculair inflammatoir muismodel

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

Dit model kan worden gebruikt om cellulaire mechanismen te bestuderen die betrekking hebben op de pathogenese van immuungemedieerde menselijke posterieure uveïtis. De implicatie van deze techniek strekt zich uit tot de translationele studie van menselijke uveïtis bij het monitoren van de werkzaamheid van nieuwe geneesmiddelen en voor het bieden van mechanistisch inzicht in de progressie van chemische ziekten. Het belangrijkste voordeel van het gebruik van dit model is de betrouwbaarheid van ziekte-inductie en het gebruik van niet-invasieve endoscopische technieken waarmee we de progressie van de ziekte kunnen volgen.Hier beschrijven we hoe de ziekte te induceren en de pathologie te beoordelen met behulp van verschillende uitlezingen Om IRBP 1-20 compleet Freund's Adjuvans of CFA te bereiden, resuspendeert u een berekende hoeveelheid van het peptide in een minimumvolume van 100% DMSO. Wanneer het poeder volledig is opgelost, voegt u kleine volumes PBS toe aan de buis totdat u het uiteindelijke berekende volume PBS bereikt op basis van het aantal muizen dat moet worden geïnjecteerd met behulp van zachte agitatie om de oplossing te mengen. Na het bereiden van het volledige Freund's Adjuvans, pipetteer de oplossing voorzichtig en regelmatig om een viscus en gelijkmatig verdeelde emulsie te vormen terwijl u de DMSO PBS-peptideoplossing druppelsgewijs toevoegt in een één-op-één verhouding met de suspensie.Om de oplossingen te beluchten, gebruikt u een pipet van 1000 microliter op 700 microliter om de oplossing herhaaldelijk te pipetteren totdat een dikke, romige emulsie is verkregen. Voordat u de peptidesuspensie injecteert, plaatst u elke muis die moet worden geïnjecteerd in een aparte kooi en gebruikt u een spuit van één milliliter uitgerust met een naald van 23 gauge om intraperitoneaal 1,5 microgram Bordetella kinkhoesttoxine af te leveren in 100 microliter RPMI 1640-medium aangevuld met 1% muizenserum aan elk dier. Wanneer kinkhoesttoxine-oplossing is geïnjecteerd, moet de muis in een nekvelachtige positie worden gehouden en de huid worden samengeknepen om een tentachtige structuur aan de achterkant van de nek te vormen.Rijg de naald aan de ruimte tussen de vinger en duim en injecteer 200 microliter van de IRBP-emulsie op de tenthuid, handhaaf de druk na de injectie en draai de naaldkop om de huid te sluiten voordat deze wordt ingetrokken. Om de klinische ziekte te scoren, bevestigt u op dag 21 na injectie een gebrek aan respons op de bloembladreflex in de verdoofde peptide geïnjecteerde muis en houdt u het dier in een nekvel. Breng topisch 1% tropicamide en 2% fenylefrine aan op het hoornvlies van elk oog onmiddellijk na injectie.Wanneer de pupillen volledig zijn verwijd, plaatst u de muis op een speciaal gebouwd microscoopstadium. Plaats de microscoop voor volledige toegang tot het netvlies. Pas het oogstuk tijdens het beeldvormingsproces indien nodig aan om de optische schijf en het netvlies te zien en beelden van het hele netvliesgebied te verkrijgen, waarbij alle hoeken van de periferie worden aangepast en bedekt.Om vaatlekkage te meten, dient u 100 microliter 2% fluoresceïne subcutaan toe aan de achterkant van de nek en verplaatst u de muis zodanig dat het netvlies zich in het midden van het live beeld bevindt. Stel de fundoscoop in op een excitatiefilter voor blauw licht op 465 tot 490 nanometer voordat u een beeld van elk krijgt op 1,5 en zeven minuten na fluorescerende injectie. Wanneer alle beelden zijn verkregen, levert intraperitoneaal een anti-sedatie-injecteerbaar voor herstel en plaatst de muis in een kooi op een voorverwarmde mat met toegang tot nat geweekt dieet met monitoring totdat de muis weer bij bewustzijn komt.Voor klinische ziektescores van de beelden, baseer de klinische beoordeling op de ernst van de optische schijfontsteking, retinale vaatmanchetten, retinaal weefselinfiltraat en structurele schade. Scoor elk van deze parameters op een schaal van één tot vijf. Het collectieve totaal is representatief voor de klinische ziekte voor het hele oog met een maximale score van 20 per oog.Na fundusbeeldvorming voor het uiteindelijke klinische eindpunt van het onderzoek, euthanaseert u de muis. Voor histologische analyse, prijs de oogleden uit elkaar voor toegang tot het hele oog, plaats vervolgens gebogen tangen achter de bol om het orbitale bindweefsel en de oogzenuw te grijpen en het oog te enucleeren. Plaats het enucleated oog in één tot vijf milliliter 4% glutaaraldehyde gedurende minimaal 15 minuten voordat u het orgaan gedurende ten minste 24 uur overbrengt naar één tot vijf milliliter 10% formaldehyde.Na histologische weefselkleuring, volgens standaardprotocollen, toegewezen scores op een schaal van nul tot drie op basis van het niveau van immuuncelinfiltratie en de mate van retinale schade. Fundoscopische veranderingen worden tijdens ziekteprogressie geclassificeerd als inflammatoire veranderingen die retinale weefsel- en vasculaire en optische schijfontsteking en retinale structurele schade omvatten, naast histologische veranderingen op basis van infiltrerende immuuncellen en structurele stoornissen. Deze klinische en histopathologische veranderingen kunnen worden beoordeeld en gescoord om de progressie van de ziekte te beoordelen en de werkzaamheid van therapeutische interventies te evalueren.Vasculaire lekkage is ook een pathologisch kenmerk van het model en van menselijke uveïtis. Zoals geïllustreerd in deze analyse, kan fluoresceïne worden gebruikt om vasculaire lekkage te visualiseren als een andere uitlezing van dit model. Het is essentieel voor onderzoekers om ervoor te zorgen dat de emulsie correct wordt voorbereid zonder tekenen van scheiding tussen de oplossingen.Ze moeten grondig worden gemengd en het eindproduct moet glad van textuur zijn. Deze procedure kan worden gecombineerd met andere toedieningsmethoden voor geneesmiddelen en met voor cytometrie voor fenotypering infiltrerende retinale immuuncelpopulaties.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimentele metastase en CTL adoptieve overdracht Immunotherapie Muis Model

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Voorbereiding van de muis hypofyse Immunogeen voor de inductie van experimentele auto-immune Hypophysitis

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Inductie van experimentele auto-immune Hypophysitis in SJL Muizen

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Het overwinnen van reageert niet in experimentele autoimmune encefalomyelitis (EAE) Resistant muizenstammen door adoptieve overdracht en Antigene Challenge

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

Isolatie van Infiltrating leukocyten uit Mouse huid met behulp van enzymatische Digest en Gradient Scheiding

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Eenvoudige en efficiënte productie en zuivering van de Muis myeline oligodendrocyt-glycoproteïne voor experimentele auto-immune Encephalomyelitis Studies

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

Een IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model voor de<em&gt; In Vivo</em&gt; Lange termijn monitoring van inflammatoire reacties

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model

Effecten van smaak signalering eiwitten afschaffing op ontsteking van de darm in een muismodel van Inflammatory Bowel Disease

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects ...

High-Efficiency Generation of Antigen-Specific Primary Mouse Cytotoxic T Cells for Functional Testing in an Autoimmune Diabetes Model

Zeer efficiënte generatie van antigeen-specifieke cytotoxische T-cellen voor de functionele test in een auto-immune diabetes model

Type 1 Diabetes (T1D) is characterized by islet-specific autoimmunity leading to beta cell destruction and absolute loss of insulin production. In the ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

Adoptieve immunotherapie van iNKT-cellen in glucose-6-fosfaat-isomerase (G6PI)-Geïnduceerde RA-muizen

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...