Name: experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model
Uploaded: 2022-01-12T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

JG, CB'yi desteklemek için UCL Etki Öğrenciliği ve Rosetrees Trust fonu ile ödüllendirildi. VC, Akari Therapeutics Inc.'den bir araştırma işbirliği hibesi alıyordu. UCL Oftalmoloji Enstitüsü, Biyolojik Hizmet Birimi, özellikle Bayan Alison O'Hara ve ekibine teknik destekleri için teşekkür ederiz.

Tüm deneyler, 1986 tarihli İngiltere Hayvanlar (Bilimsel Prosedürler) Yasası ve kurumsal Hayvan Refahı ve Etik İnceleme Organı (AWERB) yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1. Muhafaza C57BL / 6J fareler
<ol><li>Ev fareleri belirli bir patojen içermeyen ortamda, 12 saatlik bir aydınlık-karanlık döngüsünde ve yiyecek ve su mevcut ad libitumda.</li>
	<li>Yetişkin dişi C57BL / 6J üzerinde tüm deneyleri yapın (üveit hastalarında kadınların erkeklere...

<ol>
	<li>Lyu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TMP778,+a+selective+inhibitor+of+RORgammat,+suppresses+experimental+autoimmune+uveitis+development,+but+affects+both+Th17+and+Th1+cell+populations.">TMP778, a selective inhibitor of RORgammat, suppresses experimental autoimmune uveitis development, but affects both Th17 and Th1 cell populations.</a> The European Journal of Immunology. 48, 1810-1816 (2018).</li><li>Klaska, I. P., Forrester, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+autoimmune+uveitis.">Mouse models of autoimmune uveitis.</a> Current Pharmaceutical Design. 21, 2453-2467 (2015).</li><li>Eskandarpour, M., Alexander, R., Adamson, P., Calder, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+Inhibition+of+Bromodomain+Proteins+Suppresses+Retinal+Inflammatory+Disease+and+Downregulates+Retinal+Th17+Cells.">Pharmacological Inhibition of Bromodomain Proteins Suppresses Retinal Inflammatory Disease and Downregulates Retinal Th17 Cells.</a> The Journal of Immunology. 198, 1093-1103 (2017).</li><li>Mochizuki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+and+clinical+study+of+FK506+in+uveitis.">Preclinical and clinical study of FK506 in uveitis.</a> Current Eye Research. 11, 87-95 (1992).</li><li>Nguyen, Q. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreal+Sirolimus+for+the+Treatment+of+Noninfectious+Uveitis:+Evolution+through+Preclinical+and+Clinical+Studies.">Intravitreal Sirolimus for the Treatment of Noninfectious Uveitis: Evolution through Preclinical and Clinical Studies.</a> Ophthalmology. 125, 1984-1993 (2018).</li><li>Leal, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-TNF+Drugs+for+Chronic+Uveitis+in+Adults-A+Systematic+Review+and+Meta-Analysis+of+Randomized+Controlled+Trials.">Anti-TNF Drugs for Chronic Uveitis in Adults-A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials.</a> Frontiers in Medicine (Lausanne). 6, 104 (2019).</li><li>Chen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+distinct+IFN-?++IL-17A++Th+cells+in+experimental+autoimmune+uveitis:+T-cell+heterogeneity,+migration,+and+steroid+response.">Functionally distinct IFN-?+ IL-17A+ Th cells in experimental autoimmune uveitis: T-cell heterogeneity, migration, and steroid response.</a> European Journal of Immunology. 50 (12), 1941-1951 (2020).</li><li>Xu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+clinical+grading+system+for+retinal+inflammation+in+the+chronic+model+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+digital+fundus+images.">A clinical grading system for retinal inflammation in the chronic model of experimental autoimmune uveoretinitis using digital fundus images.</a> Experimental Eye Research. 87, 319-326 (2008).</li><li>Copland, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+time-course+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+topical+endoscopic+fundal+imaging+with+histologic+and+cellular+infiltrate+correlation.">The clinical time-course of experimental autoimmune uveoretinitis using topical endoscopic fundal imaging with histologic and cellular infiltrate correlation.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49, 5458-5465 (2008).</li><li>Dick, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doyne+lecture+2016:+intraocular+health+and+the+many+faces+of+inflammation.">Doyne lecture 2016: intraocular health and the many faces of inflammation.</a> Eye (Lond). 31, 87-96 (2017).</li><li>Agarwal, R. K., Silver, P. B., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Rodent models of experimental autoimmune uveitis.</a> Methods in Molecular Biology. 900, 443-469 (2012).</li><li>Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+look+at+autoimmunity+and+inflammation+in+the+eye.">A look at autoimmunity and inflammation in the eye.</a> Journal of Clininical Investigation. 120, 3073-3083 (2010).</li><li>Caspi, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Mouse models of experimental autoimmune uveitis.</a> Ophthalmic Research. 40, 169-174 (2008).</li><li>Shao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+chronic+experimental+autoimmune+uveitis+(EAU)+of+the+C57BL/6+mouse+induced+by+adoptive+transfer+of+IRBP1-20-specific+T+cells.">Severe chronic experimental autoimmune uveitis (EAU) of the C57BL/6 mouse induced by adoptive transfer of IRBP1-20-specific T cells.</a> Experimental Eye Research. 82, 323-331 (2006).</li><li>Horai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota-Dependent+Activation+of+an+Autoreactive+T+Cell+Receptor+Provokes+Autoimmunity+in+an+Immunologically+Privileged+Site.">Microbiota-Dependent Activation of an Autoreactive T Cell Receptor Provokes Autoimmunity in an Immunologically Privileged Site.</a> Immunity. 43, 343-353 (2015).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+induced+vs.+spontaneous+models+of+autoimmune+uveitis+targeting+the+interphotoreceptor+retinoid+binding+protein.">Comparative analysis of induced vs. spontaneous models of autoimmune uveitis targeting the interphotoreceptor retinoid binding protein.</a> PLoS One. 8, 72161 (2013).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C. C., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8, 63904 (2013).</li><li>Harry, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+autoimmune+retinal+disease+by+lovastatin+does+not+require+Th2+cytokine+induction.">Suppression of autoimmune retinal disease by lovastatin does not require Th2 cytokine induction.</a> Journal of Immunology. 174, 2327-2335 (2005).</li></ol>

Deneysel hayvan modelleri, hastalık patogenezini incelemek ve yeni terapötik paradigmaların klinik öncesi testlerini incelemek için gerekli araçlardır. Bu protokolde, göz içi inflamatuar üveitin deneysel bir modeli olan EAU'yu indüklemek, izlemek ve puanlamak için bir metodolojiyi tartıştık. Bu EAU modeli, tüm prosedürler burada özetlenen protokole göre yapıldığında hastalık insidansı% 95'ten fazladır ve kronik, monofazik EAU'nun gelişmesiyle sonuçlanır. Bu insidans seviyesine ulaşmak için,...

Bu protokol, C57BL / 6J farede Deneysel Otoimmün Üveitin (EAU) emülsifiye bir adjuvanda retinal antijenin tek bir deri altı enjeksiyonu ile nasıl indükleneceğini gösterecektir. Hastalığın ilerlemesini izleme ve değerlendirme yöntemleri, fundoskopik görüntüleme ve histolojik inceleme ile detaylandırılacak ve ölçüm parametreleri ana hatlarıyla belirtilecektir. Ayrıca retinal kan damarı yapısını ve geçirgenliğini incelemek için kullanılan bir teknik olan floresein anjiyografi tartışılacaktır.
Bu EAU modeli, insanlarda enfeksiyöz olmayan posterior üveitin klinik patolojik özellikleri ve hastalığı yönlendiren temel hücresel ve moleküler mekanizmalar açısından merkezi özelliklerini özetlemektedir. EAU, evlat edinilmiş transfer deneylerinde ve IFNγ tükenmiş farelerde gösterildiği gibi, kendi kendine reaktif CD4 + T lenfositlerin Th1 ve / veyaTh17 alt kümeleri tarafından aracılık edilir. Üveitte bu hücrelerin potansiyel rolleri hakkındaki anlayışımızın çoğu, retina dokularında hem Th1 hem de Th17 hücrelerinin tespit edildiği EAU2'yi incelemekten kaynaklanmaktadır3. Genellikle, EAU hastalığı hafifletmede yeni tedavilerin yararını değerlendirmek için klinik öncesi bir model olarak kullanılır. EAU hastalığını başarılı bir şekilde modüle eden terapötik yaklaşımlar klinikte bir miktar etkinlik göstermiş ve FDA onaylı statüye ulaşmıştır. Bunların örnekleri, T hücre hedefleme tedavileri gibi immünoregülatör ilaç gruplarıdır: siklosporin, FK-506 ve rapamisin 4,5,6. Son zamanlarda, bu modelde hem mekanizmayı hem de hastalık sonucu üzerindeki etkisini araştırmak için yeni yolları hedefleyen müdahaleler de araştırılmıştır. Bunlar, kromatin okuyucu Bromodomain Ekstra-Terminal (BET) proteinleri ve P-TEFb inhibitörleri3 aracılığıyla transkripsiyonel düzenlemeyi hedeflemeyi içerir. Ayrıca, VLA-4 inhibitörü gibi daha geleneksel yaklaşımlar son zamanlarda efektör CD4 + T hücrelerinin modülasyonu yoluyla EAU'da baskılanma göstermiştir7. Ek olarak, bir RORγt ters agonisti olan TMP778 ile Th17 hücrelerini hedeflemenin de EAU8'i önemli ölçüde baskıladığı bulunmuştur. Ayrıca, bu model retinadaki kronik otoimmün inflamasyonu ve lenfosit primasyonu gibi eşlik eden altta yatan mekanizmaları incelemek için bir fırsat sunmaktadır.
EAU preklinik çalışmaları için birincil okumalar, retinal fundoskopi görüntülemesi yapılarak ve daha az sıklıkla, Optik Koherens Tomografi (OCT) ile retina bütünlüğünün değerlendirilmesi yoluyla klinik değerlendirmedir. Daha sonra retinal histopatolojik değerlendirme ve retina hücrelerinin akım sitometrisi ile immünofenotiplenmesi terminasyonda yapılır. Fundoskopi, tüm retinanın hızlı ve tekrarlanabilir klinik değerlendirmesine olanak tanıyan, kullanımı kolay bir canlı görüntüleme sistemidir. İmmünohistokimyasal değerlendirmeler için, teknikler, inflamasyon ve yapısal hasar derecesi için doku mimarisini incelememize izin veren retinal kesitlerin hazırlanmasına dayanmaktadır9. Kullanılan tüm teknikler için değerlendirme kriterleri ve geleneksel puanlama sistemleri bu protokolde özetlenecektir. Fundoskopik görüntüleme kullanılarak kaydedilen hasarın boyutu genellikle histolojik değişikliklerle yakından ilişkilidir. Hastalığın ciddiyetini izlemeye ve değerlendirmeye yönelik bu ikili yaklaşım, daha fazla hassasiyet ve daha güvenilir ölçüm sonuçları sağlar.
EAU preklinik testler ve immün aracılı göz hastalığının araştırılması için iyi kurulmuş, yaygın olarak kullanılan bir modeldir. Bu model, %95 > hastalık insidansı ile güvenilir ve tekrarlanabilir olup, dünya çapında çalışma yaşı körlüğünün önemli bir nedenini temsil eden göz içi inflamatuar hastalığın tedavisi için yeni tedavileri doğrulamak veya reddetmek için kullanılabilecek kapsamlı veriler üretir10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>antisedan</td>
			<td>ZOETIS, USA</td>
			<td></td>
			<td>for waking up</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Freund&#8217;s Adjuvant; CFA</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F5881</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domitor</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flourescein</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F2456</td>
			<td>for Angiography</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRBP1-20</td>
			<td>Chamberidge peptide, UK</td>
			<td></td>
			<td>peptide;antigen&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micron III</td>
			<td>Phoenix Research, USA</td>
			<td></td>
			<td>for fundoscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Serum</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>M5905</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycobacterium terberculosis</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>344289</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis Toxin</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>P2980</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylephrine hydrochloride 2.5%&#160;</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb UK&#160;</td>
			<td>PHEN25</td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 1%</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td></td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viscotears</td>
			<td>WELDRICKS Pharmacy, UK</td>
			<td>2082642</td>
			<td>for eye lubrication</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model

Deneysel Otoimmün Üveit (EAU), kendi kendine antijenlere yanıt veren immün hücreler tarafından yönlendirilir. Bu enfeksiyöz olmayan, göz içi inflamatuar hastalık modelinin birçok özelliği, insanları etkileyen posterior üveitin klinik fenotipini özetlemektedir. EAU, yeni inflamatuar terapötiklerin etkinliğini, etki biçimlerini incelemek ve göz içi bozuklukların hastalık ilerlemesini destekleyen mekanizmaları daha fazla araştırmak için güvenilir bir şekilde kullanılmıştır. Burada, bu hastalığa duyarlılığı olan en yaygın kullanılan model organizma olan C57BL / 6J farede EAU indüksiyonu hakkında ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Hastalığın şiddeti ve progresyonunun klinik değerlendirmesi fundoskopi, histolojik inceleme ve floresein anjiyografi ile gösterilecektir. İndüksiyon prosedürü, oküler protein interfotoreseptör retinoid bağlayıcı proteinden (retinol bağlayıcı protein 3 olarak da bilinir), Complete Freund's Adjuvant'tan (CFA) bir peptid (IRBP1-20) içeren bir emülsiyonun deri altı enjeksiyonunu içerir ve öldürülmüş Mycobacterium tuberculosis ile desteklenir. Bu viskoz emülsiyonun boynun arkasına enjeksiyonunu, Bordetella boğmaca toksininin tek bir intraperitoneal enjeksiyonu izler. Semptomların başlangıcında (12-14. gün) ve genel anestezi altında, klinik muayene yoluyla hastalığın ilerlemesini değerlendirmek için fundoskopik görüntüler alınır. Bu veriler, daha sonraki zaman noktalarında ve pik hastalıkta (20-22. gün) analiz edilen farklılıklarla doğrudan karşılaştırılabilir. Aynı zamanda, bu protokol, araştırmacının floresein anjiyografi kullanarak damar geçirgenliği ve hasarındaki potansiyel farklılıkları değerlendirmesini sağlar. EAU, diğer fare suşlarında (hem vahşi tipte hem de genetiği değiştirilmiş olarak) indüklenebilir ve ilaç etkinliğini ve / veya hastalık mekanizmalarını incelemek için esneklik sunan yeni tedavilerle birleştirilebilir.

Bu protokolde, IRBP'den türetilen bir uveitojenik retinal peptid ile fareleri bağışıklayarak deneysel otoimmün üveit (EAU) modelini indüklemek için adım adım bir yöntem tanımlamaktayız. Yaygın olarak kullanılan ve kolayca erişilebilen yaklaşımların kullanıldığı hastalığın değerlendirilmesi, bunlar münhasır olmamasına ve diğer görüntüleme tekniklerine eklenebilmesine veya kısmen değiştirilmesine rağmen, ele alınmaktadır. C57BL/6J farelerde EAU belirtileri, Şek...

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

Bu yazıda, araştırmacının göz içi üveitinin fare modelini oluşturmasını sağlayan bir protokol sunuyoruz. Daha yaygın olarak deneysel otoimmün üveit (EAU) olarak adlandırılan bu yerleşik model, insan hastalığının birçok yönünü yakalar. Burada, birkaç okuma kullanarak hastalığın ilerlemesinin nasıl indükleneceğini ve izleneceğini açıklayacağız.

Deneysel Otoimmün Üveit: Göz İçi İnflamatuar Bir Fare Modeli

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

Bu model, immün aracılı insan posterior üveitinin patogenezini içeren hücresel mekanizmaları incelemek için kullanılabilir. Bu tekniğin anlamı, yeni ilaç etkinliğinin izlenmesinde ve kimyasal hastalık progresyonuna mekanik bir bakış açısı sağlamada insan üveitinin translasyonel çalışmasına doğru uzanmaktadır. Bu modeli kullanmanın temel avantajı, hastalık indüksiyonunun güvenilirliği ve hastalığın ilerlemesini izlememizi sağlayan non-invaziv endoskopik tekniklerin kullanılmasıdır.Burada hastalığın nasıl indükleneceğini ve patolojinin birkaç okuma kullanarak nasıl değerlendirileceğini açıklıyoruz IRBP 1-20 tam Freund's Adjuvan veya CFA'yı hazırlamak için, hesaplanan bir peptit miktarını minimum% 100 DMSO hacminde askıya alın. Toz tamamen çözündüğünde, çözeltiyi karıştırmak için nazik ajitasyon kullanılarak enjekte edilecek fare sayısına göre nihai hesaplanan PBS hacmine ulaşana kadar tüpe küçük miktarlarda PBS ekleyin. Freund's Adjuvant'ın tamamını hazırladıktan sonra, DMSO PBS peptid çözeltisini süspansiyona bire bir oranda damla damla eklerken, bir visküs ve eşit olarak dağıtılmış emülsiyon oluşturmak için çözeltiyi nazikçe ve sık sık pipetleyin.Çözeltileri havalandırmak için, kalın, kremsi bir emülsiyon elde edilene kadar çözeltiyi tekrar tekrar pipetlemek için 700 mikrolitreye ayarlanmış 1000 mikrolitrelik bir pipet kullanın. Peptit süspansiyonunu enjekte etmeden önce, enjekte edilecek her fareyi ayrı bir kafese yerleştirin ve intraperitoneal olarak 100 mikrolitre RPMI 1640 ortamında 1.5 mikrogram Bordetella boğmaca toksini vermek için 23 gauge iğne ile donatılmış bir mililitre şırınga kullanın. Boğmaca toksin çözeltisi enjekte edildiğinde, fare scruff benzeri bir pozisyonda tutulmalı ve cilt boynun arkasında çadır benzeri bir yapı oluşturmak için sıkıştırılmalıdır.İğneyi parmak ve başparmak arasındaki boşluğa geçirin ve 200 mikrolitre IRBP emülsiyonunu çadırlı cilde enjekte edin, enjeksiyondan sonra basıncı koruyun ve geri çekilmeden önce cildi kapatmak için iğne kafasını döndürün. Klinik hastalığı puanlamak için, enjeksiyondan sonraki 21. günde, anestezi uygulanan peptit enjekte edilen farede yaprak refleksine yanıt eksikliğini doğrulayın ve hayvanı bir karışıklıkta kısıtlayın. Topikal olarak, enjeksiyondan hemen sonra her gözün korneasına% 1 tropikamid% ve% 2 fenilefrin uygulayın.Öğrenciler tamamen genişlediğinde, fareyi amaca yönelik bir mikroskop aşamasına yerleştirin. Retinaya tam erişim için mikroskopu konumlandırın. Optik diski ve retinayı görmek ve tüm retina bölgesinin görüntülerini elde etmek, çevrenin tüm köşelerini ayarlamak ve kaplamak için görüntüleme işlemi boyunca göz merceğini gerektiği gibi ayarlayın.Damar sızıntısını ölçmek için, boynun arkasına deri altından 100 mikrolitre% 2 floresein uygulayın ve fareyi, retina canlı görüntünün ortasında ortalanacak şekilde yeniden konumlandırın. Floresan enjeksiyonundan 1.5 ve yedi dakika sonra her birinin görüntüsünü elde etmeden önce fonoskopu 465 ila 490 nanometrede mavi ışık uyarma filtresine ayarlayın. Tüm görüntüler elde edildiğinde, intraperitoneal olarak iyileşme için enjekte edilebilir bir anti sedasyon verir ve fareyi, fare bilincini yeniden kazanana kadar izleme ile ıslak ıslatılmış diyete erişimi olan önceden ısıtılmış bir mat üzerindeki bir kafese yerleştirin.Görüntülerin klinik hastalık skorlaması için, klinik değerlendirmeyi optik disk iltihabının şiddetine, retinal damar kelepçelemesine, retina dokusuna sızmasına ve yapısal hasara dayandırın. Bu parametrelerin her birini bir ila beş arasında bir ölçekte puanlayın. Kolektif toplam, göz başına elde edilebilecek maksimum 20 puan ile tüm göz için klinik hastalığı temsil eder.Çalışmanın son klinik bitiş noktası için fundus görüntülemeden sonra, fareyi ötenazileştirin. Histolojik analiz için, tüm göze erişim için göz kapaklarını ayırın, ardından orbital bağ dokusunu ve optik siniri kavramak ve gözü enüklee etmek için kavisli forsepsleri dünyanın arkasına yerleştirin. Enüklee olmuş gözü, organı en az 24 saat boyunca bir ila beş mililitre% 10 formaldehit'e aktarmadan önce en az 15 dakika boyunca bir ila beş mililitre% 4 glutaraldehit içine yerleştirin.Histolojik doku boyamasından sonra, standart protokollere göre, bağışıklık hücresi infiltrasyon seviyesine ve retina hasarının derecesine bağlı olarak sıfır ila üç arasında bir ölçekte puanlar atanır. Hastalığın ilerlemesi sırasında yapılan fundoskopik değişiklikler, retina dokusu ile vasküler ve optik disk inflamasyonu ve retinal yapısal hasarın yanı sıra infiltrasyona bağlı histolojik değişiklikler ve yapısal bozuklukları içeren inflamatuar değişiklikler olarak sınıflandırılır. Bu klinik ve histopatolojik değişiklikler, hastalığın ilerlemesini değerlendirmek ve terapötik müdahale etkinliğini değerlendirmek için derecelendirilebilir ve puanlanabilir.Vasküler sızıntı ayrıca modelin ve insan üveitinin patolojik bir özelliğidir. Bu analizde gösterildiği gibi, floresein, vasküler sızıntıyı bu modelin başka bir okuması olarak görselleştirmek için kullanılabilir. Araştırmacıların, emülsiyonun, çözeltiler arasında ayrılık belirtileri olmadan doğru şekilde hazırlandığından emin olmaları önemlidir.İyice karıştırılmalı ve nihai ürün dokuda pürüzsüz olmalıdır. Bu prosedür diğer ilaç uygulama yöntemleri ve retinal immün hücre popülasyonlarına sızan fenotipleme için sitometri ile birleştirilebilir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Deneysel metastaz ve CTL Kabul edilmiş Transfer İmmünoterapi Fare Modeli

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon Fare Hipofiz İmmunogen hazırlanması

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

SJL Farelerde Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Kabul edilmiş Transfer ve antijenik Challenge Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis (EAE) Dayanıklı Fare Suşlarında yanıtsızlık Aşmak

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

Enzimatik Digest ve Gradient Ayırma kullanma Fare Skin gelen sızan lökositlerin İzolasyonu

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Deneysel Otoimmün ENSEFALOMYELİT Çalışmaları Basit ve Etkin Üretim ve Fare Miyelin oligodendrosit Glikoprotein saflaştırılması

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

Bir IL-8 Geçici Transgenize Edilmiş Fare Modeli<emIn vivo</em&gt; İnflamatuvar Yanıtların Uzun Vadeli İzlenmesi

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model

Protein Halifeliğin bağırsak iltihabı bir iltihabi bağırsak hastalığı fare modeli üzerinde sinyal tat etkileri

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects ...

High-Efficiency Generation of Antigen-Specific Primary Mouse Cytotoxic T Cells for Functional Testing in an Autoimmune Diabetes Model

Otoimmün Diyabet Modelinde Fonksiyonel Testler için Antijene Özgü Primer Fare Sitotoksik T Hücrelerinin Yüksek Verimli Üretimi

Type 1 Diabetes (T1D) is characterized by islet-specific autoimmunity leading to beta cell destruction and absolute loss of insulin production. In the ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

Glukoz-6-Fosfat İzomazlarında (G6PI)-Indüklenen RA Farelerde iNKT Hücrelerinin Benimseyici İmmünoterapisi

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...