Name: label-free imaging of lipid storage dynamics in caenorhabditis elegans using stimulated raman scattering microscopy
Uploaded: 2021-05-28T14:00:00
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1. 자극 라만 산란 현미경 검사법에 대한 악기 설정
참고: SRS 현미경 시스템은 펌프 통합 광학 파라메트릭 발진기와 공초점 레이저 스캐닝 현미경으로 피코초 레이저를 기반으로 구축됩니다. 발진기는 1,064 nm의 스토크스 빔과 700-990 nm 사이의 펌프 빔을 포함하여 두 개의 피코초 펄스 트레인을 제공합니다. 두 빔의 시간적 및 공간 중첩은 레이저 내부에서 달성된다. 내장된 전자 ?...

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비만과 그 관련 신진 대사 무질서에 대하여 방어에서, 지질 항상성의 규정 기계장치를 더 잘 이해하기 위하여 중요한 연구 노력이 실행되었습니다. 생물학적 샘플에서 지질 분자의 정량적 검출을 위해 SRS 현미경 검사법에 의한 라벨 없는 이미징은 생화학 적 분석 및 기타 염색 방법에 대한 신뢰할 수있는 대안으로 입증되었습니다. 우리 그룹 및 다른 사람들은 C. elegans 및 SRS 현미경<sup class="...

비만은 전 세계 인구의 3분의 1을 위협하는 글로벌 건강 문제가 되었으며, 당뇨병 2, 심혈관 질환3 및 일부 유형의암4를포함한 정신 건강1 및 치명적인 질병과의 연관성을 감안할 때 심각한 의학적 우려를 제시하고 있다. 지질 대사의 연구는 비만 뒤에 생물학 문제를 더 잘 이해하기 위하여 필수적입니다. 지질 저장의 신속하고 구체적인 정량화는 지방산및 그 유도체의 검출뿐만 아니라 스테롤 함유 대사산물의 검출을 수반하며, 높은 감도와 바람직하게는 공간 정보로 수반된다. 지질은 본질적인 형광이 부족하고 쉽게 형광 태그가 될 수 없기 때문에 이미지에 도전적인 표적입니다. 형광 태그는 종종 지질 분자보다 더 크므로 생체 응용 분야에서 화학적으로 침습적이고 비실용적 일 수 있습니다. 지질 분자의 소수성 구조를 보존하기 위해서는 라벨이 없거나 최소한의 라벨링 전략이 필요하다5. 이미징 기술의 최근 발전은 살아있는 세포, 조직 및 유기체에 있는 지질의 레이블 없는 화상 진찰을 위한 흥미진진한 기회를 만들었습니다.
생물학적 샘플에서 지질 저장 분석을 위한 전통적인 접근은 심포성 염료를 가진 생화학적인 분석 및 염색 프로토콜을 포함합니다. 질량 분석법(MS)을 포함하는 생화학적 정량화 분석법은 분자 재사용과 비교할 수 없지만, 매우 많은 샘플 양이 필요하며 샘플 준비는 보통 몇 시간이 걸리며, 생활 시스템의 실시간 이미징을 위한 적용을 제한합니다5. 이러한 분석의 또 다른 주요 제한은 공간 정보의 부족이다. 한편, 오일 레드 O와 수단 블랙과 같은 지질성 염료는 지질 저장 소기관의 조직 및 세포 분포를 제공하고 MS 기술에 비해 이러한 염색 방법도 비용이 낮고 수행하기 쉽습니다. 그러나, 이러한 염색 프로토콜은 지질 방울의 소수성 특성에 영향을 미칠 수 있는 고정을 필요로 하며, 그 구조에 인위적인 변화를 일으키고 실험6사이의 불일치를 초래한다. 생화학 및 염색 기술과 관련된 기술적 어려움은 지질 분자를 이미지화하고 지질 이미징에서 일관된 라만 산란 (CRS) 현미경 검사법의 사용이 급격히 증가하는 라벨없는 방법을 찾는 데 주도했습니다.
라만 효과는 라만과 크리슈난에 의해 처음 인식되었으며, 광자와 상호 작용할 때 분자는 파장의 변화없이 산란된 빛을 생성할 수 있다고 보고했습니다(레일리 산란이라고 함) 또는 파장의 변화는 분자7내의 기능성 화학 군의 특징이다. 분자 내의 화학 결합이 펌프 광자라고 불리는 사건 광자에 의해 더 높은 진동 에너지 레벨에 흥분하면 스토크스 광자라고 불리는 흩어진 광자의 에너지가 낮아집니다. 그렇지 않으면, 화학 결합은 원래 더 높은 수준에 있는 경우 낮은 진동 에너지 수준에 도달할 수 있고, 흩어져 있는 광자는 안티 스토크스 광자될 에너지를 얻는다. 인시던트와 흩어진 광자의 빈도 차이를 라만 시프트라고 합니다. 분자 내의 각 화학 결합은 특징적이고 정량화 가능한 라만 시프트를 갖는다. 예를 들어,CH2 결합은 지방산 사슬8이풍부한 2,845cm-1의 라만 시프트를 갖는다. 이 자발적인 라만 신호는 일반적으로 매우 약하며, 이는 기존의 자발적인 라만 현미경 검사법의 이미징 속도를 크게 제한합니다. 수년에 걸쳐, 자발적인 라만 현미경 검사법의 화상 진찰 속도 및 감도를 높이기 위하여 각종 접근이 개발되었습니다. 일관된 라만 산란 현미경 검사법은 일관된 안티 스토크스 라만 산란 (CARS) 현미경 검사법과 자극 라만 산란 (SRS) 현미경 검사를 포함하여, 가장 최근의 진행이다. CARS와 SRS는 약간 다른 작동 원리를 가지고 있지만, 둘 다 라이브 이미징 기능을 가진 라벨이 없는 기술이며, 지질 저장 역학에 대한 공간 및 시간 정보를 얻을 수 있으며 작은 샘플 크기만 필요합니다. CARS 현미경 검사는 다양한 비선형 공정에서 비롯된 비공명 배경으로 고통받고 있으며, CARS 신호는 또한 분자 농도와 비선형관계를 가지며, 이는 함께 정량화 공정9을복잡하게 한다. CARS 현미경 검사법과 달리 SRS 현미경 검사는 불공명 배경 신호를 생성하지 않으며 관심 분자의 농도에 선형 의존성을 제공합니다. 따라서, 현재 SRS 현미경 검사는 지질 이미징에 더 널리 사용된다.
SRS 현미경 검사법에서, 약한 자발적인 라만 신호는 화학 결합 진동 주파수와 일치하는 주파수 차이와 두 개의 동기화 된 레이저 빔에 의해 흥분 될 때 증폭 될 수있다. 분자는 일관된 흥분된 흥분으로 인해 흥분된 상태로의 향상된 전환을 경험하게 될 것입니다. 그 결과, 스토크스 광자 세대의 비율이 향상됩니다. 따라서, 전송된 "Stokes" 빔의 강도(자극라만 게인, SRG)와 전송된 "펌프" 빔의 강도가 감소합니다(라만 손실, SRL 자극). SRG 또는 SRL 신호의 검출은 특정 화학 결합을 가진 분자의 자극된 라만 산란(SRS) 현미경 이미징의기초가 10을기초로 한다. 두 레이저 빔 간의 주파수 차이가 관심 분자 내의 화학 결합의 진동 주파수와 일치하지 않으면 SRG 또는 SRL 신호가 생성되지 않습니다. SRS 현미경 검사법의 이미징 속도는 픽셀당 약 2 μsec 또는 프레임당 1초이며, 이는 자발적인 라만 현미경 검사법11보다훨씬 빠릅니다. SRS 현미경 검사법에 대한 일반적인 측면 해상도는 회절이 제한되고 약 300 nm입니다. 또한, SRS 현미경 검사법의 2광광 광학 공정은 상대적인 두꺼운 조직 샘플의 체피 3D 이미징을 허용하고 이미징 깊이는 300-500 μm에 도달 할 수 있습니다. 전반적으로, SRS 현미경 검사는 특정 생체 분자, 특히 지질을 검출하기 위하여 능률적인, 레이블없는 화상 진찰 기술을 제시합니다.
지질 방울은 트리아실글리세롤(TAGs) 및 콜레스테롤 에스테르(CEs)를 포함한 중성 지질의 주요 세포 저장 사이트인 단일 멤브레인 세포기관입니다. 이들 지질 분자의 지방산 사슬에 있는CH2 결합은8을흥분할 때 2,845cm-1에서 강한 SRS 신호를 생성하여, 따라서 온전한 세포, 조직 단면 및 전체 유기체 12,13,14,15에서저장 지질 수준의 검출 및 정량화를 가능하게 한다. 특히, C. elegans는 그들의 투명성 때문에 지질 화상 진찰 연구 결과에 유용합니다. 포유류와 마찬가지로, C. elegans는 지질 물방울에 지질을 저장하고 지질 분자의 합성 및 분해 경로는 매우보존된다 16. 이 프로토콜에서, 우리는 SRS 현미경 검사법의 작동 원리, 그것의 근본적인 설치를 제공하고 C. elegans에있는 지질 화상 진찰에 그것의 사용을 위한 방법을 설명할 것입니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>A/D converter</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Analog Unit</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>GeneMate</td>
			<td>3119</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - adapter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SM1A4</td>
			<td>For mounting the tool on scope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - target</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>VRC2SM1</td>
			<td>For viewing IR laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - tube</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SM1L40</td>
			<td>Length can vary</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autocorrelator (Optional)</td>
			<td>APE</td>
			<td>pulseCheck</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter</td>
			<td>minicircuits</td>
			<td>BBP-21.4+ if modulated at 20MHz or KR Electronics 2724 if modulated at 8 MHz</td>
			<td>For signal with modulation frequency filtering</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNC cables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800</td>
			<td>For handling and picking worms for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodecane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>44010</td>
			<td>Used for calibration of the SRS signal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>890/220 CARS</td>
			<td>For removing Stokes beam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General purpose laboratory labeling tape</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89097</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-106</td>
			<td>For covering worms for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microscope slide</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-422</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser scanning microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>L1: AC254-050-B 
			L2: AC254-075-B</td>
			<td>For beam expander</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lock-in amplifier</td>
			<td>Zurich</td>
			<td>HF2LI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lowpass filter</td>
			<td>minicircuits</td>
			<td>BLP-1.9+</td>
			<td>For power supply noise suppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mirrors</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>BB1-E03</td>
			<td>For relay and periscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>UPlanSAPO 20x 0.75, UPlanSAPO 60XW 1.20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photodiode</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FDS1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picosecond laser source</td>
			<td>APE</td>
			<td>picoEmerald</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply</td>
			<td>TEKPOWER</td>
			<td>TP1342U</td>
			<td>For photodiode, reversed 50V voltage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002</td>
			<td>For anaesthesizing the worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm picker</td>
			<td>WormStuff</td>
			<td>59-AWP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

label-free imaging of lipid storage dynamics in caenorhabditis elegans using stimulated raman scattering microscopy

지질 대사는 세포 와 유기체 건강에 필요한 기본적인 생리 과정입니다. 지질 대사의 dysregulation는 수시로 심장 혈관 무질서, 타입 II 당뇨병 및 암을 포함하여 비만 및 많은 관련질병을 유도합니다. 지질 대사 조절의 현재 이해를 증진하기 위해, 시간과 공간에서 생체 지질 저장 수준을 정확하게 측정하는 정량적 방법은 점점 더 중요하고 유용해지고 있다. 지질 저장을 분석하는 전통적인 접근 방식은 현미경 평가를 위한 반정성 또는 생화학적 측정을 위한 spatio-측두성 정보 부족입니다. 자극된 라만 산란(SRS) 현미경 검사는 세포 외 분해능을 가진 살아있는 세포에서 지질을 신속하고 정량적 검출할 수 있는 라벨이 없는 화학 영상 기술입니다. 본질적인 분자 진동에서 대조가 악용됨에 따라 SRS 현미경 검사법은 살아있는 동물의 지질을 4차원 추적할 수 있습니다. 지난 10년 동안, SRS 현미경 검사는 생체 의학 연구에서 작은 분자 이미징에 널리 사용되었으며 기존의 형광 염색 및 지질 추출 방법의 주요 한계를 극복했습니다. 실험실에서, 우리는 강력한 모형 유기체, Caenorhabditis elegans에 유효한 유전 및 생화학 공구와 SRS 현미경 검사를 결합했습니다, 다른 세포및 조직에 걸쳐 지질 물방울의 분포 그리고 이질성을 조사하고 궁극적으로 지질 대사를 조절하는 새로운 보존된 신호 통로를 발견하기 위하여. 여기서, 우리는 SRS 현미경의 작업 원리및 상세한 설정을 제시하고 야생 형 및 인슐린 신호 결핍 돌연변이 C. elegans의뚜렷한 발달 시점에서 지질 저장을 정량화하는 데 사용하는 방법을 제공합니다.

인슐린 신호는 발달, 재생산, 수명 및 신진 대사에 영향을 미치는 중요한 내분비 통로입니다. 웜에서, 인슐린 신호는 약 40인슐린 같은 펩티드 리간드, 인슐린 과 같은 성장 인자 수용체 정형돌로그 DAF-2, 다운스트림 PI3K/AKT 키나아제 캐스케이드, 및 FoxO 전사 인자 직교인, DAF-1620으로구성된다. daf-2 돌연변이체는 인슐린 수용체가 결여되어 장내 지질 방울이 더 많고, 벌레 지?...

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Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

자극라만 산란 (SRS) 현미경 검사법은 특정 화학 적 moieties의 선택적, 라벨없는 이미징을 허용하고 효과적으로 생체 내에서 지질 분자를 이미지하기 위해 사용되었습니다. 여기에서, 우리는 SRS 현미경 검사법의 원리에 대한 간략한 소개를 제공하고 Caenorhabditis elegans에있는 지질 저장에 그것의 사용을 위한 방법을 기술합니다.

자극라만 산란 현미경 검사를 사용하여 Caenorhabditis elegans의 지질 저장 역학의 라벨 프리 이미징

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits ...

자극된 라만 산란 현미경 검사는 지질의 신속하고 정량적 검출을 가능하게 하고 라벨이 없는 방식으로 살아있는 동물에서 지질을 추적할 수 있는 화학 영상 기술입니다. 전통적인 지질 검출 기술에 대한 SRS 현미경 검사법의 가장 중요한 장점은 라벨이 없고 따라서 다른 형광 및 염색 문제로 표백하는 것이 지속 가능하지 않다는 것입니다. 모델 유기체에 사용할 수 있는 유전 및 생화학 적 도구와 함께 SRS 현미경 검사법의 사용, 특히 Caenorhabditis elegans지질 생물학 및 신진 대사의 정상적인 레귤러를 공부하기위한 강력한 프레임 워크를 제공합니다.SRS 현미경에 레이저 빔을 공급하려면 먼저 잠망경을 설정하여 피코초 광원 출구에서 현미경 스캐너의 적외선 레이저 입력 포트로 빔을 들어 올리고 레이저 제어 소프트웨어를 열어 레이저를 시작합니다. 펌프 레이저 전력을 50밀리와트로 낮추고 펌프 신호를 750나노미터로 설정합니다. 빔 익스팬더를 사용하여 빔 직경을 조정하여 현미경 목표의 후면 조리개에 맞춥시게 합니다.두 개의 릴레이 거울, M1 및 M2를 사용하여 레이저 빔을 잠망경으로 안내하고 튜닝 범위의 중앙에 잠망경의 고개를 끄덕입니다. 레이저 빔이 대략 미러의 중앙에 닿는 것을 각 미러의 초기 위치와 각도를 선택하여 현미경으로 빔을 발사하고 현미경의 객관적인 포탑에 빈 포트를 사용하여 코스 정렬을 수행합니다. 파워 미터 프로브를 목표 포트에 배치하여 전송된 빛의 힘을 측정하고 현미경스캐너를 가장 높은 줌 인 50X로 설정합니다.중점 레이저 빔 스폿으로 송신된 빛의 힘을 측정하고 가장 높은 투과 레이저 전력을 달성하기 위해 미러 M1 및 M2의 노브를 반복적으로 최적화합니다. 정렬 도구를 사용하여 전달된 빛의 미세 정렬을 수행하여 빛이 목표의 중심을 통과하고 형광 목표 정렬 캡을 빈 목표 시트에 배치합니다. 첫 번째 스티어링 미러M1의 노브를 조정하여 레이저 빔 스팟을 중앙에 놓고 다른 쪽 끝에 정렬 캡이 있는 익스텐션 튜브를 레이저 빔 스팟을 모니터링하기 위한 빈 목표 시트에 도입합니다.그런 다음, 두 번째 스티어링 미러M2의 노브를 조정하여 확장 튜브의 다른 쪽 끝에 레이저 빔 스팟을 다시 중앙으로 조정합니다. SRS 검출 모듈을 설정하려면 응축기 후 빔 스플리터 큐브를 배치하여 전송된 레이저를 사진 다이오드 모듈로 유도합니다. 전자 장치 연결을 설정하려면 피코초 튜닝 가능 레이저 내부의 20메가헤르츠에 내장된 전자 광학 변조기를 사용하여 스토크스 빔의 강도를 조절하고 사진 다이오드의 출력 신호를 잠금 증폭기로 공급하여 자극된 라만 손실의 강등을 유도합니다.그런 다음, 마이크로코프의 아날로그 상자에 잠금 증폭기 출력을 공급하여 전기 아날로그 신호를 디지털 신호로 변환한다. 이미징 조건을 최적화하려면 5개의 올레산 마이크로리터를 미니 현미경 슬라이드 챔버에 추가하고 커버 슬립으로 샘플을 덮습니다. 샘플을 현미경 단계에 배치하고 패드가장자리를 사용하여 물방울을 찾고 집중합니다.Kohler 조명에 대한 응축기를 조정하고 적외선 센서 카드와 적외선 뷰어를 사용하여 펌프 빔 경로가 여전히 올바른지 확인합니다. 지연 단계가 펨토초제로 설정되어 있는지 확인하고 펌프 빔 파장을 795.8나노미터로 설정합니다. 펌프 빔의 전력을 50밀리와트로 설정하고 스토크 빔을 100밀리와트로 설정합니다.레이저의 메인 셔터뿐만 아니라 빔 모두에 대한 셔터를 엽니 다. 샘플을 스캔하고 컴퓨터 화면에서 이미지를 확인합니다. 디스플레이 모드를 높은 낮은 수준으로 변경하고 범위를 조정하여 약 50%의 채도를 확인합니다.포화도가 이미지에 중심이 되는지 확인하여, 펌프와 스토크스의 최적화된 오버랩을 위해 피코초 조정 가능 레이저 시스템 내부의 스티어링 미러를 신중하게 조정하여 이미지 강도를 극대화하고 필요에 따라 피크 강도를 중심으로 합니다. 각 이미징 세션 전에 100 마이크로리터의 따뜻한 2%아가로즈를 두 층의 실험실 테이프가 있는 지지 슬라이드 사이에 배치한 깨끗한 유리 슬라이드에 추가하고 첫 번째 슬라이드 위에 두 번째 슬라이드를 빠르게 놓습니다. 얇게, 심지어 아가로즈 패드를 만들고 아가로즈가 식힐 수 있도록 부드럽게 누르십시오.이미징을 위해 벌레를 장착하려면 10~20개의 벌레당 마취제 의 4~5방울을 커버 슬립에 놓고 해부 현미경을 사용하여 이미지를 지정하여 벌레를 마취액에 배치합니다. 모든 웜이 수집되면 아가로즈 패드로 유리 슬라이드로 웜을 덮습니다. 이미징의 경우, 가려움서 를 사용하여 벌레 샘플을 대적 렌즈를 향하고 밝은 필드 광원을 접안으로 향하여 웜을 찾습니다.웜을 초점으로 가져오고 그에 따라 응축기 위치를 조정합니다. 펌프 레이저 전력을 200밀리와트로 설정하고 IR 전력을 400밀리와트로 설정하여 레이저 파워를 조정합니다. 웜 SRS 신호의 강등용 잠금 증폭기를 설정합니다.빠른 스캔 속도로 첫 번째 웜을 스캔하여 관심 영역을 찾기 위해 미세 한 초점을 조정하십시오. 신호가 최적화되면 느린 스캔 속도와 더 높은 픽셀 해상도로 전환하여 SRS 이미지를 얻고 이미지를 고해상도로 저장하는 형식으로 저장합니다. 모든 샘플이 이미지화되면 레이저 소스를 대기 중으로 배치하고 관련된 모든 장비를 끕니다.이미지를 분석하려면 ImageJ에서 파일을 열고 분석할 속성을 선택하기 위해 분석 및 설정을 선택합니다. 다각형 선택 도구를 사용하여 웜 장의 영역을 윤곽을 잡아 정량화하고 분석 및 측정을 다시 클릭합니다. 측정값이 결과 창에 나타납니다.모든 웜이 설명되면 지정된 유전자형의 각 웜에 대한 측정값을 스프레드시트에 복사하여 붙여넣습니다. 배경 측정 값의 경우, SRS 신호가 없는 웜 부근의 영역을 선택하고 각 개별 웜에 대한 측정에서 배경 평균 회색 값을 빼서 주어진 유전자형 또는 테스트 그룹의 모든 웜에서 평균 회색 값을 빼낸 배경의 평균 및 표준 편차를 계산합니다. 그런 다음 이러한 값을 대조군의 평균으로 정규화할 수 있습니다.이러한 대표적인 분석에서, 인슐린 수용체가 결여된 연령 동기화 된 야생 형 웜 및 daf-2 돌연변이체의 장 지질 수준은 성인기 동안 정량화되었다. 예상대로, 지질 수준에 있는 쇠퇴는 야생 모형 벌레에서 관찰됩니다, 첫날에서 시작하여 성인의 9 일까지 계속. daf-2 돌연변이의 지질 수준은 5 일 까지 증가하며, 이 시점에서 야생 유형보다 약 2.5 ~ 3 배 높게 일정하게 유지됩니다.Daf-16 비활성화는 daf-2 돌연변이체의 지질 수준의 증가를 억제합니다. daf-16a 또는 daf-16b 이소폼의 발현은 daf-2, daf-16 이중 돌연변이체는 지질 수준을 복원하지 않는다. 그러나 daf-16d/f/h 등소형태의 발현은 daf-2, daf-16 이중 돌연변이체에서 다프-2 단일 돌연변이체에서 관찰되는 수준으로 지질 수준을 복원하기에 충분하다.이러한 결과는 daf-16d/f/h 이소형이 daf-2 돌연변이 벌레의 지질 대사를 특별히 조절한다는 것을 나타냅니다. 이미징 세션 전반에 걸쳐 펌프 및 Stokes 빔에 동일한 레이저 전력을 사용하고 6및 4개의 일관된 정량화마다 제어 그룹을 포함하는 것이 중요합니다. 지질 저장을 정량화하는 것 외에도, SRS 현미경 검사는 중수소와 같은 생물orthogonal 태그와 결합될 수 있고, 지질 통합, 합성 및 분해의 역학을 시각화하기 위하여 구현될 수 있습니다.SRS 현미경 검사는 멀티플렉싱을 허용하고 다른 세포 외 구획에서 여러 생체 분자를 이미지하도록 구현될 수 있습니다. 소위 하이퍼 스펙트럼 SRS 현미경 검사는 신진 대사 역학을 탐구에 있는 중대한 미래를 가지고 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Label-free in situ Imaging of Lignification in Plant Cell Walls

Label-free in situ Imaging of Lignification in Plant Cell Walls

라벨 - 무료 현장에서</em식물 세포 벽 Lignification의> 이미징

Meeting growing energy demands safely and efficiently is a pressing global challenge. Therefore, research into biofuels production that seeks to find ...

연구

생물학

Differential Imaging of Biological Structures with Doubly-resonant Coherent Anti-stokes Raman Scattering (CARS)

Differential Imaging of Biological Structures with Doubly-resonant Coherent Anti-stokes Raman Scattering CARS

이중 - 공진 코히어런트 반 스톡스 래맨 산란 (자동차)와 생물 학적 구조의 차동 영상

Coherent Raman imaging techniques have seen a dramatic increase in activity over the past decade due to their promise to enable label-free optical imaging ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

상순 Embryogenesis의 시간 경과 현미경 Caenorhabditis 엘레간스

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

기본<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; 방법 : 동기화 및 전망

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

사용<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em&gt; 다세포 생물의 단백질 항상성을 연구하는 모델 시스템으로

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

지질 풍부 및 평가의 지질 분포 나 일 빨강, 기름 빨간 O 얼룩으로 꼬마 선 충 의 정량화

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

Oligomerization Dynamics of Cell Surface Receptors in Living Cells by Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy Combined with Number and Brightness Analysis

총 내부 반사 형광 현미경 검사법에 의해 살아있는 세포에 있는 세포 표면 수용체의 올리고머화 역학 은 수 및 밝기 분석과 결합됩니다

Despite the importance and ubiquity of receptor oligomerization, few methods are applicable for detecting clustering events and measuring the degree of ...

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

조직별 샤페론 상호 작용을 위해 검사하기 위해 Caenorhabditis elegans를 사용

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, ...

Rapid Antimicrobial Susceptibility Testing by Stimulated Raman Scattering Imaging of Deuterium Incorporation in a Single Bacterium

단일 박테리아에 혼입된 중수소의 자극된 라만 산란 이미징에 의한 신속한 항균 감수성 테스트

To slow and prevent the spread of antimicrobial resistant infections, rapid antimicrobial susceptibility testing (AST) is in urgent need to ...

Automating Aggregate Quantification in Caenorhabditis elegans

Automating Aggregate Quantification in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans의 집계 정량화 자동화

A rise in the prevalence of neurodegenerative protein conformational diseases (PCDs) has fostered a great interest in this subject over the years. This ...