Name: isolation of viable adipocytes and stromal vascular fraction from human visceral adipose tissue suitable for rna analysis and macrophage phenotyping
Uploaded: 2020-10-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Viable Adipocytes and Stromal Vascular Fraction from Human Visceral Adipose Tissue Suitable for RNA Analysis and Macrophage Phenotyping at JoVE.c

Cette étude a été financée par l’Instituto Nacional de Perinatologia (numéros de subvention : 3300-11402-01-575-17 et 212250-3210-21002-06-15) et le CONACyT, Fondo Sectorial de Investigación en Salud y Seguridad Social (FOSISS) (numéro de subvention 2015-3-2-61661).

Ce protocole a été approuvé par l’IRB de l’Instituto Nacional de Perinatologia (212250-3210-21002-06-15). La participation était volontaire et toutes les femmes inscrites ont signé le formulaire de consentement éclairé.
1. Prélèvement de tissu adipeux viscéral
<ol><li>Obtenez des biopsies de TVA par omentectomie partielle pendant la césarienne de femmes adultes en bonne santé ayant une grossesse unique à terme sans travail.</li>
	<li>Après la fermeture utérine et l’hémo...

La TVA joue un rôle crucial dans la régulation métabolique et l’inflammation. L’intérêt croissant pour le rôle des adipocytes et des cellules immunitaires dans l’inflammation chronique associée à l’obésité a conduit au développement de différentes techniques pour séparer les SVF et les cellules graisseuses présentes dans l’AT. Cependant, la plupart des techniques ne permettent pas d’obtenir ces deux ensembles différents de cellules viables pour des applications en aval à partir d’une même b...

Le tissu adipeux blanc est composé non seulement de cellules adipeuses ou adipocytes, mais aussi d’une fraction de cellules non graisseuses connue sous le nom de fraction vasculaire stromale (SVF), qui contient une population cellulaire hétérogène composée de macrophages, d’autres cellules immunitaires comme les lymphocytes T régulateurs (Tregs) et d’éosinophiles, de préadipocytes et de fibroblastes, entourés de tissu vasculaire et conjonctif 1,2. Le tissu adipeux (TA) est maintenant considéré comme un organe qui régule les processus physiologiques liés au métabolisme et à l’inflammation par le biais d’adipokines, de cytokines et de microARN produits et libérés par différentes cellules dans le tissu, avec des effets autocrines, paracrines et endocriniens 3,4. Chez l’homme, le tissu adipeux blanc comprend le tissu adipeux sous-cutané (SAT) et le tissu adipeux viscéral (VAT), avec d’importantes différences anatomiques, moléculaires, cellulaires et physiologiques entre eux 2,5. Le SAT représente jusqu’à 80 % de l’AT humain, tandis que le VAT est situé dans la cavité abdominale, principalement dans le mésentère et l’épiploon, étant métaboliquement plus actif6. De plus, le VAT est un organe endocrinien qui sécrète des médiateurs ayant un impact substantiel sur le poids corporel, la sensibilité à l’insuline, le métabolisme des lipides et l’inflammation. Par conséquent, l’accumulation de TVA entraîne une obésité abdominale et des maladies liées à l’obésité telles que le diabète de type 2, le syndrome métabolique, l’hypertension et le risque de maladies cardiovasculaires, ce qui représente un meilleur prédicteur de la mortalité associée à l’obésité 6,7,8,9.
Dans des conditions homéostatiques, les adipocytes, les macrophages et les autres cellules immunitaires coopèrent pour maintenir le métabolisme de la TVA par la sécrétion de médiateurs anti-inflammatoires10. Cependant, une expansion excessive de la TVA favorise le recrutement de lymphocytes T, de cellules NK et de macrophages activés. En fait, dans la TVA pauvre, le rapport des macrophages est de 5%, tandis que ce rapport monte jusqu’à 50% dans l’obésité, avec une polarisation des macrophages du phénotype anti-inflammatoire au phénotype pro-inflammatoire, générant un environnement inflammatoire chronique10,11.
En raison de la pandémie d’obésité, un nombre étonnant de rapports ont été publiés sur différents sujets de recherche sur la TVA, notamment la biologie des adipocytes, l’épigénétique, l’inflammation, les propriétés endocriniennes et les domaines émergents comme les vésicules extracellulaires, entre autres 8,10,12,13. Cependant, bien que l’environnement de la TVA soit défini par la diaphonie entre les adipocytes et les macrophages résidents ou entrants, la plupart des études se sont concentrées sur une seule population cellulaire, et il existe peu d’informations sur l’interaction de ces cellules dans la TVA et leurs conséquences physiopathologiques11,14. De plus, des études intéressantes portant sur l’interaction adipocyte-macrophage dans l’AT ont été réalisées à l’aide de lignées cellulaires, sans les conditions d’amorçage in vivo 11,14,15. Une stratégie appropriée pour disséquer l’interaction ou la contribution particulière de ces cellules dans la TVA nécessite l’isolement des deux types de cellules à partir d’une même biopsie graisseuse pour réaliser des tests in vitro qui reflètent aussi similaires que possible les propriétés in vivo qui régulent le métabolisme de la TVA.
Bien que les méthodes de dissociation non enzymatique basées sur les forces mécaniques pour briser l’AT garantissent une manipulation minimale, ces méthodes ne peuvent pas être utilisées si l’objectif est d’étudier les cellules SVF, car elles ont une efficacité moindre dans la récupération cellulaire et une faible viabilité cellulaire par rapport aux méthodes enzymatiques, et un plus grand volume de tissu est nécessaire16,17. La digestion enzymatique à l’aide de la collagénase est une méthode douce qui permet une digestion adéquate du collagène et des protéines de la matrice extracellulaire des tissus fibreux tels que WAT18 et est fréquemment utilisée lorsque la trypsine est inefficace ou dommageable19. Le protocole fournit des directives de dépannage fondamentales pour isoler efficacement des adipocytes matures viables et des cellules SVF à partir de biopsies de VAT humaines en un seul processus, en utilisant une technique de digestion enzymatique de la collagénase, fournissant des informations pour assurer des rendements élevés (quantité, pureté et intégrité) d’ARN total à partir d’adipocytes matures, y compris des microARN, pour les applications d’expression en aval. Simultanément, le protocole est optimisé pour identifier les sous-ensembles de macrophages des cellules SVF grâce à la coloration de plusieurs marqueurs membranaires pour une analyse plus approfondie par cytométrie en flux20.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 mL PCR tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>PCR-02-C</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL serological pipettes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS4101-50EA</td>
			<td>Individually plastic wrapped</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L universal pipet tip</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>T-300-L-R</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L universal pipet tip</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>T-300-R-S</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L universal pipet tip</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>T-1000-B-R</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.0 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-200-C</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L universal pipet tip</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>T-200-Y-R</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2100 Bioanalyzer Instrument</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G2939BA</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2101 Bioanalyzer PC</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G2953CA</td>
			<td>2100 Expert Software pre-installed in PC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352003&#160;</td>
			<td>Snap cap, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL centrifuge tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS430828-100EA</td>
			<td>Polipropilene, conical bottom and sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acid-guanidinium-phenol based reagent</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>R2050-1-200</td>
			<td>TRI Reagent or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent RNA 6000 Nano Kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067-1511</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent Small RNA Kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067-1548</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC/Cy7 anti-human CD14 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>325620</td>
			<td>0.4 mg/106 cells, present on monocytes/macrophages, clone HCD14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baker</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>250 ml, non sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A3912-100G</td>
			<td>Heat shock fraction, pH 5.2, &#8805;96%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chip priming station</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5065-9951</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type II</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17101-015</td>
			<td>Powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270-100G</td>
			<td>Powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Direct-zol RNA Miniprep</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>R2051</td>
			<td>Supplied with 50 mL TRI reagen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Steel, serrated jaws and round ends</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection tray</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Stainless steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E7023-500ML</td>
			<td>200&#160;proof, for molecular biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Flow Sheath Fluid</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>342003</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Lysing Solution</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>349202</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSAria III Flow Cytometer/Cell Sorter</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>648282</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FASCDiva Software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>642868</td>
			<td>Software v6.0 pre-installed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemacytometer</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z359629-1EA</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual cell counter</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo dissecting scisors</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Stainless steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Adjustable temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND2000LAPTOP</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Adjustable temperature and speed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P10&#160;variable volume&#160;micropipette&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific-Finnpipette</td>
			<td>4642040</td>
			<td>1 to 10 &#956;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P1000&#160;variable volume&#160;micropipette&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific-Finnpipette</td>
			<td>4642090</td>
			<td>100 to 1000 &#956;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P2&#160;variable volume&#160;micropipette&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific-Finnpipette</td>
			<td>4642010</td>
			<td>0.2 to 2 &#956;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P200&#160;variable volume&#160;micropipette&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific-Finnpipette</td>
			<td>4642080</td>
			<td>20 to 200 &#956;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR tube storage rack</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>R96PCRFSP</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE/Cy5 anti-human HLA-DR Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>307608</td>
			<td>0.0625 mg/106 cells, present on macrophages, clone L243</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE/Cy7 anti-human CD45 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304016</td>
			<td>0.1 mg/106 cells, present on leukocytes, clone H130</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3813-10PAK</td>
			<td>Powder, pH 7.4, for preparing 1 L solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette controller</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cells Lysis Buffer</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11 814 389 001</td>
			<td>For preferential lysis of red blood cells from human whole blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated centrifuge</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Whit adapter for 50 mL conical tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Specimen container</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette</td>
			<td>Thermo Scientific-Samco</td>
			<td>204-1S</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td>0.4% Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube racks</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>For different tube sizes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Mini Shaker</td>
			<td>Cientifica SENNA</td>
			<td>BV101</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of viable adipocytes and stromal vascular fraction from human visceral adipose tissue suitable for rna analysis and macrophage phenotyping

Le tissu adipeux viscéral (VAT) est un organe métabolique actif composé principalement d’adipocytes matures et de cellules de fraction vasculaire stromale (SVF), qui libèrent différentes molécules bioactives qui contrôlent les processus métaboliques, hormonaux et immunitaires ; Actuellement, on ne sait pas comment ces processus sont régulés dans le tissu adipeux. Par conséquent, le développement de méthodes évaluant la contribution de chaque population cellulaire à la physiopathologie du tissu adipeux est crucial. Ce protocole décrit les étapes d’isolement et fournit les directives de dépannage nécessaires pour isoler efficacement les adipocytes matures viables et la SVF des biopsies de TVA humaine en un seul processus, en utilisant une technique de digestion enzymatique de la collagénase. De plus, le protocole est également optimisé pour identifier les sous-ensembles de macrophages et effectuer l’isolement d’ARN adipocytaires matures pour les études d’expression génique, ce qui permet de réaliser des études disséquant l’interaction entre ces populations cellulaires. En bref, les biopsies de VAT sont lavées, hachées mécaniquement et digérées pour générer une suspension unicellulaire. Après centrifugation, les adipocytes matures sont isolés par flottation à partir de la pastille SVF. Le protocole d’extraction d’ARN garantit un rendement élevé d’ARN total (y compris les miARN) des adipocytes pour les tests d’expression en aval. Simultanément, les cellules SVF sont utilisées pour caractériser les sous-ensembles de macrophages (phénotype pro- et anti-inflammatoire) par analyse par cytométrie en flux.

Ce protocole décrit une méthode enzymatique utilisant la digestion de la collagénase suivie d’une centrifugation différentielle pour isoler, en un seul processus, des adipocytes matures viables et des cellules SVF à partir de biopsies de TVA obtenues sur des femmes enceintes en bonne santé après une omentectomie partielle. Dans ce cas, nous utilisons les adipocytes pour l’extraction de l’ARN et le SVF pour le phénotypage des macrophages.
Le protocole d’extraction de l’ARN a p...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Viable Adipocytes and Stromal Vascular Fraction from Human Visceral Adipose Tissue Suitable for RNA Analysis and Macrophage Phenotyping at JoVE.c

Isolation of Viable Adipocytes and Stromal Vascular Fraction from Human Visceral Adipose Tissue Suitable for RNA Analysis and Macrophage Phenotyping

Ce protocole fournit une méthode efficace de digestion de la collagénase pour isoler des adipocytes viables et des cellules stromales de fraction vasculaire-SVF de la graisse viscérale humaine en un seul processus, y compris une méthodologie pour obtenir un ARN de haute qualité à partir d’adipocytes et la phénotypification des macrophages SVF par coloration de plusieurs marqueurs membranaires pour analyse par cytométrie en flux.

Isolement d’adipocytes viables et d’une fraction vasculaire stromale à partir de tissu adipeux viscéral humain adapté à l’analyse de l’ARN et au phénotypage des macrophages

Visceral adipose tissue (VAT) is an active metabolic organ composed mainly of mature adipocytes and stromal vascular fraction (SVF) cells, which release ...

This protocol allows for isolation and study of viable adipocytes and stromal vascular fraction SVF cells from human visceral fat. Enzymatic digestion using collagenase ensures high yields of total RNA from mature adipocytes, including microRNAs suitable for expression analysis. Simultaneously, the method is optimized to identify macrophages by flow cytometry.This protocol provides fundamental troubleshooting guidelines for easy and efficient isolation of viable mature adipocytes and SVF cells from human VAT biopsies in a single process. After the uterine closure and hemostasis, identify greater omentum and extend it on a wet compress. Identify an avascular zone and use Kelly forceps to drill the outer side of visceral adipose tissue, or VAT.Use Ochsner forceps to clamp the proximal and distal side in the zone where VAT was drilled, and used Metzenbaum scissors to cut the tissue. Tie the greater omentum with black silk number one, then remove the Ochsner forceps and evaluate the hemostasis. To perform enzymatic digestion, cut four grams of VAT and use scissors to mince the tissue into small pieces in a dissection tray.Transfer the pieces to a new sterile 50-milliliter centrifuge tube and add 25 milliliters of digestion solution. Incubate the tube at 37 degrees Celsius for 60 minutes in an orbital shaker at 125 RPM. Then filter the digested tissue through three layers of gauze into a new sterile 50-milliliter centrifuge tube.Centrifuge the tube at 200 G for five minutes at four degrees Celsius. After centrifugation, two phases should be visible. The upper phase corresponds to mature adipocytes while SVF cells remain in the pellet.Transfer the mature adipocytes to a tube. Lyse cells by adding 1000 microliters of acid-guanidinium-phenol-based reagent and mix thoroughly with a P1000 micropipette to homogenize. Incubate the mixture for five minutes at room temperature to boost dissociation of nucleo-protein complexes.Centrifuge the cell lysate for five minutes at 12, 000 G to obtain three phases, an upper yellow phase corresponding to adipocyte lipids, a middle pink phase corresponding to nucleic acids, and a pellet with cellular debris. Carefully remove the lipid layer with a P200 micro pipette. Then transfer the middle phase into a new two-milliliter tube, taking care not to disturb the other phases.After purifying the RNA and measuring the concentration with a UV visible spectrophotometer, use an RNA integrity kit to determine the RNA integrity number. Then use the small RNA kit to determine the concentration and percent of microRNAs. Place the clip into a bioanalyzer.Dilute 10 microliters of SVF cell suspension into 90 microliters of 0.4%trypan blue solution, and apply 10 microliters to a standard hemocytometer. Count the viable cells carefully, excluding the dead cells, in four squares at the corner of the counting chamber. Transfer a total of 1 million SVF cells per milliliter to a five-milliliter round-bottom polypropylene test tube for flow cytometry and pellet the cells by centrifugation at 800 G for five minutes at four degrees Celsius.Vortex carefully to loosen the pellet and resuspend the cells in 100 microliters of PBS. Add the pre-titrated optimal concentration of each fluorochrome-conjugated monoclonal antibody specific for a cell surface antigen and mix gently, then incubate the cells for 15 minutes in the dark. Add an excess of cold PBS.And centrifuge the SVF at 400 G for five minutes at four degrees Celsius. Decant the supernatant, taking care to not disturb the pellet. Resuspend the pellet in five milliliters of sheath fluid.Then filter the cells through three layers of gauze into a new five-milliliter round-bottom polypropylene test tube. Vortex each tube briefly before analysis and count a minimum of 10, 000 events for flow analysis. This RNA extraction protocol was used to obtain adequate purity and high integrity RNA and microRNAs from mature adipocytes.The RNA integrity was assessed by an RNA quality control analyzer. Approximately 2.8 times 10 to the six nucleated cells were present per gram of visceral adipose tissue. The stromal vascular fraction cells were labeled with fluorophore-conjugated primary antibodies to identify and characterize 18 macrophages by fluorescence-activated cell-sorting analysis.Cell aggregates were eliminated from analysis by plotting the forward scatter area versus forward scatter height. Then cellular debris was excluded by gating the cells, based on the correct size and complexity, using forward scatter area and the side scatter area. To analyze macrophages, the monocyte and macrophage lineage cells were selected using CD45 and CD14 markers.Subsequently, the CD45-CD14 double positive cells were separated based on macrophage marker HLA-DR expression. Two subsets of macrophages were identified. In addition to identifying new cell phenotypes, this protocol makes it possible to use purified cell populations for future analyses, such as DNA methylation, post-translational modifications, and signaling pathways.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

L&#39;isolement des îlots humains à partir des patients partiellement pancréatectomisés

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

Recherche

Médecine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Génération expérimentale de carcinome Associated fibroblastes (CAF) à partir des fibroblastes mammaires

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Encapsulation thermogénique préadipocytes pour la transplantation dans dépôts de tissu adipeux

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Isolement cellulaire et phénotypage des cellules souches mésenchymateuses dérivées de liquide synovial et de moelle osseuse de Minipigs

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata

Stroma vasculaire Fraction greffe de graisse enrichie pour le traitement de fin-neuromata symptomatique

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

Évaluation de la fonction microvasculaire tissu adipeux humain en utilisant la vidéomicroscopie

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Clinical Protocol of Producing Adipose Tissue-Derived Stromal Vascular Fraction for Potential Cartilage Regeneration

Protocole clinique de produire des dérivés du tissu adipeux stroma vasculaire Fraction pour la régénération du Cartilage potentiels

Osteoarthritis (OA) is one of the most common debilitating disorders.&#160;Recently, numerous attempts have been made to improve the functions of the ...

Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy

Isolement des cellules régénératives dérivées adipeuses pour le traitement de la dysfonction érectile après une prostatectomie radicale

Stem cells are used in many research areas within regenerative medicine in part because these treatments can be curative rather than symptomatic. Stem ...

Technique for Obtaining Mesenchymal Stem Cell from Adipose Tissue and Stromal Vascular Fraction Characterization in Long-Term Cryopreservation

Technique d’obtention de cellules souches mésenchymateuses à partir de tissu adipeux et caractérisation de la fraction vasculaire stromale dans la cryoconservation à long terme

Human mesenchymal stem cells derived from adipose tissue have become increasingly attractive as they show appropriate features and are an accessible ...

Isolation and Culture of Human Adipose-Derived Stem Cells With an Innovative Xenogeneic-Free Method for Human Therapy

Isolement et culture de cellules souches humaines dérivées du tissu adipeux à l’aide d’une méthode innovante sans xénogène pour la thérapie humaine

Considering the increasing impact of stem cell therapy, biosafety concerns have been raised regarding potential contamination or infection transmission ...